環(huán)境消毒、監(jiān)測與驗證

1、環(huán)境消毒、監(jiān)測與驗證耳輪第一部分：潔凈區(qū)清潔與消毒第二部分：潔凈室環(huán)境監(jiān)測 第三部分：設(shè)備清潔本章內(nèi)容： 我們已經(jīng)走得太遠(yuǎn)，以至于忘記了為什么而出發(fā)。 黎巴嫩 紀(jì)伯倫（18831931）心得：心得：第一部分：潔凈區(qū)清潔與消毒 表面擦拭 手工噴霧 蒸汽熏蒸（熱過程） 干霧消毒、滅菌（冷處理）房間消毒的方法 一種效果非常好的潔凈房間的消毒方式。 在越來越“以人為本”和“環(huán)境保護(hù)”的今天，應(yīng)該格外關(guān)注“甲醛”和“臭氧”等氣體消毒劑的不良影響。 熏蒸 熏蒸（fumigating）滅菌概念： 這一標(biāo)準(zhǔn)于1980起收錄于USP ，如今已為世界各國普遍接受和采用。 在一定溫度和壓力的密閉條件下，化學(xué)毒劑由固

2、態(tài)或液態(tài)迅速轉(zhuǎn)成氣態(tài)滲透到生物體內(nèi)，使生物致死。 熏蒸有助于降低潔凈區(qū)內(nèi)死角的微生物污染。 熏蒸消毒： 消毒滅菌時間： 12小時接觸時間（通常推薦）。 排氣、通風(fēng)時間： 24小時。一個漫長過程。 甲醛熏蒸： 3.1.5.1 概述： 甲醛是一種滅菌劑，對所有的微生物都有殺滅作用，包括細(xì)菌繁殖體、芽孢、真菌和病毒。 3.1.5.2 適用范圍：可用于對濕、熱敏感、易腐蝕的醫(yī)療用品的滅菌。 3.1.5.4 注意事項 (5) 甲醛有致癌作用，不宜用于室內(nèi)空氣消毒。甲醛熏蒸：甲醛熏蒸：衛(wèi)生部：消毒技術(shù)規(guī)范衛(wèi)生部：消毒技術(shù)規(guī)范 2002 殺菌徹底，廣譜 可殺滅細(xì)菌繁殖體和芽孢、病毒、真菌等，并可 破壞肉毒桿

3、菌毒素。對霉菌也有極強的殺滅作用。 無殘留，是一種無污染的消毒劑。 臭氧是氣體滅菌，能迅速彌漫到整個滅菌空間， 滅菌無死角。 臭氧滅菌 空氣消毒：用于無人的情況下，室 內(nèi)空氣 的消毒。衛(wèi)生部：消毒技術(shù)規(guī)范衛(wèi)生部：消毒技術(shù)規(guī)范 2002 3.1.7.4 注意事項 (1) 臭氧對人有毒，國家規(guī)定大氣中允許濃度為 0.2mg/m3。 (2) 臭氧為強氧化劑，對多種物品有損壞，濃度 越高對物品損害越重，可使銅片出現(xiàn)綠色銹 斑、橡膠老化，變色，彈性降低，以致變脆、橡膠老化，變色，彈性降低，以致變脆、 斷裂，斷裂，使織物漂白褪色等。 使用時應(yīng)注意。 (3) 多種因素可影響臭氧的殺菌作用，包括溫度、 相對濕

4、度、有機物、pH、水的渾濁度、水的 色度等。使用時應(yīng)加以控制。 臭氧熏蒸：衛(wèi)生部：消毒技術(shù)規(guī)范衛(wèi)生部：消毒技術(shù)規(guī)范 2002常見的化學(xué)消毒劑： 1）醇類：使蛋白質(zhì)變性。如75%酒精用于皮膚和容器表面消毒；10%丙二醇用于熏蒸消毒。 （2）酚類：損害細(xì)菌的細(xì)胞壁和細(xì)胞質(zhì)膜。如苯酚一般使用濃度為0.5-3%，甲苯酚為2-5%。 （3）醛類：如37-40%甲醛液8-9ml/立方米，加4-5g高錳酸鉀用于熏蒸，并密閉12-24小時；2%戊二醛用于熏蒸消毒。 （4）酸類：如10%的乳酸用于熏蒸消毒。 （5）氧化劑：作用于細(xì)菌酶系統(tǒng)。如0.2-0.5%過氧乙酸、高錳酸鉀、過氧化氫和臭氧等。 （6）表面活性

5、劑：作用于細(xì)菌質(zhì)膜，主要用于表面消毒、浸潤消毒和手消毒等。如0.1-0.2%新潔爾滅、0.05-0.1%杜滅芬、0.1-0.2%洗必泰。 消毒劑：過氧化氫和過氧乙酸 消毒方式：干霧消毒系統(tǒng)介紹一種消毒劑和消毒方式干霧：小液滴會反彈不會破碎。 生產(chǎn)7.5 m的液滴 像氣體性質(zhì) 反彈離開表面 不濕潤接觸的表面 空間分布均勻，符合布朗運動原理。干霧系統(tǒng) 潔凈區(qū)生物負(fù)荷研究（風(fēng)險分析） 潔凈區(qū)操作人員行為的規(guī)范規(guī)范潔凈區(qū)操作人員的行為是維持潔凈區(qū)平衡不可或缺的！潔凈區(qū)潔凈度平衡的維持第二部分：潔凈室環(huán)境監(jiān)測 細(xì)菌數(shù)：在細(xì)菌培養(yǎng)基上菌落形成單位的平均數(shù)。 真菌數(shù)：在真菌培養(yǎng)基上菌落形成單位的平均數(shù)。微生

6、物總數(shù) = 細(xì)菌數(shù) + 真菌數(shù)微生物總數(shù)細(xì)菌、真菌培養(yǎng)基： 采用大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基（TSA）配制的培養(yǎng)皿經(jīng)采樣后，在30 35 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時間不少于2d； 采用沙氏培養(yǎng)基（SDA）配制的培養(yǎng)皿經(jīng)采樣后，在20 25 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時間不少于5d。GB/T 16293-2010 GB/T 16294-2010 細(xì)菌培養(yǎng)基上生長的真菌如何計數(shù)？ 真菌培養(yǎng)基上生長的細(xì)菌如何計數(shù)？微生物計數(shù)的困惑 ！定義：在TSA（大豆酪蛋白瓊脂）培養(yǎng)基上 生長的包括真菌的菌落形成單位總的 數(shù)量。培養(yǎng)溫度/時間： 1、細(xì)菌： 3035 5天。 2、細(xì)菌： 3035 2天； 霉菌或酵母菌： 2025 3天?？偤醚?/p>

7、微生物數(shù)（TAMC）：定義：在SDA（沙氏葡萄糖瓊脂）培養(yǎng)基上 生長的包括細(xì)菌的菌落形成單位總的 數(shù)量。培養(yǎng)溫度/時間： 2025 5天。酵母菌和霉菌總數(shù)（TYMC）：1、TAMC時，如果真菌被發(fā)現(xiàn)生長，應(yīng)該被 作為TAMC計數(shù)的一部分。2、TYMC時，如果細(xì)菌被發(fā)現(xiàn)生長，應(yīng)該被 作為TYMC計數(shù)的一部分。 3、當(dāng)TYMC由于細(xì)菌的生長而超過了可接受 標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)當(dāng)使用含有抗生素的SDA培養(yǎng)基。計數(shù)原則：潔凈室環(huán)境監(jiān)測培養(yǎng)基的選擇？（關(guān)鍵區(qū)域使用培養(yǎng)基的特殊要求）潔凈區(qū)微生物監(jiān)測的動態(tài)標(biāo)準(zhǔn)潔凈區(qū)微生物監(jiān)測的動態(tài)標(biāo)準(zhǔn)（GMP2011版）版）CHP2010中國藥典2010年版 二部 附錄附錄XIX X

8、IX Q Q “藥品微生物實驗室規(guī)范指導(dǎo)原則藥品微生物實驗室規(guī)范指導(dǎo)原則” 用于環(huán)境監(jiān)測的培養(yǎng)基須特別防護(hù)，最好要雙層包裝和終端滅菌，如果不能采用終端滅菌的培養(yǎng)基，那么在使用前應(yīng)進(jìn)行100%的預(yù)培養(yǎng)以防止外來的污染物帶到環(huán)境中以避免出現(xiàn)假陽性的結(jié)果。附錄B:B.3 培養(yǎng)基平皿培養(yǎng)及保存 制備好的培養(yǎng)基平皿宜在28保存，一般以一周為宜或按廠商提供的標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。采用適宜的方法在平皿上做好培養(yǎng)基的名稱、制備日期的標(biāo)記。 GB/T 16293-2010 / GB/T 16293-20101、TSA 用于細(xì)菌取樣。 培養(yǎng)溫度/時間：3035 不少于2天。2、 SDA 用于霉菌和酵母菌取樣。 培養(yǎng)溫度/時間

9、：2025 不少于5天。環(huán)境測試培養(yǎng)基：3、用戶認(rèn)可并驗證了的培養(yǎng)基。 以上摘自：GB/T 16293-2010 GB/T 16294-2010環(huán)境測試培養(yǎng)基：1、忽視潔凈環(huán)境中的影響因素2、忽視培養(yǎng)基的選擇環(huán)境監(jiān)測中常忽視的兩個方面：（1）API 的殘留（2）消毒劑/殺孢子劑的殘留1、忽視潔凈環(huán)境中的影響因素 抗菌素 藥物活性成分API 消毒劑/殺孢子劑常見的化學(xué)消毒劑：1、酚類2、醛類3、過氧化氫類4、季胺鹽類化合物5、以上混合物（1）選擇性低下，營養(yǎng)全面（2）含有中和劑（3）“無菌”平板培養(yǎng)基2、忽視培養(yǎng)基的選擇 營養(yǎng)瓊脂 胰蛋白胨大豆瓊脂（TSA）培養(yǎng)基的選擇參見：“中國藥典”2010

10、年版 附錄109頁附錄XI J 表1：“常見干擾物中和劑或滅活方法”中和劑的使用： 青霉素酶（ -內(nèi)酰胺酶） 可以有效的水解-內(nèi)酰胺類抗生素。 包括： - 青霉素G - 氨基青霉素類，如氨芐西林、阿莫西林、匹氨西等 - 羧基青霉素類，如羧芐西林、替卡西林等 - 脲基青霉素類，如呋芐西林、美洛西林等 - 頭孢、酶（1）：青霉素酶 頭孢菌素酶 可以有效水解頭孢類抗生素及以上的頭孢類 抗生素。 包括：頭孢羥氨芐、頭孢拉定、頭孢克洛、頭孢呋辛、 頭孢克肟、頭孢哌酮、頭孢噻肟、頭孢曲松等。酶（2）：頭孢菌素酶抵抗消毒劑的中和劑：1、吐溫、吐溫-80 能夠消除六氯酚和含汞類消毒劑的影響。2、卵磷脂、卵磷脂

11、 能夠消除洗必泰類消毒劑的影響。3、卵磷脂、吐溫、卵磷脂、吐溫-80 能夠消除季胺類化合物（苯扎溴銨、苯扎 氯銨等）消毒劑的影響。 無菌平板培養(yǎng)基 （預(yù)灌裝無菌培養(yǎng)基）理想的環(huán)境測試培養(yǎng)基：1、A級、B級、C級潔凈區(qū)直接使用2、室溫儲存3、有效期長4、無菌包裝、包裝完整5、特制平板6、培養(yǎng)基灌裝量大無菌平板培養(yǎng)基優(yōu)點：55mm接觸平板（Rodac Plate） Replicate Organism Detection and Counting GMP2011和和 EU GMP: - 平板尺寸：15 X 55 mm - 取樣單位面積：25cm2 接觸板的取樣面積： 2430cm2 USP1116

12、 潔凈室和其它控制環(huán)境的微生物評估 取樣面積：不小于20cm2 。 取樣方法： 采樣時培養(yǎng)基表面應(yīng)與采樣點接觸不少于10s，向整個接觸表面施加恒定均勻的壓力（如施加的質(zhì)量約為25g/cm2），不得有環(huán)形或線性運動，裝置有接觸并拿開后，要加蓋并盡快用適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)條件培養(yǎng)。ISO 14698 潔凈室及其相關(guān)控制環(huán)境 目前各類官方的指導(dǎo)原則中，很少有對潔凈環(huán)境微生物監(jiān)測方法提出要求的。 目前各類官方的指導(dǎo)原則中，各種微生物只有生長在如下兩種固體表面上的測試方法：瓊脂培養(yǎng)基和濾膜，才能夠得到確認(rèn)。潔凈環(huán)境微生物檢測：方法確認(rèn) 培養(yǎng)基就是微生物檢驗員的“分析儀器”。 培養(yǎng)基的質(zhì)量控制相當(dāng)于“培養(yǎng)基驗證”。

13、培養(yǎng)基 = “分析儀器” TSA TSA+吐溫80+卵磷脂 TSA+酶關(guān)鍵區(qū)域環(huán)境監(jiān)測培養(yǎng)基：第三部分：設(shè)備清潔第一百四十三條 清潔方法應(yīng)當(dāng)經(jīng)過驗證，證實其清潔的效果，以有效防止污染和交叉污染。清潔驗證應(yīng)當(dāng)綜合考慮設(shè)備使用情況、所使用的清潔劑和消毒劑、取樣方法和位置以及相應(yīng)的取樣回收率、殘留物的性質(zhì)和限度、殘留物檢驗方法的靈敏度等因素。GMP 2011年版：1、沒有定期對設(shè)備和器具進(jìn)行清潔與維護(hù)， 有可能造成污染，并對藥品的安全性、鑒 別特性、濃度/效價、質(zhì)量和純度造成影 響。FDA關(guān)于設(shè)備潔凈“警告信”統(tǒng)計：2、生產(chǎn)中所用的設(shè)備（包括器具）的清潔維 護(hù)沒有建立完善的規(guī)程。FDA關(guān)于設(shè)備潔凈“

14、警告信”統(tǒng)計：3、沒有保存藥品生產(chǎn)中所用設(shè)備的維護(hù)、清 潔、消毒和檢查記錄，無設(shè)備清潔、維護(hù) 使用的記錄，包括日期及使用時間。FDA關(guān)于設(shè)備潔凈“警告信”統(tǒng)計： 活性成分殘留 輔料殘留物（非水溶性） 清潔劑和溶劑殘留 生物細(xì)胞及代謝物殘留 微生物 潤滑油殘留物分類：制劑殘留關(guān)注點：1、實際的2、可以被驗證的3、可實現(xiàn)的4、能夠經(jīng)得起科學(xué)推敲的限度和可接受標(biāo)準(zhǔn)制定原則：PDA技術(shù)報告：1998增刊52卷 第6號1、目檢（肉眼檢測）2、化學(xué)檢驗3、微生物檢驗限度規(guī)格制定的三個層面：原則：目檢不得有可見殘留。* 是直觀、定性、簡單評估清潔的方式* 經(jīng)驗數(shù)據(jù)：目見能發(fā)現(xiàn)最低的殘留物 限度是14g/ c

15、m2* 這是換品種生產(chǎn)時設(shè)備清潔的最低標(biāo)準(zhǔn)！1、肉眼檢測限度：該種方法不適用于高效、低劑量的產(chǎn)品。1) 殘留物濃度限度：10 X 10-62) 生物活性度：正常治療劑量的1/10003) 殘留溶劑限度標(biāo)準(zhǔn)2、化學(xué)檢驗殘留物限度的確定10 X 10-6含義：上批產(chǎn)品殘留在設(shè)備里的物質(zhì)全 部溶解到下批產(chǎn)品中的濃度限度 10 X 10-6檢測：最終沖洗水中殘留物的濃度限度 10 X 10-6（1）殘留物濃度限度* 正常治療劑量的1/1000* 含義：最低日治療劑量（MTDD）的1/1000* 檢測： MTDD = 每次給藥數(shù)X活性成分含量X每日最少給藥次數(shù)允許殘留物總量（g/ cm2 ） = MTD

16、D X 最小生產(chǎn)批量 X 1000 單個制劑質(zhì)量X每日最多使用制劑數(shù)X設(shè)備內(nèi)表面積（2）生物活性度（安全系數(shù)）： 可用于清洗的化學(xué)溶劑 (三級溶劑) 在下批生產(chǎn)中允許的溶劑殘留小于初始溶液濃度的0.5%。（3）殘留溶劑限度標(biāo)準(zhǔn)： 特殊產(chǎn)品，如致敏性產(chǎn)品（青霉素、頭孢類）或高活性產(chǎn)品在使用最好的檢測手段的前提下，不應(yīng)被檢出。 實際上意味著對于這類產(chǎn)品需要采用專用生產(chǎn)設(shè)施。特殊產(chǎn)品的限度：分析方法、取樣方法、以及殘留限度的關(guān)系取樣方法、分析方法、殘留限度、棉簽回收率或其它取樣工具的回收率。必須對以上因素的關(guān)聯(lián)性的進(jìn)行評價。設(shè)備清洗的正確評價： 專屬的方法只能檢測到其關(guān)心的殘留物，其他的殘留物不會被檢測到。 活性成分專屬的清潔效果檢測方法，可能只能檢測到單一的活性成分殘留物。 制劑生產(chǎn)的清潔驗證都要用專屬的測試方法進(jìn)行檢測。 （1）專屬性的分析方法 非專屬的方法將能夠檢測到許多不同的殘留物。 非專屬的方法可以用于原料藥生產(chǎn)的早期階段，或者作為日常監(jiān)控的手段。 非專屬方法的主要優(yōu)點是這類方法非常容易實施、具備高的靈敏度、不需要繁瑣的樣品制備。 （2）非專屬性的分析方法 檢驗方法進(jìn)行方法學(xué)驗證。 驗證項目包括專屬性、準(zhǔn)確度、精密度、線性、范圍、耐用性、檢測限和定量限。方法學(xué)驗證： 取樣：無菌棉簽、無菌平板培養(yǎng)基或沖洗水。 檢測 -定量檢測，建立警戒線