基因工程的基本操作程序一

1、1.2 1.2 基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序知識點(diǎn)一：知識點(diǎn)一：1.1.原核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)原核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)非編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)編碼區(qū)編碼區(qū)編碼區(qū)上游編碼區(qū)上游 編碼區(qū)下游編碼區(qū)下游 與與RNARNA聚合酶結(jié)合位點(diǎn)聚合酶結(jié)合位點(diǎn)啟動子啟動子終止子終止子啟動子：啟動子：位于基因首端一段能與位于基因首端一段能與RNARNA聚合酶結(jié)合并能起聚合酶結(jié)合并能起始始mRNAmRNA合成的序列。沒有啟動子，基因就不能轉(zhuǎn)錄。合成的序列。沒有啟動子，基因就不能轉(zhuǎn)錄。終止子：終止子：位于基因的尾端的一段特殊的位于基因的尾端的一段特殊的DNADNA片斷，它能片斷，它能阻礙阻礙RNARNA

2、聚合酶的移動，并使其從聚合酶的移動，并使其從DNADNA模板鏈上脫離下來，模板鏈上脫離下來，使轉(zhuǎn)錄終止。使轉(zhuǎn)錄終止。RNARNA聚合酶聚合酶: :能夠識別啟動子上的結(jié)合位點(diǎn)并與其結(jié)合能夠識別啟動子上的結(jié)合位點(diǎn)并與其結(jié)合的一種蛋白質(zhì)的一種蛋白質(zhì).(.(以模板轉(zhuǎn)錄然后脫落以模板轉(zhuǎn)錄然后脫落) )不能轉(zhuǎn)錄為信使不能轉(zhuǎn)錄為信使RNARNA，不能，不能 編碼蛋白質(zhì)。編碼蛋白質(zhì)。：能轉(zhuǎn)錄相應(yīng)的信使：能轉(zhuǎn)錄相應(yīng)的信使RNARNA，能，能 編碼蛋白質(zhì)編碼蛋白質(zhì) 編碼區(qū)編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)原核原核細(xì)胞細(xì)胞的的 基因基因結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)有調(diào)控遺傳信息表達(dá)的核有調(diào)控遺傳信息表達(dá)的核 苷酸序列，在該序列中，苷酸序列，在該序

3、列中， 最重要的是位于編碼區(qū)上最重要的是位于編碼區(qū)上 游的游的RNARNA聚合酶結(jié)合位點(diǎn)。聚合酶結(jié)合位點(diǎn)。非編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)編碼區(qū)編碼區(qū)編碼區(qū)上游編碼區(qū)上游 編碼區(qū)下游編碼區(qū)下游 啟動子啟動子終止子終止子編碼區(qū)編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)與與RNARNA聚合酶聚合酶結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合位點(diǎn)內(nèi)含子內(nèi)含子 外顯子外顯子 能夠編碼蛋白質(zhì)的序列叫做外顯子能夠編碼蛋白質(zhì)的序列叫做外顯子 不能夠編碼蛋白質(zhì)的序列叫做內(nèi)不能夠編碼蛋白質(zhì)的序列叫做內(nèi)含子含子啟動子啟動子終止子終止子編碼區(qū)上游編碼區(qū)上游 編碼區(qū)下游編碼區(qū)下游 內(nèi)含子：內(nèi)含子： 外顯子：外顯子： 知識點(diǎn)一：知識點(diǎn)一：2.2.真核細(xì)胞

4、的基因結(jié)構(gòu)真核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)真核真核細(xì)胞細(xì)胞的的 基因基因結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)編碼區(qū)編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)外顯子：能編碼蛋白質(zhì)的序列外顯子：能編碼蛋白質(zhì)的序列內(nèi)含子：不能編碼蛋白質(zhì)的序列內(nèi)含子：不能編碼蛋白質(zhì)的序列：有調(diào)控作用的核苷酸序列，：有調(diào)控作用的核苷酸序列， 包括位于編碼區(qū)上游的包括位于編碼區(qū)上游的RNARNA 聚合酶結(jié)合位點(diǎn)等。聚合酶結(jié)合位點(diǎn)等。非編碼序列：非編碼序列： 包括非編碼區(qū)和內(nèi)含子包括非編碼區(qū)和內(nèi)含子原核細(xì)胞原核細(xì)胞真核細(xì)胞真核細(xì)胞不同點(diǎn)不同點(diǎn)編碼區(qū)是編碼區(qū)是_的的編碼區(qū)是間隔的、編碼區(qū)是間隔的、_的的相同點(diǎn)相同點(diǎn)都由能夠編碼蛋白質(zhì)的都由能夠編碼蛋白質(zhì)的_和具和具有調(diào)控作用的有調(diào)控作用

5、的_區(qū)組成的區(qū)組成的原核細(xì)胞與真核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)比較原核細(xì)胞與真核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)比較思考思考編碼相同數(shù)目氨基酸的蛋白質(zhì)，原核編碼相同數(shù)目氨基酸的蛋白質(zhì)，原核細(xì)胞與真核細(xì)胞基因結(jié)構(gòu)一樣長嗎？細(xì)胞與真核細(xì)胞基因結(jié)構(gòu)一樣長嗎？連續(xù)連續(xù)不連續(xù)不連續(xù)編碼區(qū)編碼區(qū)非編碼非編碼1 1、目的基因的獲取、目的基因的獲取2 2、基因表達(dá)載體的構(gòu)建、基因表達(dá)載體的構(gòu)建3 3、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞4 4、目的基因的檢測與鑒定、目的基因的檢測與鑒定知識點(diǎn)二知識點(diǎn)二. .基因工程基本操作的四個步驟基因工程基本操作的四個步驟有了目的基因，我們才有了目的基因，我們才能賦予一種生物以另一能賦予一種生物

6、以另一種生物的遺傳特性。種生物的遺傳特性。使目的基因在受體細(xì)胞使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并可進(jìn)行中穩(wěn)定存在，并可進(jìn)行遺傳、表達(dá)和發(fā)揮作用遺傳、表達(dá)和發(fā)揮作用 載體進(jìn)入受體細(xì)胞穩(wěn)定載體進(jìn)入受體細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)，才能實(shí)現(xiàn)一種生表達(dá)，才能實(shí)現(xiàn)一種生物的基因在另一種生物物的基因在另一種生物中的轉(zhuǎn)化。中的轉(zhuǎn)化。 才能確定目的基因是否才能確定目的基因是否真正在受體細(xì)胞中穩(wěn)定真正在受體細(xì)胞中穩(wěn)定遺傳和正確表達(dá)。遺傳和正確表達(dá)。一、目的基因的獲取一、目的基因的獲取( (一一) )、目的基因主要是、目的基因主要是_編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因請舉出三個以上的例子請舉出三個以上的例子（二）、獲取目的

7、基因的常用方法有哪些（二）、獲取目的基因的常用方法有哪些? ?1 1、從基因文庫中獲取、從基因文庫中獲取2 2、利用、利用PCRPCR技術(shù)擴(kuò)增技術(shù)擴(kuò)增3 3、人工合成、人工合成請閱讀請閱讀P9P9第一和二兩段第一和二兩段一、目的基因的獲取一、目的基因的獲?。ㄒ唬幕蛭膸熘兄苯荧@?。ㄒ唬幕蛭膸熘兄苯荧@取1.1.基因文庫：基因文庫：概念見概念見P9P92.2.基因文庫的分類基因文庫的分類: :按外源按外源DNADNA片段的來源分類片段的來源分類種種類類基因組基因組DNA文庫：文庫：含有一種生物的含有一種生物的全部全部基因基因部分基因文庫：部分基因文庫：只包含了一種生物的只包含了一種生物的部分

8、部分基因，基因， 如：如：cDNA文庫文庫3.3.基因文庫的目的基因文庫的目的為了在不知目的基因序列的情況下，便于獲得所需的為了在不知目的基因序列的情況下，便于獲得所需的目的基因。目的基因。4.4.獲取目的基因的根據(jù)：獲取目的基因的根據(jù)： 見課本見課本P9提取某種生物的全部提取某種生物的全部DNADNA用適當(dāng)?shù)南拗泼盖杏眠m當(dāng)?shù)南拗泼盖幸欢ù笮〉囊欢ù笮〉腄NADNA片段片段將將DNADNA片段與載體連接片段與載體連接導(dǎo)入受體菌中儲存導(dǎo)入受體菌中儲存基因組文庫基因組文庫5.5.基因文庫的構(gòu)建方法之一基因文庫的構(gòu)建方法之一（1 1）直接分離法）直接分離法某種生物的單鏈某種生物的單鏈mRNAmRNA

9、單鏈互補(bǔ)單鏈互補(bǔ)DNADNA雙鏈雙鏈cDNAcDNA片段片段導(dǎo)入受體菌中儲存導(dǎo)入受體菌中儲存與載體連接與載體連接cDNAcDNA文庫文庫反（逆）轉(zhuǎn)錄酶反（逆）轉(zhuǎn)錄酶DNADNA聚合酶聚合酶反轉(zhuǎn)錄法：反轉(zhuǎn)錄法：cDNAcDNA的合成流程圖解的合成流程圖解5.5.基因文庫的構(gòu)建方法之基因文庫的構(gòu)建方法之基因組文庫和部分基因組文庫基因組文庫和部分基因組文庫(cDNA文庫文庫)比較比較 概念概念：PCRPCR全稱為全稱為_，是一項(xiàng)，是一項(xiàng) 在生物在生物_復(fù)制復(fù)制_的核酸合成技術(shù)的核酸合成技術(shù) 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)體外體外特定特定DNADNA片段片段原理：原理：DNADNA復(fù)制復(fù)制2 2、利用、

10、利用PCRPCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因技術(shù)擴(kuò)增目的基因四種脫氧核苷酸四種脫氧核苷酸(dNTP)(dNTP) 一對引物：一對引物：熱穩(wěn)定熱穩(wěn)定DNADNA聚合酶聚合酶(Taq(Taq酶）酶）模板模板DNA( DNA( 需含有目的基因需含有目的基因 ) ) MgMg2+2+( (激活劑激活劑) )緩沖溶液緩沖溶液一對寡核苷酸序列：與目的基因一對寡核苷酸序列：與目的基因的起始段互補(bǔ)的起始段互補(bǔ)一段已知目的基因的核苷酸序列，以便一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根據(jù)這一序列合成引物根據(jù)這一序列合成引物 過程過程高溫變性（高溫變性（解旋為單鏈解旋為單鏈）低溫退火（低溫退火（引物與單鏈互補(bǔ)結(jié)合引物與單鏈互補(bǔ)結(jié)合

11、）適溫延伸（適溫延伸（在在TaqTaq酶的作用下合成酶的作用下合成 與模板互補(bǔ)的與模板互補(bǔ)的DNADNA雙鏈雙鏈）重復(fù)循環(huán)重復(fù)循環(huán)預(yù)變性（預(yù)變性（增加增加DNADNA變性的概率變性的概率）2 2、具體過程、具體過程PCR(多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)) 概念：概念：PCRPCR全稱為全稱為_，是一項(xiàng)，是一項(xiàng) 在生物在生物_復(fù)制復(fù)制_的核酸合成技術(shù)的核酸合成技術(shù) 條件：條件：_、 _、_ _ 、 _._.等等原理：原理：_方式：以方式：以_方式擴(kuò)增，即方式擴(kuò)增，即_（n n為擴(kuò)增為擴(kuò)增循循 環(huán)的次數(shù)）環(huán)的次數(shù)）結(jié)果：結(jié)果：聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)體外體外特定特定DNADNA片段片段DNADNA復(fù)制復(fù)制四種

12、脫氧核苷酸四種脫氧核苷酸一對引物一對引物DNADNA聚合酶聚合酶指數(shù)指數(shù)2 2n n使目的基因的片段在短時間內(nèi)成百萬倍地?cái)U(kuò)增使目的基因的片段在短時間內(nèi)成百萬倍地?cái)U(kuò)增要有一段已知目的基因的核苷酸序列（前提條件）要有一段已知目的基因的核苷酸序列（前提條件）過程：過程：a a、DNADNA變性變性（90-9590-95）：雙鏈）：雙鏈DNADNA模板模板 在熱作用下，在熱作用下，_斷裂，形成斷裂，形成_b b、退火、退火（復(fù)性復(fù)性55-6555-65）：系統(tǒng)溫度降低，引）：系統(tǒng)溫度降低，引 物與物與DNADNA模板結(jié)合，形成局部模板結(jié)合，形成局部_。 c c、延伸、延伸（70-7570-75）：在）

13、：在TaqTaq酶的作用下，酶的作用下，合成與模板互補(bǔ)的合成與模板互補(bǔ)的_。 氫鍵氫鍵單鏈單鏈DNADNA雙鏈雙鏈DNADNA鏈鏈PCR技術(shù)擴(kuò)增與技術(shù)擴(kuò)增與DNA復(fù)制的比較復(fù)制的比較PCR技術(shù)技術(shù)DNA復(fù)制復(fù)制相相同同點(diǎn)點(diǎn)原理原理原料原料條件條件不不同同點(diǎn)點(diǎn)解旋解旋方式方式場所場所酶酶結(jié)果結(jié)果堿基互補(bǔ)配對堿基互補(bǔ)配對四種脫氧核苷酸四種脫氧核苷酸模板、能量、酶模板、能量、酶DNA在高溫下變性解旋在高溫下變性解旋解旋酶催化解旋酶催化體外復(fù)制體外復(fù)制細(xì)胞核內(nèi)細(xì)胞核內(nèi)熱穩(wěn)定的熱穩(wěn)定的DNA聚合酶聚合酶細(xì)胞內(nèi)的細(xì)胞內(nèi)的DNA聚合酶聚合酶大量的大量的DNA片段片段形成整個形成整個DNA分子分子3 3、人工

14、合成的目的基因、人工合成的目的基因1.1.用一定的用一定的_切割切割 質(zhì)粒，使其出現(xiàn)一個切質(zhì)粒，使其出現(xiàn)一個切 口，露出口，露出_。2.2.用用_切斷目切斷目 的基因，使其產(chǎn)生的基因，使其產(chǎn)生_ _ _。 核心核心3.3.將切下的目的基因片段插入質(zhì)粒的將切下的目的基因片段插入質(zhì)粒的_處，處， 再加入適量再加入適量_，形成了一個重組，形成了一個重組 DNADNA分子（重組質(zhì)粒）分子（重組質(zhì)粒）限制酶限制酶黏性末端黏性末端同一種限制酶同一種限制酶的黏性末端的黏性末端切口切口DNADNA連接酶連接酶相同相同二基因表達(dá)載體的構(gòu)建二基因表達(dá)載體的構(gòu)建基因表達(dá)載體的構(gòu)建基因表達(dá)載體的構(gòu)建核心核心質(zhì)粒質(zhì)粒D

15、NADNA分子分子一個一個切口切口兩個兩個黏性末端黏性末端兩個兩個切口切口獲得目的基因獲得目的基因DNA DNA 連接酶連接酶重組重組DNADNA分子（重組質(zhì)粒）分子（重組質(zhì)粒）同一種同一種 限制酶限制酶基因表達(dá)載體的組成：基因表達(dá)載體的組成：目的：使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存目的：使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳給下一代，同時使目在，并且可以遺傳給下一代，同時使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。a、目的基因、目的基因b、啟動子、啟動子c、終止子、終止子d、標(biāo)記基因、標(biāo)記基因啟動子：啟動子：位于基因的首端的位于基因的首端的一段特殊的一段特殊的DNADNA片斷，它

16、是片斷，它是RNARNA聚合酶識別和結(jié)合的部聚合酶識別和結(jié)合的部位，有了它才能位，有了它才能驅(qū)動基因轉(zhuǎn)驅(qū)動基因轉(zhuǎn)錄出錄出mRNAmRNA，最終獲得蛋白質(zhì)，最終獲得蛋白質(zhì)終止子：終止子：位于基因的尾端的位于基因的尾端的一段特殊的一段特殊的DNADNA片斷，片斷，能終能終止止mRNAmRNA的轉(zhuǎn)錄的轉(zhuǎn)錄標(biāo)記基因標(biāo)記基因的作用是的作用是為了為了鑒別鑒別受體細(xì)胞中是否含有目的基受體細(xì)胞中是否含有目的基因，從而將有目的基因的細(xì)因，從而將有目的基因的細(xì)胞篩選出來胞篩選出來載體載體與與表達(dá)載體表達(dá)載體的區(qū)別：二者都有標(biāo)記基因的區(qū)別：二者都有標(biāo)記基因和復(fù)制原點(diǎn)兩部分和復(fù)制原點(diǎn)兩部分DNADNA片段。表達(dá)載體在

17、載體片段。表達(dá)載體在載體基礎(chǔ)上增加了基礎(chǔ)上增加了目的基因、啟動子、終止子目的基因、啟動子、終止子三部三部分結(jié)構(gòu)分結(jié)構(gòu)用到的工具酶：用到的工具酶：既用到限制酶切割載體，又既用到限制酶切割載體，又用到用到DNADNA連接酶將目的基因和載體拼接，兩種連接酶將目的基因和載體拼接，兩種酶作用的化學(xué)鍵都是磷酸二酯鍵酶作用的化學(xué)鍵都是磷酸二酯鍵啟動子、終止子啟動子、終止子對于目的基因表達(dá)必不可少對于目的基因表達(dá)必不可少目的基因不能單獨(dú)進(jìn)入受體細(xì)胞，目的基因不能單獨(dú)進(jìn)入受體細(xì)胞，必需以表必需以表達(dá)載體的方式攜帶進(jìn)去。達(dá)載體的方式攜帶進(jìn)去。注意注意三、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞三、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)化目的

18、基因進(jìn)入目的基因進(jìn)入_內(nèi)，并且在內(nèi)，并且在 受體細(xì)胞內(nèi)維持受體細(xì)胞內(nèi)維持_和和_的過程的過程受體細(xì)胞受體細(xì)胞穩(wěn)定穩(wěn)定表達(dá)表達(dá)方法方法導(dǎo)入植物細(xì)胞導(dǎo)入植物細(xì)胞導(dǎo)入動物細(xì)胞導(dǎo)入動物細(xì)胞導(dǎo)入微生物細(xì)胞導(dǎo)入微生物細(xì)胞農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法基因槍法基因槍法花粉管通道法花粉管通道法顯微注射法顯微注射法 感受態(tài)細(xì)胞吸收感受態(tài)細(xì)胞吸收DNADNA分子分子三、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞三、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞1 1、將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法：、將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法：（1）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 農(nóng)桿菌特點(diǎn)：農(nóng)桿菌特點(diǎn)：易感染雙子葉植物和裸子植物，對大多易感染雙子葉植物和裸子植物，對大多數(shù)單子葉植物

19、沒有感染能力數(shù)單子葉植物沒有感染能力原理：原理：Ti質(zhì)粒上的質(zhì)粒上的T-DNA可以轉(zhuǎn)可以轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞，并整合到受體細(xì)胞染移到受體細(xì)胞，并整合到受體細(xì)胞染色體的色體的DNA上。上。 目的基因插入目的基因插入TiTi質(zhì)粒的質(zhì)粒的T-DNAT-DNA上上 農(nóng)桿菌農(nóng)桿菌 導(dǎo)入植物細(xì)胞導(dǎo)入植物細(xì)胞 整合到受體細(xì)胞的染色體上整合到受體細(xì)胞的染色體上 目的基因的遺傳特性得以維持穩(wěn)定和表達(dá)目的基因的遺傳特性得以維持穩(wěn)定和表達(dá)過程：過程：（2）基因槍法基因槍法（3）花粉管通道法花粉管通道法2 2、將目的基因?qū)雱游锛?xì)胞、將目的基因?qū)雱游锛?xì)胞方法：顯微注射法方法：顯微注射法程序：程序：目的基因表達(dá)載體提純目的

20、基因表達(dá)載體提純 取卵（受精卵）取卵（受精卵） 顯微注射顯微注射 受精卵受精卵 新性狀動物新性狀動物3 3、將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞、將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞原核生物特點(diǎn)：繁殖快、單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)少原核生物特點(diǎn)：繁殖快、單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)少方法：方法： 用用Ca2+處理細(xì)胞處理細(xì)胞 感受態(tài)細(xì)胞感受態(tài)細(xì)胞 表表達(dá)載體與感受態(tài)細(xì)胞混合達(dá)載體與感受態(tài)細(xì)胞混合 感受態(tài)感受態(tài)細(xì)胞吸收細(xì)胞吸收DNA分子分子四、目的基因的檢測與鑒定四、目的基因的檢測與鑒定檢查是否成功檢查是否成功（一）、檢測（一）、檢測1 1、檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的、檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNADNA上是否插入上是否插入了目的基因了目的基因

21、( (關(guān)鍵步驟關(guān)鍵步驟) ).首先取出轉(zhuǎn)基因生物的基因組首先取出轉(zhuǎn)基因生物的基因組DNA.用含目的基因的用含目的基因的DNA片段用放射性同位素片段用放射性同位素等作標(biāo)記等作標(biāo)記,以此做探針以此做探針.使探針和轉(zhuǎn)基因生物的基因組雜交使探針和轉(zhuǎn)基因生物的基因組雜交,若顯若顯示出雜交帶示出雜交帶,表明染色體已插入染色體表明染色體已插入染色體DNA中中（1）方法方法: :DNADNA分子雜交分子雜交（2）過程）過程:歸納步驟DNADNA分子雜交示意圖分子雜交示意圖 采用一定的技術(shù)手段，將兩種生物的采用一定的技術(shù)手段，將兩種生物的DNADNA分分子的單鏈放在一起，如果這兩個單鏈具有互補(bǔ)子的單鏈放在一起，

22、如果這兩個單鏈具有互補(bǔ)的堿基序列，那么，互補(bǔ)的堿基序列就會結(jié)合的堿基序列，那么，互補(bǔ)的堿基序列就會結(jié)合在一起，形成雜合雙鏈區(qū)；在沒有互補(bǔ)堿基序在一起，形成雜合雙鏈區(qū)；在沒有互補(bǔ)堿基序列的部位，仍然是兩條游離的單鏈。列的部位，仍然是兩條游離的單鏈。 P P1515思考與探究思考與探究（二）、鑒定（個體生物學(xué)水平）（二）、鑒定（個體生物學(xué)水平）2 2、檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了、檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNAmRNA3 3、檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)、檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等方法方法: :分分 子子 雜雜 交交方法方法: :抗原抗體

23、雜交抗原抗體雜交過程過程: 用上述探針和轉(zhuǎn)基因生物的用上述探針和轉(zhuǎn)基因生物的mRNA雜交雜交,若出現(xiàn)雜交帶若出現(xiàn)雜交帶,表明目的基因轉(zhuǎn)錄出了表明目的基因轉(zhuǎn)錄出了mRNA歸納步驟( (四四) )目的基因的檢測與鑒定目的基因的檢測與鑒定檢查是否成功檢查是否成功檢測檢測鑒定鑒定檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA DNA 上是否插入了目的基因上是否插入了目的基因檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNAmRNA檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等方法方法方法方法方法方法DNADNA分子雜交分子

24、雜交分子雜交（注意與上不同之處）分子雜交（注意與上不同之處）抗原抗體雜交抗原抗體雜交歸納: 基因工程的基本操作程序 獲取目的基因獲取目的基因u從基因文庫從基因文庫u利用利用PCRPCRu化學(xué)方法人工合成化學(xué)方法人工合成 構(gòu)建基因表達(dá)載體構(gòu)建基因表達(dá)載體u目的基因、啟動子、終止子、標(biāo)記基因目的基因、啟動子、終止子、標(biāo)記基因 將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞u農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、顯微注射法農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、顯微注射法 目的基因的檢測與鑒定目的基因的檢測與鑒定u檢測：是否插入、轉(zhuǎn)錄、翻譯檢測：是否插入、轉(zhuǎn)錄、翻譯u鑒定：鑒定：練習(xí)練習(xí)1：(2008理綜山東卷理綜山東卷)為擴(kuò)大可耕地面積，為擴(kuò)大可耕

25、地面積，增加糧食產(chǎn)量，黃河三角洲等鹽堿地的開發(fā)利增加糧食產(chǎn)量，黃河三角洲等鹽堿地的開發(fā)利用備受關(guān)注。我國科學(xué)家應(yīng)用耐鹽基因培育出用備受關(guān)注。我國科學(xué)家應(yīng)用耐鹽基因培育出了耐鹽水稻新品系。了耐鹽水稻新品系。（1）獲得耐鹽基因后，構(gòu)建重組）獲得耐鹽基因后，構(gòu)建重組DNA分子所分子所用的限制性內(nèi)切酶作用于圖中的用的限制性內(nèi)切酶作用于圖中的 處，處，DNA連接酶作用于連接酶作用于 處。（填處。（填“a”或或“b”）aa練習(xí)練習(xí)1：(2008理綜山東卷理綜山東卷)為擴(kuò)大可耕地面積，增為擴(kuò)大可耕地面積，增加糧食產(chǎn)量，黃河三角洲等鹽堿地的開發(fā)利用備加糧食產(chǎn)量，黃河三角洲等鹽堿地的開發(fā)利用備受關(guān)注。我國科學(xué)家

26、應(yīng)用耐鹽基因培育出了耐鹽受關(guān)注。我國科學(xué)家應(yīng)用耐鹽基因培育出了耐鹽水稻新品系。水稻新品系。（2）將重組）將重組DNA分子導(dǎo)入水稻受體細(xì)胞的常用方分子導(dǎo)入水稻受體細(xì)胞的常用方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法和法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法和 法。法。（3）由導(dǎo)入目的基因的水稻細(xì)胞培養(yǎng)成植株需要）由導(dǎo)入目的基因的水稻細(xì)胞培養(yǎng)成植株需要利用利用 技術(shù)，該技術(shù)的核心是技術(shù)，該技術(shù)的核心是 和和 。（4）為了確定耐鹽轉(zhuǎn)基因水稻是否培育成功，既）為了確定耐鹽轉(zhuǎn)基因水稻是否培育成功，既要用放射性同位素標(biāo)記的要用放射性同位素標(biāo)記的 作探針進(jìn)行作探針進(jìn)行分子雜交檢測，又要用分子雜交檢測，又要用 方方法從個體水平鑒定水稻植株的耐鹽性。法從個體水平鑒定水稻植株的耐鹽性?；驑尫ǎɑǚ酃芡ǖ婪ǎ┗驑尫ǎɑǚ酃芡ǖ婪ǎ┲参锝M織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)脫分化和