LB培養(yǎng)基怎樣配制.doc

1、LB 培養(yǎng)基怎樣配制LB 一般被解釋為 Luria-Bertani ，然而根據(jù)其發(fā)明人貝爾塔尼 (Giuseppe Bertani) 的說法，這個(gè)名字來源于英語 lysogeny broth ，即溶菌肉湯。 LB 培養(yǎng)基是近年來用于培養(yǎng)基因工程受體菌 ( 大腸桿菌 ) 的常用培養(yǎng)基之一。LB 培養(yǎng)基是一種應(yīng)用最廣泛和最普通的細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基，有時(shí)又稱普通培養(yǎng)基，含有酵母提取物、胰化蛋白胨和 NaCl。酵母提取物：酵母經(jīng)破壁后將其中蛋白質(zhì)、核酸、維生素等抽提，再經(jīng)生物酶解的富含小分子的氨基酸、 肽、核苷酸、維生素等天然活性成分的淡黃色粉末，其中氨基酸含量 30%以上，總蛋白 50%以上，核苷酸 1

2、0%以上，廣泛用作生物培養(yǎng)基和食品調(diào)味品制造原料。胰化蛋白胨： 一種優(yōu)質(zhì)蛋白胨， 是以新鮮牛肉和牛骨經(jīng)胰酶消化， 濃縮干燥而成的白色粉末，含有豐富的氮源、氨基酸等。酵母提取物為微生物提供碳源、能源、磷酸鹽、生長(zhǎng)因子、維生素等 ; 蛋白胨主要提供氮源 ;NaCl 主要提供微生物生長(zhǎng)環(huán)境 ( 如滲透壓 ) ，其次是提供無機(jī)鹽。在配制固體培養(yǎng)基時(shí)還要加入一定量瓊脂作凝固劑。瓊脂在常用濃度下96時(shí)溶化，一般實(shí)際應(yīng)用時(shí)在沸水浴中或墊以石棉網(wǎng)直接煮沸溶化。瓊脂在40時(shí)凝固， 通常不被微生物分解利用。 固體培養(yǎng)基中瓊脂的含量根據(jù)瓊脂的質(zhì)量和氣溫的不同而有所不同。由于這種培養(yǎng)基多用于培養(yǎng)細(xì)菌，因此，要用稀酸或

3、稀堿將其 pH調(diào)至中性或微堿性，以利于細(xì)菌的生長(zhǎng)繁殖。LB 培養(yǎng)基配方 ( 每升 )酵母提取物 5g胰化蛋白胨 10g氯化鈉 10gNaOH調(diào) pH至 7.0 ，121、 20min 高壓滅菌。LB 固體培養(yǎng)基LB 培養(yǎng)基 1L瓊脂粉 15gNaOH調(diào) pH至 7.0 ，121、 20min 高壓滅菌。有時(shí)需在培養(yǎng)基中添加抗生素，瓊脂凝固點(diǎn)為40，所以添加抗生素最好在 5055。LB 培養(yǎng)基用途：用于一般細(xì)菌培養(yǎng)，特別用于分子生物學(xué)試驗(yàn)中大腸桿菌的保存和培養(yǎng)。LB 培養(yǎng)基使用原理：蛋白胨、酵母膏粉提供氮源、 維生素和生長(zhǎng)因子 ; 氯化鈉維持均衡的滲透壓 ; 葡萄糖提供碳源 ; 瓊脂是培養(yǎng)基的凝

4、固劑。LB 培養(yǎng)基配制方法配制每升 培養(yǎng)基，應(yīng)該在 950 ml 去液態(tài) lb 培養(yǎng)基離子水中加入：胰化蛋白胨 10g 酵母提取物 5g NaCl 10g搖動(dòng)容器直至溶質(zhì)溶解。用5mol/LNaOH調(diào) pH至 7.0 。用去離子水定容至1L。在 15psi 高壓下蒸汽滅菌 20min。1.LB 固體培養(yǎng)基 1L 和液體一樣，加 15g 瓊脂粉，一定要在溫度降下之前加好抗固態(tài) LB 培養(yǎng)基生素，并且倒好板。 LB 固體培養(yǎng)基倒板 1。配制： 100mlLB 培養(yǎng)基加入 1.5g 瓊脂粉2. 抗生素的加入：高壓滅菌后，將融化的 LB 固體培養(yǎng)基置與 55的水浴中，待培養(yǎng)基溫度降到 55時(shí) ( 手可觸摸 ) 加入抗生素，以免溫度過高導(dǎo)致抗生素失效，并充分搖勻。3. 倒板：一般 10ml 倒 1 個(gè)板子。培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿后，打開蓋子，在紫外下照 10-15