微生物思考題及參考答案

1、微生物思考題及參考答案1.用油鏡觀察時(shí)應(yīng)注意哪些問(wèn)題？在載玻片和鏡頭之間加滴什么油?起什么作用？答：應(yīng)該先用擦鏡紙將鏡頭擦干凈,以防上次實(shí)驗(yàn)的污染.操作時(shí),先低倍再高倍.用完要擦掉油.加香柏油,作用是增加折光率,也就是增加了顯微鏡的分辨率.油的折光率和分辨率成反比(有公式),同時(shí)與波長(zhǎng)成正比.2.什么是物鏡的同焦現(xiàn)象？它在顯微鏡觀察中有什么意義？答：在一般情況下，當(dāng)物像在一種物鏡中已清晰聚焦后，轉(zhuǎn)動(dòng)物鏡轉(zhuǎn)換器將其他物鏡轉(zhuǎn)到工作位置進(jìn)行觀察時(shí)，物像將保持基本準(zhǔn)焦的狀態(tài)，這種現(xiàn)象稱(chēng)為物鏡的同焦。利用這種同焦現(xiàn)象，可以保證在使用高倍鏡或油鏡等放大倍數(shù)高、工作距離短的物鏡時(shí)僅用細(xì)調(diào)節(jié)器即可對(duì)物像清晰聚

2、焦，從而避免由于使用粗調(diào)節(jié)器時(shí)可能的誤操作而損壞鏡頭或載玻片。3.影響顯微鏡分辨率的因素有哪些？答：物鏡的NA值（物鏡的數(shù)值孔徑）與照明光源的波長(zhǎng).4.美藍(lán)染色液作用時(shí)間的不同,對(duì)酵母菌死細(xì)胞數(shù)量有何影響,試分析原因答：會(huì)造成更多的死細(xì)胞，在顯微鏡下觀察，活的是透明無(wú)色，衰老的是淡藍(lán)色，死亡的是藍(lán)色，如果美藍(lán)染色液作用時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，會(huì)造成細(xì)胞脫水死亡并滲透染液，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。5.鏡檢時(shí)如何區(qū)分放線菌基內(nèi)菌絲，氣生菌絲以及孢子絲一般氣生菌絲顏色較深，直生或分枝絲狀，比基內(nèi)菌絲粗；而基內(nèi)菌絲色淺、發(fā)亮，可看到橫隔膜，繼而斷裂成球狀或桿狀小體。6.在進(jìn)行細(xì)菌涂片時(shí)應(yīng)注意哪些環(huán)節(jié)1、載玻片應(yīng)該冷卻后再涂片

3、。 2、如果是涂布液體，可以用毛細(xì)管或接種環(huán)滴一小滴，然后輕輕抹開(kāi)，一圈足夠。 3、如果是涂布菌落或菌苔，應(yīng)該在載玻片上先滴一滴水，再將菌落或菌苔涂布上去，接種環(huán)的尖蘸一點(diǎn)點(diǎn)即可。 4、為了節(jié)省時(shí)間，可以將干燥和熱固定合并成一步。但是應(yīng)該避免高溫，因?yàn)闇囟纫桓撸?xì)菌會(huì)變形。 5、染色時(shí)間視染色液種類(lèi)而定。如結(jié)晶紫只需幾十秒，亞甲基藍(lán)則需一到兩分鐘。 6、沖洗時(shí)，水流不能太大，而且盡量避免水流直接沖在涂片上。 7、沖洗后干燥，可以用酒精燈加熱以節(jié)省時(shí)間，同樣的，應(yīng)該避免高溫，因?yàn)闇囟纫桓?，?xì)菌會(huì)變形。7.進(jìn)行細(xì)菌制片時(shí)為什么要進(jìn)行加熱固定?在加熱固定時(shí)應(yīng)注意什么?固定的目的有三個(gè)：1）殺死微生物

4、，固定細(xì)胞結(jié)構(gòu)。2）保證菌體能更牢的粘附在載玻片上，防止標(biāo)本被水沖洗掉。3）改變?nèi)玖蠈?duì)細(xì)胞的通透性，因?yàn)樗赖脑|(zhì)比活的原生質(zhì)易于染色。固定時(shí)應(yīng)注意：手持玻片，菌膜朝上，在微火過(guò)3次（手指觸摸玻片反面，不燙手為宜），固定時(shí)應(yīng)盡可能維持細(xì)胞原有形態(tài)，防止細(xì)胞膨脹或收縮。8.為什么要求制片完全干燥后才能用油鏡觀察1.因?yàn)橛糜顽R觀察時(shí),鏡頭離玻片會(huì)很近.如果未完全干燥,載玻片上的液體會(huì)污染油鏡鏡頭.鏡頭非常精密,被污染后不利于下次觀察.2、若未完全干燥，水滴會(huì)影響油與玻璃之間折光率，造成視野不夠清晰。9.哪些環(huán)節(jié)會(huì)影響革蘭色染色結(jié)果的正確性？其中最關(guān)鍵的環(huán)節(jié)是什么？答：涂片環(huán)節(jié)、加熱固定環(huán)節(jié)、脫色環(huán)

5、節(jié)；其中最關(guān)鍵的環(huán)節(jié)是脫色環(huán)節(jié)。10.進(jìn)行革蘭氏染色時(shí)，為什么特別強(qiáng)調(diào)菌齡不能太老，用老齡細(xì)菌染色會(huì)出現(xiàn)什么問(wèn)題?答：菌齡太老，細(xì)胞壁通透性改變。著色不均，染色效果不好。陰性陽(yáng)性不明顯分不太清楚,問(wèn)題是：不便于顯微鏡下觀察是陽(yáng)性菌還是陰性菌。11.革蘭氏染色中那一步是關(guān)鍵?為什么？你是如何操作的？革蘭氏染色的關(guān)鍵步驟是：乙醇脫色（是脫色時(shí)間）。如果脫色過(guò)度，革蘭氏陽(yáng)性菌也可被脫色而被誤認(rèn)為是革蘭氏陰性菌；如脫色時(shí)間過(guò)短，革蘭氏陰性菌也可被脫色而被誤認(rèn)為是革蘭氏陽(yáng)性菌。脫色時(shí)間的長(zhǎng)短還受涂片的厚薄，脫色是玻片晃動(dòng)的快慢及乙醇用量的多少等因素的影響，難以嚴(yán)格規(guī)定（脫色是應(yīng)當(dāng)控制速度，脫色時(shí)間一般為

6、2030s）。12.革蘭氏染色中,哪個(gè)步驟可以省略?在什么情況下采用媒染目的是在所有的細(xì)胞壁內(nèi)形成了不溶于水的結(jié)晶紫與碘的復(fù)合物。 脫色后使革蘭氏陰性菌變?yōu)闊o(wú)色。 復(fù)染使革蘭氏陰性菌染成紅色。 所以鑒別細(xì)菌的革蘭氏陰陽(yáng)性只須媒染，復(fù)染的目的是為了看清革蘭氏陰性菌。13.你主要根據(jù)哪些形態(tài)特征來(lái)區(qū)分四種不同的霉菌 曲霉:具有分隔；氣生菌絲的一部分形成長(zhǎng)而粗糙的分生孢子梗，頂端膨大成球狀頂囊，表面輻射出一層或兩層小梗，小梗上著生成串的球形分生孢子。分生孢子梗生于足細(xì)胞上，并通過(guò)足細(xì)胞與營(yíng)養(yǎng)菌絲相連。根霉:菌絲無(wú)隔、多核、分枝狀，有匍匐菌絲和假根。在假根的上方直立地生長(zhǎng)出一至數(shù)根孢囊梗，其頂端膨大成

7、球形孢子囊。囊的基部有囊托，中間有球形或半球形囊軸。毛霉:菌絲無(wú)隔、多核、分枝狀，無(wú)假根或匍匐菌絲。菌絲體上直接生出單生、總狀分枝或假軸狀分枝的孢囊梗。各分枝頂端著生球形孢子囊，無(wú)囊托。青霉:菌絲有橫隔，分生孢子梗亦有橫隔，光滑或粗糙?；繜o(wú)足細(xì)胞，頂端不形成膨大的頂囊，其分生孢子梗經(jīng)過(guò)多次分枝，產(chǎn)生幾輪對(duì)稱(chēng)或不對(duì)稱(chēng)的小梗，形如掃帚，稱(chēng)為帚狀體。孢子顏色：黑曲霉是黑色，青霉是青色，根霉是白菌絲黑孢子，毛霉則是淡黃色。以上為實(shí)驗(yàn)室觀察1）菌絲特征：青菌與曲霉菌絲與膈；毛霉與根霉則無(wú)；2）菌絲的特化結(jié)構(gòu)：曲霉有足細(xì)胞，其它霉菌無(wú)；根霉有假根與匍匐枝，其它霉菌無(wú)；3）孢子頭特征：青霉的孢子頭為掃帚狀

8、；根霉與毛霉的孢子頭為囊狀；曲霉為菊花狀孢子頭。14.為什么更換不同放大倍數(shù)的目鏡或物鏡時(shí)，必須用鏡臺(tái)測(cè)微尺重新對(duì)目鏡測(cè)微尺進(jìn)行校正?目鏡測(cè)微尺中每小格代表的實(shí)際長(zhǎng)度是不固定的，它是隨所使用目鏡和物鏡的放大率的不同而改變的，故在測(cè)量前必須先用鏡臺(tái)測(cè)微尺重新對(duì)目鏡測(cè)微尺進(jìn)行校正，以得出在顯微鏡的特定放大倍率下，目鏡測(cè)微尺每小格所代表的相對(duì)長(zhǎng)度。15.在不改變目鏡和目鏡測(cè)微尺，而改用不同放大倍數(shù)的物鏡來(lái)測(cè)定同一細(xì)菌的大小時(shí)，其測(cè)定結(jié)果是否相同？為什么？答:相同;目鏡測(cè)微尺是一塊圓形玻片，其中央刻有精確等分的刻度，有把 毫米刻成為50 等分或把10 毫米長(zhǎng)度刻成100 等分。測(cè)量時(shí)，將其放在接目鏡中

9、的隔板上來(lái)測(cè)量經(jīng)顯微 鏡放大后的細(xì)胞物象。由于在不改變目鏡和目鏡測(cè)微尺，而改用不同放大倍數(shù)的物鏡來(lái)測(cè)定 同一細(xì)菌的大小時(shí)，物象的放大倍數(shù)與每小格目鏡測(cè)微尺所代表的長(zhǎng)度在變化比例上是同步的，故而測(cè)定結(jié)果相同。16.哪些因素會(huì)造成血細(xì)胞計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)誤差，應(yīng)如何避免?操作時(shí)沒(méi)有先蓋蓋玻片再滴加懸液，導(dǎo)致體積不準(zhǔn)確。避免：先蓋蓋玻片再滴加懸液。細(xì)胞密度太高。避免：稀釋溶液。 溶液不均勻。避免：滴加溶液前混勻懸液。1、儀器誤差：所用器材均應(yīng)清潔干凈，并且計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)區(qū)不應(yīng)該有擦痕。2、計(jì)數(shù)室內(nèi)可能有氣泡。因?yàn)榻湍讣?xì)胞并沒(méi)有染色，看起來(lái)是透明的，有氣泡很容易被計(jì)入，使數(shù)值偏高；并且，氣泡會(huì)影響菌懸液的隨機(jī)分

10、布。改進(jìn)：若產(chǎn)生氣泡，則用吸水紙吸出。3、菌體在計(jì)數(shù)板上分布不均，當(dāng)用選取5格計(jì)數(shù)時(shí)，會(huì)造成很大誤差。改進(jìn)：應(yīng)使菌液自然流入并混勻，進(jìn)行觀察時(shí)盡可能多數(shù)幾個(gè)格子。4、配制稀釋液時(shí)吸取的濃度過(guò)高或過(guò)低，導(dǎo)致稀釋液濃度和原液不成正確比例，計(jì)算時(shí)產(chǎn)生誤差。應(yīng)將原液搖晃均勻后取中部的液體進(jìn)行稀釋。5、由于數(shù)菌體數(shù)目時(shí)視覺(jué)疲勞而導(dǎo)致的視覺(jué)誤差。應(yīng)多人觀察，取記錄平均數(shù)。6、計(jì)數(shù)時(shí)可能將格四周的菌都計(jì)算在內(nèi)了，使數(shù)值偏高。改進(jìn)：謹(jǐn)遵一個(gè)規(guī)則，計(jì)上不計(jì)下，計(jì)左不計(jì)右，不可以重復(fù)計(jì)數(shù)。7、可能出現(xiàn)有出芽的酵母菌，將出芽的酵母菌按兩個(gè)計(jì)數(shù)了，使數(shù)值偏高。改進(jìn)：計(jì)數(shù)時(shí)，只有當(dāng)芽體于母細(xì)胞一樣大的時(shí)候，才能計(jì)為兩個(gè)

11、。17.培養(yǎng)基配好后，為什么必須立即滅菌?如何檢查滅菌后的培養(yǎng)基是否無(wú)菌？為什么要倒置培養(yǎng)？答：由于配制培養(yǎng)基的各類(lèi)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和容器等含有各種微生物，因此，已配制好的培養(yǎng)基必須立即滅菌，如果來(lái)不及滅菌，應(yīng)暫存冰箱內(nèi)，以防止其中的微生物生長(zhǎng)系列而消耗養(yǎng)分和改變培養(yǎng)基的酸堿度所帶來(lái)的不利影響。將滅菌的培養(yǎng)基放入37溫箱中培養(yǎng)2448h，無(wú)菌生長(zhǎng)即可證明滅菌后的培養(yǎng)基無(wú)菌。倒置培養(yǎng)的主要目的：1）由于重力的作用使培養(yǎng)基表面及次層能富集微生物生長(zhǎng)所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，利于微生物生長(zhǎng)；2）防止空氣中微生物的污染培養(yǎng)基及培養(yǎng)物：倒置時(shí)平板內(nèi)的空氣是不流動(dòng)的,雜菌不會(huì)沉降到培養(yǎng)基表面,如果不倒置,很快平板周邊會(huì)長(zhǎng)起

12、雜菌。3）倒置培養(yǎng)使瓊脂里水分不易蒸發(fā)出去，而充分的保持瓊脂的彈性與細(xì)菌容易繁殖和生存的環(huán)境。如果不倒置，大概3天左右培養(yǎng)基就會(huì)出現(xiàn)龜裂等水分散失的情況。而一些落菌等試驗(yàn)，需驗(yàn)證培養(yǎng)基無(wú)菌，就要先倒置培養(yǎng)48小時(shí)才可作為模板做落菌，水分散失是很重要的。19.在配制培養(yǎng)基的操作過(guò)程中應(yīng)注意些什么問(wèn)題？為什么？答：一般而言，培養(yǎng)基的配置要注意如下幾點(diǎn)原則：1）營(yíng)養(yǎng)成分的配比：碳源和氮源的比例（C/N）要適當(dāng)；2）適宜的酸堿度（pH值）：配制培養(yǎng)基時(shí)pH的調(diào)節(jié)；3）滲透壓：營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)要有適合的濃度；4）培養(yǎng)基不能反復(fù)高溫滅菌。5) 稱(chēng)不溶性固形物時(shí)，應(yīng)單獨(dú)稱(chēng)，若量少的可以與無(wú)機(jī)鹽一起稱(chēng)，但一定要混勻再

13、分裝；6）一般情況下培養(yǎng)基用自來(lái)水配制。操作細(xì)節(jié)上則要注意：1）稱(chēng)藥品用的牛角匙不要混用，稱(chēng)完藥品應(yīng)及時(shí)蓋緊瓶蓋2）調(diào)pH值不要調(diào)過(guò)頭，以免回調(diào)而影響培養(yǎng)基內(nèi)各離子的濃度3）分裝時(shí)注意不要污染棉塞、試管口，以免染菌。4）及時(shí)滅菌，以免培養(yǎng)基及容器里的微生物生長(zhǎng)繁殖消耗養(yǎng)分、改變酸堿度。1、當(dāng)然是注意濃度配比不要搞錯(cuò)2、很多培養(yǎng)基的加料順序有講究,否則會(huì)有沉淀產(chǎn)生3、有些培養(yǎng)基會(huì)有不溶物質(zhì),分裝前應(yīng)搖勻4、不要忘了調(diào)節(jié)pH值（一般細(xì)菌都需要,酵母可能自然pH就行,不過(guò)不一定）5、加熱溶解時(shí)盡量不要煮沸,會(huì)損失營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)20.高壓蒸氣滅菌開(kāi)始之前，為什么要將鍋內(nèi)冷空氣排盡？滅菌完畢后，為什么待壓力降

14、低“0”時(shí)才能打開(kāi)排氣閥，開(kāi)蓋取物。答：1）在使用高壓蒸汽滅菌時(shí)，滅菌鍋內(nèi)冷空氣的排除是否完全極為重要，因?yàn)榭諝獾呐蛎泬捍笥谒羝呐蛎泬?，所以，?dāng)水蒸氣中含有空氣時(shí)，在同一壓力下，含空氣蒸汽的溫度低于飽和蒸汽的溫度。2）壓力未降至“0”便開(kāi)蓋取物的可能后果：壓力鍋內(nèi)壓力驟然降低，引起容器中的溶液噴出容器口導(dǎo)致污染或?qū)е氯藛T的燙傷。21.干熱滅菌操作過(guò)程中應(yīng)注意哪些問(wèn)題為什么1、物品不要擺放太擠,以免妨礙空氣流通2、滅菌物品不要接觸干燥箱內(nèi)壁的鐵板,以防包裝紙烤焦起火3、滅菌時(shí)人不能離開(kāi)4、滅菌結(jié)束后不能忘記關(guān)掉電源5、待溫度降到70度以下再打開(kāi),否則冷熱空氣交替,玻璃器皿容易炸裂或發(fā)生燙傷事

15、故22.為什么干熱滅菌比濕熱滅菌所需溫度高時(shí)間長(zhǎng)？在濕熱條件下，有水蒸汽的作用：a高溫水蒸汽導(dǎo)熱比干空氣要快；b高溫水蒸汽冷凝變水時(shí)有放熱過(guò)程；c高溫水蒸汽能穿透細(xì)菌的細(xì)胞膜，直接進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)破壞細(xì)胞；d高溫水蒸汽能水解一部分細(xì)胞結(jié)構(gòu)，加速導(dǎo)熱。（濕熱中細(xì)菌菌體吸收水分，蛋白質(zhì)較易凝固，因蛋白質(zhì)含水量增加，所需凝固溫度降低；濕熱的穿透力比干熱大；濕熱的蒸汽有潛熱存在，每1克水在100時(shí)，由氣態(tài)變?yōu)橐簯B(tài)時(shí)可放出226kJ（千焦）的熱量。這種潛熱，能迅速提高被滅菌物體的溫度，從而增加滅菌效力。）23.設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案，比較干熱滅菌和濕熱滅菌的效果。以下試驗(yàn)方案有關(guān)操作均遵循無(wú)菌操作條件和等量原則。（一）

16、實(shí)驗(yàn)材料試管鑷子酒精燈嗜熱脂肪芽孢桿菌ATCC7053菌片紙片（與菌片同大小同材料）溴甲酚紫蛋白凍水培養(yǎng)基（已滅菌）等實(shí)驗(yàn)材料（材料有余）。（二）對(duì)照組取9支潔凈試管，分為A1B1C1三組（每3支一組），將A1組中放入菌片，B1組中放入紙片，C1組中什么也不加；不經(jīng)滅菌，直接加入溴甲酚紫蛋白凍水培養(yǎng)基（等量）。（三）恒為培養(yǎng)將上述所有試管按分組在56恒溫條件下培養(yǎng)48小時(shí)。24.如何確定平板上某單個(gè)菌落是否為純培養(yǎng)請(qǐng)寫(xiě)出實(shí)驗(yàn)的主要步驟純培養(yǎng)的確定除觀察其菌落特征外，還要結(jié)合顯微鏡檢測(cè)個(gè)體形態(tài)特征后才能確定，有些微生物的純培養(yǎng)要經(jīng)過(guò)一系列分離與純化過(guò)程和多種特征鑒定才能得到。25.配制牛肉膏蛋白

17、胨培養(yǎng)基，有哪些操作步驟？那幾步易出錯(cuò)，如何防止？稱(chēng)取藥品加熱溶化分裝加棉塞包扎滅菌擱置斜面易出錯(cuò)的步驟有：a稱(chēng)取藥品稱(chēng)取時(shí)鑰匙專(zhuān)用，瓶蓋不要錯(cuò)蓋，易吸水的藥品要快速稱(chēng)取；b加熱溶化加入藥品后要用玻璃棒不停攪拌，以免糊底（在瓊脂熔化過(guò)程中，應(yīng)控制火力，以免培養(yǎng)基因沸騰而溢出容器，同時(shí)，需不斷攪拌，以防瓊脂糊底燒焦。）；c分裝分裝時(shí)培養(yǎng)基不能粘在三角瓶（或試管）口，以免接種時(shí)染菌；d擱置斜面斜面長(zhǎng)度約試管長(zhǎng)度一半為宜。26.平板菌落計(jì)數(shù)法的原理是什么?它適用于那些微生物的計(jì)數(shù)？平板菌落計(jì)數(shù)法是將等測(cè)樣品經(jīng)適當(dāng)稀釋后，其中的微生物充分分散為單個(gè)細(xì)胞，取一定量的稀釋液接種到平板上，經(jīng)過(guò)培養(yǎng)，由每個(gè)單

18、細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖而形成的肉眼可見(jiàn)的菌落，即一個(gè)單菌落應(yīng)代表原樣品中的一個(gè)單細(xì)胞。統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)，根據(jù)其稀釋倍數(shù)和取樣接種量即可換算出樣品中的含菌數(shù)。（但是，由于待測(cè)樣品往往不易完全分散成單個(gè)細(xì)胞，所以，長(zhǎng)成的一個(gè)單菌落也可能來(lái)自樣品中的23或更多個(gè)細(xì)胞。因此平板菌落計(jì)數(shù)的結(jié)果往往偏低?，F(xiàn)在常使用菌落形成單位）。平板計(jì)數(shù)法是根據(jù)微生物在固體培養(yǎng)基上所形成的一個(gè)菌落是由一個(gè)微生物繁殖而形成的現(xiàn)象進(jìn)行的，也就是一個(gè)菌落可代表一種微生物（并不絕對(duì))。通常用來(lái)測(cè)定樣品中所含細(xì)菌、孢子、酵母菌等單細(xì)胞微生物的數(shù)量。8、微量移液器的最小量程太大，在加樣時(shí)，容易加多，使蓋玻片鼓起，血球計(jì)數(shù)板所技術(shù)的體積變大，最終結(jié)果

19、偏大。改進(jìn)：用量程的小的微量移液器并少加一些。27.如果一項(xiàng)科學(xué)研究?jī)?nèi)容需從自然界中篩選到能產(chǎn)生高溫蛋白酶的菌株，你將如何完成？寫(xiě)出實(shí)驗(yàn)方案（產(chǎn)蛋白酶菌株在酪素平板上能形成降解酪素透明圈）。 以下試驗(yàn)方案有關(guān)操作均遵循無(wú)菌操作條件 一 材料準(zhǔn)備 1 土壤【有機(jī)質(zhì)（特別是蛋白質(zhì)）含量豐富的土壤】 2 滅菌生理鹽水（0.85%NaCl） 3 滅菌移液管 4 添加酪素的B4（牛肉膏蛋白胨完全培養(yǎng)基）經(jīng)滅菌 5 B4斜面（經(jīng)滅菌） 6 其他材料：接種環(huán) 酒精燈等 二 操作方法 1在盛有10ml滅菌生理鹽水的燒杯中添加1g土壤，配成懸浮液； 2 稍靜止后，用滅菌移液管移取部分上清液，將其制成104106

20、倍的稀釋液； 3 用滅菌移液管吸取各稀釋液用稀釋倒平板法（或涂布平板法）將其接入添加酪素的B4平板上； 4 在5565下培養(yǎng)12天； 5 挑取形成降解酪素透明圈的菌落（透明圈直徑D與菌落直徑d之比較大者），轉(zhuǎn)接入B4斜面上培養(yǎng)；（若無(wú)特定菌落形成，則需另取土樣從開(kāi)始重復(fù)試驗(yàn)） 6 將B4斜面上的菌落再用平板純培養(yǎng)，依次重復(fù)23次后即可得到純培養(yǎng)（鏡檢）； 7 純培養(yǎng)細(xì)菌中蛋白酶的提取及活性鑒定【搖瓶培養(yǎng)（若提取蛋白酶及其活性正常，則純培養(yǎng)成功，否則，重取土樣重復(fù)以上實(shí)驗(yàn)）】。28.為什么熔化后的培養(yǎng)基要冷卻至45左右才能倒平板？低于這個(gè)溫度瓊脂會(huì)凝固，溫度過(guò)高，如果是做傾倒瓊脂做菌落計(jì)數(shù)，會(huì)殺

21、死一部分細(xì)菌，如果只是只是制備瓊脂平板，那么溫度太高就進(jìn)行傾倒會(huì)導(dǎo)致瓊脂凝固后偏軟，水汽過(guò)多。29.要使平板菌落計(jì)數(shù)準(zhǔn)確，需要掌握哪幾個(gè)關(guān)鍵？為什么？1 無(wú)菌操作 2 稀釋良好，不會(huì)太濃或太稀。 3 菌落生長(zhǎng)時(shí)間控制好，不會(huì)長(zhǎng)的太大不便區(qū)分，也不至于太小影響計(jì)數(shù)。30.當(dāng)你的平板上長(zhǎng)出的菌落不是均勻分散的而是集中在一起時(shí)，你認(rèn)為問(wèn)題出在哪里？1.太濃 2.沒(méi)涂勻31.用傾注法和涂布法計(jì)數(shù)，其平板上長(zhǎng)出的菌落有何不同？為什么要培養(yǎng)較長(zhǎng)時(shí)間（48h）后觀察結(jié)果？?jī)A注法是在培養(yǎng)皿中接種好樣品之后，傾注瓊脂并培養(yǎng)；而涂布法則是在瓊脂表面接種并使用L型棒涂布。因此，傾注法的菌落將出現(xiàn)在瓊脂的各個(gè)部位，包括底層和中層，但涂布法培養(yǎng)后形成的菌落只出現(xiàn)在瓊脂表面。32.你如何解釋淀粉酶是胞外酶而非胞內(nèi)酶？答：淀粉是大分子物質(zhì)，進(jìn)入細(xì)胞十分困難，甚至需要高耗能的胞吞作用。因而通過(guò)胞外酶的作用，將淀粉水解為葡萄糖后運(yùn)入細(xì)胞，較方便高效。試驗(yàn)中出現(xiàn)透明圈，說(shuō)明培養(yǎng)基內(nèi)淀粉被水解，可推測(cè)是細(xì)菌產(chǎn)生的胞外的淀粉酶起的作用。33.不利用碘