植物生理實(shí)驗(yàn)希爾反應(yīng)

1、-作者xxxx-日期xxxx植物生理實(shí)驗(yàn)希爾反應(yīng)【精品文檔】植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)希爾反應(yīng)的觀察和反應(yīng)速率的測定 摘要：本實(shí)驗(yàn)以新鮮的菠菜葉片為實(shí)驗(yàn)材料；以菠菜的離體葉綠體為實(shí)驗(yàn)對象，由離體葉綠體懸浮液在光下能還原某些氧化劑，根據(jù)2,6-二氯酚靛酚在光下從藍(lán)色到粉紅色再到無色的變化，觀察希爾反應(yīng)。在本實(shí)驗(yàn)中觀察到，加入葉綠體懸浮液的試管，在光下由藍(lán)色變?yōu)榫G色（由于葉綠體存在的原因）；暗處的試管仍為藍(lán)色。一、 實(shí)驗(yàn)原理與實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)原理：希爾發(fā)現(xiàn)，離體葉綠體懸浮液在光下能還原某些氧化劑（如2,6 -二氯酚靛酚、高鐵氰化鉀、苯醌、NADP+、草酸等） 2H2O+2A 2AH2+O2 希爾反應(yīng)的測定的方法是

2、（1）放氧速率；（2）氧化劑被還原的速率。 本實(shí)驗(yàn)中2,6 -氯酚靛酚還原后，溶液由蘭色變?yōu)闊o色。實(shí)驗(yàn)?zāi)康模河^察和測定希爾反應(yīng)，了解葉綠體在光合放氧中的作用。二、 實(shí)驗(yàn)材料和方法實(shí)驗(yàn)材料：菠菜實(shí)驗(yàn)器材：離心機(jī)、分光光度計(jì)、天平、研缽、漏斗、容量瓶、量筒、燒杯、紗布、移液管、臺(tái)燈等實(shí)驗(yàn)試劑：（1）提取液（0.067M 磷酸緩沖液，pH 6.5 + 0.3M 蔗糖 + 0.01M KCl）；（2） 0.1% 2,6 -二氯酚靛酚（溶于0.067M 磷酸緩沖液+0.01%KCl）三、 實(shí)驗(yàn)步驟1.離體葉綠體懸浮液的制備稱取8克葉片,加10ml預(yù)冷提取液研磨,在研缽中搗碎30秒鐘后,繼續(xù)加入15ml冷

3、提取液;經(jīng)過二層紗布過濾,去殘?jiān)?擠出濾液,置于離心管中。以1000轉(zhuǎn)/分離心3分鐘;棄去沉淀。以3000轉(zhuǎn)/分離心上層液,8分鐘,棄去上清液,沉淀為破碎的葉綠體。用20ml提取液懸浮沉淀,置于冰浴備用。2.離體葉綠體對2,6 -二氯酚靛酚的還原作用取2支試管，分別加入5ml葉綠體懸浮液和1ml 0.1%的2,6 -二氯酚靛酚。一試管照光，另一試管置于黑暗。5-10min后觀察溶液顏色的變化。四、 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論實(shí)驗(yàn)結(jié)果：黑暗處的試管顏色未發(fā)生變化，一直都是藍(lán)綠色；光照下的試管顏色明顯變淺，由較深的藍(lán)綠色變?yōu)闇\綠色，證明希爾反應(yīng)的存在，可見離體葉綠體懸浮液在光下能還原某些氧化劑。實(shí)驗(yàn)討論：1、 離體葉綠體對染料的還原作用實(shí)驗(yàn)中,比較兩個(gè)處理的溶液顏色有何不同,并解釋實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 答：現(xiàn)象：兩份葉綠體懸浮液，分別加入1ml 0.1%的2,6 -二氯酚靛酚后，一份在光照條件下，一份在黑暗條件下；在黑暗條件下的葉綠體懸浮液一直是藍(lán)綠色的；而在光照條件下的葉綠體懸浮液在加入1ml 0.1%的2,6 -二氯酚靛酚后為藍(lán)綠色，而放在光下一段時(shí)間后葉綠體懸浮液又慢慢變?yōu)樵瓉淼念伾?，淺綠色。原因：這是由于葉綠素在光照條件下被激活，而釋放出電子，從而還原某些氧化劑。2,6 -二氯酚靛酚本來是藍(lán)色的，加入后使得葉綠素提取液變?yōu)樗{(lán)綠色，而2,6 -氯酚靛酚還原后，溶液變?yōu)闊o色，這時(shí)葉