朱潔 激素對(duì)血糖的影響課件(研究生)

1、實(shí) 驗(yàn)激素對(duì)血糖濃度的影響 安徽中醫(yī)學(xué)院生化與分子生物學(xué)教研室安徽中醫(yī)學(xué)院生化與分子生物學(xué)教研室 朱朱 潔潔目的要求 1 1、掌握血糖測(cè)定的原理、掌握血糖測(cè)定的原理- -葡萄糖氧化酶法葡萄糖氧化酶法2 2、掌握大鼠的一般實(shí)驗(yàn)方法、掌握大鼠的一般實(shí)驗(yàn)方法3 3、熟悉血糖含量的調(diào)節(jié)機(jī)制，明確腎上、熟悉血糖含量的調(diào)節(jié)機(jī)制，明確腎上腺素和胰島素對(duì)家兔血糖含量的影響腺素和胰島素對(duì)家兔血糖含量的影響。 實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理v 升糖激素與降糖激素的作用相互對(duì)抗又彼此升糖激素與降糖激素的作用相互對(duì)抗又彼此協(xié)調(diào)，共同維持著血糖濃度的恒定。協(xié)調(diào)，共同維持著血糖濃度的恒定。血血 糖糖腎上腺素腎上腺素胰島素胰島素v本實(shí)驗(yàn)

2、通過分別給大鼠注射腎上腺素和胰島本實(shí)驗(yàn)通過分別給大鼠注射腎上腺素和胰島素，作用一段時(shí)間后再分別采血，對(duì)比注射素，作用一段時(shí)間后再分別采血，對(duì)比注射前后血糖濃度的變化，觀察激素對(duì)血糖濃度前后血糖濃度的變化，觀察激素對(duì)血糖濃度的影響。的影響。 v本實(shí)驗(yàn)用葡萄糖氧化酶法測(cè)定血糖含量。本實(shí)驗(yàn)用葡萄糖氧化酶法測(cè)定血糖含量。葡萄糖葡萄糖+ o+ o2 2 + h + h2 2o o 葡萄糖酸葡萄糖酸+h+h2 2o o2 2葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶2h2h2 2o o2 2 + 4-aap + + 4-aap + 酚酚 紅色醌類化合物紅色醌類化合物 過氧化物酶過氧化物酶v其呈色深淺有葡萄糖含量成正比，在其

3、呈色深淺有葡萄糖含量成正比，在505nm505nm處處與同樣處理的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行比色，計(jì)算葡與同樣處理的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行比色，計(jì)算葡萄糖含量。萄糖含量。 實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理v1 1、胰島素注射液、胰島素注射液v2 2、腎上腺素注射液、腎上腺素注射液 v3 3、葡萄糖測(cè)定試劑盒（、葡萄糖測(cè)定試劑盒（葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶過氧化物酶過氧化物酶法）法） v4 4、吸管、分光光度計(jì)、電熱恒溫水浴箱、碘酒棉球、吸管、分光光度計(jì)、電熱恒溫水浴箱、碘酒棉球、酒精棉球、注射器等。酒精棉球、注射器等。 v 5 5、麻醉劑：烏拉坦：按大鼠、麻醉劑：烏拉坦：按大鼠 0.5ml/100g0.5ml/100g。 實(shí)驗(yàn)

4、試劑與器材實(shí)驗(yàn)試劑與器材（一）動(dòng)物準(zhǔn)備及取血一）動(dòng)物準(zhǔn)備及取血v1 1、動(dòng)物準(zhǔn)備及空腹采血、動(dòng)物準(zhǔn)備及空腹采血 取禁食取禁食1616小時(shí)大鼠一只，過磅稱重，小時(shí)大鼠一只，過磅稱重，并記錄體重并記錄體重。v2 2、取血并測(cè)定注射激素前血糖水平、取血并測(cè)定注射激素前血糖水平 大鼠大鼠斷尾取血斷尾取血，用，用血糖儀血糖儀測(cè)定血糖濃度（空腹血糖濃測(cè)定血糖濃度（空腹血糖濃度）并記錄度）并記錄“胰前胰前”或或“腎前腎前”。v3 3、注射激素、注射激素 按按0.5ml/100g0.5ml/100g腹腔注射胰島素或腎上腺素。記錄注腹腔注射胰島素或腎上腺素。記錄注藥時(shí)間。藥時(shí)間。 實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟v4 4、注射

5、胰島素或注射腎上、注射胰島素或注射腎上腺素腺素2020分鐘后，腹腔注射分鐘后，腹腔注射烏拉坦烏拉坦 0.5ml/100g0.5ml/100g，麻醉麻醉，腹主動(dòng)脈腹主動(dòng)脈取血取血，標(biāo)以，標(biāo)以“胰胰后后”或或“腎后腎后” ” 。v5 5、將收集的血液置離心機(jī)運(yùn)轉(zhuǎn)、將收集的血液置離心機(jī)運(yùn)轉(zhuǎn)5 5分鐘分鐘(3000/min.r)(3000/min.r)，分離出血漿，制備樣本管。分離出血漿，制備樣本管。 大鼠，禁食大鼠，禁食16小時(shí)，小時(shí)，稱重并記錄稱重并記錄腹腔注射腎上腺腹腔注射腎上腺素素0.3ml/100g ，記時(shí)記時(shí)20分鐘分鐘斷尾取血斷尾取血，用血糖儀測(cè)定，用血糖儀測(cè)定大鼠注射激素前血糖水平，大

6、鼠注射激素前血糖水平，并記錄胰前或腎前并記錄胰前或腎前腹腔注射腹腔注射胰島素胰島素0.3ml/100g ，計(jì)，計(jì)時(shí)時(shí)20分鐘分鐘按按 0.5ml/100g，皮下注射烏拉坦，皮下注射烏拉坦，麻醉麻醉將麻醉后大鼠捆綁將麻醉后大鼠捆綁于解剖臺(tái)上固定于解剖臺(tái)上固定將收集血液置離心機(jī)運(yùn)轉(zhuǎn)將收集血液置離心機(jī)運(yùn)轉(zhuǎn)5分鐘分鐘(3000/min轉(zhuǎn)轉(zhuǎn))，分，分離出血漿，制備樣本管。離出血漿，制備樣本管。 腹腔解剖，暴露腹主動(dòng)腹腔解剖，暴露腹主動(dòng)脈，抗凝負(fù)壓管脈，抗凝負(fù)壓管取血取血，輕輕振蕩，靜置輕輕振蕩，靜置葡萄糖氧化酶法試劑盒，葡萄糖氧化酶法試劑盒，分別測(cè)定血糖含量，并記分別測(cè)定血糖含量，并記錄錄“胰后胰后”或

7、或“腎后腎后”比較大鼠比較大鼠“胰前胰前”或或 “胰胰后后”血糖的差異以及血糖的差異以及“腎前腎前” 與與“腎后腎后”血糖的差異血糖的差異（二）血糖含量的測(cè)定（二）血糖含量的測(cè)定樣本管樣本管空白管空白管血清血清10ul蒸餾水蒸餾水10ul酶試劑酶試劑1ml1mlv置置37水浴水浴5分鐘，用波長分鐘，用波長505nm、比色杯光徑、比色杯光徑1.0cm，用空白管調(diào)，用空白管調(diào)“零零”點(diǎn)測(cè)定各管的吸光度點(diǎn)測(cè)定各管的吸光度（a）。）。v結(jié)果處理計(jì)算：結(jié)果處理計(jì)算： 樣本管吸光度（樣本管吸光度（a）葡萄糖（葡萄糖（mmol/l）標(biāo)準(zhǔn)液濃度（標(biāo)準(zhǔn)液濃度（5.55） 標(biāo)準(zhǔn)管吸光度標(biāo)準(zhǔn)管吸光度（a）（）（0.

8、24） v比較激素對(duì)血糖影響的百分?jǐn)?shù)。比較激素對(duì)血糖影響的百分?jǐn)?shù)。v本實(shí)驗(yàn)要求男女搭配本實(shí)驗(yàn)要求男女搭配,操作大鼠時(shí)要耐心大膽操作大鼠時(shí)要耐心大膽,特別特別注意不能放走大鼠注意不能放走大鼠.v大鼠注射激素后要放回大鼠籠大鼠注射激素后要放回大鼠籠!v打開腹腔時(shí)不要用厚的勞保手套打開腹腔時(shí)不要用厚的勞保手套!換戴一次性手套換戴一次性手套.v實(shí)驗(yàn)結(jié)束后統(tǒng)一收集大鼠尸體實(shí)驗(yàn)結(jié)束后統(tǒng)一收集大鼠尸體,仔細(xì)清理實(shí)驗(yàn)臺(tái)面仔細(xì)清理實(shí)驗(yàn)臺(tái)面,不要留有血跡不要留有血跡! 實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟討論思考v1 1、比較注射激素前、后血糖濃度的變化，這些變化說、比較注射激素前、后血糖濃度的變化，這些變化說明什么？明什么？v2 2、血糖主要有哪些代謝來源與去路？升糖激素和降糖、血糖主要有哪