食品中動(dòng)物用藥殘留量檢驗(yàn)方法-抗原蟲劑多重殘留分析

1、食品中動(dòng)物用藥殘留量檢驗(yàn)方法抗原蟲劑多重殘留分析99 年 3 月 12 日署授食字第0991900107號(hào)公告1.適用範(fàn)圍：本檢驗(yàn)方法適用於畜禽產(chǎn)品中抗原蟲劑那寧素（narasin）、海樂福精（ halofuginone）、羅苯嘧啶（robenidine hydrochloride）、戴克拉爾（diclazuril ）、乃卡巴精（ nicarbazin）、待美嘧唑（ dimetridazole）及硝基甲嘧唑乙醇（ metronidazole）之檢驗(yàn)。2. 檢驗(yàn)方法 ：液相層析串聯(lián)質(zhì)譜法 （ liquid chromatography/tandem mass spectrometry, LC/

2、MS/MS）。2.1.裝置：2.1.1.液相層析串聯(lián)質(zhì)譜儀：2.1.1.1.離子源：電灑離子化（electrospray ionization, ESI）。2.1.1.2.層析管： ACQUITY UPLC ? HSS T3，1.8 m，2.1 mm 10 cm ，或同級(jí)品。2.1.2.均質(zhì)機(jī)（ Homogenizer）。2.1.3.旋渦混合器（Vortex mixer ）。2.1.4.超音波震盪器（Ultrasonic vibrator ）。2.1.5.離心機(jī)（ Centrifuge）：轉(zhuǎn)速可達(dá)4000 rpm 以上者。2.1.6.固相真空萃取裝置（Solid phase extractio

3、n vacuum manifolds）。2.1.7.氮?dú)庹舭l(fā)裝置（Nitrogen evaporator）。2.2. 試藥：乙腈及甲醇均採用液相層析級(jí)；甲酸、二甲基甲醯胺（dimethylformamide ）、無水硫酸鈉及乙醇均採用試藥特級(jí)；海樂福精乳酸鹽標(biāo)準(zhǔn)原液（halofuginone lactate 100g/mL，相當(dāng)於含海樂福精82.2 g/mL），那寧素、羅苯嘧啶、戴克拉爾、乃卡巴精、待美嘧唑及硝基甲嘧唑乙醇對(duì)照用標(biāo)準(zhǔn)品；dimetridazole-d3（ DMZ-d 3 ）、4,4 -dinitrocarbanilide-d 8 （ DNC-d8）及 metronidazole

4、-d3（ MNZ-d 3）同位素內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)品。2.3.器具及材料：2.3.1.塑膠離心管：50 mL。2.3.2.固相萃取匣（Solid phase extraction cartridge）： Sep-Pak? silica, 1 g, 6 mL ，或同級(jí)品。2.3.3.濾膜：孔徑0.22m， Nylon 材質(zhì)。2.3.4.容量瓶： 50 mL。2.4.移動(dòng)相溶液之調(diào)製：2.4.1.移動(dòng)相溶液A：乙腈與甲酸以99.9： 0.1（ v/v）之比例混勻，以濾膜過濾，取濾液供作移動(dòng)相溶液A 。2.4.2.移動(dòng)相溶液 B：去離子水與甲酸以 99.9：0.1（ v/v）之比例混勻，以濾膜過濾，取濾液供作

5、移動(dòng)相溶液 B。2.5.內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)溶液之配製：取 DNC-d8 、DMZ-d 3 及 MNZ-d 3 同位素內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)品各約5 mg，精確稱定。DNC-d 8 以二甲基甲醯胺溶解並定容至50 mL，DMZ-d 3 及 MNZ-d 3 分別以甲醇溶解並定容至50 mL ，作為內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)原液。使用時(shí)，分別取適量內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)原液混合後，以50%乙腈溶液稀釋至2.0 g/mL，作為混合內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)溶液。2.6.標(biāo)準(zhǔn)溶液之配製：取那寧素、羅苯嘧啶、戴克拉爾、乃卡巴精、待美嘧唑及硝基甲嘧唑乙醇對(duì)照用標(biāo)準(zhǔn)品各約5 mg，精確稱定。那寧素及羅苯嘧啶分別以乙醇溶解並定容至50 mL；戴克拉爾及乃卡巴精分別以二甲基甲醯胺溶解並

6、定容至50 mL ；待美嘧唑及硝基甲嘧唑乙醇分別以甲醇溶解並定容至50 mL ，作為標(biāo)準(zhǔn)原液。使用時(shí)，分別取適量標(biāo)準(zhǔn)原液以50%乙腈溶液稀釋至那寧素及戴克拉爾為0.0220 g/mL，海樂福精、羅苯嘧啶及乃卡巴精為0.0510 g/mL，待美嘧唑及硝基甲嘧唑乙醇為0.00250.1 g/mL，作為標(biāo)準(zhǔn)溶液。2.7.檢液之調(diào)製：2.7.1.萃?。簩z體細(xì)切均質(zhì)後，取檢體約5 g，精確稱定，置於塑膠離心管中，加入混合內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)溶液25 L，靜置10 分鐘。再加入乙腈10 mL 及無水硫酸鈉10 g，旋渦混合 1 分鐘後，以超音波震盪 5 分鐘，於 4 C 以 4000 rpm 離心 20 分鐘，取上

7、清液供淨(jìng)化用。2.7.2.淨(jìng)化：取 2.7.1 節(jié)供淨(jìng)化用之溶液，注入預(yù)先以乙腈5 mL 潤洗之固相萃取匣，收集流出液，再以乙腈2 mL 沖提固相萃取匣，合併流出液，於40 C 以氮?dú)鉂饪s至殘留液體積略少於1 mL （註 1） ，以乙腈定容至1.0 mL ，經(jīng)濾膜過濾後，供作檢液。註 1：濃縮至乾，會(huì)嚴(yán)重影響海樂福精、待美嘧唑及硝基甲嘧唑乙醇之回收率。2.8.檢量線之製作：精確量取各標(biāo)準(zhǔn)溶液添加於空白檢體中，依2.7 節(jié)調(diào)製檢液，並參照下列條件進(jìn)行液相層析串聯(lián)質(zhì)譜分析，就各抗原蟲劑與內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)品波峰面積比，與對(duì)應(yīng)之各抗原蟲劑濃度，製作檢量線。液相層析串聯(lián)質(zhì)譜測定條件：層析管柱溫度：35移動(dòng)相溶液

8、：A 液與 B 液以下列條件進(jìn)行梯度分析移動(dòng)相流速：0.3 mL/min注入量： 10L毛細(xì)管電壓（Capillary voltage）：電灑離子化正離子（ESI ）採用3.2 kV，電灑離子化負(fù)離子（ESI ）採用 3.0 kV離子源溫度（Ion source temperature）： 120溶媒揮散溫度（Desolvation temperature）： 450進(jìn)樣錐氣體流速（Cone gas flow rate）： 100 L/hr溶媒揮散流速（Desolvation rate）： 700 L/hr偵測模式：多重反應(yīng)偵測（multiple reaction monitoring, MR

9、M ）電灑離子化模式、離子對(duì)、進(jìn)樣錐電壓（cone voltage）與碰撞能量 （collision energy）如下：電灑離子化離子對(duì)進(jìn)樣錐電壓分析物母離子（ m/z） 碰撞能量（ eV）模式（ V ）子離子（ m/z）那寧素ESI787 4315050787 5315045海樂福精ESI416 1003545416 1202530羅苯嘧啶ESI334 1552525334 1112540戴克拉爾ESI405 3343520407 3364020乃卡巴精ESI301 1372040301 1072035待美嘧唑ESI142 962522142 812525硝基甲嘧唑乙ESI172 1282

10、515醇172 822525DMZ-d 3ESI145 992015MNZ-d 3ESI175 1311515DNC-d8ESI309 1412515定量離子對(duì)：那寧素為m/z 787 m/z 431、海樂福精為m/z 416 m/z 100、羅苯嘧啶為m/z 334 m/z 155、戴克拉爾為m/z 405 m/z 334、乃卡巴精為m/z 301 m/z137、待美嘧唑?yàn)閙/z 142 m/z 96、硝基甲嘧唑乙醇為m/z 172 m/z 128。內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)品：那寧素、海樂福精、羅苯嘧啶及待美嘧唑均採用醇採用 MNZ-d 3，戴克拉爾及乃卡巴精均採用DMZ-d 3，硝基甲嘧唑乙DNC-d8。2.9.鑑別試驗(yàn)及含量測定：精確量取檢液及標(biāo)準(zhǔn)溶液各10 L，分別注入液相層析串聯(lián)質(zhì)譜儀中，參照2.8 節(jié)測定條件進(jìn)行分析，就檢液與標(biāo)準(zhǔn)溶液所得波峰之滯留時(shí)間及多重反應(yīng)偵測相對(duì)離子強(qiáng)度比（註 2）鑑別之，並依下列計(jì)算式，求出檢體中各抗原蟲劑之含量（ppm）：C：由檢量線求得檢液中各抗原蟲劑之濃度（g/mL）V ：檢體最後定容之體積（mL ）M ：取樣分析檢體之重量（g）註：相對(duì)離子強(qiáng)度由2 組離子對(duì)之波峰面積相除而得（100%），容許範(fàn)圍如下：相對(duì)離子強(qiáng)度（%）容許範(fàn)圍（ %） 50 20 2