細(xì)菌病的一搬診斷程序

1、第三節(jié)第三節(jié) 細(xì)菌的人工培養(yǎng)細(xì)菌的人工培養(yǎng) 是指把細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖所需的各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)是指把細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖所需的各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì) 合理地調(diào)配在一起制成的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。合理地調(diào)配在一起制成的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。 一、一、培養(yǎng)基的概念培養(yǎng)基的概念二、培養(yǎng)基種類二、培養(yǎng)基種類 液體培養(yǎng)基、固體培養(yǎng)基和半固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基、固體培養(yǎng)基和半固體培養(yǎng)基三三種。種。液體培養(yǎng)基：液體培養(yǎng)基：含有各種營(yíng)養(yǎng)成分的水溶液。含有各種營(yíng)養(yǎng)成分的水溶液。 固體培養(yǎng)基：固體培養(yǎng)基：在液體培養(yǎng)基中加入在液體培養(yǎng)基中加入2 23%3%瓊脂瓊脂即為固體培養(yǎng)基。即為固體培養(yǎng)基。半固體培養(yǎng)基：半固體培養(yǎng)基：加入加入0.0.3 3 0.5% 0.5%瓊脂即為

2、半固瓊脂即為半固體培養(yǎng)基。體培養(yǎng)基。( (一一) )按其物理性狀分為按其物理性狀分為 1、基礎(chǔ)培養(yǎng)基、基礎(chǔ)培養(yǎng)基 含有培養(yǎng)一般細(xì)菌的最基本成分。含有培養(yǎng)一般細(xì)菌的最基本成分?？晒┐蠖嗫晒┐蠖鄶?shù)細(xì)菌人工培養(yǎng)用。如肉湯培養(yǎng)基、普通瓊脂培數(shù)細(xì)菌人工培養(yǎng)用。如肉湯培養(yǎng)基、普通瓊脂培養(yǎng)基和蛋白胨水等。養(yǎng)基和蛋白胨水等。( (二二) )按其用途分為按其用途分為2 2、營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基、營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基 于基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入于基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入高營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)如葡萄高營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)如葡萄糖、血液、血清、腹水、生長(zhǎng)因子糖、血液、血清、腹水、生長(zhǎng)因子等，以等，以滿足營(yíng)養(yǎng)要求較高的細(xì)菌生長(zhǎng)需要。有的滿足營(yíng)養(yǎng)要求較高的細(xì)菌生長(zhǎng)需要。有的細(xì)菌還

3、需加入特殊物質(zhì)，如結(jié)核桿菌需加細(xì)菌還需加入特殊物質(zhì)，如結(jié)核桿菌需加入雞蛋清、馬鈴薯、甘油等才能良好生長(zhǎng)。入雞蛋清、馬鈴薯、甘油等才能良好生長(zhǎng)。3、選擇培養(yǎng)基、選擇培養(yǎng)基 在培養(yǎng)基中加入某些化學(xué)物質(zhì)，而選在培養(yǎng)基中加入某些化學(xué)物質(zhì)，而選擇性地?fù)裥缘刈層蛛x的細(xì)菌旺盛生長(zhǎng)的培養(yǎng)基，讓欲分離的細(xì)菌旺盛生長(zhǎng)的培養(yǎng)基，使用后可以達(dá)到選擇分離的目的。如膽鹽使用后可以達(dá)到選擇分離的目的。如膽鹽和薔薇色酸可以選擇性地抑制和薔薇色酸可以選擇性地抑制g+g+菌的生長(zhǎng)，菌的生長(zhǎng)，而不影響而不影響gg菌的生長(zhǎng)。在培養(yǎng)基中加入菌的生長(zhǎng)。在培養(yǎng)基中加入二藥后可選擇性地分離出腸道桿菌。二藥后可選擇性地分離出腸道桿菌。 利用

4、細(xì)菌分解底物及其代謝產(chǎn)物的利用細(xì)菌分解底物及其代謝產(chǎn)物的不同，可不同，可在培養(yǎng)基中加入某種物質(zhì)和指在培養(yǎng)基中加入某種物質(zhì)和指示劑示劑，即制為鑒別培養(yǎng)基，目的是使得，即制為鑒別培養(yǎng)基，目的是使得混合在一起的多種細(xì)菌在同一種培養(yǎng)基混合在一起的多種細(xì)菌在同一種培養(yǎng)基上生長(zhǎng)時(shí)，表現(xiàn)出不同的、肉眼可鑒別上生長(zhǎng)時(shí)，表現(xiàn)出不同的、肉眼可鑒別的變化，從而達(dá)到鑒別細(xì)菌的目的。的變化，從而達(dá)到鑒別細(xì)菌的目的。 4 4、鑒別培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基5.5.厭氧培養(yǎng)基厭氧培養(yǎng)基 厭氧菌不能在有氧環(huán)境中生長(zhǎng)。厭氧菌不能在有氧環(huán)境中生長(zhǎng)。將培養(yǎng)基與空將培養(yǎng)基與空氣隔絕，或向培養(yǎng)基中加入一些物質(zhì)，使培養(yǎng)氣隔絕，或向培養(yǎng)基中加入一

5、些物質(zhì)，使培養(yǎng)基中的氧氣耗盡基中的氧氣耗盡，則可用于培養(yǎng)厭氧菌。如肝則可用于培養(yǎng)厭氧菌。如肝片肉湯培養(yǎng)基，應(yīng)用時(shí)于液體表面加蓋液體石片肉湯培養(yǎng)基，應(yīng)用時(shí)于液體表面加蓋液體石蠟以隔絕空氣。蠟以隔絕空氣。區(qū)分選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基區(qū)分選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基 選擇培養(yǎng)基上的菌類，有選擇培養(yǎng)基上的菌類，有2種或兩種以上種或兩種以上時(shí)，時(shí)，只有適應(yīng)環(huán)境（選擇培養(yǎng)基的基底）只有適應(yīng)環(huán)境（選擇培養(yǎng)基的基底）的菌種才能存活的菌種才能存活。 鑒別培養(yǎng)基上的菌類，有兩種或兩種以鑒別培養(yǎng)基上的菌類，有兩種或兩種以上時(shí)，在培養(yǎng)基中加入某種試劑或化學(xué)上時(shí)，在培養(yǎng)基中加入某種試劑或化學(xué)藥品，使培養(yǎng)后會(huì)發(fā)生某種變化，從而藥

6、品，使培養(yǎng)后會(huì)發(fā)生某種變化，從而區(qū)別不同類型的微生物（但區(qū)別不同類型的微生物（但培養(yǎng)基上的培養(yǎng)基上的各個(gè)菌種均不死亡各個(gè)菌種均不死亡）。）。 三、制備培養(yǎng)基的基本程序三、制備培養(yǎng)基的基本程序配料配料溶化溶化測(cè)定及矯正測(cè)定及矯正phph過(guò)濾過(guò)濾分裝分裝滅菌滅菌無(wú)菌檢驗(yàn)無(wú)菌檢驗(yàn)備用備用培養(yǎng)基的基本要求培養(yǎng)基的基本要求1.含有豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，不含任何抑菌物質(zhì)。2.具有適當(dāng)?shù)膒h值和水分。3.均勻透明，易于觀察。4.經(jīng)過(guò)滅菌和無(wú)菌檢驗(yàn)。1 1、細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)現(xiàn)象：、細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)現(xiàn)象： 觀察細(xì)菌在平板上的菌落特征：觀察細(xì)菌在平板上的菌落特征： 菌落：細(xì)菌接種在固體培養(yǎng)基上，經(jīng)過(guò)一菌

7、落：細(xì)菌接種在固體培養(yǎng)基上，經(jīng)過(guò)一定時(shí)間的培養(yǎng)后，表面可出現(xiàn)肉眼可見的單個(gè)定時(shí)間的培養(yǎng)后，表面可出現(xiàn)肉眼可見的單個(gè)細(xì)菌集團(tuán)，稱為菌落。細(xì)菌集團(tuán)，稱為菌落。四、細(xì)菌在培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)情況四、細(xì)菌在培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)情況形態(tài)、大小、邊緣、表面構(gòu)造（濕潤(rùn)度和光滑形態(tài)、大小、邊緣、表面構(gòu)造（濕潤(rùn)度和光滑度）、隆起度、透明度、顏色等，及在血平板度）、隆起度、透明度、顏色等，及在血平板上的溶血現(xiàn)象（上的溶血現(xiàn)象（溶血、溶血、溶血）。溶血）。2、細(xì)菌在半固體培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)現(xiàn)象 有鞭毛的細(xì)菌，沿有鞭毛的細(xì)菌，沿穿剌線呈模糊穿剌線呈模糊羽毛羽毛狀狀生長(zhǎng)。生長(zhǎng)。 無(wú)鞭毛的細(xì)菌，沿?zé)o鞭毛的細(xì)菌，沿穿剌線呈穿剌線呈清晰清晰

8、的線的線狀生長(zhǎng)狀生長(zhǎng)。3、細(xì)菌在液體培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)現(xiàn)象 觀察肉湯培養(yǎng)物的觀察肉湯培養(yǎng)物的混濁度、管底沉淀、混濁度、管底沉淀、肉湯表面菌膜或菌肉湯表面菌膜或菌環(huán)，以及有無(wú)汽泡環(huán)，以及有無(wú)汽泡等。等。 臨床標(biāo)本預(yù)處理增 菌接種培養(yǎng)基，分離單個(gè)菌落各種鑒定試驗(yàn)涂片染色快速診斷試驗(yàn)生化試驗(yàn)血清學(xué)實(shí)驗(yàn)涂片染色藥敏試驗(yàn)動(dòng)物試驗(yàn)初步診斷報(bào)告最終診斷報(bào)告第四節(jié)第四節(jié) 細(xì)菌病的一般診斷程序細(xì)菌病的一般診斷程序 一、病料的采集、保存及運(yùn)送一、病料的采集、保存及運(yùn)送二、細(xì)菌的形態(tài)檢查二、細(xì)菌的形態(tài)檢查 1.1.單染色法單染色法 2.2.復(fù)染色法復(fù)染色法革蘭氏（革蘭氏（g）染色法染色法 革蘭氏陽(yáng)性菌（革蘭氏陽(yáng)性菌（g g+ +菌）藍(lán)紫色菌）藍(lán)紫色革蘭氏陰性菌（革蘭氏陰性菌（g g- -菌菌）紅色紅色細(xì)菌的接種培養(yǎng)方法 1.傾注平皿接種法 2.平板劃線分離法 3.斜面接種法 4.穿刺接種法 5.液體培養(yǎng)基接種法三、細(xì)菌的分離培養(yǎng)三、細(xì)菌的分離培養(yǎng)必須用純培養(yǎng)物鑒定必須用純培養(yǎng)物鑒定選用單個(gè)菌落選用單個(gè)菌落四、細(xì)菌的生化試驗(yàn)四、細(xì)菌的生化試驗(yàn) 1.1.糖分解試驗(yàn)糖分解試驗(yàn) 2.2.維維- -培試驗(yàn)培試驗(yàn) 3.3.甲基紅試驗(yàn)甲基紅試驗(yàn) 4.4.枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)枸櫞酸鹽利用試驗(yàn) 5.5.吲哚試驗(yàn)吲哚試驗(yàn) 6.6.硫化氫試驗(yàn)硫化氫試驗(yàn) 7.7.觸媒試驗(yàn)觸媒