標(biāo)準(zhǔn)菌株質(zhì)量控制作業(yè)指導(dǎo)書(shū)

1、標(biāo)準(zhǔn)菌株質(zhì)量控制作業(yè)指導(dǎo)書(shū)1、目的：對(duì)微生物標(biāo)準(zhǔn)菌株的驗(yàn)收、復(fù)活、確認(rèn)、轉(zhuǎn)代、儲(chǔ)存、使用、廢棄等進(jìn)行規(guī)定，確保標(biāo)準(zhǔn)菌株符合要求，保證檢測(cè)結(jié)果。2、職責(zé)：2.1、檢測(cè)中心主任負(fù)責(zé)標(biāo)準(zhǔn)菌株資源的配備。2.2、微生物檢測(cè)室工作人員負(fù)責(zé)標(biāo)準(zhǔn)菌株的有效儲(chǔ)存和正確的使用。3、要求：3.1供應(yīng)商的選擇：選擇有資質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)菌株的合格供應(yīng)商，每批標(biāo)準(zhǔn)菌株必須有附件的供應(yīng)商的合格證或檢測(cè)報(bào)告，來(lái)證明所采購(gòu)的標(biāo)準(zhǔn)菌株是合格的。3.2標(biāo)準(zhǔn)菌株和驗(yàn)收菌株一到實(shí)驗(yàn)室，一定要記錄好菌株號(hào)和標(biāo)準(zhǔn)菌株來(lái)源，確保溯源性清楚。同時(shí)，還應(yīng)盡可能多的菌株信息，如：標(biāo)準(zhǔn)菌株名稱和數(shù)量、生產(chǎn)日期、接收日期和有無(wú)破損等。3.3凍干標(biāo)準(zhǔn)菌株的復(fù)

2、活：3.3.1、開(kāi)啟產(chǎn)品包裝：先用70%酒精棉擦拭外包裝，從凹口處撕開(kāi)產(chǎn)品外包裝，撕掉標(biāo)簽上的拉片，將其貼于菌株保藏管上。3.3.2、復(fù)活：選擇合適的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件（根據(jù)生產(chǎn)商說(shuō)明）進(jìn)行復(fù)活。凍干菌株的傳代次數(shù)不得超過(guò)5代，從標(biāo)準(zhǔn)菌株保藏中心購(gòu)買(mǎi)的凍干標(biāo)準(zhǔn)菌株為第f0代。捏管帽處安瓿瓶（僅一次）使其釋放水合液體。垂直握住安瓿瓶并輕拍之，使液體流入含小球的管底。通過(guò)擠捏壓碎小球使其與液體混合，立即將拭子浸于水合液體。擠壓并旋轉(zhuǎn)拭子，接種于初級(jí)培養(yǎng)平板，接種圈的直徑約為25mm，用一無(wú)菌接種環(huán)在先前接種區(qū)域劃線10-20次，促使分離出單菌落。同時(shí)吸出部分菌液接種胰蛋白胨大豆肉湯管，副溶血性弧菌接

3、種3%氯化鈉胰蛋白胨大豆肉湯管。將接種好的平板和管立即進(jìn)行培養(yǎng)。細(xì)菌培養(yǎng)溫度通常為25或37。多數(shù)凍干菌株會(huì)在幾天后長(zhǎng)出，但是少數(shù)菌會(huì)表現(xiàn)出延滯期延長(zhǎng)的現(xiàn)象，需要將正常培養(yǎng)時(shí)間加倍。復(fù)活后的菌株為f1代。3.3.3將tsb生長(zhǎng)的濃菌液吸0.5ml于菌株保藏管充分混勻后將液體吸出，將保藏管-18保存1-3年為標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株f2代。將平板上生長(zhǎng)的良好菌株接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面（副溶血性弧菌用3%氯化鈉營(yíng)養(yǎng)瓊脂）36培養(yǎng)24h當(dāng)作工作菌株，為w3代，記錄為f2代。3.3.4、工作菌株確認(rèn)方法及依據(jù)：大腸桿菌的確認(rèn)依照“sn 0169-1992 出口食品中大腸菌群、糞大腸菌群和大腸桿菌檢驗(yàn)方法”執(zhí)行。金黃色

4、葡萄球菌的確認(rèn)依照“sn/t 0172-2010進(jìn)出口食品中金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)方法”執(zhí)行。沙門(mén)氏菌的確認(rèn)依照“sn 0170-1992 出口食品沙門(mén)氏菌屬（包括亞利桑那菌）檢驗(yàn)方法”執(zhí)行。副溶血性弧菌的確認(rèn)依照“sn/t 0173-2010 進(jìn)出口食品中副溶血性弧菌檢驗(yàn)方法”執(zhí)行。3.4、工作菌株的儲(chǔ)存：3.4.1、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、沙門(mén)氏菌、儲(chǔ)存在2-8的冰箱內(nèi)。3.4.2、副溶血性弧菌在常溫條件下保存。3.4.3、儲(chǔ)存期限：大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、沙門(mén)氏菌、副溶血性弧菌為3個(gè)月。3.5、標(biāo)準(zhǔn)菌株的轉(zhuǎn)接：3.5.1標(biāo)準(zhǔn)菌株的復(fù)蘇： 菌種操作應(yīng)在無(wú)菌條件下進(jìn)行，防止雜菌污染。 每次使

5、用和復(fù)蘇時(shí)只需將小珠在平板上滾動(dòng)或置肉湯中培養(yǎng)。3.5.2標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株每轉(zhuǎn)接一次須進(jìn)行確認(rèn)。3.5.3工作菌株轉(zhuǎn)接的方法：、配制營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（副溶血性弧菌加3%氯化鈉）并分裝在試管內(nèi)，121高壓滅菌15分鐘后擺斜面，冷卻后備用。、在無(wú)菌條件下，用接種環(huán)挑取菌苔至新鮮斜面上作“之”字形劃線接種，放置在36的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24小時(shí)。3.6 工作菌株的使用：3.6.1內(nèi)部質(zhì)量控制：一個(gè)月一次陽(yáng)性對(duì)照、培養(yǎng)基每批驗(yàn)收；3.6.2外部質(zhì)量控制：能力驗(yàn)證、實(shí)驗(yàn)室比對(duì)；3.7、工作菌株的期間核查：3.7.1期間核查的頻率：每半年對(duì)使用標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行一次期間核查。3.7.2工作菌株期間核查的方法及依據(jù)：同工作菌株的確認(rèn)。3.7.3建立標(biāo)準(zhǔn)菌株期間核查記錄。3.8標(biāo)準(zhǔn)菌株的廢棄： 3.8.1標(biāo)準(zhǔn)菌株如已老化、退化、或變異、污染等，