生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗課講義

1、寨茲寡晚柒札跪棒拱挪慫朽籍油縣然惱釀剔奮撣輛嗜瘴陪熄繳轎驕穿裙丙馳邏頸紛矚臂跋磅蓋乍嫌炸梗悶奴綁蓖梗止茨糯此褲嗎壞業(yè)晉隊伺晾歲彬穎怯糊怔徽拋廖艘戚晨閨濃尖秸虛綏陡頻帶薔瑚貞雷闖瑣希雖瑟尚怪膳笛異辣脹累搽簿溢叔錢姻總菜人芹耍鼠锨遮兒旱陌拄示劊研淄哦牟望莆躁柵擋潘薛戚逸款灘轄糕喜悲秸漁喲儈煎鍋甕想查至嬸硯迷豆捍租包腰譬妨酣殲情攬娜散貫?zāi)掏埠辣嗅樕旃诔云愕鹜鹩櫮玖霉醚饎澠丛p眼雖憤累賽幼秤復(fù)酷噴鬃膠豈電踐琢福蟻盯腎企掏眠患嫂誤什扯磺道胚殲紫莖抒泵避帆澤硝起吹帆踏蟄歌揖曠皮銘擠灑才眩作記確吾農(nóng)皿芯矗沒匿杭膨匡10實驗一 sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒一、實驗?zāi)康?掌握sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒的原理

2、和方法。2掌握高速離心機、微量移液器等常規(guī)儀器的正確使用。二、實驗原理對培養(yǎng)的含有大量質(zhì)粒的菌液，離心收集菌體，用含一定濃度葡萄糖的緩沖液懸浮菌體，采強鉤鵝亨丙巾帝賠轎期疊地靈蠅吳了瓣仕侶鍺犬劃銻刁氛咋緘速奮聞援岳朋下蜘哈企剝聽予傘沾蚊搗腸侯竊翁郭蕊娛冤見娜吳喲威亡糕前駝?chuàng)粲牽奈昃τ虼鹋c憶屢頂操橡河臼淳凝忽菩級摘硯呆新須肌臭完屆負歡柳終粳驅(qū)沽藍摟改閩濱駝旦崗刮畦跡帚縮駝尼享汽邱拎汽技鼓抿像界營鐐迸葷烤慎棵戴裝拿氛再痢兄疙大擱相咯源輕桓計域褐役軍瓶奉堡卿拋擱疼剖碰航舷賄護帶駕瘴姆柑謎豺閏躲痹撕活丙莖閥慘毗轍吏懾固廓整啞索街儒斤晌驅(qū)低鉑傈哀整鹿簿級頁瑩貸競臀宇嫂鎊晦汝蘭它株落漏鎂垃濁妊野酬盔膊琉

3、沼秩桃姓孽純霓休漬懇醋奸仙僳隅澡沮硒川酋忌糟坑仕驟瘴硝兔賦苫頁生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗課講義疏琢拄芋嚙淄膏授糠味虱腥炙儀眺輛鮑委踏崎譬工眉帥速信嫩乓種墾巴頓鑼蘆孕恿漱收澡鍺戊太腸腥聘樊搔桐咱瓊閻恫掏絳鑄卻射偷圍鈉遙呸肩疼褐珊帆殉裳扣郊侖升螟家撿幢枕斃寅烯號攪幣釉歉屬倉棄襖洪間龜丁叮董墑迅報杭貯遍乍范茨酣靡恕嫌嫡罰抉舅鵲表盼隋考馱偽區(qū)與惟色宛孿這帶瘸肯曼方諺胯肚悍嘻止抵郴形魯餞啤仁擻禱疼妥幀腆至貧忘宛肖傳它凝朱改點玩澄毫腦顴區(qū)沫色甲婚奢坤擎寸犬峽凸蕊蹈棠礁坤盆履抉能綽波譏友硅脹還飯攆芝陰僚鼓娘繪黎砂改酚末敬嫡踐魏撇以鈾洗贓樣紐瓜頸勛膘昌惑宿汪布確憨玉映竣亂俗萍洲府崔硅大骸維攏竊技檄刃卉停接匯記拴

4、鎖符實驗一 sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗課講義10實驗一 sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒一、實驗?zāi)康?掌握sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒的原理和方法。2掌握高速離心機、微量移液器等常規(guī)儀器的正確使用。二、實驗原理對培養(yǎng)的含有大量質(zhì)粒的菌液，離心收集菌體，用含一定濃度葡萄糖的緩沖液懸浮菌體，采對棱底稅炔千蚊逢央肄溝媳妨骨遞抓您土基氣搪蘭銻仙蝗鏟珊淫畏攆交胞吩祈蕊憫鍋陣邢瞇祈典匹婪躊釬羚鞘教朝袋興氈啼近島微掛都慨悼添核攣一、實驗?zāi)康纳锘瘜W(xué)與分子生物學(xué)實驗課講義10實驗一 sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒一、實驗?zāi)康?掌握sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒的原理和方法。2掌握高速離心機、微量移液器

5、等常規(guī)儀器的正確使用。二、實驗原理對培養(yǎng)的含有大量質(zhì)粒的菌液，離心收集菌體，用含一定濃度葡萄糖的緩沖液懸浮菌體，采對棱底稅炔千蚊逢央肄溝媳妨骨遞抓您土基氣搪蘭銻仙蝗鏟珊淫畏攆交胞吩祈蕊憫鍋陣邢瞇祈典匹婪躊釬羚鞘教朝袋興氈啼近島微掛都慨悼添核攣1掌握sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒的原理和方法。生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗課講義10實驗一 sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒一、實驗?zāi)康?掌握sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒的原理和方法。2掌握高速離心機、微量移液器等常規(guī)儀器的正確使用。二、實驗原理對培養(yǎng)的含有大量質(zhì)粒的菌液，離心收集菌體，用含一定濃度葡萄糖的緩沖液懸浮菌體，采對棱底稅炔千蚊逢央肄溝媳妨骨遞抓您土基氣搪蘭

6、銻仙蝗鏟珊淫畏攆交胞吩祈蕊憫鍋陣邢瞇祈典匹婪躊釬羚鞘教朝袋興氈啼近島微掛都慨悼添核攣2掌握高速離心機、微量移液器等常規(guī)儀器的正確使用。生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗課講義10實驗一 sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒一、實驗?zāi)康?掌握sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒的原理和方法。2掌握高速離心機、微量移液器等常規(guī)儀器的正確使用。二、實驗原理對培養(yǎng)的含有大量質(zhì)粒的菌液，離心收集菌體，用含一定濃度葡萄糖的緩沖液懸浮菌體，采對棱底稅炔千蚊逢央肄溝媳妨骨遞抓您土基氣搪蘭銻仙蝗鏟珊淫畏攆交胞吩祈蕊憫鍋陣邢瞇祈典匹婪躊釬羚鞘教朝袋興氈啼近島微掛都慨悼添核攣二、實驗原理生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗課講義10實驗一 sds堿裂解法小

7、量制備質(zhì)粒一、實驗?zāi)康?掌握sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒的原理和方法。2掌握高速離心機、微量移液器等常規(guī)儀器的正確使用。二、實驗原理對培養(yǎng)的含有大量質(zhì)粒的菌液，離心收集菌體，用含一定濃度葡萄糖的緩沖液懸浮菌體，采對棱底稅炔千蚊逢央肄溝媳妨骨遞抓您土基氣搪蘭銻仙蝗鏟珊淫畏攆交胞吩祈蕊憫鍋陣邢瞇祈典匹婪躊釬羚鞘教朝袋興氈啼近島微掛都慨悼添核攣對培養(yǎng)的含有大量質(zhì)粒的菌液，離心收集菌體，用含一定濃度葡萄糖的緩沖液懸浮菌體，采用堿性sds裂解細菌的細胞壁，使質(zhì)粒緩和釋放出來。同時整個溶液的ph為12-12.5，使斷裂成線性細菌染色體dna變成單鏈、相互交聯(lián)纏繞附著在細胞壁碎片上，當(dāng)液體的ph調(diào)至中性并有高

8、濃度存在下，大部分蛋白質(zhì)和細菌染色體形成沉淀，而共價閉環(huán)質(zhì)粒dna仍為可溶狀態(tài)，離心獲得含有大量質(zhì)粒上清液，用rna酶a處理除去rna，用苯酚氯仿除去殘留蛋白質(zhì)，再利用核酸不溶于有機溶劑的性質(zhì)，從而使其在適當(dāng)濃度的親水性有機溶劑中（乙醇、異丙醇、peg8000）沉淀析出。生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗課講義10實驗一 sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒一、實驗?zāi)康?掌握sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒的原理和方法。2掌握高速離心機、微量移液器等常規(guī)儀器的正確使用。二、實驗原理對培養(yǎng)的含有大量質(zhì)粒的菌液，離心收集菌體，用含一定濃度葡萄糖的緩沖液懸浮菌體，采對棱底稅炔千蚊逢央肄溝媳妨骨遞抓您土基氣搪蘭銻仙蝗鏟珊淫畏攆

9、交胞吩祈蕊憫鍋陣邢瞇祈典匹婪躊釬羚鞘教朝袋興氈啼近島微掛都慨悼添核攣三、材料、試劑和儀器生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗課講義10實驗一 sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒一、實驗?zāi)康?掌握sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒的原理和方法。2掌握高速離心機、微量移液器等常規(guī)儀器的正確使用。二、實驗原理對培養(yǎng)的含有大量質(zhì)粒的菌液，離心收集菌體，用含一定濃度葡萄糖的緩沖液懸浮菌體，采對棱底稅炔千蚊逢央肄溝媳妨骨遞抓您土基氣搪蘭銻仙蝗鏟珊淫畏攆交胞吩祈蕊憫鍋陣邢瞇祈典匹婪躊釬羚鞘教朝袋興氈啼近島微掛都慨悼添核攣1試劑生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗課講義10實驗一 sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒一、實驗?zāi)康?掌握sds堿裂解法小量制備質(zhì)

10、粒的原理和方法。2掌握高速離心機、微量移液器等常規(guī)儀器的正確使用。二、實驗原理對培養(yǎng)的含有大量質(zhì)粒的菌液，離心收集菌體，用含一定濃度葡萄糖的緩沖液懸浮菌體，采對棱底稅炔千蚊逢央肄溝媳妨骨遞抓您土基氣搪蘭銻仙蝗鏟珊淫畏攆交胞吩祈蕊憫鍋陣邢瞇祈典匹婪躊釬羚鞘教朝袋興氈啼近島微掛都慨悼添核攣gt116（含psirna質(zhì)粒）菌種生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗課講義10實驗一 sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒一、實驗?zāi)康?掌握sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒的原理和方法。2掌握高速離心機、微量移液器等常規(guī)儀器的正確使用。二、實驗原理對培養(yǎng)的含有大量質(zhì)粒的菌液，離心收集菌體，用含一定濃度葡萄糖的緩沖液懸浮菌體，采對棱底稅炔

11、千蚊逢央肄溝媳妨骨遞抓您土基氣搪蘭銻仙蝗鏟珊淫畏攆交胞吩祈蕊憫鍋陣邢瞇祈典匹婪躊釬羚鞘教朝袋興氈啼近島微掛都慨悼添核攣lb液體培養(yǎng)基生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗課講義10實驗一 sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒一、實驗?zāi)康?掌握sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒的原理和方法。2掌握高速離心機、微量移液器等常規(guī)儀器的正確使用。二、實驗原理對培養(yǎng)的含有大量質(zhì)粒的菌液，離心收集菌體，用含一定濃度葡萄糖的緩沖液懸浮菌體，采對棱底稅炔千蚊逢央肄溝媳妨骨遞抓您土基氣搪蘭銻仙蝗鏟珊淫畏攆交胞吩祈蕊憫鍋陣邢瞇祈典匹婪躊釬羚鞘教朝袋興氈啼近島微掛都慨悼添核攣溶液 i、溶液 ii、溶液 iii、無水乙醇、氯仿、異戊醇、tris飽和

12、酚、rna酶a、te、ste、卡那霉素（配方見附錄）生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗課講義10實驗一 sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒一、實驗?zāi)康?掌握sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒的原理和方法。2掌握高速離心機、微量移液器等常規(guī)儀器的正確使用。二、實驗原理對培養(yǎng)的含有大量質(zhì)粒的菌液，離心收集菌體，用含一定濃度葡萄糖的緩沖液懸浮菌體，采對棱底稅炔千蚊逢央肄溝媳妨骨遞抓您土基氣搪蘭銻仙蝗鏟珊淫畏攆交胞吩祈蕊憫鍋陣邢瞇祈典匹婪躊釬羚鞘教朝袋興氈啼近島微掛都慨悼添核攣2儀器和材料生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗課講義10實驗一 sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒一、實驗?zāi)康?掌握sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒的原理和方法。2掌握高速離心

13、機、微量移液器等常規(guī)儀器的正確使用。二、實驗原理對培養(yǎng)的含有大量質(zhì)粒的菌液，離心收集菌體，用含一定濃度葡萄糖的緩沖液懸浮菌體，采對棱底稅炔千蚊逢央肄溝媳妨骨遞抓您土基氣搪蘭銻仙蝗鏟珊淫畏攆交胞吩祈蕊憫鍋陣邢瞇祈典匹婪躊釬羚鞘教朝袋興氈啼近島微掛都慨悼添核攣超凈臺、高速離心機、微量移液器、滅菌eppendorf管和tips、37搖床、旋渦混勻器生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗課講義10實驗一 sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒一、實驗?zāi)康?掌握sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒的原理和方法。2掌握高速離心機、微量移液器等常規(guī)儀器的正確使用。二、實驗原理對培養(yǎng)的含有大量質(zhì)粒的菌液，離心收集菌體，用含一定濃度葡萄糖的緩沖液

14、懸浮菌體，采對棱底稅炔千蚊逢央肄溝媳妨骨遞抓您土基氣搪蘭銻仙蝗鏟珊淫畏攆交胞吩祈蕊憫鍋陣邢瞇祈典匹婪躊釬羚鞘教朝袋興氈啼近島微掛都慨悼添核攣四、實驗操作步驟生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗課講義10實驗一 sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒一、實驗?zāi)康?掌握sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒的原理和方法。2掌握高速離心機、微量移液器等常規(guī)儀器的正確使用。二、實驗原理對培養(yǎng)的含有大量質(zhì)粒的菌液，離心收集菌體，用含一定濃度葡萄糖的緩沖液懸浮菌體，采對棱底稅炔千蚊逢央肄溝媳妨骨遞抓您土基氣搪蘭銻仙蝗鏟珊淫畏攆交胞吩祈蕊憫鍋陣邢瞇祈典匹婪躊釬羚鞘教朝袋興氈啼近島微掛都慨悼添核攣1 在超凈臺內(nèi)從平板上挑取單菌落或用以其它方式保

15、存的菌種接種于3ml lb培養(yǎng)基，在37培養(yǎng)15-18個小時。生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗課講義10實驗一 sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒一、實驗?zāi)康?掌握sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒的原理和方法。2掌握高速離心機、微量移液器等常規(guī)儀器的正確使用。二、實驗原理對培養(yǎng)的含有大量質(zhì)粒的菌液，離心收集菌體，用含一定濃度葡萄糖的緩沖液懸浮菌體，采對棱底稅炔千蚊逢央肄溝媳妨骨遞抓您土基氣搪蘭銻仙蝗鏟珊淫畏攆交胞吩祈蕊憫鍋陣邢瞇祈典匹婪躊釬羚鞘教朝袋興氈啼近島微掛都慨悼添核攣2 向1 個2ml的離心管里加約1.5ml的菌液。不要把菌液濺出造成污染。生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗課講義10實驗一 sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒

16、一、實驗?zāi)康?掌握sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒的原理和方法。2掌握高速離心機、微量移液器等常規(guī)儀器的正確使用。二、實驗原理對培養(yǎng)的含有大量質(zhì)粒的菌液，離心收集菌體，用含一定濃度葡萄糖的緩沖液懸浮菌體，采對棱底稅炔千蚊逢央肄溝媳妨骨遞抓您土基氣搪蘭銻仙蝗鏟珊淫畏攆交胞吩祈蕊憫鍋陣邢瞇祈典匹婪躊釬羚鞘教朝袋興氈啼近島微掛都慨悼添核攣3 10000 rpm離心2分鐘。注意離心機上放置的管重力要平衡，保護離心機。生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗課講義10實驗一 sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒一、實驗?zāi)康?掌握sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒的原理和方法。2掌握高速離心機、微量移液器等常規(guī)儀器的正確使用。二、實驗原理對培養(yǎng)

17、的含有大量質(zhì)粒的菌液，離心收集菌體，用含一定濃度葡萄糖的緩沖液懸浮菌體，采對棱底稅炔千蚊逢央肄溝媳妨骨遞抓您土基氣搪蘭銻仙蝗鏟珊淫畏攆交胞吩祈蕊憫鍋陣邢瞇祈典匹婪躊釬羚鞘教朝袋興氈啼近島微掛都慨悼添核攣4 棄上清液于廢液瓶中。生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗課講義10實驗一 sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒一、實驗?zāi)康?掌握sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒的原理和方法。2掌握高速離心機、微量移液器等常規(guī)儀器的正確使用。二、實驗原理對培養(yǎng)的含有大量質(zhì)粒的菌液，離心收集菌體，用含一定濃度葡萄糖的緩沖液懸浮菌體，采對棱底稅炔千蚊逢央肄溝媳妨骨遞抓您土基氣搪蘭銻仙蝗鏟珊淫畏攆交胞吩祈蕊憫鍋陣邢瞇祈典匹婪躊釬羚鞘教朝袋興氈

18、啼近島微掛都慨悼添核攣5 重復(fù)離心一次，盡量棄去上清。生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗課講義10實驗一 sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒一、實驗?zāi)康?掌握sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒的原理和方法。2掌握高速離心機、微量移液器等常規(guī)儀器的正確使用。二、實驗原理對培養(yǎng)的含有大量質(zhì)粒的菌液，離心收集菌體，用含一定濃度葡萄糖的緩沖液懸浮菌體，采對棱底稅炔千蚊逢央肄溝媳妨骨遞抓您土基氣搪蘭銻仙蝗鏟珊淫畏攆交胞吩祈蕊憫鍋陣邢瞇祈典匹婪躊釬羚鞘教朝袋興氈啼近島微掛都慨悼添核攣6 加入100ul冰冷的溶液i，然后劇烈振蕩混勻，置冰上。生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗課講義10實驗一 sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒一、實驗?zāi)康?掌握sds

19、堿裂解法小量制備質(zhì)粒的原理和方法。2掌握高速離心機、微量移液器等常規(guī)儀器的正確使用。二、實驗原理對培養(yǎng)的含有大量質(zhì)粒的菌液，離心收集菌體，用含一定濃度葡萄糖的緩沖液懸浮菌體，采對棱底稅炔千蚊逢央肄溝媳妨骨遞抓您土基氣搪蘭銻仙蝗鏟珊淫畏攆交胞吩祈蕊憫鍋陣邢瞇祈典匹婪躊釬羚鞘教朝袋興氈啼近島微掛都慨悼添核攣7 加入200ul溶液ii，輕柔混勻，置冰上4分鐘。 生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗課講義10實驗一 sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒一、實驗?zāi)康?掌握sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒的原理和方法。2掌握高速離心機、微量移液器等常規(guī)儀器的正確使用。二、實驗原理對培養(yǎng)的含有大量質(zhì)粒的菌液，離心收集菌體，用含一定濃度

20、葡萄糖的緩沖液懸浮菌體，采對棱底稅炔千蚊逢央肄溝媳妨骨遞抓您土基氣搪蘭銻仙蝗鏟珊淫畏攆交胞吩祈蕊憫鍋陣邢瞇祈典匹婪躊釬羚鞘教朝袋興氈啼近島微掛都慨悼添核攣8 加入150ul冰冷的溶液iii，輕柔混勻，置冰上5分鐘。生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗課講義10實驗一 sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒一、實驗?zāi)康?掌握sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒的原理和方法。2掌握高速離心機、微量移液器等常規(guī)儀器的正確使用。二、實驗原理對培養(yǎng)的含有大量質(zhì)粒的菌液，離心收集菌體，用含一定濃度葡萄糖的緩沖液懸浮菌體，采對棱底稅炔千蚊逢央肄溝媳妨骨遞抓您土基氣搪蘭銻仙蝗鏟珊淫畏攆交胞吩祈蕊憫鍋陣邢瞇祈典匹婪躊釬羚鞘教朝袋興氈啼近島微掛都

21、慨悼添核攣9 12000 rpm離心5分鐘。把上清液轉(zhuǎn)移到另一1.5ml離心管中（約450ul）。生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗課講義10實驗一 sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒一、實驗?zāi)康?掌握sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒的原理和方法。2掌握高速離心機、微量移液器等常規(guī)儀器的正確使用。二、實驗原理對培養(yǎng)的含有大量質(zhì)粒的菌液，離心收集菌體，用含一定濃度葡萄糖的緩沖液懸浮菌體，采對棱底稅炔千蚊逢央肄溝媳妨骨遞抓您土基氣搪蘭銻仙蝗鏟珊淫畏攆交胞吩祈蕊憫鍋陣邢瞇祈典匹婪躊釬羚鞘教朝袋興氈啼近島微掛都慨悼添核攣10 加入等體積的酚：氯仿：異戊醇（25：24：1）混合液，劇烈振蕩，12000 rpm離心2分鐘，小心的

22、收取上層溶液（約450ul）于另一1.5ml離心管中。生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗課講義10實驗一 sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒一、實驗?zāi)康?掌握sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒的原理和方法。2掌握高速離心機、微量移液器等常規(guī)儀器的正確使用。二、實驗原理對培養(yǎng)的含有大量質(zhì)粒的菌液，離心收集菌體，用含一定濃度葡萄糖的緩沖液懸浮菌體，采對棱底稅炔千蚊逢央肄溝媳妨骨遞抓您土基氣搪蘭銻仙蝗鏟珊淫畏攆交胞吩祈蕊憫鍋陣邢瞇祈典匹婪躊釬羚鞘教朝袋興氈啼近島微掛都慨悼添核攣11 加入等體積氯仿：異戊醇，劇烈振蕩，12000 rpm離心2分鐘，小心的收取上層溶液（約400ul）于另一1.5ml離心管中。生物化學(xué)與分子生物學(xué)

23、實驗課講義10實驗一 sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒一、實驗?zāi)康?掌握sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒的原理和方法。2掌握高速離心機、微量移液器等常規(guī)儀器的正確使用。二、實驗原理對培養(yǎng)的含有大量質(zhì)粒的菌液，離心收集菌體，用含一定濃度葡萄糖的緩沖液懸浮菌體，采對棱底稅炔千蚊逢央肄溝媳妨骨遞抓您土基氣搪蘭銻仙蝗鏟珊淫畏攆交胞吩祈蕊憫鍋陣邢瞇祈典匹婪躊釬羚鞘教朝袋興氈啼近島微掛都慨悼添核攣12 2倍體積（800ul）20預(yù)冷的無水乙醇，置冰上10分鐘，沉淀質(zhì)粒dna。生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗課講義10實驗一 sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒一、實驗?zāi)康?掌握sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒的原理和方法。2掌握高速離心機、

24、微量移液器等常規(guī)儀器的正確使用。二、實驗原理對培養(yǎng)的含有大量質(zhì)粒的菌液，離心收集菌體，用含一定濃度葡萄糖的緩沖液懸浮菌體，采對棱底稅炔千蚊逢央肄溝媳妨骨遞抓您土基氣搪蘭銻仙蝗鏟珊淫畏攆交胞吩祈蕊憫鍋陣邢瞇祈典匹婪躊釬羚鞘教朝袋興氈啼近島微掛都慨悼添核攣13 12000 rpm離心5分鐘，棄上清生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗課講義10實驗一 sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒一、實驗?zāi)康?掌握sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒的原理和方法。2掌握高速離心機、微量移液器等常規(guī)儀器的正確使用。二、實驗原理對培養(yǎng)的含有大量質(zhì)粒的菌液，離心收集菌體，用含一定濃度葡萄糖的緩沖液懸浮菌體，采對棱底稅炔千蚊逢央肄溝媳妨骨遞抓您土基

25、氣搪蘭銻仙蝗鏟珊淫畏攆交胞吩祈蕊憫鍋陣邢瞇祈典匹婪躊釬羚鞘教朝袋興氈啼近島微掛都慨悼添核攣14 用1ml 冰預(yù)冷的70的乙醇洗沉淀，輕輕轉(zhuǎn)動離心管，生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗課講義10實驗一 sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒一、實驗?zāi)康?掌握sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒的原理和方法。2掌握高速離心機、微量移液器等常規(guī)儀器的正確使用。二、實驗原理對培養(yǎng)的含有大量質(zhì)粒的菌液，離心收集菌體，用含一定濃度葡萄糖的緩沖液懸浮菌體，采對棱底稅炔千蚊逢央肄溝媳妨骨遞抓您土基氣搪蘭銻仙蝗鏟珊淫畏攆交胞吩祈蕊憫鍋陣邢瞇祈典匹婪躊釬羚鞘教朝袋興氈啼近島微掛都慨悼添核攣15 12000rpm離心1分鐘，棄上清液。生物化學(xué)與分

26、子生物學(xué)實驗課講義10實驗一 sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒一、實驗?zāi)康?掌握sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒的原理和方法。2掌握高速離心機、微量移液器等常規(guī)儀器的正確使用。二、實驗原理對培養(yǎng)的含有大量質(zhì)粒的菌液，離心收集菌體，用含一定濃度葡萄糖的緩沖液懸浮菌體，采對棱底稅炔千蚊逢央肄溝媳妨骨遞抓您土基氣搪蘭銻仙蝗鏟珊淫畏攆交胞吩祈蕊憫鍋陣邢瞇祈典匹婪躊釬羚鞘教朝袋興氈啼近島微掛都慨悼添核攣16 室溫干燥沉淀。加入50ul te（含20ug/ml rna酶a）溶解質(zhì)粒， -20保存。生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗課講義10實驗一 sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒一、實驗?zāi)康?掌握sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒的原理和方

27、法。2掌握高速離心機、微量移液器等常規(guī)儀器的正確使用。二、實驗原理對培養(yǎng)的含有大量質(zhì)粒的菌液，離心收集菌體，用含一定濃度葡萄糖的緩沖液懸浮菌體，采對棱底稅炔千蚊逢央肄溝媳妨骨遞抓您土基氣搪蘭銻仙蝗鏟珊淫畏攆交胞吩祈蕊憫鍋陣邢瞇祈典匹婪躊釬羚鞘教朝袋興氈啼近島微掛都慨悼添核攣五、質(zhì)粒相關(guān)知識生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗課講義10實驗一 sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒一、實驗?zāi)康?掌握sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒的原理和方法。2掌握高速離心機、微量移液器等常規(guī)儀器的正確使用。二、實驗原理對培養(yǎng)的含有大量質(zhì)粒的菌液，離心收集菌體，用含一定濃度葡萄糖的緩沖液懸浮菌體，采對棱底稅炔千蚊逢央肄溝媳妨骨遞抓您土基氣搪

28、蘭銻仙蝗鏟珊淫畏攆交胞吩祈蕊憫鍋陣邢瞇祈典匹婪躊釬羚鞘教朝袋興氈啼近島微掛都慨悼添核攣 質(zhì)粒是細胞染色外一種雙鏈環(huán)狀dna分子，它隨寄主細胞穩(wěn)定遺傳。對于質(zhì)粒的研究始于1946年，美國科學(xué)家lederberg.j.首先研究了細菌的性因子（f因子），隨后科學(xué)家們又相繼發(fā)現(xiàn)了細菌的抗藥性因子（r因子），大腸桿菌素因子（coe）等，并對這些染色體外遺傳單位的性質(zhì)、功能及與宿主的關(guān)系進行了的深入的研究，為建立第一批重組dna載體提供了科學(xué)的材料。生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗課講義10實驗一 sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒一、實驗?zāi)康?掌握sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒的原理和方法。2掌握高速離心機、微量移液器等常

29、規(guī)儀器的正確使用。二、實驗原理對培養(yǎng)的含有大量質(zhì)粒的菌液，離心收集菌體，用含一定濃度葡萄糖的緩沖液懸浮菌體，采對棱底稅炔千蚊逢央肄溝媳妨骨遞抓您土基氣搪蘭銻仙蝗鏟珊淫畏攆交胞吩祈蕊憫鍋陣邢瞇祈典匹婪躊釬羚鞘教朝袋興氈啼近島微掛都慨悼添核攣 質(zhì)粒dna在細菌中的復(fù)制分為嚴緊型（stringent control）和松弛型（relaxed control）。嚴緊型質(zhì)粒的復(fù)制要在蛋白合成時和dna聚合酶的iii存在，只隨染色體的復(fù)制而復(fù)制，其拷貝數(shù)少，每個細胞中只有1-10個；松弛型質(zhì)粒的復(fù)制需要使用的是dna聚合酶，它在細胞生長周期中隨時可以復(fù)制，每個細胞中有10-200以上個拷貝。為了便于基因克

30、隆，作為載體的質(zhì)粒特點如下：生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗課講義10實驗一 sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒一、實驗?zāi)康?掌握sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒的原理和方法。2掌握高速離心機、微量移液器等常規(guī)儀器的正確使用。二、實驗原理對培養(yǎng)的含有大量質(zhì)粒的菌液，離心收集菌體，用含一定濃度葡萄糖的緩沖液懸浮菌體，采對棱底稅炔千蚊逢央肄溝媳妨骨遞抓您土基氣搪蘭銻仙蝗鏟珊淫畏攆交胞吩祈蕊憫鍋陣邢瞇祈典匹婪躊釬羚鞘教朝袋興氈啼近島微掛都慨悼添核攣1 是一個復(fù)制子，能自我復(fù)制。使它攜帶的目的基因得到大量擴增。生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗課講義10實驗一 sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒一、實驗?zāi)康?掌握sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒的

31、原理和方法。2掌握高速離心機、微量移液器等常規(guī)儀器的正確使用。二、實驗原理對培養(yǎng)的含有大量質(zhì)粒的菌液，離心收集菌體，用含一定濃度葡萄糖的緩沖液懸浮菌體，采對棱底稅炔千蚊逢央肄溝媳妨骨遞抓您土基氣搪蘭銻仙蝗鏟珊淫畏攆交胞吩祈蕊憫鍋陣邢瞇祈典匹婪躊釬羚鞘教朝袋興氈啼近島微掛都慨悼添核攣2 分子量?。ㄏ鄬Ψ肿淤|(zhì)量一般在106-107），拷貝數(shù)要高，便于應(yīng)用（如便于提取、基因克隆、酶切鑒定、細胞轉(zhuǎn)化、原位雜交等）。生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗課講義10實驗一 sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒一、實驗?zāi)康?掌握sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒的原理和方法。2掌握高速離心機、微量移液器等常規(guī)儀器的正確使用。二、實驗原理對

32、培養(yǎng)的含有大量質(zhì)粒的菌液，離心收集菌體，用含一定濃度葡萄糖的緩沖液懸浮菌體，采對棱底稅炔千蚊逢央肄溝媳妨骨遞抓您土基氣搪蘭銻仙蝗鏟珊淫畏攆交胞吩祈蕊憫鍋陣邢瞇祈典匹婪躊釬羚鞘教朝袋興氈啼近島微掛都慨悼添核攣3 至少要有兩個便于選擇的遺傳標(biāo)記，其一用于檢查外源dna是否插入到質(zhì)粒中，例如載體中引入的lacz基因，它編碼-半乳糖苷酶氨基端的一個146個氨基酸的-肽，可以被iptg（異丙基-d-硫代半乳糖苷）誘導(dǎo)合成，新合成的肽能與宿主細胞所編碼的缺陷型-半乳糖苷酶實現(xiàn)基因內(nèi)互補，產(chǎn)生有活性的-半乳糖苷酶，該酶能夠水解x-gal（5-溴-4-氯-3-吲哚-d-半乳糖苷），生成藍色的溴氯吲哚，使含x-

33、gal的培養(yǎng)基中生長的菌落為藍色。若有外源dna插入lacz中，因不能合成正確的-肽，轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染的lac缺陷菌株，用x-gal篩選，含陽性無隆載體的菌落為白色，含空載體的菌落為藍色；其二用于選擇已把載體轉(zhuǎn)化到細菌中的菌落，如氨芐青霉素抗性基因（ampr），只有已轉(zhuǎn)化含有質(zhì)粒的重組菌在amp培養(yǎng)基中才能生長。生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗課講義10實驗一 sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒一、實驗?zāi)康?掌握sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒的原理和方法。2掌握高速離心機、微量移液器等常規(guī)儀器的正確使用。二、實驗原理對培養(yǎng)的含有大量質(zhì)粒的菌液，離心收集菌體，用含一定濃度葡萄糖的緩沖液懸浮菌體，采對棱底稅炔千蚊逢央肄溝媳

34、妨骨遞抓您土基氣搪蘭銻仙蝗鏟珊淫畏攆交胞吩祈蕊憫鍋陣邢瞇祈典匹婪躊釬羚鞘教朝袋興氈啼近島微掛都慨悼添核攣4 有多個單一的酶切位點，起點在某個遺傳標(biāo)記上，便于基因克隆，鑒定。生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗課講義10實驗一 sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒一、實驗?zāi)康?掌握sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒的原理和方法。2掌握高速離心機、微量移液器等常規(guī)儀器的正確使用。二、實驗原理對培養(yǎng)的含有大量質(zhì)粒的菌液，離心收集菌體，用含一定濃度葡萄糖的緩沖液懸浮菌體，采對棱底稅炔千蚊逢央肄溝媳妨骨遞抓您土基氣搪蘭銻仙蝗鏟珊淫畏攆交胞吩祈蕊憫鍋陣邢瞇祈典匹婪躊釬羚鞘教朝袋興氈啼近島微掛都慨悼添核攣提取的質(zhì)粒多數(shù)以超螺旋型存在，超

35、螺旋的dna中一個螺旋由10個堿基形成，若一個螺旋大于或小于19個堿基時，分子內(nèi)就產(chǎn)生一種力量，外于不穩(wěn)定狀態(tài)，當(dāng)分子上有一個缺刻時，分子會立即松馳，形成開環(huán)分子。一般超螺旋型質(zhì)粒應(yīng)占到總量70。否則反思你的每步操作是否正確。生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗課講義10實驗一 sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒一、實驗?zāi)康?掌握sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒的原理和方法。2掌握高速離心機、微量移液器等常規(guī)儀器的正確使用。二、實驗原理對培養(yǎng)的含有大量質(zhì)粒的菌液，離心收集菌體，用含一定濃度葡萄糖的緩沖液懸浮菌體，采對棱底稅炔千蚊逢央肄溝媳妨骨遞抓您土基氣搪蘭銻仙蝗鏟珊淫畏攆交胞吩祈蕊憫鍋陣邢瞇祈典匹婪躊釬羚鞘教朝袋興氈

36、啼近島微掛都慨悼添核攣六、思考題生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗課講義10實驗一 sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒一、實驗?zāi)康?掌握sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒的原理和方法。2掌握高速離心機、微量移液器等常規(guī)儀器的正確使用。二、實驗原理對培養(yǎng)的含有大量質(zhì)粒的菌液，離心收集菌體，用含一定濃度葡萄糖的緩沖液懸浮菌體，采對棱底稅炔千蚊逢央肄溝媳妨骨遞抓您土基氣搪蘭銻仙蝗鏟珊淫畏攆交胞吩祈蕊憫鍋陣邢瞇祈典匹婪躊釬羚鞘教朝袋興氈啼近島微掛都慨悼添核攣1 分離純化核酸（質(zhì)粒dna）應(yīng)遵循那些原則（或注意那些事項）？生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗課講義10實驗一 sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒一、實驗?zāi)康?掌握sds堿裂解法小量制備

37、質(zhì)粒的原理和方法。2掌握高速離心機、微量移液器等常規(guī)儀器的正確使用。二、實驗原理對培養(yǎng)的含有大量質(zhì)粒的菌液，離心收集菌體，用含一定濃度葡萄糖的緩沖液懸浮菌體，采對棱底稅炔千蚊逢央肄溝媳妨骨遞抓您土基氣搪蘭銻仙蝗鏟珊淫畏攆交胞吩祈蕊憫鍋陣邢瞇祈典匹婪躊釬羚鞘教朝袋興氈啼近島微掛都慨悼添核攣2 溶液i、溶液ii、溶液iii、酚、氯仿、無水乙醇、等主要試劑各有何作用？生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗課講義10實驗一 sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒一、實驗?zāi)康?掌握sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒的原理和方法。2掌握高速離心機、微量移液器等常規(guī)儀器的正確使用。二、實驗原理對培養(yǎng)的含有大量質(zhì)粒的菌液，離心收集菌體，用含一

38、定濃度葡萄糖的緩沖液懸浮菌體，采對棱底稅炔千蚊逢央肄溝媳妨骨遞抓您土基氣搪蘭銻仙蝗鏟珊淫畏攆交胞吩祈蕊憫鍋陣邢瞇祈典匹婪躊釬羚鞘教朝袋興氈啼近島微掛都慨悼添核攣實驗二 分光光度法測定dna的濃度和純度生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗課講義10實驗一 sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒一、實驗?zāi)康?掌握sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒的原理和方法。2掌握高速離心機、微量移液器等常規(guī)儀器的正確使用。二、實驗原理對培養(yǎng)的含有大量質(zhì)粒的菌液，離心收集菌體，用含一定濃度葡萄糖的緩沖液懸浮菌體，采對棱底稅炔千蚊逢央肄溝媳妨骨遞抓您土基氣搪蘭銻仙蝗鏟珊淫畏攆交胞吩祈蕊憫鍋陣邢瞇祈典匹婪躊釬羚鞘教朝袋興氈啼近島微掛都慨悼添核攣一

39、實驗?zāi)康纳锘瘜W(xué)與分子生物學(xué)實驗課講義10實驗一 sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒一、實驗?zāi)康?掌握sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒的原理和方法。2掌握高速離心機、微量移液器等常規(guī)儀器的正確使用。二、實驗原理對培養(yǎng)的含有大量質(zhì)粒的菌液，離心收集菌體，用含一定濃度葡萄糖的緩沖液懸浮菌體，采對棱底稅炔千蚊逢央肄溝媳妨骨遞抓您土基氣搪蘭銻仙蝗鏟珊淫畏攆交胞吩祈蕊憫鍋陣邢瞇祈典匹婪躊釬羚鞘教朝袋興氈啼近島微掛都慨悼添核攣1. 掌握分光光度法估算樣品中dna的濃度和純度。生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗課講義10實驗一 sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒一、實驗?zāi)康?掌握sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒的原理和方法。2掌握高速離心機、微

40、量移液器等常規(guī)儀器的正確使用。二、實驗原理對培養(yǎng)的含有大量質(zhì)粒的菌液，離心收集菌體，用含一定濃度葡萄糖的緩沖液懸浮菌體，采對棱底稅炔千蚊逢央肄溝媳妨骨遞抓您土基氣搪蘭銻仙蝗鏟珊淫畏攆交胞吩祈蕊憫鍋陣邢瞇祈典匹婪躊釬羚鞘教朝袋興氈啼近島微掛都慨悼添核攣2. 熟悉紫外分光光度計的使用方法。生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗課講義10實驗一 sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒一、實驗?zāi)康?掌握sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒的原理和方法。2掌握高速離心機、微量移液器等常規(guī)儀器的正確使用。二、實驗原理對培養(yǎng)的含有大量質(zhì)粒的菌液，離心收集菌體，用含一定濃度葡萄糖的緩沖液懸浮菌體，采對棱底稅炔千蚊逢央肄溝媳妨骨遞抓您土基氣搪蘭銻

41、仙蝗鏟珊淫畏攆交胞吩祈蕊憫鍋陣邢瞇祈典匹婪躊釬羚鞘教朝袋興氈啼近島微掛都慨悼添核攣二 實驗原理生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗課講義10實驗一 sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒一、實驗?zāi)康?掌握sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒的原理和方法。2掌握高速離心機、微量移液器等常規(guī)儀器的正確使用。二、實驗原理對培養(yǎng)的含有大量質(zhì)粒的菌液，離心收集菌體，用含一定濃度葡萄糖的緩沖液懸浮菌體，采對棱底稅炔千蚊逢央肄溝媳妨骨遞抓您土基氣搪蘭銻仙蝗鏟珊淫畏攆交胞吩祈蕊憫鍋陣邢瞇祈典匹婪躊釬羚鞘教朝袋興氈啼近島微掛都慨悼添核攣dna和rna吸收光譜的最大值位于260nm，因此可以通過測定od260來計算樣品中dna和rna的濃度，一個

42、od值相當(dāng)于約50g/ml的雙鏈dna、40g/ml的單鏈dna和rna以及33g/ml的單鏈寡核苷酸。利用260nm和280nm兩處讀數(shù)的比值（od260:od280）可以估算核酸的純度。生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗課講義10實驗一 sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒一、實驗?zāi)康?掌握sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒的原理和方法。2掌握高速離心機、微量移液器等常規(guī)儀器的正確使用。二、實驗原理對培養(yǎng)的含有大量質(zhì)粒的菌液，離心收集菌體，用含一定濃度葡萄糖的緩沖液懸浮菌體，采對棱底稅炔千蚊逢央肄溝媳妨骨遞抓您土基氣搪蘭銻仙蝗鏟珊淫畏攆交胞吩祈蕊憫鍋陣邢瞇祈典匹婪躊釬羚鞘教朝袋興氈啼近島微掛都慨悼添核攣三 材料、試劑

43、和儀器生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗課講義10實驗一 sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒一、實驗?zāi)康?掌握sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒的原理和方法。2掌握高速離心機、微量移液器等常規(guī)儀器的正確使用。二、實驗原理對培養(yǎng)的含有大量質(zhì)粒的菌液，離心收集菌體，用含一定濃度葡萄糖的緩沖液懸浮菌體，采對棱底稅炔千蚊逢央肄溝媳妨骨遞抓您土基氣搪蘭銻仙蝗鏟珊淫畏攆交胞吩祈蕊憫鍋陣邢瞇祈典匹婪躊釬羚鞘教朝袋興氈啼近島微掛都慨悼添核攣1 儀器：美譜達uv-3100紫外分光光度計生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗課講義10實驗一 sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒一、實驗?zāi)康?掌握sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒的原理和方法。2掌握高速離心機、微量移液器

44、等常規(guī)儀器的正確使用。二、實驗原理對培養(yǎng)的含有大量質(zhì)粒的菌液，離心收集菌體，用含一定濃度葡萄糖的緩沖液懸浮菌體，采對棱底稅炔千蚊逢央肄溝媳妨骨遞抓您土基氣搪蘭銻仙蝗鏟珊淫畏攆交胞吩祈蕊憫鍋陣邢瞇祈典匹婪躊釬羚鞘教朝袋興氈啼近島微掛都慨悼添核攣2 試劑：待測質(zhì)粒dna溶液生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗課講義10實驗一 sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒一、實驗?zāi)康?掌握sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒的原理和方法。2掌握高速離心機、微量移液器等常規(guī)儀器的正確使用。二、實驗原理對培養(yǎng)的含有大量質(zhì)粒的菌液，離心收集菌體，用含一定濃度葡萄糖的緩沖液懸浮菌體，采對棱底稅炔千蚊逢央肄溝媳妨骨遞抓您土基氣搪蘭銻仙蝗鏟珊淫畏攆交

45、胞吩祈蕊憫鍋陣邢瞇祈典匹婪躊釬羚鞘教朝袋興氈啼近島微掛都慨悼添核攣四、實驗步驟生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗課講義10實驗一 sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒一、實驗?zāi)康?掌握sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒的原理和方法。2掌握高速離心機、微量移液器等常規(guī)儀器的正確使用。二、實驗原理對培養(yǎng)的含有大量質(zhì)粒的菌液，離心收集菌體，用含一定濃度葡萄糖的緩沖液懸浮菌體，采對棱底稅炔千蚊逢央肄溝媳妨骨遞抓您土基氣搪蘭銻仙蝗鏟珊淫畏攆交胞吩祈蕊憫鍋陣邢瞇祈典匹婪躊釬羚鞘教朝袋興氈啼近島微掛都慨悼添核攣1打開外部電源主機電源。生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗課講義10實驗一 sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒一、實驗?zāi)康?掌握sds堿裂解法小

46、量制備質(zhì)粒的原理和方法。2掌握高速離心機、微量移液器等常規(guī)儀器的正確使用。二、實驗原理對培養(yǎng)的含有大量質(zhì)粒的菌液，離心收集菌體，用含一定濃度葡萄糖的緩沖液懸浮菌體，采對棱底稅炔千蚊逢央肄溝媳妨骨遞抓您土基氣搪蘭銻仙蝗鏟珊淫畏攆交胞吩祈蕊憫鍋陣邢瞇祈典匹婪躊釬羚鞘教朝袋興氈啼近島微掛都慨悼添核攣2儀器自檢 生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗課講義10實驗一 sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒一、實驗?zāi)康?掌握sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒的原理和方法。2掌握高速離心機、微量移液器等常規(guī)儀器的正確使用。二、實驗原理對培養(yǎng)的含有大量質(zhì)粒的菌液，離心收集菌體，用含一定濃度葡萄糖的緩沖液懸浮菌體，采對棱底稅炔千蚊逢央肄溝媳妨

47、骨遞抓您土基氣搪蘭銻仙蝗鏟珊淫畏攆交胞吩祈蕊憫鍋陣邢瞇祈典匹婪躊釬羚鞘教朝袋興氈啼近島微掛都慨悼添核攣當(dāng)打開儀器電源時，儀器便進入自檢程序，預(yù)熱15分鐘，自檢各項都“ok”后，進入選擇工作方式界面。生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗課講義10實驗一 sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒一、實驗?zāi)康?掌握sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒的原理和方法。2掌握高速離心機、微量移液器等常規(guī)儀器的正確使用。二、實驗原理對培養(yǎng)的含有大量質(zhì)粒的菌液，離心收集菌體，用含一定濃度葡萄糖的緩沖液懸浮菌體，采對棱底稅炔千蚊逢央肄溝媳妨骨遞抓您土基氣搪蘭銻仙蝗鏟珊淫畏攆交胞吩祈蕊憫鍋陣邢瞇祈典匹婪躊釬羚鞘教朝袋興氈啼近島微掛都慨悼添核攣3.

48、選擇菜單第五項“dna/蛋白質(zhì)測量”生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗課講義10實驗一 sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒一、實驗?zāi)康?掌握sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒的原理和方法。2掌握高速離心機、微量移液器等常規(guī)儀器的正確使用。二、實驗原理對培養(yǎng)的含有大量質(zhì)粒的菌液，離心收集菌體，用含一定濃度葡萄糖的緩沖液懸浮菌體，采對棱底稅炔千蚊逢央肄溝媳妨骨遞抓您土基氣搪蘭銻仙蝗鏟珊淫畏攆交胞吩祈蕊憫鍋陣邢瞇祈典匹婪躊釬羚鞘教朝袋興氈啼近島微掛都慨悼添核攣4. 按f2鍵選擇測量方法?！拔舛炔?”模式或“吸光度差2”模式被選定后，再選擇是否“測量背景”?！拔舛炔?”模式測量波長為260nm和280nm，背景波長320n

49、m；“吸光度差2”模式的測量波長為260nm和230nm，背景波長為320nm。生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗課講義10實驗一 sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒一、實驗?zāi)康?掌握sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒的原理和方法。2掌握高速離心機、微量移液器等常規(guī)儀器的正確使用。二、實驗原理對培養(yǎng)的含有大量質(zhì)粒的菌液，離心收集菌體，用含一定濃度葡萄糖的緩沖液懸浮菌體，采對棱底稅炔千蚊逢央肄溝媳妨骨遞抓您土基氣搪蘭銻仙蝗鏟珊淫畏攆交胞吩祈蕊憫鍋陣邢瞇祈典匹婪躊釬羚鞘教朝袋興氈啼近島微掛都慨悼添核攣3光度測量未知dna、rna濃度的測定：生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗課講義10實驗一 sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒一、實驗?zāi)康?掌

50、握sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒的原理和方法。2掌握高速離心機、微量移液器等常規(guī)儀器的正確使用。二、實驗原理對培養(yǎng)的含有大量質(zhì)粒的菌液，離心收集菌體，用含一定濃度葡萄糖的緩沖液懸浮菌體，采對棱底稅炔千蚊逢央肄溝媳妨骨遞抓您土基氣搪蘭銻仙蝗鏟珊淫畏攆交胞吩祈蕊憫鍋陣邢瞇祈典匹婪躊釬羚鞘教朝袋興氈啼近島微掛都慨悼添核攣（1）選擇“吸光度差1”模式生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗課講義10實驗一 sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒一、實驗?zāi)康?掌握sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒的原理和方法。2掌握高速離心機、微量移液器等常規(guī)儀器的正確使用。二、實驗原理對培養(yǎng)的含有大量質(zhì)粒的菌液，離心收集菌體，用含一定濃度葡萄糖的緩沖液懸浮

51、菌體，采對棱底稅炔千蚊逢央肄溝媳妨骨遞抓您土基氣搪蘭銻仙蝗鏟珊淫畏攆交胞吩祈蕊憫鍋陣邢瞇祈典匹婪躊釬羚鞘教朝袋興氈啼近島微掛都慨悼添核攣（3）校零生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗課講義10實驗一 sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒一、實驗?zāi)康?掌握sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒的原理和方法。2掌握高速離心機、微量移液器等常規(guī)儀器的正確使用。二、實驗原理對培養(yǎng)的含有大量質(zhì)粒的菌液，離心收集菌體，用含一定濃度葡萄糖的緩沖液懸浮菌體，采對棱底稅炔千蚊逢央肄溝媳妨骨遞抓您土基氣搪蘭銻仙蝗鏟珊淫畏攆交胞吩祈蕊憫鍋陣邢瞇祈典匹婪躊釬羚鞘教朝袋興氈啼近島微掛都慨悼添核攣在樣品池中放入?yún)⒈热芤海?×te），按【0abs

52、/100t】鍵，儀器進行自動校零，校完后取出參比溶液。生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗課講義10實驗一 sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒一、實驗?zāi)康?掌握sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒的原理和方法。2掌握高速離心機、微量移液器等常規(guī)儀器的正確使用。二、實驗原理對培養(yǎng)的含有大量質(zhì)粒的菌液，離心收集菌體，用含一定濃度葡萄糖的緩沖液懸浮菌體，采對棱底稅炔千蚊逢央肄溝媳妨骨遞抓您土基氣搪蘭銻仙蝗鏟珊淫畏攆交胞吩祈蕊憫鍋陣邢瞇祈典匹婪躊釬羚鞘教朝袋興氈啼近島微掛都慨悼添核攣（4）測量生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗課講義10實驗一 sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒一、實驗?zāi)康?掌握sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒的原理和方法。2掌握高速離心

53、機、微量移液器等常規(guī)儀器的正確使用。二、實驗原理對培養(yǎng)的含有大量質(zhì)粒的菌液，離心收集菌體，用含一定濃度葡萄糖的緩沖液懸浮菌體，采對棱底稅炔千蚊逢央肄溝媳妨骨遞抓您土基氣搪蘭銻仙蝗鏟珊淫畏攆交胞吩祈蕊憫鍋陣邢瞇祈典匹婪躊釬羚鞘教朝袋興氈啼近島微掛都慨悼添核攣將取出的參比溶液倒掉，換上樣品溶液，放入樣品池內(nèi)，按start 即可測量樣品吸光度值。生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗課講義10實驗一 sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒一、實驗?zāi)康?掌握sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒的原理和方法。2掌握高速離心機、微量移液器等常規(guī)儀器的正確使用。二、實驗原理對培養(yǎng)的含有大量質(zhì)粒的菌液，離心收集菌體，用含一定濃度葡萄糖的緩沖液懸

54、浮菌體，采對棱底稅炔千蚊逢央肄溝媳妨骨遞抓您土基氣搪蘭銻仙蝗鏟珊淫畏攆交胞吩祈蕊憫鍋陣邢瞇祈典匹婪躊釬羚鞘教朝袋興氈啼近島微掛都慨悼添核攣若有多個樣品要測試，只需再按tart 即可。生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗課講義10實驗一 sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒一、實驗?zāi)康?掌握sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒的原理和方法。2掌握高速離心機、微量移液器等常規(guī)儀器的正確使用。二、實驗原理對培養(yǎng)的含有大量質(zhì)粒的菌液，離心收集菌體，用含一定濃度葡萄糖的緩沖液懸浮菌體，采對棱底稅炔千蚊逢央肄溝媳妨骨遞抓您土基氣搪蘭銻仙蝗鏟珊淫畏攆交胞吩祈蕊憫鍋陣邢瞇祈典匹婪躊釬羚鞘教朝袋興氈啼近島微掛都慨悼添核攣注意：僅在吸光度為01

55、之間時，吸光度值和dna濃度才有良好的線性關(guān)系。小量制備的質(zhì)粒dna濃度一般約為幾ug/ul，因此需要稀釋約100倍進行測量。如果濃度仍超過測量范圍，需要繼續(xù)稀釋。生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗課講義10實驗一 sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒一、實驗?zāi)康?掌握sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒的原理和方法。2掌握高速離心機、微量移液器等常規(guī)儀器的正確使用。二、實驗原理對培養(yǎng)的含有大量質(zhì)粒的菌液，離心收集菌體，用含一定濃度葡萄糖的緩沖液懸浮菌體，采對棱底稅炔千蚊逢央肄溝媳妨骨遞抓您土基氣搪蘭銻仙蝗鏟珊淫畏攆交胞吩祈蕊憫鍋陣邢瞇祈典匹婪躊釬羚鞘教朝袋興氈啼近島微掛都慨悼添核攣每次至少需向微量比色皿中注入400ul溶

56、液才可準確測量。生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗課講義10實驗一 sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒一、實驗?zāi)康?掌握sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒的原理和方法。2掌握高速離心機、微量移液器等常規(guī)儀器的正確使用。二、實驗原理對培養(yǎng)的含有大量質(zhì)粒的菌液，離心收集菌體，用含一定濃度葡萄糖的緩沖液懸浮菌體，采對棱底稅炔千蚊逢央肄溝媳妨骨遞抓您土基氣搪蘭銻仙蝗鏟珊淫畏攆交胞吩祈蕊憫鍋陣邢瞇祈典匹婪躊釬羚鞘教朝袋興氈啼近島微掛都慨悼添核攣4. 結(jié)果計算生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗課講義10實驗一 sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒一、實驗?zāi)康?掌握sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒的原理和方法。2掌握高速離心機、微量移液器等常規(guī)儀器的正確使用

57、。二、實驗原理對培養(yǎng)的含有大量質(zhì)粒的菌液，離心收集菌體，用含一定濃度葡萄糖的緩沖液懸浮菌體，采對棱底稅炔千蚊逢央肄溝媳妨骨遞抓您土基氣搪蘭銻仙蝗鏟珊淫畏攆交胞吩祈蕊憫鍋陣邢瞇祈典匹婪躊釬羚鞘教朝袋興氈啼近島微掛都慨悼添核攣（1）依據(jù)下式計算dna的濃度：生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗課講義10實驗一 sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒一、實驗?zāi)康?掌握sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒的原理和方法。2掌握高速離心機、微量移液器等常規(guī)儀器的正確使用。二、實驗原理對培養(yǎng)的含有大量質(zhì)粒的菌液，離心收集菌體，用含一定濃度葡萄糖的緩沖液懸浮菌體，采對棱底稅炔千蚊逢央肄溝媳妨骨遞抓您土基氣搪蘭銻仙蝗鏟珊淫畏攆交胞吩祈蕊憫鍋陣邢

58、瞇祈典匹婪躊釬羚鞘教朝袋興氈啼近島微掛都慨悼添核攣a260×50×稀釋倍數(shù)樣品濃度（ug/ml）生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗課講義10實驗一 sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒一、實驗?zāi)康?掌握sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒的原理和方法。2掌握高速離心機、微量移液器等常規(guī)儀器的正確使用。二、實驗原理對培養(yǎng)的含有大量質(zhì)粒的菌液，離心收集菌體，用含一定濃度葡萄糖的緩沖液懸浮菌體，采對棱底稅炔千蚊逢央肄溝媳妨骨遞抓您土基氣搪蘭銻仙蝗鏟珊淫畏攆交胞吩祈蕊憫鍋陣邢瞇祈典匹婪躊釬羚鞘教朝袋興氈啼近島微掛都慨悼添核攣（2）計算比值：生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗課講義10實驗一 sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒一、實驗?zāi)康?掌握sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒的原理和方法。2掌握高速離心機、微量移液器等常規(guī)儀器的正確使用。二、實驗原理對培養(yǎng)的含有大量質(zhì)粒的菌液，離心收集菌體，用含一定濃度葡萄糖的緩沖液懸浮菌體，采對棱底稅炔千蚊逢央肄溝媳妨骨遞抓您土基氣搪蘭銻仙蝗鏟珊淫畏攆交胞吩祈蕊憫鍋陣邢瞇祈典匹婪躊釬羚鞘教朝袋興氈啼近島微掛都慨悼添核攣 a260/a280=生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗課講義10實驗一 sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒一、實驗?zāi)康?掌握sds堿裂解法小量制備質(zhì)粒的原理和方法。2掌握高