研究黃芪精中黃芪甲苷

1、研究黃芪精中黃芪甲苷揚(yáng)揚(yáng) 子子 江江 藥藥 業(yè)業(yè) 集集 團(tuán)團(tuán)揚(yáng)揚(yáng) 子子 江江 藥藥 業(yè)業(yè) 集集 團(tuán)團(tuán)研究黃芪精中黃芪甲苷二.小組概況( (一一) )小組簡(jiǎn)介小組簡(jiǎn)介 小組名稱小組名稱飛躍飛躍QCQC小組小組課題注冊(cè)號(hào)課題注冊(cè)號(hào)TZ2005015TZ2005015課題類型課題類型創(chuàng)新型創(chuàng)新型小組成員小組成員8 8人人成立時(shí)間成立時(shí)間2005.102005.10活動(dòng)時(shí)間活動(dòng)時(shí)間2005.102005.102006.42006.4課題名稱課題名稱研究黃芪精中黃芪甲苷含量測(cè)定的新方法研究黃芪精中黃芪甲苷含量測(cè)定的新方法活動(dòng)次數(shù)活動(dòng)次數(shù)1919次次出勤率出勤率100%100%制表人：張集盤制表人：張集盤

2、 日期：日期：2006.3 .202006.3 .20揚(yáng)揚(yáng) 子子 江江 藥藥 業(yè)業(yè) 集集 團(tuán)團(tuán)研究黃芪精中黃芪甲苷(二)QC小組成員一覽表序號(hào)序號(hào)姓名姓名性別性別受教育情況受教育情況職務(wù)職務(wù)組內(nèi)分工組內(nèi)分工1張集盤張集盤男男大專大專標(biāo)準(zhǔn)研究員標(biāo)準(zhǔn)研究員組長(zhǎng)，資料整理組長(zhǎng)，資料整理2黃新蘭黃新蘭女女本科，工程師，質(zhì)量本科，工程師，質(zhì)量管理工程師管理工程師QC主管主管副組長(zhǎng)，技術(shù)指導(dǎo)副組長(zhǎng)，技術(shù)指導(dǎo)3馬馬 軍軍男男大專大專標(biāo)準(zhǔn)研究員標(biāo)準(zhǔn)研究員方案實(shí)施方案實(shí)施4盧晶晶盧晶晶女女本科本科標(biāo)準(zhǔn)研究員標(biāo)準(zhǔn)研究員方案實(shí)施，成果匯報(bào)方案實(shí)施，成果匯報(bào)5陸莉娟陸莉娟女女大專大專標(biāo)準(zhǔn)研究員標(biāo)準(zhǔn)研究員方案實(shí)施方案實(shí)

3、施6祖若玉祖若玉女女大專大專標(biāo)準(zhǔn)研究員標(biāo)準(zhǔn)研究員方案實(shí)施方案實(shí)施7牛牛 萍萍女女碩士，高工，質(zhì)量管碩士，高工，質(zhì)量管理工程師理工程師質(zhì)管經(jīng)理質(zhì)管經(jīng)理技術(shù)指導(dǎo)技術(shù)指導(dǎo)8季洪英季洪英女女大專，工程師，質(zhì)量大專，工程師，質(zhì)量管理工程師管理工程師質(zhì)管部長(zhǎng)質(zhì)管部長(zhǎng)技術(shù)指導(dǎo)技術(shù)指導(dǎo)制表人：張集盤制表人：張集盤 日期：日期：2006.3.20研究黃芪精中黃芪甲苷三選擇課題三選擇課題1.薄層掃描法測(cè)定黃芪精中黃芪甲苷含量的缺陷分析薄層掃描法測(cè)定黃芪精中黃芪甲苷含量的缺陷分析基線不基線不穩(wěn)定穩(wěn)定耗時(shí)長(zhǎng)耗時(shí)長(zhǎng)易出現(xiàn)易出現(xiàn)鬼峰鬼峰偏差大偏差大缺陷缺陷研究黃芪精中黃芪甲苷1.1.掃描時(shí)基線不穩(wěn)定掃描時(shí)基線不穩(wěn)定研究黃

4、芪精中黃芪甲苷1.2.容易出現(xiàn)鬼峰容易出現(xiàn)鬼峰研究黃芪精中黃芪甲苷1.3.檢測(cè)偏差大，方法的準(zhǔn)確性較差檢測(cè)偏差大，方法的準(zhǔn)確性較差研究黃芪精中黃芪甲苷v1.4.薄層板展開耗時(shí)長(zhǎng)，且一塊薄層板只能點(diǎn)一個(gè)薄層板展開耗時(shí)長(zhǎng)，且一塊薄層板只能點(diǎn)一個(gè)批號(hào)的供試品，檢測(cè)批次很有限，導(dǎo)致出成品檢測(cè)批號(hào)的供試品，檢測(cè)批次很有限，導(dǎo)致出成品檢測(cè)報(bào)告的周期較長(zhǎng)。報(bào)告的周期較長(zhǎng)。v1.5.按照部頒標(biāo)準(zhǔn)，以薄層掃描法按照部頒標(biāo)準(zhǔn)，以薄層掃描法 （TLCS）對(duì)黃）對(duì)黃芪精中黃芪甲苷進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果如下。芪精中黃芪甲苷進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果如下。研究黃芪精中黃芪甲苷黃芪精按部頒標(biāo)準(zhǔn)含量測(cè)定結(jié)果黃芪精按部頒標(biāo)準(zhǔn)含量測(cè)定結(jié)果批

5、批 號(hào)號(hào)含量（含量（mgml-1）含量平均值含量平均值（mgml-1）相對(duì)平均偏差相對(duì)平均偏差（%）030301-10.114120.105260.109694.1030401-10.110680.106490.108582.0030501-10.126550.119450.123002.9030601-10.120410.113520.116963.0030702-10.129010.119300.124164.0030801-10.125070.133710.129393.4制表人：張集盤制表人：張集盤 日期：日期：2005.11.3TLCS法測(cè)定本品含量時(shí)偏差大，不利于產(chǎn)品質(zhì)量的控制。法

6、測(cè)定本品含量時(shí)偏差大，不利于產(chǎn)品質(zhì)量的控制。研究黃芪精中黃芪甲苷2.課題確定課題確定 研究研究黃芪黃芪精中精中黃芪黃芪甲苷甲苷含量含量測(cè)定測(cè)定的新的新方法方法可供直接借鑒的方法少可供直接借鑒的方法少黃芪化學(xué)成分復(fù)雜黃芪化學(xué)成分復(fù)雜黃芪為君藥黃芪為君藥黃芪甲苷為主要有效成分黃芪甲苷為主要有效成分研究黃芪精中黃芪甲苷四四.設(shè)定目標(biāo)設(shè)定目標(biāo)v擬制定黃芪精中黃芪甲苷含量擬制定黃芪精中黃芪甲苷含量測(cè)定的新方法的回收率不低于測(cè)定的新方法的回收率不低于90%；含量測(cè)定結(jié)果的相對(duì)平；含量測(cè)定結(jié)果的相對(duì)平均偏差小于均偏差小于2.0%。研究黃芪精中黃芪甲苷五提出并選擇最佳方案五提出并選擇最佳方案v 1.提出方案提

7、出方案v（1）HPLC-UV（高效液相色譜（高效液相色譜-紫外檢測(cè)器）法紫外檢測(cè)器）法v（2）HPLC-RI（高效液相色譜（高效液相色譜-示差折光檢測(cè)器）法示差折光檢測(cè)器）法v（3）HPLC-ELSD（高效液相色譜（高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)器）法蒸發(fā)光散射檢測(cè)器）法研究黃芪精中黃芪甲苷 2.方案的分析、評(píng)估與確定方案的分析、評(píng)估與確定序序號(hào)號(hào)方方 案案 內(nèi)內(nèi) 容容原原 理理 分分 析析評(píng)估人評(píng)估人方方 案案 評(píng)評(píng) 估估綜綜合合得得分分方案方案選定選定可操作可操作性性準(zhǔn)確準(zhǔn)確性性經(jīng)濟(jì)經(jīng)濟(jì)性性1HPLC-UV（高效液相色譜（高效液相色譜-紫外檢測(cè)器）紫外檢測(cè)器）法法利用黃芪甲利用黃芪甲苷在苷在

8、203nm處有末端吸處有末端吸收的原理收的原理,建立以乙腈建立以乙腈-水水（32：68）為流動(dòng)相的為流動(dòng)相的HPLC-UV法法張集盤張集盤44因在因在203nm處干處干擾大擾大不選不選黃新蘭黃新蘭馬馬 軍軍盧晶晶盧晶晶陸莉娟陸莉娟祖若玉祖若玉牛牛 萍萍季洪英季洪英研究黃芪精中黃芪甲苷序序號(hào)號(hào)方方 案案 內(nèi)內(nèi) 容容原原 理理 分分 析析評(píng)估人評(píng)估人方方 案案 評(píng)評(píng) 估估綜綜合合得得分分方案方案選定選定可操作可操作性性準(zhǔn)確準(zhǔn)確性性經(jīng)濟(jì)經(jīng)濟(jì)性性2HPLC- RI（高效液相色（高效液相色譜譜-示差折光示差折光檢測(cè)器）檢測(cè)器）法法樣品組分折樣品組分折射率與流動(dòng)射率與流動(dòng)相溶劑折射相溶劑折射率有差異，率有

9、差異，當(dāng)組分洗脫當(dāng)組分洗脫出來時(shí)，會(huì)出來時(shí)，會(huì)引起流動(dòng)相引起流動(dòng)相折射率的變折射率的變化，該變化化，該變化與樣品組分與樣品組分的濃度成正的濃度成正比比 張集盤張集盤 32因靈因靈敏度敏度不高不高不選不選黃新蘭黃新蘭 馬馬 軍軍 盧晶晶盧晶晶 陸莉娟陸莉娟 祖若玉祖若玉 牛牛 萍萍 季洪英季洪英 研究黃芪精中黃芪甲苷序序號(hào)號(hào)方方 案案 內(nèi)內(nèi) 容容原原 理理 分分 析析評(píng)估人評(píng)估人方方 案案 評(píng)評(píng) 估估綜綜合合得得分分方案選方案選定定可操作可操作性性準(zhǔn)確準(zhǔn)確性性經(jīng)濟(jì)經(jīng)濟(jì)性性3HPLC-ELSD （高效液相色（高效液相色譜譜-蒸發(fā)光散射蒸發(fā)光散射檢測(cè)器）檢測(cè)器）法法 ELSD可以可以對(duì)所有揮發(fā)對(duì)所有

10、揮發(fā)性低于流動(dòng)性低于流動(dòng)相的物質(zhì)作相的物質(zhì)作出準(zhǔn)確檢測(cè)出準(zhǔn)確檢測(cè),而與被檢測(cè)而與被檢測(cè)物質(zhì)的化學(xué)物質(zhì)的化學(xué)基團(tuán)關(guān)系不基團(tuán)關(guān)系不大大,響應(yīng)值響應(yīng)值與樣品的質(zhì)與樣品的質(zhì)量成正比量成正比張集盤張集盤76因檢測(cè)因檢測(cè)范圍廣、范圍廣、靈敏度靈敏度高，故高，故選定選定黃新蘭黃新蘭馬馬 軍軍盧晶晶盧晶晶陸莉娟陸莉娟祖若玉祖若玉牛牛 萍萍 季洪英季洪英 備注：可操作性、準(zhǔn)確性、經(jīng)濟(jì)性三個(gè)指標(biāo)均以備注：可操作性、準(zhǔn)確性、經(jīng)濟(jì)性三個(gè)指標(biāo)均以1分（分（一般）、一般）、3分（分（良好）、良好）、5分（分（顯著）為評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，上述綜合得分為顯著）為評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，上述綜合得分為QC小組成員所評(píng)分?jǐn)?shù)的總和。小組成員所評(píng)分?jǐn)?shù)的總和

11、。研究黃芪精中黃芪甲苷3.確定方案的采用順序確定方案的采用順序（3）HPLC-ELSD（高效液相色譜高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)器）法蒸發(fā)光散射檢測(cè)器）法（1）HPLC-UV（高效液相色譜（高效液相色譜-紫外檢測(cè)器）法紫外檢測(cè)器）法（2）HPLC-RI（高效液相色譜（高效液相色譜-示差折光檢測(cè)器）法示差折光檢測(cè)器）法P DCA研究黃芪精中黃芪甲苷六制定對(duì)策六制定對(duì)策 根據(jù)以上選擇的最佳方案制訂對(duì)策表根據(jù)以上選擇的最佳方案制訂對(duì)策表對(duì)對(duì) 策策目目 標(biāo)標(biāo)措措 施施地地 點(diǎn)點(diǎn)時(shí)時(shí) 間間負(fù)責(zé)人負(fù)責(zé)人色譜條件色譜條件的確定的確定峰形對(duì)稱，目標(biāo)峰形對(duì)稱，目標(biāo)峰與相鄰峰分離峰與相鄰峰分離度不小于度不小于1.

12、5，保，保留時(shí)間適中留時(shí)間適中對(duì)不同的色譜柱、流動(dòng)對(duì)不同的色譜柱、流動(dòng)相、流速等進(jìn)行摸索，相、流速等進(jìn)行摸索，盡量與藥典中黃芪藥材盡量與藥典中黃芪藥材含量測(cè)定的色譜條件劃含量測(cè)定的色譜條件劃一一儀器室儀器室05.11.2105.11.28張集盤張集盤馬馬 軍軍供試品前供試品前處理方法處理方法的選擇的選擇有效地提取目標(biāo)有效地提取目標(biāo)物且操作方便物且操作方便摸索科學(xué)、準(zhǔn)確的供試摸索科學(xué)、準(zhǔn)確的供試品前處理方法，盡量與品前處理方法，盡量與藥典中黃芪藥材含量測(cè)藥典中黃芪藥材含量測(cè)定的前處理方法劃一定的前處理方法劃一儀器室儀器室05.12.0505.12.17張集盤張集盤馬馬 軍軍盧晶晶盧晶晶陸莉娟陸莉

13、娟研究黃芪精中黃芪甲苷對(duì)對(duì) 策策目目 標(biāo)標(biāo)措措 施施地地 點(diǎn)點(diǎn)時(shí)時(shí) 間間負(fù)責(zé)人負(fù)責(zé)人線性關(guān)線性關(guān)系的確系的確定定 相關(guān)系數(shù)大于相關(guān)系數(shù)大于0.9990配制至少配制至少5個(gè)個(gè)系列濃度，選系列濃度，選擇適當(dāng)?shù)那€擇適當(dāng)?shù)那€擬和類型進(jìn)行擬和類型進(jìn)行確定確定 儀器室儀器室 06.01.0506.01.20 張集盤張集盤馬馬 軍軍盧晶晶盧晶晶精密度精密度試驗(yàn)試驗(yàn) 峰面積的相對(duì)峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD2.0% 同一供試品至同一供試品至少連續(xù)進(jìn)樣少連續(xù)進(jìn)樣5次，考查色譜次，考查色譜峰面積的相對(duì)峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD） 儀器室儀器室 06.02.0506.02.11 張集盤張集盤馬馬

14、 軍軍祖若玉祖若玉研究黃芪精中黃芪甲苷對(duì)對(duì) 策策目目 標(biāo)標(biāo)措措 施施地地 點(diǎn)點(diǎn)時(shí)時(shí) 間間負(fù)責(zé)人負(fù)責(zé)人重復(fù)性重復(fù)性試驗(yàn)試驗(yàn) 含量測(cè)定結(jié)果的含量測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD2.0%同一批號(hào)的供同一批號(hào)的供試品同一人同試品同一人同一儀器平行操一儀器平行操作作6份，考查含份，考查含量測(cè)定結(jié)果的量測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD） 儀器室儀器室 06.02.1306.02.18 張集盤張集盤穩(wěn)定性穩(wěn)定性試驗(yàn)試驗(yàn)峰面積的相對(duì)標(biāo)峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差準(zhǔn)偏差RSD2.0% 同一供試品分同一供試品分別在別在0、2、4小時(shí)進(jìn)樣小時(shí)進(jìn)樣分析，考查色分析，考查色譜峰面積的相譜峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差對(duì)

15、標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）儀器室儀器室 06.02.2006.02.23 張集盤張集盤馬馬 軍軍盧晶晶盧晶晶祖若玉祖若玉 研究黃芪精中黃芪甲苷對(duì)對(duì) 策策目目 標(biāo)標(biāo)措措 施施地地 點(diǎn)點(diǎn)時(shí)時(shí) 間間負(fù)責(zé)人負(fù)責(zé)人方法回收方法回收率試驗(yàn)率試驗(yàn) 方法回收率不低方法回收率不低于于90% 同一批號(hào)已知同一批號(hào)已知含量的供試品含量的供試品加入適量的對(duì)加入適量的對(duì)照品（或?qū)φ照掌罚ɑ驅(qū)φ掌啡芤海┢叫衅啡芤海┢叫胁僮鞑僮?份，考查份，考查方法回收率方法回收率 儀器室儀器室 06.02.2506.03.10張集盤張集盤馬馬 軍軍陸莉娟陸莉娟 制表人：張集盤制表人：張集盤 日期：日期：2005.11.4研究黃芪精中黃芪甲苷七對(duì)

16、策實(shí)施七對(duì)策實(shí)施實(shí)施一：色譜條件的確定實(shí)施一：色譜條件的確定1.儀器與試藥儀器與試藥 Agilent1100高效液相色譜儀；高效液相色譜儀；Attech2000蒸發(fā)光蒸發(fā)光散射檢測(cè)器；梅特勒散射檢測(cè)器；梅特勒AG285電子天平。電子天平。 黃芪精黃芪精；天津農(nóng)藥總廠天津農(nóng)藥總廠D101型大孔吸附樹脂；甲醇、型大孔吸附樹脂；甲醇、乙腈為色譜純；乙腈為色譜純；95%乙醇為分析純；水為超純水。乙醇為分析純；水為超純水。研究黃芪精中黃芪甲苷2.對(duì)照品溶液的制備對(duì)照品溶液的制備v取黃芪甲苷對(duì)照品適量，加甲醇溶解，配制成取黃芪甲苷對(duì)照品適量，加甲醇溶解，配制成0.1 mgml-1的對(duì)照品溶液。的對(duì)照品溶液

17、。3.供試品溶液的制備供試品溶液的制備v精密量取本品精密量取本品10ml，置分液漏斗中，加水，置分液漏斗中，加水10ml，搖，搖勻，用水飽和的正丁醇振搖提取勻，用水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次次，每次20ml，合，合并正丁醇液，用氨試液充分洗滌并正丁醇液，用氨試液充分洗滌2次，每次次，每次20ml，棄，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状既グ币?，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状?0ml使溶解，使溶解，0.45 m有機(jī)系微孔濾膜濾過，即得有機(jī)系微孔濾膜濾過，即得。研究黃芪精中黃芪甲苷4.色譜條件的確定色譜條件的確定研究黃芪精中黃芪甲苷色譜條件篩選圖色譜條件篩選圖1色譜柱：色譜柱：Agilent XDB-

18、C18柱（柱（4.6150 mm，5m）流動(dòng)相：乙腈流動(dòng)相：乙腈-水水 (40：60)柱溫：柱溫：40流速：流速：1.2mlmin-1min24681012mAu100200300400500600700 ADC1 A, ADC1 CHANNEL A (ZJPHQJ21528.D) 1.405 7.917研究黃芪精中黃芪甲苷色譜條件篩選圖色譜條件篩選圖2色譜柱：色譜柱：Agilent XDB-C18柱（柱（4.6150 mm，5m）流動(dòng)相：乙腈流動(dòng)相：乙腈-水水 (40：60)柱溫：柱溫：40流速：流速：1.0 mlmin-1min2468101214mAu150200250300350400

19、450 ADC1 A, ADC1 CHANNEL A (ZJPHQJ11038.D) 1.406 1.848 2.463 2.738 3.088 3.281 10.198研究黃芪精中黃芪甲苷色譜條件篩選圖色譜條件篩選圖3色譜柱：色譜柱：Agilent XDB-C18柱（柱（4.6150 mm，5m）流動(dòng)相：乙腈流動(dòng)相：乙腈-水水 (40：60)柱溫：柱溫：40流速：流速：0.9 mlmin-1min24681012mAu20040060080010001200 ADC1 A, ADC1 CHANNEL A (ZJPHQJ25055.D) 1.482 11.243研究黃芪精中黃芪甲苷色譜條件篩選

20、圖色譜條件篩選圖4色譜柱：色譜柱：Agilent XDB-C18柱（柱（4.6150 mm，5 m）流動(dòng)相：乙腈流動(dòng)相：乙腈-水水 (40：60)柱溫：柱溫：40流速：流速：0.9 mlmin-1min24681012mAu25050075010001250150017502000 ADC1 A, ADC1 CHANNEL A (ZJPHQJ25019.D) 1.427 1.853 2.814 3.315 3.507 4.446 11.265 12.380研究黃芪精中黃芪甲苷色譜條件篩選圖色譜條件篩選圖5色譜柱：色譜柱：Agilent XDB-C18柱（柱（4.6150 mm，5m）流動(dòng)相：乙

21、腈流動(dòng)相：乙腈-水水 (32：68)柱溫：柱溫：40流速：流速：1.0 mlmin-1min2468101214mAu200250300350400450500550 ADC1 A, ADC1 CHANNEL A (ZJPHQJ11185.D) 1.494 10.575 - Astragaloside 研究黃芪精中黃芪甲苷色譜條件篩選圖色譜條件篩選圖6色譜柱：色譜柱：Agilent XDB-C18柱（柱（4.6150 mm，5 m）流動(dòng)相：乙腈流動(dòng)相：乙腈-水水 (32：68)柱溫：柱溫：40流速：流速：1.0 mlmin-1min24681012mAu200250300350400 ADC1

22、 A, ADC1 CHANNEL A (ZJPHQJ11215.D) 1.485 1.877 2.786 3.150 3.345 10.453 - Astragaloside 研究黃芪精中黃芪甲苷色譜條件篩選圖色譜條件篩選圖7色譜柱：色譜柱：Dikma DiamonsilTM（鉆石）（鉆石）C18柱柱(4.6250 mm,5 m)流動(dòng)相：乙腈流動(dòng)相：乙腈-水水 (40：60)柱溫：柱溫：40流速：流速：1.0 mlmin-1min2.557.51012.51517.5mAu02505007501000125015001750 ADC1 A, ADC1 CHANNEL A (ZJPHQJ0000

23、1.D) 2.294 10.117 17.536 19.273研究黃芪精中黃芪甲苷色譜條件選擇情況匯總表色譜條件選擇情況匯總表制表人：馬軍制表人：馬軍 日期：日期：2005.11.20色譜柱色譜柱流動(dòng)相流動(dòng)相不同流速（不同流速（mlmin-1）下的）下的對(duì)照品溶液色譜峰分離情況對(duì)照品溶液色譜峰分離情況不同流速（不同流速（mlmin-1）下的）下的供試品溶液色譜峰分離情況供試品溶液色譜峰分離情況0.91.01.20.91.01.2Agilent XDB-C18柱柱（4.6150 mm，5 m）乙腈乙腈-水水 (40：60)峰形對(duì)稱；目標(biāo)峰與相鄰峰峰形對(duì)稱；目標(biāo)峰與相鄰峰分離度大于分離度大于1.5

24、，保留時(shí)間適，保留時(shí)間適中中峰形對(duì)稱；目標(biāo)峰與相鄰峰峰形對(duì)稱；目標(biāo)峰與相鄰峰分離度大于分離度大于1.5，保留時(shí)間適，保留時(shí)間適中中Dikma DiamonsilTM（鉆石）（鉆石）C18柱柱（4.6250 mm，5 m）乙腈乙腈-水水 (40：60)峰形對(duì)稱；目標(biāo)峰與相鄰峰峰形對(duì)稱；目標(biāo)峰與相鄰峰分離度大于分離度大于1.5，tR R10min10min峰形對(duì)稱；目標(biāo)峰與相鄰峰峰形對(duì)稱；目標(biāo)峰與相鄰峰分離度大于分離度大于1.5，tR R10min10minAgilent XDB-C18柱柱（4.6150 mm，5 m）乙腈乙腈-水水 (32：68)峰形對(duì)稱；目標(biāo)峰與相鄰峰峰形對(duì)稱；目標(biāo)峰與相鄰峰

25、分離度大于分離度大于1.5，tR R10min10min峰形對(duì)稱；目標(biāo)峰與相鄰峰峰形對(duì)稱；目標(biāo)峰與相鄰峰分離度大于分離度大于1.5，tR R10min10minDikma DiamonsilTM（鉆石）（鉆石）C18柱柱（4.6250 mm，5 m）乙腈乙腈-水水 (32：68)峰形較對(duì)稱；目標(biāo)峰與相鄰峰形較對(duì)稱；目標(biāo)峰與相鄰峰分離度大于峰分離度大于1.5，tR R10min10min峰形較對(duì)稱；目標(biāo)峰與相鄰峰形較對(duì)稱；目標(biāo)峰與相鄰峰分離度大于峰分離度大于1.5，tR R10min10min研究黃芪精中黃芪甲苷v 因此，可以選擇因此，可以選擇Agilent XDB-C18柱柱（4.6150 m

26、m，5 m）、以、以乙腈乙腈-水水 (32：68)為流動(dòng)相為流動(dòng)相，流速為流速為1.0 mlmin-1進(jìn)行后續(xù)進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。試驗(yàn)。研究黃芪精中黃芪甲苷實(shí)施二：供試品前處理方法的選擇實(shí)施二：供試品前處理方法的選擇1.供試品溶液的制備供試品溶液的制備精密量取本品精密量取本品10ml，置分液漏斗中，加水，置分液漏斗中，加水10ml，搖勻，用，搖勻，用水飽和的正丁醇振搖提取水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次次，每次20ml，合并正丁醇液，合并正丁醇液，用氨試液充分洗滌用氨試液充分洗滌2次，每次次，每次20ml，棄去氨液，正丁醇液蒸，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)铀?，殘?jiān)铀?ml使溶解，放冷，通過使溶

27、解，放冷，通過D101型大孔吸附樹脂型大孔吸附樹脂柱，以水柱，以水50ml洗脫，棄去水液，再用洗脫，棄去水液，再用A乙醇乙醇30ml洗脫，洗脫，棄去洗脫液，繼用棄去洗脫液，繼用B乙醇乙醇50ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，洗脫，收集洗脫液，蒸干，用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，即得。濾過，即得。研究黃芪精中黃芪甲苷2.提取分離條件的確定提取分離條件的確定收集上述水液和各擬棄去的乙醇洗脫液，蒸收集上述水液和各擬棄去的乙醇洗脫液，蒸干，加甲醇適量使溶解，得溶液干，加甲醇適量使溶解，得溶液C按照上述按照上述色譜條件分別進(jìn)樣色譜條件

28、分別進(jìn)樣20 l，記錄色譜峰面積。，記錄色譜峰面積。研究黃芪精中黃芪甲苷各擬棄去的乙醇洗脫液蒸干，加甲醇適量使溶解，得溶液各擬棄去的乙醇洗脫液蒸干，加甲醇適量使溶解，得溶液C水液水液30%40%50%60%70%80%95%黃芪甲黃芪甲苷峰檢苷峰檢出情況出情況未檢未檢出出未檢未檢出出檢出檢出量較量較小小檢出檢出量較量較大大檢出檢出量最量最大大未檢未檢出出未檢未檢出出未檢未檢出出制表人制表人:盧晶晶盧晶晶 日期日期:2005.12.10研究黃芪精中黃芪甲苷v試驗(yàn)結(jié)果表明：（試驗(yàn)結(jié)果表明：（1）棄去的水液中目）棄去的水液中目標(biāo)物無損失；（標(biāo)物無損失；（2）當(dāng)）當(dāng)A=40，即采用，即采用40%乙醇洗

29、脫時(shí)，目標(biāo)物有損失；（乙醇洗脫時(shí)，目標(biāo)物有損失；（3）當(dāng)當(dāng)B=60，即繼續(xù)采用，即繼續(xù)采用60%乙醇洗脫時(shí)，乙醇洗脫時(shí)，則目標(biāo)物洗脫不完全。則目標(biāo)物洗脫不完全。v因此因此確定確定A%、B%的最佳值分別為：的最佳值分別為：30%、70%，并以此值確定的提取分離，并以此值確定的提取分離條件進(jìn)行后續(xù)方法學(xué)的驗(yàn)證。條件進(jìn)行后續(xù)方法學(xué)的驗(yàn)證。研究黃芪精中黃芪甲苷實(shí)施三：線性關(guān)系的確定實(shí)施三：線性關(guān)系的確定v取黃芪甲苷對(duì)照品適量，加甲醇溶解并稀釋至取黃芪甲苷對(duì)照品適量，加甲醇溶解并稀釋至8個(gè)系列濃度個(gè)系列濃度, 分別進(jìn)樣分別進(jìn)樣10 l，測(cè)定峰面積，測(cè)定峰面積，以對(duì)照品濃度以對(duì)照品濃度X(mgml-1)的

30、的lg值為橫坐標(biāo)，峰值為橫坐標(biāo)，峰面積積分值面積積分值Y的的lg值為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，值為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：得回歸方程： Y=0.1819X+1.9515 r=0.9992研究黃芪精中黃芪甲苷工作曲線工作曲線評(píng)價(jià)：評(píng)價(jià)：結(jié)果表明黃芪甲苷在結(jié)果表明黃芪甲苷在76.560255.20 gml-1 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。研究黃芪精中黃芪甲苷實(shí)施四：精密度試驗(yàn)實(shí)施四：精密度試驗(yàn)取同一供試品溶液，在上述色譜條件下重復(fù)取同一供試品溶液，在上述色譜條件下重復(fù)進(jìn)樣進(jìn)樣6次，每次次，每次10 l，測(cè)得黃芪甲苷色譜峰，測(cè)得黃芪甲苷色譜峰峰面積平均值為峰面積平均值為978.5788

31、3，RSD為為0.5%。研究黃芪精中黃芪甲苷制表人：祖若玉制表人：祖若玉 日期：日期：2006.2.7進(jìn)樣次數(shù)進(jìn)樣次數(shù)峰面積峰面積峰面積平均值峰面積平均值RSD（%）1977.09442978.578830.52980.079413975.409004986.095835976.362926976.43140研究黃芪精中黃芪甲苷繪圖人：祖若玉繪圖人：祖若玉 日期：日期：2006.2.7評(píng)價(jià)：精密度良好，達(dá)到預(yù)期目標(biāo)。評(píng)價(jià)：精密度良好，達(dá)到預(yù)期目標(biāo)。研究黃芪精中黃芪甲苷實(shí)施五：重復(fù)性試驗(yàn)實(shí)施五：重復(fù)性試驗(yàn)取同一批號(hào)樣品，制備取同一批號(hào)樣品，制備6份供試品溶液，分份供試品溶液，分別精密吸取對(duì)照品溶

32、液別精密吸取對(duì)照品溶液10l、20l，供試，供試品溶液品溶液10l，注入液相色譜儀，測(cè)定峰面，注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積值，以外標(biāo)兩點(diǎn)法對(duì)數(shù)方程計(jì)算，即得積值，以外標(biāo)兩點(diǎn)法對(duì)數(shù)方程計(jì)算，即得黃芪甲苷的含量。黃芪甲苷的含量。研究黃芪精中黃芪甲苷重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果試驗(yàn)次數(shù)試驗(yàn)次數(shù)含量含量（mgml-1）含量平均值含量平均值（mgml-1）RSD（%）10.1234380.1223571.20.12196820.1233660.12376830.1238620.12227040.1211760.12373450.1211650.11947860.1209460.123113制表人：張集盤制

33、表人：張集盤 日期：日期：2006.2.14研究黃芪精中黃芪甲苷 繪圖人：張集盤繪圖人：張集盤 日期：日期：2006.2.14評(píng)價(jià)：重復(fù)性試驗(yàn)評(píng)價(jià)：重復(fù)性試驗(yàn)RSD為為1.2%，達(dá)到預(yù)期目標(biāo)。，達(dá)到預(yù)期目標(biāo)。 研究黃芪精中黃芪甲苷實(shí)施六：穩(wěn)定性試驗(yàn)實(shí)施六：穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一供試品溶液，于取同一供試品溶液，于0、2、4、6、12、14 h分別精密吸取分別精密吸取10 l注入液相色譜儀分注入液相色譜儀分析，測(cè)得峰面積值，計(jì)算析，測(cè)得峰面積值，計(jì)算RSD。 研究黃芪精中黃芪甲苷穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)樣時(shí)間進(jìn)樣時(shí)間（h）峰面積峰面積峰面積平均值峰面積平均值RSD（%）01071.51477106

34、9.388771.821064.4517841077.6015661053.73657121098.48413141043.48083制表人：盧晶晶制表人：盧晶晶 日期：日期：2006.2.20研究黃芪精中黃芪甲苷繪圖人：盧晶晶繪圖人：盧晶晶 日期：日期：2006.2.20 評(píng)價(jià)：上述結(jié)果表明供試品溶液在評(píng)價(jià)：上述結(jié)果表明供試品溶液在14 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。內(nèi)穩(wěn)定性良好。研究黃芪精中黃芪甲苷實(shí)施七：方法回收率試驗(yàn)實(shí)施七：方法回收率試驗(yàn) v精密吸取已知含量同一批號(hào)樣品精密吸取已知含量同一批號(hào)樣品5 ml，6份，份，分別精密加入已知濃度的對(duì)照品溶液分別精密加入已知濃度的對(duì)照品溶液5 ml，制備溶液，

35、分別進(jìn)樣制備溶液，分別進(jìn)樣10 l，測(cè)得峰面積值，測(cè)得峰面積值， 計(jì)算平均回收率和計(jì)算平均回收率和RSD。研究黃芪精中黃芪甲苷回收率測(cè)定結(jié)果（回收率測(cè)定結(jié)果（n = 6）取樣量取樣量（ml）樣品含量樣品含量（mg）加入量加入量（mg）測(cè)得量測(cè)得量（mg）回收率回收率（%）平均值平均值（%）RSD（%）50.8219550.52701.3168893.9196.761.911.3248795.4350.8219550.52701.3455599.351.3418698.6550.8219550.52701.3305796.511.3396498.2350.8219550.52701.335269

36、7.401.3371497.7650.8219550.52701.3218994.861.3219794.8850.8219550.52701.3432198.911.3241195.29制表人：張集盤制表人：張集盤 日期：日期：2006.2.26研究黃芪精中黃芪甲苷評(píng)價(jià)：平均回收率為評(píng)價(jià)：平均回收率為96.76%，RSD為為1.91%，表明方，表明方法準(zhǔn)確度良好，可以用于本品的定量分析。法準(zhǔn)確度良好，可以用于本品的定量分析。研究黃芪精中黃芪甲苷評(píng)價(jià)評(píng)價(jià)v1.初步評(píng)價(jià)初步評(píng)價(jià)v建立了黃芪精中黃芪甲苷含量測(cè)定的新方法，建立了黃芪精中黃芪甲苷含量測(cè)定的新方法，方法學(xué)研究符合方法學(xué)研究符合中國(guó)藥典中

37、國(guó)藥典2005年版（一部）年版（一部）附錄附錄“中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則”。研究黃芪精中黃芪甲苷v2.綜合評(píng)價(jià)綜合評(píng)價(jià) 取本品取本品3批，將兩法的含量測(cè)定結(jié)果進(jìn)批，將兩法的含量測(cè)定結(jié)果進(jìn)行對(duì)比。行對(duì)比。研究黃芪精中黃芪甲苷批號(hào)批號(hào)含含 量（量（mgml-1）相對(duì)平均偏差（相對(duì)平均偏差（%）TLCS法法平均值平均值HPLC-ELSD法法平均值平均值TLCS法法HPLC-ELSD法法0.133960.1393240.1304560.1352832.60.70.1332480.127400.1381040.1393240.152920.1585610.1441

38、870.1512221.91.20.1442410.147310.1578980.1585610.148710.1541390.1454340.1496721.80.70.1460540.143720.1530620.154139研究黃芪精中黃芪甲苷繪圖人：陸莉娟繪圖人：陸莉娟 日期：日期：2006.3.9研究黃芪精中黃芪甲苷v評(píng)價(jià)：評(píng)價(jià)：采用采用HPLC- ELSD法測(cè)定黃芪精中法測(cè)定黃芪精中黃芪甲苷含量比采用黃芪甲苷含量比采用TLCS法測(cè)定時(shí)的相法測(cè)定時(shí)的相對(duì)平均偏差小，測(cè)定的結(jié)果較理想。對(duì)平均偏差小，測(cè)定的結(jié)果較理想。研究黃芪精中黃芪甲苷八八.效果檢查效果檢查v1.效果驗(yàn)證效果驗(yàn)證v取不

39、同批號(hào)的黃芪精，依法制備供試品溶液，取不同批號(hào)的黃芪精，依法制備供試品溶液，在上述色譜條件下進(jìn)樣在上述色譜條件下進(jìn)樣10 l，測(cè)得峰面積值，測(cè)得峰面積值，并計(jì)算黃芪甲苷含量。并計(jì)算黃芪甲苷含量。10批樣品含量測(cè)定結(jié)果批樣品含量測(cè)定結(jié)果見下表。見下表。研究黃芪精中黃芪甲苷10批樣品含量測(cè)定結(jié)果（批樣品含量測(cè)定結(jié)果（n = 4） 批號(hào)批號(hào)含量含量（mgmlmgml-1-1）含量平均值含量平均值（mgmlmgml-1-1）相對(duì)平均偏差相對(duì)平均偏差（% %）0.1573570.1573570.1586400.1586401.11.10.1565360.1565360.1602440.1602440.1

40、604240.1604240.1554750.1554750.1555660.1555660.60.60.1556130.1556130.1539920.1539920.1571840.1571840.1634490.1634490.1643910.1643911.41.40.1611400.1611400.1659520.1659520.1670230.167023研究黃芪精中黃芪甲苷批號(hào)批號(hào)含量含量（mgmlmgml-1-1）含量平均值含量平均值（mgmlmgml-1-1）相對(duì)平均偏差相對(duì)平均偏差（% %）0.1523720.1523720.1525030.1525030.50.50.15

41、13820.1513820.1527150.1527150.1535440.1535440.1433190.1433190.1428430.1428430.80.80.1435370.1435370.1405860.1405860.1439300.1439300.1326390.1326390.1327960.1327960.40.40.1321470.1321470.1335680.1335680.1328280.132828研究黃芪精中黃芪甲苷批號(hào)批號(hào)含量（含量（mgmlmgml-1-1）含量平均值（含量平均值（mgmlmgml-1-1）相對(duì)平均偏差（相對(duì)平均偏差（% %）0.1460670.1460670.1468010.1468010.60.60.1458130.1458130.1478130.1478130.1475110.1475110.1093570.1093570.1095220.1095220.30.30.1096420.1096420.1