白藜蘆醇通過SIRT1NF

1、白藜蘆醇通過SIRT1/NF- B 途徑抑制貢氏假鰓鳉腸道衰老相關(guān)的分泌表型隨著動物年齡的增長 , 衰老細(xì)胞在各種組織中積累, 分泌一系列炎癥細(xì)胞因子、趨化因子、生長因子和蛋白酶, 稱為衰老相關(guān)的分泌表型（senescenceassociated secretory phenotype）, 簡稱 SASP。衰老細(xì)胞還發(fā)生了細(xì)胞周期阻滯 , 增殖潛力、衰老相關(guān)的 ?- 半乳糖苷酶活性不可逆的丟失。許多 SASP的組分會影響周圍細(xì)胞和它們的微環(huán)境,SASP在細(xì)胞衰老、個體老化和衰老相關(guān)的疾病之間也許有作用。白藜蘆醇 , 一種 SIRT1 的激活劑 , 具有抗衰老、抗炎癥、抗氧化、抗自由基等多種藥理

2、學(xué)作用。貢氏假鰓鳉是一種生長在東非的硬骨魚, 具有壽命較短、繁殖速度快等優(yōu)點 ,已經(jīng)成為一種新興的研究衰老的動物模型。我們實驗室之前的研究顯示白藜蘆醇飼喂后顯著延長了貢氏假鰓鳉的壽命1,2。以前的研究發(fā)現(xiàn) NF-?B是 SASP的重要調(diào)節(jié)者 ,RelA/p65 是 NF-?B的亞基 ,I?B?是 NF-?B 的抑制蛋白 ,I?B? 磷酸化后激活 NF-B。有研究表明 ,SIRT1 通過去乙?；?RelA/p65 的 K310 位點來抑制 NF-B 的轉(zhuǎn)錄 3 。本實驗利用一年生的貢氏假鰓鳉作為研究對象 , 總共 144 尾魚 , 當(dāng)魚飼養(yǎng)至性成熟（ 4 月齡）時 , 隨機(jī)分成兩組 , 對照組和

3、處理組各 72 尾 : 實驗組喂食添加白藜蘆醇的食物（200?g/g 食物）, 對照組喂食不添加白藜蘆醇的食物 , 待魚長到 6、9 和 12 月齡時冰上處死取材。 在此三個不同的年齡階段, 為了檢測貢氏假鰓鳉腸道的老化情況 , 我們對 SA-?-gal 的活性進(jìn)行了檢測。為了探究老化對貢氏假鰓鳉腸道SASP的影響以及白藜蘆醇對SASP抑制作用的具體機(jī)制 , 我們分別使用了 ELISA、 qPCR、免疫組化、免疫印記、免疫沉淀和免疫共沉淀等方法進(jìn)行檢測。實驗結(jié)果顯示:1. 隨貢氏假鰓鳉的衰老 , 腸道的 ?-半乳糖苷酶活性呈現(xiàn)上升的趨勢, 而白藜蘆醇飼喂后降低了?- 半乳糖苷酶的活性。2. 為

4、了探究老化以及白藜蘆醇對貢氏假鰓鳉腸道 SASP的影響 , 我們用 qPCR、ELISA 的方法檢測了 SASP相關(guān)分泌因子的變化 , 發(fā)現(xiàn)隨魚的衰老 , 腸道中促炎細(xì)胞因子 IL-8 和 TNF?的水平逐漸增加 , 抗炎細(xì)胞因子 IL-10 的水平逐漸減少 , 而白藜蘆醇飼喂后顯著逆轉(zhuǎn)了這些細(xì)胞因子變化。3. 我們用 qPCR和免疫組化的方法檢測了貢氏假鰓鳉腸道中SIRT1 的水平 , 發(fā)現(xiàn)隨魚的衰老 , 腸道中 SIRT1 的 mRNA和蛋白表達(dá)水平都逐漸下降, 而白藜蘆醇飼喂后SIRT1 的表達(dá)顯著上升。4. 我們用 qPCR的方法檢測了貢氏假鰓鳉腸道中 NF-?B 的表達(dá) , 結(jié)果顯示

5、 , 隨魚的衰老 ,NF-?B 的 mRNA表達(dá)水平顯著上升 , 而白藜蘆醇飼喂后顯著降低了 NF-?B的表達(dá)。用 9 和 12 月齡的魚進(jìn)行免疫印跡實驗, 發(fā)現(xiàn)隨魚的衰老 ,RelA/p65 和p-I?B? 的蛋白水平顯著增加 , 而白藜蘆醇飼喂后顯著減少了RelA/p65 和 p-I?B?的表達(dá)。我們提取 9 月齡魚腸道的蛋白 , 沉淀等量的 RelA/p65 蛋白 , 用 Ac-Lys 抗體檢測 RelA/p65 的乙?；潭?, 發(fā)現(xiàn)白藜蘆醇減少了 RelA/p65 的乙?；?。免疫印跡檢測 SIRT1 的表達(dá) , 發(fā)現(xiàn)白藜蘆醇增加了 SIRT1 和 RelA/p65 復(fù)合物的形成 ,進(jìn)而抑制了 NF-?B 的活性 , 最終抑制了 SASP。5. 用免疫組化的方法檢測細(xì)胞增殖標(biāo)志物 PCNA和用免疫印跡的方法檢測干細(xì)胞標(biāo)志物 LGR5,發(fā)現(xiàn)隨魚的衰老 , 腸道上皮細(xì)胞和腸道干細(xì)胞的數(shù)量都顯著下降 , 而飼喂白藜蘆醇后顯著逆轉(zhuǎn)了上述情況。總之 , 白藜蘆醇激活 SIRT1, 通過減少 p-I?B? 和 Ac-RelA/p65, 進(jìn)而抑制了 NF-?B 的活性 , 降低了 SASP相關(guān)的促炎細(xì)胞因子 IL-8 和 TNF?的水平 , 增加了抗炎細(xì)胞因子IL-10 的水平 , 從而抑