TaqMan-MGB探針熒光定量PCR反應(yīng)試劑盒

1、TaqMan-MGB 探針熒光定量 PCR 反應(yīng)試劑盒使用說明書（Cat#Yu-R01-1 ）【產(chǎn)品介紹】TaqMan-MGB 探針有許多特殊性質(zhì)： 1、Taqman-MGB 探針比普通 Taqman 探針（比如Taqman-TAMRA探針和Taqman-BHQ1探針）更短，一般為15bp左 右；2、MGB可以提高探針Tm值10C左右，提高配對與非配對模板間的Tm值 差異； 3、 MGB 探針特異性更高，可區(qū)分模板一個堿基的差異；4、 MGB 為不發(fā)光的熒光基團(tuán)， 并且與報告基團(tuán)的空間位置更接近， 可以使實(shí)驗的背景更低， 信 噪比更高，結(jié)果更精確，靈敏度更高。Taqman-MGB探針的特點(diǎn)使其

2、多應(yīng)用于普 通Taqman探針不能勝任的領(lǐng)域，比如SNP分型、已知點(diǎn)突變的突變型和雜合子 基因的檢測以及 microRNA 的檢測。由于具有普通外切酶活性的 DNA 聚合酶很難酶切水解 MGB 探針。另外， 由于Taqman-MGB探針在識別模板的過程中影響因素較多， 普通Taqman探針的 熒光定量 PCR 反應(yīng)液并不適用于 Taqman-MGB 探針。本公司專利技術(shù)生產(chǎn)的 TaqMan-MGB 探針專用熒光定量反應(yīng)試劑盒在許多 性能上完全超越國外同類產(chǎn)品， 性能優(yōu)良， 結(jié)果可靠。 本產(chǎn)品還可以應(yīng)用于普通 Taqman探針（比如Taqman-TAMRA探針和Taqman-BHQ1探針），同時

3、對FAM、 HEX 和 VIC 等熒光物質(zhì)的有明顯的熒光增強(qiáng)效果。【產(chǎn)品特點(diǎn)】1. 適用于使用 TaqMan-MGB 探針、 Taqman-TAMRA 探針和 Taqman-BHQ1 探針 的實(shí)時熒光定量PCR，對FAM、HEX和VIC等熒光物質(zhì)的有明顯的熒光增強(qiáng)效 果。結(jié)合本公司的各種 miRNA 提取試劑盒（ Cat#Yu-Mi01-1， Cat#Yu-Mi02-1， Cat#Yu-Mi02-2，Cat#Yu-Mi03-1），可以進(jìn)行多種游離 DNA 和 miRNA 的檢測。2. 靈敏度高：本產(chǎn)品的擴(kuò)增效率為 96.149%, R2為0.995,擴(kuò)增microRNA的效 率是進(jìn)口產(chǎn)品 4倍

4、以上（圖 1-2，表 1-2）。3. 穩(wěn)定性好：本產(chǎn)品重復(fù)好，CV值2%。4. 操作簡單： 只需在反應(yīng)體系中加入引物、探針、模板和 ROX 。5. 本產(chǎn)品使用熱啟動酶，可以進(jìn)行 Hot Start法PCR反應(yīng)。6.本產(chǎn)品無本品無OSHA規(guī)定的危險物品，安全無化學(xué)污染Inlarvi MelMifi yn昭Hui Fite il*n* CHI* *申鼻 14ehUM韶 * RM 3IriiMAjHT牛-【適用儀器】Thermal Cycler系列熒光疋量 PCR儀Applied Biosystems系列熒光疋量 PCR儀、Roche Diag no sties LightCycler 系列熒光定量

5、PCR 儀、Bio-Rad CFX96Real-Time PCR Detectio n System等。表1進(jìn)口產(chǎn)品的microRNA-21標(biāo)準(zhǔn)曲線結(jié)果濃度（Copies/匕）Ct值10437.91910533.75910630.33310726.294M!|_llAQH TFMIJ Sm cunrlXi itn ttataii圖1進(jìn)口產(chǎn)品的microRNA-21標(biāo)準(zhǔn)曲線Slandud CurvnLUrH尹戶呂電淫拳Amplltficittoni Ploft3 呈 M-M- R R r.wJs&h.r.wJs&h.卻護(hù)！slactuMAsjslactuMAsj1717蟲擰2323遼為5050

6、耳3-13-1Hrjnvva airwegALti*iT*fM Tirtl! M ihiafc jjSjj5 口 Jri QWV *Tmo Ji rh* NLBJ-口口 口口口 口口口口口口 口s口口 dan 口 口口口&7&7口小片須1:1:呷eMs-eMs-口 aAUmH/AilMHnuEPIrlfrllQL:-aAUmH/AilMHnuEPIrlfrllQL:-口口aeDmcB 迅 mralmral 出Adupp.wuuMl+.ll-1T1s:2c2JZTp74ld;2JR:RAIAdupp.wuuMl+.ll-1T1s:2c2JZTp74ld;2JR:RAI_口口口 口 Do 表2本產(chǎn)

7、品的microRNA-21標(biāo)準(zhǔn)曲線結(jié)果濃度（Copies/匕）Ct值10435. 12210531.12461028.12310724.790圖2本產(chǎn)品的microRNA-21標(biāo)準(zhǔn)曲線【試劑盒組成】試劑盒組成數(shù)量保存條件TaqMan-MGB探針熒光定量PCR反應(yīng)預(yù)混液（5為200丄-20 C保存Rox dye 2 (50 X)15丄-20 C保存ddH2O1mL使用說明書1份3X.L23Siindud Curv1 1 ? ? J J + +1 1rairlvffi-EM.rairlvffi-EM.崎舊 *躊M M沖個 mgnAflnMv3mgnAflaaL2KHlaaL23 3口番CMCM【規(guī)

8、格】50T/盒【貯藏與有效期】PCR反應(yīng)預(yù)混液-20C保存，有效期12個月。開蓋后，4C保 存，有效期2周。Rox dye 2（50 x） -20C保存，有效期24個月?！居行С煞帧縏ris-Hcl，氯化鉀，氯化鎂【注意事項】使用前務(wù)必認(rèn)真閱讀以下注意事項。1. 使用前充分融解，輕輕顛倒混勻，避免起泡，短暫離心后使用。2. 反應(yīng)液的配制和分裝務(wù)必使用無污染的尖嘴、EP管等。3. 如果配制試劑時間較長，請將融解后的反應(yīng)液于冰上放置。4試劑盒僅供科研使用。【操作步驟】1、在無菌潔凈PCR管中依次加入以下試劑：成分加入量（丄）終濃度PCR反應(yīng)預(yù)混液（5X41 X上游引物（10gM）0.60.3 M下

9、游引物（10gM）0.60.3 M探針（10gM）0.40.2 M模板2ddH2O12.15Rox dye 2 ( 50 X0.25總體積20注：以下僅為建議，最佳條件需要各個實(shí)驗室摸索。 通常引物濃度為0.30.3 M M可以獲得很好的結(jié)果。反應(yīng)不佳時，引物濃度可以在 0.110.11 M M范圍內(nèi)調(diào)整。 使用的探針濃度與定量PCRPCR儀、探針種類和熒光標(biāo)記物質(zhì)有關(guān)。通常探針終 濃度在0.10.50.10.5 M M范圍內(nèi)調(diào)整。 模板添加量因模板溶液中靶基因的拷貝數(shù)不同而不同，模板添加量最好在100ng100ng以下。RNA/MicroRNARNA/MicroRNA模板的添加量最好不要超過總體積的 10%10%。RoxRox是否加入視儀器而定。2、充分混勻后短暫離心。3、擴(kuò)增：95