常用免疫組化染色方法SP法免疫組化染色_第1頁
常用免疫組化染色方法SP法免疫組化染色_第2頁
常用免疫組化染色方法SP法免疫組化染色_第3頁
全文預(yù)覽已結(jié)束

下載本文檔

版權(quán)說明：本文檔由用戶提供并上傳，收益歸屬內(nèi)容提供方，若內(nèi)容存在侵權(quán)，請進(jìn)行舉報或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡介

1、常用免疫組化染色方法 SP 法免疫組化染色1. 原理：鏈霉素抗生物素蛋白（ SA ）是從鏈霉素中分 離出的蛋白質(zhì)，穿透組織的能力比 ABC 、PAP 復(fù)合物大，反 應(yīng)速度快， 它含有四個亞基， 每個亞基都有與生物素 （Biotin ） 連接的部位，且二者間有極強(qiáng)的親和力， SA 的等電位接近 于 6.5 ，近中性，而卵白素（ Avidin ）為 10，因此， SA 幾乎 不與組織中的內(nèi)源性凝集樣物質(zhì)發(fā)生非特異性結(jié)合，使用鏈 霉素抗生物素蛋白 -過氧化物酶放大系統(tǒng)，即可產(chǎn)生低背景、 高放大效果。 S-P 采用生物素標(biāo)記的第二抗體與鏈霉素抗生 物素蛋白連接的過氧化物酶及基質(zhì)素混合液來測定細(xì)胞和 組

2、織中的抗原。2. 基本染色方法：（1）石蠟切片脫蠟至水。（2）3%H202室溫孵育510分鐘，以消除內(nèi)源性過 氧化物酶的活性。（3）蒸餾水沖洗，PBS浸泡5分鐘，（如需采用抗原修 復(fù)，可在此步后進(jìn)行 ） 。(4) 510%正常山羊血清(PBS稀釋)封閉，室溫孵育 10 分鐘。傾去血清，勿洗，滴加適當(dāng)比例稀釋的一抗或一抗工作液，37 C孵育12小時或4C過夜。(5)PBS沖洗，5分鐘X 3次。( 6) 滴 加 適 當(dāng) 比 例 稀 釋 的 生 物 素 標(biāo) 記 二 抗(1%BSA-PBS稀釋)，37C孵育1030分鐘；或滴加第二代 生物素標(biāo)記二抗工作液，37 C或室溫孵育1030分鐘。(7) PBS沖洗，5分鐘X 3次。( 8)滴加適當(dāng)比例稀釋的辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素 (PBS 稀釋),37C孵育1030分鐘；或第二代辣根酶標(biāo)記鏈霉卵 白素工作液，37 C或室溫孵育1030分鐘。(9) PBS沖洗，5分鐘X 3次。( 10)顯色劑顯色( DAB 或 AEC)。( 11)自來水充分沖洗，復(fù)染，封片。(附， 冰凍切片免疫組化染色步驟： 冰凍切片 48um ， 室溫放置30分鐘后，入4C丙酮固定10分鐘，PBS洗，5 分鐘X 3次。用3%過氧化氫孵育510分鐘，消除內(nèi)

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明，都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等，如果需要附件，請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙，網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽，若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 人人文庫網(wǎng)僅提供信息存儲空間，僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理，對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯，并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容，請與我們聯(lián)系，我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評論

0/150

提交評論