TSH熒光酶免疫分析法

1、tsh熒光酶免疫檢測法本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!相關(guān)幫助n需要相關(guān)抗體試劑的可以訪問fantibody全球抗體搜索引擎nfantibody全球抗體搜索引擎是一個供公共檢索的抗體數(shù)據(jù)庫，其抗體信息數(shù)據(jù)來源于全球范圍的研究機構(gòu)與商業(yè)公司。該引擎由商品化抗體數(shù)據(jù)庫與抗體應(yīng)用評價數(shù)據(jù)庫兩部分組成，以幫助研究者更高效的尋找并評估該抗體的性能。全球抗體搜索引擎是繼基因與蛋白數(shù)據(jù)庫之后更為復(fù)雜的應(yīng)用型檢索平臺n需要相關(guān)的實驗室儀器設(shè)備、生物試劑、醫(yī)療器械、制藥設(shè)備、醫(yī)藥原料、體外診斷試劑及耗材與技術(shù)服務(wù)信息的，可以訪問探生網(wǎng)biomean進行咨詢，期待

2、您的加入本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!一、先天性甲低的新生兒篩查方法n1、酶免疫分析法 (enzymelmmunoassay，eia)n2、放射免疫分析法 (radioimmunoassay，ria)n3、免疫放射法 (immunoradiometricassay，irma)本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!一、先天性甲低的新生兒篩查方法n4、時間分辨熒光免疫分析法 trfia me-resolvedfluorescenceimmunoassayn5、熒光酶免疫分析法feia fluoresee

3、nceenzymeimmunoassayn6、自動新生兒疾病篩查系統(tǒng)(automatednewbornscreeningsystem)本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!tsh熒光酶免疫分析法本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!1、原 理本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!1原理n熒光酶免疫分析法(feia)是一種高度靈敏的檢測方法，用feia測定血htsh基于一步夾心法一步夾心法原理，采用固相、雙位點固相、雙位點熒光酶免疫分析法。n干血斑中洗滌出的htsh

4、，同時與包被在酶標(biāo)板上抗htsh的單克隆抗體分子和辣根過氧化物酶(hrp)標(biāo)記的抗htsh亞基的第二抗體結(jié)合。本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!被測tsh抗原被測tsh抗原有兩個抗原決定簇 故叫雙位點位點位點本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!tsh單克隆抗體tsh單克隆抗體tsh單克隆抗體包被在反應(yīng)板上的tsh單克隆抗體故叫固相本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!hpr標(biāo)記的抗tsh亞基單克隆抗體hrp位點本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全

5、球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!tsh單克隆抗體被測tsh抗原tsh單克隆抗體tsh單克隆抗體被測tsh抗原被測tsh抗原h(huán)pr標(biāo)記的抗tsh亞基單克隆抗體hpr標(biāo)記的抗tsh亞基單克隆抗體hpr標(biāo)記的抗tsh亞基單克隆抗體hpr標(biāo)記的抗tsh亞基單克隆抗體hrp被測tsh抗原被測tsh抗原h(huán)rphrphrptshtsh單克隆抗體的酶標(biāo)反應(yīng)孔內(nèi)。（一步法）單克隆抗體的酶標(biāo)反應(yīng)孔內(nèi)。（一步法）ph：6.5本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!tsh單克隆抗體被測tsh抗原tsh單克隆抗體tsh單克隆抗體被測tsh抗原被測tsh抗原h(huán)pr標(biāo)記的抗tsh

6、亞基單克隆抗體hpr標(biāo)記的抗tsh亞基單克隆抗體hpr標(biāo)記的抗tsh亞基單克隆抗體hpr標(biāo)記的抗tsh亞基單克隆抗體hrp被測tsh抗原被測tsh抗原h(huán)rphrphrphpr標(biāo)記的抗tsh亞基單克隆抗體hpr標(biāo)記的抗tsh亞基單克隆抗體被測tsh抗原被測tsh抗原h(huán)rphrp本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!tsh單克隆抗體被測tsh抗原tsh單克隆抗體tsh單克隆抗體被測tsh抗原被測tsh抗原h(huán)pr標(biāo)記的抗tsh亞基單克隆抗體hpr標(biāo)記的抗tsh亞基單克隆抗體hpr標(biāo)記的抗tsh亞基單克隆抗體hrphrphrp本文由探生科技技術(shù)人員提供,fa

7、ntibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!tsh單克隆抗體被測tsh抗原tsh單克隆抗體tsh單克隆抗體被測tsh抗原被測tsh抗原h(huán)pr標(biāo)記的抗tsh亞基單克隆抗體hpr標(biāo)記的抗tsh亞基單克隆抗體hpr標(biāo)記的抗tsh亞基單克隆抗體hrphrphrpph：7.8本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!2hppa+h2o2 dpdpa+2h2ohrp本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!原理n以甘氨酸緩沖液終止酶反應(yīng)。ph：10.3本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊

8、的抗體專家!原理n用熒光讀數(shù)儀以320nm為激發(fā)光，405nm為發(fā)射光測定熒光值。由于熒光強度與酶標(biāo)反應(yīng)板上結(jié)合的htsh數(shù)量成正比，因此，通過已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)血斑熒光值和樣本的熒光值，也就可換算出樣本血斑中htsh的含量。本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!特點：n熒光物質(zhì)為dpdpa，是由hppa與雙氧水在hrp的作用下脫氫結(jié)合而成，它吸收特定波長（320nm）的光能后，發(fā)生原子重排，同時發(fā)射出更長波長（405nm）的光。 激發(fā)光波長320nm發(fā)光波長405nm本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!特點

9、：n鑒于hppa（3-p-羥基苯丙酸）敏感性高、動力學(xué)范圍廣，已被廣泛用于替代傳統(tǒng)eia顯色劑，作為辣根過氧化物酶的底物。以hppa作底物的feia可檢測極低和極高濃度，具有明顯優(yōu)勢，由于htsh樣本正常值與非正常值之間差異大，故該法特別適用于htsh檢測。本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!特點：nhppah2o2反應(yīng)生成的熒光強度的影響因素中，最重要的是底物濃度、反應(yīng)液和終止液的ph值。酶反應(yīng)最佳ph值為7.8。加入堿性緩沖液終止酶反應(yīng)，又可顯著增強熒光強度。經(jīng)測定，使用ph10.3、1.5 moll甘氨酸緩沖液可獲得最大熒光強度。在低濃度ht

10、sh下，該緩沖液可使熒光強度增加5倍，當(dāng)htsh濃度高于80miul時，增強作用依次減弱。本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!特點：n熒光產(chǎn)物穩(wěn)定，可放置過夜后測定。無論在室溫(2025)或30孵育用feia測定htsh的敏感性無變化；而在37條件下孵育會增加背景熒光，降低靈敏度。建議底物孵育溫度為2030。本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!特點nfeia檢測法方法先進，重復(fù)性高。n一般情況下，批內(nèi)分析變異系數(shù)和批間分析變異系數(shù)均小于10。本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎

11、，您身邊的抗體專家!特點n應(yīng)用feia法進行htsh檢測時，其他垂體激素和人絨毛膜促性腺激素(hcg)對實驗的干擾極小。本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!2、儀器和試劑本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!以下儀器均由芬蘭labsystems公司提供本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!(1)、儀器：n、熒光讀數(shù)儀；、孵育振蕩儀；、自動洗板儀；、3mm打孔器，或打孔鉗；、加樣器；八道加樣器。以上儀器均由芬蘭labsystems公司提供。、3mm實驗血片塑料支架

12、；、電腦、打印機；、冰箱。本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!材料n、新生兒篩查濾紙干血斑標(biāo)本：用s&s903濾紙，按新生兒疾病篩查濾紙干血斑標(biāo)本采集方法采集；本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!試劑本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!試劑n、抗htsh包被的酶標(biāo)板（1）：抗htsh抗體igg(小鼠單克隆抗體)包被的酶標(biāo)板，濃度1.0g/m1。所有包被酶標(biāo)板均置于有干燥劑的錫箔密封袋中以防止潮濕。潮濕將破壞酶標(biāo)板的包被，嚴(yán)重縮短試劑盒保存期。試劑盒通常儲存在

13、28，為防止打開錫箔密封袋時水蒸氣凝結(jié)破壞酶標(biāo)板性能，試劑盒使用前需置室溫半小時后再打開。若錫箔密封袋在使用前受損或干燥劑變色，請勿使用；本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!n、抗htshhrp酶結(jié)合物（2） ：辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗htsh(小鼠單克隆抗體濃度50ngiggm1)抗體，加02的kathoncge作為防腐劑；本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!n、酶結(jié)合物稀釋液（3） ：緩沖鹽溶液，ph6.5，加0.2的kathoncg作為防腐劑。用于酶結(jié)合物的稀釋；試劑本文由探生科技技術(shù)人員提供,fa

14、ntibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!n、hppa熒光底物（4a） ：3p羥基苯丙酸溶于tris緩沖液(ph7.8)中，加0.2的kathoncge作為防腐劑；本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!n、h2o2溶液（4b） ：檸檬酸醋酸緩沖液，ph6.0，含過氧化氫。避免與氧化還原劑接觸；本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!n、終止液：甘氨酸緩沖液（5） ，ph10.3；本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!n、洗滌液（6） ：含有吐溫20的磷酸鹽緩

15、沖液，加入0.05bronidox作為防腐劑。按1:9比例加入蒸餾水稀釋。由于儲于4可能形成結(jié)晶，稀釋前溫度需達(dá)1830；本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!n、htsh標(biāo)準(zhǔn)品（7） ：tsh存在于干血濾紙片的血斑中，包括一個零空白。存于裝有干燥劑的鋁箔袋中。加入0.05bronidox作為防腐劑。標(biāo)準(zhǔn)品由紅細(xì)胞壓積為50一55的人血液制得，所含的htsh濃度經(jīng)過who2nd irp(80558)校正；本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!n、質(zhì)控物（8） ：htsh存在于濾紙上的干血濾紙血斑中。加入00

16、5bronidox作為防腐劑。1張濾紙中具有5套2種濃度質(zhì)控物(品)，存于裝有干燥劑的鋁箔袋中。n標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控物(品)的tsh濃度有批號差異，需參照每一試劑盒中的標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控物(品)的記錄單。本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!試劑盒內(nèi)的tsh標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控物的濃度標(biāo)準(zhǔn)血片tsh濃度（miu/l）質(zhì)控物tsh濃度（miu/l）a1.0c12b7.5c220c15.0d40e60f100本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!3、實驗操作本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗

17、體專家!實驗操作步驟n(1)用編碼機給每一張血片按次序蓋上卡片號，此卡片號也就是我們的檢驗編號。n在檢驗前，所有的試劑和酶標(biāo)反應(yīng)板應(yīng)放置室溫平衡30分鐘。本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!實驗操作步驟n(2)做好實驗登記，包括檢測日期、檢測區(qū)間、復(fù)查樣本號等。n編寫好實驗操作卡；把本次實驗要做的標(biāo)準(zhǔn)、質(zhì)控、復(fù)查標(biāo)本、重查標(biāo)本及常規(guī)標(biāo)本的卡片號在電腦中用不同的顏色的字打印出來，看上去一目了然，嚴(yán)防打孔時張冠李戴。本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!第一板12345678910 11 12aae33333

18、900019000990017900259003390041900499005790065bae33333cbf66666dbf66666ecc188888fcc188889gdc289993hdc28999890072試劑批號：試劑批號：163zc1 標(biāo)準(zhǔn)濃度：標(biāo)準(zhǔn)濃度：1、9、20、44、66、87。質(zhì)控批號：質(zhì)控批號：163zc1 范范 圍：圍：高值：高值：14-37，中值，中值26。低值：低值：0-5，中值，中值3.0。佛山市新生兒疾病篩查中心實驗操作卡佛山市新生兒疾病篩查中心實驗操作卡 檢測項目檢測項目: tsh 檢測時間檢測時間: 2003年年11月月11日日 操作者：操作者：本文

19、由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!實驗操作步驟n（3）對照操作卡在濾紙血斑上打下直徑3mm的標(biāo)準(zhǔn)品(雙孔)、質(zhì)控物(品)(雙孔)和標(biāo)本，并依次放置到抗htsh包被的酶標(biāo)板孔內(nèi)。注意：為避免層析效應(yīng)，應(yīng)圍繞血樣點中央對稱地打孔。本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!血斑打孔的位置打孔時要選擇合格的血斑，同時要選擇合適的地方，兩面都要看一下。由于層析效應(yīng)中心位比周邊位的濃度要高10%左右。正確太靠邊太中心本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!實驗操作步驟n(4)加入2

20、00l抗htshhrp酶結(jié)合物。然后用膠膜覆蓋密封。n配制抗htshhrp酶結(jié)合物溶液：一個酶標(biāo)反應(yīng)板需配量，200l酶結(jié)合物（2號溶液）加20ml酶結(jié)合物稀釋液（3號溶液）。本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!實驗操作步驟n(5)選擇以下步驟進行孵育：過程a：室溫(1830)振蕩孵育3小時，振蕩速率650轉(zhuǎn)分。過程b：室溫(1830)振蕩15分鐘，4過夜孵育。備注：室溫超過30，最好選擇過程b孵育，以避免高本底干擾。本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!實驗操作步驟n(6)洗板n手工洗滌：去掉溶液和濾紙

21、片， 每孔加入300l的洗滌液，倒去孔內(nèi)液體并拍打，使孔內(nèi)無殘液，重復(fù)操作4次，倒置于紙巾上；n洗板儀洗滌：洗滌液每孔400l，先洗滌一次，甩掉溶液和濾紙片，再重復(fù)洗滌4次。n使用電動打孔去紙片系統(tǒng)可簡化實驗操作。如labsystems公司的電動打孔器可將樣品固定在一次性塑料支架上，將帶有樣品紙片的支架插入酶標(biāo)板反應(yīng)孔內(nèi)進行反應(yīng)。孵育結(jié)束后，樣品紙片和支架一同去除。本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!實驗操作步驟n(7)每孔加入200l底物溶液。底物溶液的配制：每個3酶標(biāo)反應(yīng)板配60ml，即50mlhppa溶液（4a溶液）加10ml雙氧水溶液（4b溶液）。n(8)室溫1830振蕩孵育l小時。n(9)每孔加入100l終止液，即甘氨酸緩沖液（5號溶液） 。n(10)在60分鐘內(nèi)，用熒光讀數(shù)儀測定各孔的熒光值。本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!實驗操作步驟打孔本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!4、結(jié)果計算本文由探生科技技術(shù)人員提供,fantibody全球抗體搜索引擎，您身邊的抗體專家!結(jié)果計算n測量結(jié)束后，可利用電腦工作軟進行自動