反相高效液相色譜法測醇提姜黃素含量

1、反相高效液相色譜法測醇提姜黃素含量 摘 要：姜黃素是一種從姜科植物姜黃等的根莖中提取得到的黃色色素，具有抗炎、抗氧化等藥理作用。本實驗采用高效液相色譜法對醇提姜黃素中的姜黃素的進行了含量測定。方法：采用c18色譜柱，甲醇-水-醋酸（70：30：0.5）為流動相，檢測波長為425nm，流速為1.0ml/min。姜黃素在5400gml-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系（r=0.99995）。姜黃素平均回收率分別為99.6%。結(jié)論：本法簡便、準確，可用于醇提姜黃素中姜黃素的含量測定。 關(guān)鍵詞：醇提姜黃素；含量；測定 姜黃素是一種從姜科植物姜黃等的根莖中提取得到的黃色色素，具有抗炎、抗氧化等藥理作用。姜黃素的

2、測定方法主要有高效液相色譜法、薄層掃描法、分光光度法、庫侖滴定法等1-5。高效液相色譜法以液體為流動相，采用高壓輸液系統(tǒng)，將具有不同極性的流動相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內(nèi)各成分被分離后，從而實現(xiàn)對試樣的分析。本實驗采用高效液相色譜法對醇提姜黃素中的姜黃素的進行了含量測定。 1 儀器與試藥 1.1 儀器：milli-q integral純水超純水一體化智能系統(tǒng)（精藝興業(yè)科技有限公司）；jwc-52b1精密恒溫槽（上海思爾達科學(xué)儀器有限公司）；fl2200-2四元低壓梯度液相色譜儀（浙江福立分析儀器有限公司）；721可見分光光度計（上海楚定分析儀器有限公司）；bxxw-30ad博翔興旺雙頻超聲

3、波清洗機（北京博宇寶威實驗設(shè)備有限公司）；fa2004j電子密度分析天平（上海維菱科學(xué)儀器有限公司）。 1.2 色譜柱：迪馬c18鉆石色譜柱（220mm4.6mm，5m）。 1.3 對照品：姜黃素 1.4 試劑：甲醇（永華化學(xué)科技（江蘇）有限公司）、醋酸（永華化學(xué)科技（江蘇）有限公司）、冰醋酸（東莞市喬科化學(xué)有限公司）、乙腈（永華化學(xué)科技（江蘇）有限公司）、磷酸（東莞市喬科化學(xué)有限公司）、草酸（東莞市喬科化學(xué)有限公司）、氫氧化鈉（武漢市偉琪博星生物科技有限公司）、磷酸二氫鈉（武漢市偉琪博星生物科技有限公司）。 2 測定方法確定 2.1 色譜條件 依據(jù)查閱文獻及考查的結(jié)果，確定色譜條件如下。流動

4、相：甲醇-水-醋酸（70：30：0.5）為流動相，檢測波長：425nm，流速：1.0mmin-1。柱溫：30。理論板數(shù)按姜黃素峰計算應(yīng)不得低于2000。 2.2 對照品溶液的制備 精密稱取姜黃素對照品適量，置容量瓶中，加流動相制成每1ml含40g的溶液，即得。 2.3 供試品溶液的制備 取供試品適量，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入流動相10ml，密塞，精密稱定重量，超聲處理5分鐘，放冷，精密稱定，用流動相補足重量，搖勻，濾過。取續(xù)濾液，即得。 2.4 專屬性試驗 取乙醇、甲醇、醋酸等試驗用試劑，照2.3項下供試品溶液的制備方法制成陰性液，依上述方法測定，結(jié)果在姜黃素出峰處陰性液無色譜峰，結(jié)

5、果陰性試驗沒有干擾，表明本方法專屬性良好。 2.5 精密度試驗 精密稱取姜黃素對照品適量，加流動相使溶解，制成濃度為40gml-1的供試品溶液。照上述色譜條件，精密吸取10l，連續(xù)進樣6次，記錄峰面積。結(jié)果，rsd=0.63%，表明本方法精密度良好。 2.6 對照品的線性考察 精密稱取適量姜黃素對照品，加入流動相溶液使溶解分別配制成每毫升含0.05、0.1、0.5、1.0、2.0、4.0毫克的溶液。分別精密上述溶液吸取10l，注人液相色譜儀，依照2.1項下的色譜條件測定，記錄色譜峰。以峰面積（y）為縱坐標，對照品進樣量（x）為橫坐標，繪制標準曲線。結(jié)果表明，姜黃素在5400gml-1范圍內(nèi)呈良

6、好的線性關(guān)系。 2.7 重現(xiàn)性試驗 稱取同一批的醇提姜黃素樣品6份，按測定方法項下的方法制備供試品溶液，測定含量并計算樣品的rsd值，結(jié)果rsd為0.62%，結(jié)果表明此方法的重現(xiàn)性良好。 2.8 準確度試驗 精密稱取已知含量的樣品9份，分別精密加入姜黃素對照品，按項下方法制備成120% 140%、160%。取模擬樣品照試驗方法試驗，計算回收率為99.6%， rsd為0.53%。 2.9 樣品穩(wěn)定性試驗 取同一批醇提姜黃素樣品，按2.3項下的供試品制備方法制備供試品，將供試品置室溫下放置，分別于第0、1、2、3、4、5小時，精密吸取供試品溶液10？滋l 注入液相色譜儀中，記錄色譜圖。測定醇提姜黃

7、素中姜黃素的rsd=0.76%。結(jié)果表明供試品5小時內(nèi)穩(wěn)定。 2.10 樣品含量測定 依照上述含量測定方法，測定醇提姜黃素三批樣品中姜黃素的含量，結(jié)果三批樣品的含量分別為35gml-1、32gml-1、36gml-1。 3 討論 3.1 流動相的選擇 分別考察甲醇-水-醋酸（70：30：0.5），甲醇-水-冰醋酸（20：80：0.5），乙腈-0.4%磷酸溶液（10：90），甲醇-1%冰醋酸溶液（28：72），甲醇-水-冰醋酸（33：65：1），乙腈-0.1%的草酸溶液（30：70），甲醇-磷酸鹽緩沖液（ 取0.2mol/l磷酸二氫鈉溶液一定量，用氫氧化鈉試液調(diào)節(jié)ph值至5.0）（72：28）不

8、同比例的流動相，結(jié)果以甲醇-水-醋酸（70：30：0.5）為流動相為流動相，供試品各峰分離效果最好，故選用甲醇-水-醋酸（70：30：0.5）為流動相。 3.2 檢測波長的選擇 制備姜黃素對照品稀釋液照紫外-可見分光光度法，于190900nm波長范圍內(nèi)進行全波長光譜掃描，記錄吸收光譜。在425nm處有最大吸收峰，故選用425nm為檢測波長。 本實驗表明此方法分離效果好、方法簡便、快捷、準確，、專屬性好，可用于醇提姜黃素中姜黃素的含量測定。醇提姜黃素的含量應(yīng)不少于30gml-1。 參考文獻 1童榮生，席慶，孫世明，吳正中.反相高效液相色譜法測定七味姜黃膠囊中姜黃素的含量j.中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2003（3）. 2戚愛棣，于虹，朱晨.薄層掃描法測定姜黃、郁金、莪術(shù)中姜黃素的含量j.天津中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2002（2）. 3劉碩謙，劉仲華，黃建安，田娜，陸英，羅國安.反相高效液相色譜法同時測定姜黃藥材中3個組分的含量j.分析化