輸血管）吸收放散試驗課件

1、輸血管）吸收放散試驗吸收放散試驗輸血管）吸收放散試驗吸收試驗放散試驗試 驗 原 理試 劑操 作 步 驟注 意 事 項臨 床 應(yīng) 用 加熱放散法 乙醚放散法試 驗 原 理操 作 步 驟注 意 事 項臨 床 應(yīng) 用試 驗 原 理操 作 步 驟注 意 事 項臨 床 應(yīng) 用主要內(nèi)容輸血管）吸收放散試驗吸收試驗原理待檢紅細(xì)胞已知已知效價效價的抗A或抗B血清吸收液已知抗原的紅細(xì)胞滴定滴定比較吸收前后血清中抗體效價抗體效價紅細(xì)胞上有無相應(yīng)抗原及其強度間接判定間接判定待檢紅細(xì)胞血型及其亞型種類輸血管）吸收放散試驗試劑n抗A及抗B分型血清。n2%A型及B型紅細(xì)胞。n受檢紅細(xì)胞。輸血管）吸收放散試驗操作步驟1、吸

2、收液的制備： 取受檢紅細(xì)胞用生理鹽水洗滌3次，末次洗滌后將鹽水倒盡，取壓實紅細(xì)胞1份，與等量抗A血清混合， 另取1份與等量抗B血清混合，置44冰箱至少至少1 1小時小時，每10分鐘搖動試管1次（紅細(xì)胞充分吸收抗體），離心后取上清液（即吸收液）。輸血管）吸收放散試驗2、倍量稀釋： 排列10mm60mm小試管4排，每排5支，每管各加生理鹽水0.2 ml。第1、3兩排第1管分別加己吸的收抗A及抗B血清 0.2 ml；第2、4兩排第1管分別加未吸收的抗A及抗B血清0.2 ml；分別作232的倍量稀釋。輸血管）吸收放散試驗3、第1、2兩排每管各加2%A型紅細(xì)胞鹽水懸液0.2ml，第3、4兩排每管各加2%

3、B型紅細(xì)胞鹽水懸液0.2ml。4、將試管振搖使紅細(xì)胞充分混勻，置室溫室溫1 1小時小時（或1000r/min離心1min），觀察凝集反應(yīng)。輸血管）吸收放散試驗結(jié)果判定1、吸收后，抗A效價較未吸收抗A效價顯著降低或消失者為A型（同理判定B型），若吸收后抗A和抗B都顯著下降為AB型，若吸收后抗A和抗B效價都無顯著差異者為O型。 輸血管）吸收放散試驗2、若試驗?zāi)康氖氰b定A亞型， 則按受檢紅細(xì)胞的吸收強度,A1A2A3AxAm的規(guī)律來判定。 B亞型鑒定與此類似。輸血管）吸收放散試驗注意事項1、試驗所用抗A及抗B血清效價不宜過高不宜過高，應(yīng)先將抗血清效價稀釋到3232倍為宜。若抗血清效價太高，抗血清被A

4、亞型紅細(xì)胞吸收后效價下降不明顯，難以判斷結(jié)果。 輸血管）吸收放散試驗2、紅細(xì)胞經(jīng)洗滌壓實，鹽水應(yīng)盡量去盡，以免抗血清被稀釋。3、吸收試驗的溫度應(yīng)根據(jù)抗原抗體反應(yīng)的最適溫度來確定。ABOABO系統(tǒng)以44為宜，RhRh系統(tǒng)以3737為宜。輸血管）吸收放散試驗臨床應(yīng)用 本試驗用以間接證明紅細(xì)胞上血型抗原及其強度，常用于ABO亞型鑒定、全凝集或多凝集紅細(xì)胞定型以及某種原因引起紅細(xì)胞血型抗原減弱時的定型等。輸血管）吸收放散試驗放散試驗分類1、ABO血型IgM類抗體常用熱放散法。2、Rh血型IgG類抗體常用乙醚放散法。輸血管）吸收放散試驗加熱放散試驗原理待檢紅細(xì)胞分型血清物理條件物理條件的改變的改變（加熱

5、）抗體待檢紅細(xì)胞試 劑紅細(xì)胞確定抗體的種類和強度判定待檢紅細(xì)胞上抗原的型別放散放散凝集或凝集或致敏致敏輸血管）吸收放散試驗試劑1、 抗A和抗B分型血清。2 、2%A型和B型試劑紅細(xì)胞鹽水懸液。3 、受檢紅細(xì)胞。輸血管）吸收放散試驗操作步驟1 、將受檢紅細(xì)胞以大量生理鹽水洗滌3次，末次洗滌后，將鹽水除盡將鹽水除盡，取壓實紅細(xì)胞1份，分別與2份抗A和抗B分型血清混合。置4 4C 1 hC 1 h，每隔10分鐘將試管振搖1次，使充分混合(充分吸附充分吸附) 。輸血管）吸收放散試驗2 、離心去掉上清液，以4 4C C冷鹽水冷鹽水洗滌紅細(xì)胞34次，傾去洗滌液，留取壓實紅細(xì)胞。用1/2容積的生理鹽水, 置

6、5656C C水浴1010分鐘，每隔15秒振搖1次，使吸附在紅細(xì)胞上的抗體充分放散。輸血管）吸收放散試驗3、立刻以3000r/min3000r/min離心，離心式套管內(nèi)放溫水，使溫度盡量保持在5656C C， 分離得到的上清液即為放散液。4 、將放散液用2%A型和B型試劑紅細(xì)胞試劑紅細(xì)胞鑒定抗體，即可檢出受檢紅細(xì)胞的血型。輸血管）吸收放散試驗結(jié)果判定n鑒定A亞型：用已知A亞型紅細(xì)胞按放散液抗體的強度A1A2A3AxAm，判定受檢紅細(xì)胞A亞型的型別。nB亞型的放散液鑒定方法相似。輸血管）吸收放散試驗1、為了獲得最大量的抗體， 應(yīng)加大吸收血清量。2 、放散時，應(yīng)嚴(yán)格注意溫度和時間溫度和時間。溫度過

7、高紅細(xì)胞易溶解；溫度過低，抗體從紅細(xì)胞上放散不完全。 注意事項輸血管）吸收放散試驗3、 放散液中抗體易變性，故應(yīng)立即進(jìn)行鑒定。若需保存，應(yīng)將抗體放散于AB血清或牛白蛋白溶液中。輸血管）吸收放散試驗臨床應(yīng)用n熱放散法常用于ABO亞型的鑒定，全凝集或多凝集紅細(xì)胞的定型，類B的放散實驗以及新生兒溶血病的診斷等。輸血管）吸收放散試驗乙醚放散試驗原理受檢者血 清已知抗原的紅細(xì)胞致敏致敏已致敏紅細(xì)胞乙醚放散液除去乙醚后鑒定抗體輸血管）吸收放散試驗試劑1、受檢者血清 2、相應(yīng)抗原的紅細(xì)胞（抗凝血）3、乙醚（分析試劑）4、AB型血清輸血管）吸收放散試驗操作步驟1、 取具有相應(yīng)抗原的抗凝血抗凝血，離心后吸取血漿

8、，加大量生理鹽水洗滌1次，離心后取壓實紅細(xì)胞壓實紅細(xì)胞備用。 2、 取受檢者血清5ml，加壓實紅細(xì)胞1ml，混勻后放在適當(dāng)溫度中1h，期間搖勻12次，離心。輸血管）吸收放散試驗3、離心后取出，將上清液吸出另放1管，鑒定上清液中抗體。4、將紅細(xì)胞用鹽水洗滌3次，離心壓實紅細(xì)胞。5、取1體積壓實紅細(xì)胞，加1體積AB型血清或生理鹽水和2體積乙醚，顛倒混勻10min10min，然后以3000r/min3000r/min離心離心5min5min。輸血管）吸收放散試驗6、 離心后即分成三層，最上層是乙醚，中層是紅細(xì)胞基質(zhì)，下層下層是具有抗體的放散液，其色深紅。 7、用清潔的吸管吸出放散液。 若有混濁，可再離心1次。 8、將放散液放置37水浴30min（除盡乙醚），然后鑒定抗體