dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型課件

1、dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型1第六章第六章呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型2一、慢性支氣管炎概述 慢性支氣管炎(chronic bronchitis)：指由感染或非感染因素引起的氣管、支氣管黏膜及其周圍組織的慢性非特異性炎性反應(yīng)。第一節(jié) 慢性支氣管炎動物模型1. 慢性支氣管炎的定義：dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型32. 慢性支氣管炎的特點：2) 咳痰或伴有喘息反復(fù)發(fā)作，每次持續(xù)3個月以上，連續(xù)2年以上的慢性病理過程。3) 嚴(yán)重時可并發(fā)肺氣腫或肺心病。4) 初期癥狀較輕，常在冬季發(fā)病，春季轉(zhuǎn)暖后癥狀緩解。 晚

2、期病性加重，季節(jié)性表現(xiàn)不明顯，可常年存在。1) 發(fā)病以老年人居多。dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型43. 慢性支氣管炎的病因： 1)吸煙：長期煙民 2)感染：各種病原菌 3)理化因素：刺激性煙霧、毒氣、粉塵、二氧化硫氣體等。 4)氣候因素：寒冷 5)過敏反應(yīng) 6)呼吸道局部防御及免疫功能降低 7)自主神經(jīng)功能失調(diào)dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型5二、慢性支氣管炎造模方法1. 吸入毒氣方法造模有毒氣體造模方法造模時間總觀察時間含2%so2的空氣每天1次，每次吸氣10秒連續(xù)14-18天為輕度，連續(xù)27為重度97天含0.001-.004mg/lcl2的空氣每天1次，每次吸

3、氣25-30分鐘連續(xù)35天后可出現(xiàn)慢性支氣管炎癥狀50天含氨氣的空氣第天8次，每次吸氣2-3分鐘，每次間隔15-20分鐘連續(xù)32天后可出現(xiàn)慢性支氣管炎癥狀100天（一） 吸入單一有毒氣體法dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型62. 吸入so2法的特點1)小鼠出現(xiàn)刺激性咳嗽，體重不增，少數(shù)死亡。2)支氣管病理改變：早期為急性炎癥，12天后出現(xiàn)淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞浸潤，繼而支氣管周圍結(jié)締組織增生，27天后顯示為重度慢性支氣管炎。3)支氣管腔內(nèi)粘液阻塞，氣管上皮壞死，杯狀細(xì)胞和氣管平滑肌增生，肺泡腔擴(kuò)大，部分肺泡融合成肺大泡。此法還可觀察到：氣道和肺組織毒蕈堿型受體(m受體)及功能改變。dgh

4、呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型73. 吸入so2法的優(yōu)、缺點和應(yīng)用優(yōu)點： 1)此法穩(wěn)定可靠，成功率高，為最常用的慢性支氣管炎模型； 2)需要觀察氣道和肺組織毒蕈堿型受體(m受體)及功能改變的，吸入so2法最好。缺點： 1)此法需要每天檢測so2濃度，所需設(shè)備和操作復(fù)雜，耗時費力。 2) so2為有害氣體，吸入后動物發(fā)生嚴(yán)重氣道內(nèi)病變，常導(dǎo)致動物死亡。應(yīng)用：最常用的慢性支氣管炎動物模型dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型81. 吸入煙霧方法造模有毒氣體造模方法造模時間含混合煙霧的空氣將大鼠置于27m2的煙室內(nèi)制煙，每天制煙1次，每周6次。連續(xù)44天含香煙煙霧的空氣將豚鼠置于2

5、1l容器中制煙，每天煙熏2次，每次10分鐘，每周煙熏6天。同時，置于7-8環(huán)境中，每次1小時，隔天1次。45天后改為每周2次。連續(xù)28-35天后輕度，42天后可出現(xiàn)重度慢性支氣管炎癥狀（二） 吸入煙霧法dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型92. 吸入煙霧法的特點1)隨著吸入煙霧時間延長，氣管炎病變逐漸加重，至第7周形成慢性支氣管炎典型改變。2)氣管炎癥細(xì)胞特點：初期以巨噬細(xì)胞為主，隨后以淋巴細(xì)胞為主，中性粒細(xì)胞僅在接觸煙霧的早期短時間內(nèi)升高。dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型103. 吸入煙霧法的優(yōu)、缺點和應(yīng)用優(yōu)點： 1)此法簡單易行，合并出現(xiàn)其它疾病情況少。 2)此法起

6、病較緩，可以反映慢性支氣管炎早期炎癥形成的系列過程。缺點： 煙霧吸入(煙熏)法需要較長時間，考驗?zāi)托?。?yīng)用： 特別適用于研究慢性支氣管炎發(fā)生發(fā)展過程中需要探討不同階段的病理變化及相應(yīng)的炎癥細(xì)胞的浸潤、炎性標(biāo)志物的變化。dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型111. 病菌滴鼻的方法造模菌液造模方法造模時間流感病毒液，1：320；或者流感桿菌液， 7108個/ml 小鼠乙醚麻醉后，將菌液(0.03ml/只)滴鼻，每天1次連續(xù)3-6天后，支氣管上皮輕度壞死，連續(xù)35天后，典型慢支癥狀4種細(xì)菌混合液3%戊巴比妥麻醉大鼠，將混合菌液(0.1ml/只)滴鼻，每周1次連續(xù)6周后可出現(xiàn)輕度慢支癥狀寒冷

7、環(huán)境及8種細(xì)菌混合液將豚鼠置于7-8環(huán)境中，每次1小時，隔天1次。45天后改為每周2次。同時， 8種細(xì)菌混合液(0.2ml/只)滴鼻。150天后可出現(xiàn)慢性支氣管炎癥狀（三） 病菌滴鼻法dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型122. 病菌滴鼻法的特點1)更接近于臨床實際情況2)感染2天后小鼠出現(xiàn)毛松、咳嗽、食欲缺乏等3)感染3-6天后出現(xiàn)氣管上皮輕度壞死，杯狀細(xì)胞數(shù)目初期下降， 約10天后逐漸升高4)感染35天后出現(xiàn)典型的慢性支氣管炎癥狀5)感染50天后逐漸恢復(fù)正常dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型133. 病菌滴鼻法的優(yōu)、缺點和應(yīng)用優(yōu)點： 1) 由于采用病原菌摸擬臨床感染狀

8、況，故更接近臨床實際情況 2)由于呼吸道感染病源菌眾多，故采用最合適的病菌滴鼻，對探討不同病源菌導(dǎo)致慢性支氣管炎的發(fā)病機制有很的應(yīng)用價值。缺點： 1) 致病菌混合的制備有一定難度 2) 不同致病菌引起的慢性支氣管炎有較大差異 2) 可能導(dǎo)致研究人員的感染應(yīng)用：主要適用于探討慢性支氣管炎病因（不同致病菌）、誘因，以及要求模擬臨床實際情況的實驗研究dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型141. 氣管內(nèi)滴注內(nèi)毒素的方法1）將大鼠用1%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉；2）仰臥位固定，拉出舌體，暴露聲門，快速將套管穿過聲門，插入氣管；3）將內(nèi)毒素（濃度200g/ 200l）注入氣管；4）大鼠飼養(yǎng)34周后

9、，逐漸出現(xiàn)慢性支氣管炎表現(xiàn)。此法由于要做全麻手術(shù)和氣管插管，比較麻煩，對大鼠損傷也大。（四） 氣管內(nèi)滴注內(nèi)毒素法dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型152. 氣管內(nèi)滴注內(nèi)毒素法的特點1)用毒素代替致病菌，克服了致病菌混合液難制備的問題2)氣管滴注脂多糖(lps)約21天后，小鼠出現(xiàn)倦怠、毛發(fā)失澤、進(jìn)食和飲水均減少3)支氣管病理改變：氣管、支氣管上皮脫落，杯狀細(xì)胞及粘液腺細(xì)胞增生，慢性炎癥細(xì)胞浸潤，平滑肌細(xì)胞增生肥大，管壁增厚4)支氣管腔內(nèi)充滿粘液及大量中性粒細(xì)胞dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型163.氣管內(nèi)滴注內(nèi)毒素法的優(yōu)、缺點和應(yīng)用優(yōu)點： 1) 克服了致病菌混合液難制

10、備的問題 2) 避免了導(dǎo)致研究人員感染病菌的風(fēng)險 3) 不需要象so2吸入法那樣，天天測so2濃度缺點： 1) 當(dāng)?shù)巫ps過量時，可能會導(dǎo)致內(nèi)毒素血癥，引起急性肺損傷。這與復(fù)制慢性支氣管炎疾病模型思路相沖突 2)不象致病菌滴鼻法那樣貼近臨床，已經(jīng)與臨床實際情況有較大差異 3) 需要做全麻手術(shù)和氣管插管，比較麻煩，對大鼠損傷也大應(yīng)用：適用于嫌病致菌制備難，天天測so2麻煩，專注于慢性支氣管炎發(fā)生發(fā)展機制研究dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型17例一、構(gòu)建熏煙致慢性支氣管炎小鼠模型dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型18dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型19dg

11、h呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型20dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型21dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型22dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型23dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型24dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型25dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型26結(jié) 論dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型27一、支氣管哮喘概述 支氣管哮喘(bronchial asthma)：指由于某些過敏因素引起的以支氣管阻塞為特點的疾病。1. 支氣管哮喘的定義：2. 哮喘的特征：陣發(fā)性帶有哮鳴音的呼吸困難、咳嗽、咳痰

12、，且反復(fù)發(fā)作。一般春、秋二季發(fā)病率較高，20%患者有家族史。第二節(jié) 支氣管哮喘動物模型dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型283. 支氣管哮喘的危險因素： 1) 吸入性過敏原：花粉、真菌；塵螨、動物毛發(fā)及排泄物等 2) 食入性過敏原：魚蝦等水產(chǎn)、海產(chǎn)品；牛奶、雞蛋、花生等 3) 呼吸道感染 4) 藥物 5) 工業(yè)粉塵、化學(xué)氣體或蒸氣 6) 冷空氣、過度通氣、運動 7) 強烈情緒變化dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型294.支氣管哮喘發(fā)作的時相： 患者在接觸過敏原后幾分鐘內(nèi)，出現(xiàn)哮喘發(fā)作的癥狀，最大呼氣流速顯著降低，一般持續(xù)23小時后即可恢復(fù)，稱為哮喘的速發(fā)相反應(yīng)。其機制與

13、型變態(tài)反應(yīng)有關(guān)。 有一部分病人在速發(fā)相之后緊接著出現(xiàn)第二次哮喘發(fā)作，癥狀更重，持續(xù)時間更長，可達(dá)10小時甚至幾天，重癥者持續(xù)幾十天，稱為遲發(fā)相反應(yīng)。其機制與氣道過敏性炎癥有關(guān)。 過敏性哮喘的臨床過程可分為速發(fā)相反應(yīng)和遲發(fā)相反應(yīng)兩個階段。 病人可發(fā)生雙相反應(yīng)，也可只發(fā)生速發(fā)相或遲發(fā)相反應(yīng)。兒童哮喘的遲發(fā)相反應(yīng)要比成人多。dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型30二、支氣管哮喘造模方法（一） 致敏源誘發(fā)的哮喘模型動物造模因素致敏方法誘發(fā)哮喘時間與觀察時間小鼠20g左右1號卵清蛋白抗原液腹腔注射1號卵清蛋白抗原液1次， 每次0.2ml; 8天后重復(fù)注射1次第15天起將小鼠置于密閉容器中，以6

14、0g/l卵清蛋白液霧化激發(fā)，每天1次，每次30分鐘，連續(xù)7天，直至哮喘樣發(fā)作大鼠120-180g2號卵清蛋白抗原液腹腔注射2號卵清蛋白抗原液1次，每次1ml; 7天后重復(fù)注射1次2周后起將大鼠置于密閉容器中，以1%卵清蛋白液霧化激發(fā)，每天1次，每次30分鐘，連續(xù)2周，直至哮喘樣發(fā)作豚鼠300-500g1%卵清蛋白生理鹽水溶液腹腔注射1%卵清蛋白生理鹽水溶液1次，每次10ml2周后起將豚鼠置于密閉容器中，以1%卵清蛋白生理鹽水溶液霧化激發(fā)，每天1次，每次20分鐘，直至哮喘樣發(fā)作1. 方法dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型312.致敏源誘發(fā)的哮喘特點小鼠： 1)常用小鼠品系有：balb

15、/c品系較易產(chǎn)生氣道高反應(yīng)，并產(chǎn)生高滴度ige；而c57bl/6品系不易出現(xiàn)氣道高反應(yīng)，且只產(chǎn)生低滴度ige。大鼠： 1)常用大鼠品系有：brown norway(國外)；sprague dawley，wistar(國內(nèi))。 2) 哮喘激發(fā)后3-5分鐘發(fā)生速發(fā)相反應(yīng)，2-4小時發(fā)生遲發(fā)相反應(yīng)，隨后出現(xiàn)肺部炎癥細(xì)胞(24小時內(nèi)主要是嗜酸性細(xì)胞)浸潤。 3)哮喘發(fā)作24小時內(nèi)氣道反應(yīng)性升高，增幅為7-10倍，持續(xù)4-5天。多次激發(fā)能延長氣道高反應(yīng)性持續(xù)時間。 4)能出現(xiàn)與人類哮喘類似的遲發(fā)相反應(yīng)，并有嗜酸性細(xì)胞浸潤和氣道反應(yīng)性增加。豚鼠： 1)很容易致敏，并激發(fā)產(chǎn)生型變態(tài)反應(yīng)。 2)激發(fā)后的急性氣

16、道過敏反應(yīng)，包括速發(fā)相和遲發(fā)相哮喘反應(yīng)。dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型323.致敏源誘發(fā)的哮喘模型優(yōu)、缺點和應(yīng)用優(yōu)點： 1)卵清蛋白來源容易，且價格低廉。 2)卵清蛋白免疫原性強，容易致敏和激發(fā)哮喘。 3)是國內(nèi)外最常用的哮喘疾病模型。以下分別列舉： 小鼠、大鼠和豚鼠支氣管哮喘模型的優(yōu)點、缺點和應(yīng)用dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型33優(yōu)點： 小鼠便宜，價格低，有利于大規(guī)模實驗。小鼠哮喘模型優(yōu)、缺點和應(yīng)用缺點： 1)幾乎所有暴露于變應(yīng)原(過敏原)的小鼠都可產(chǎn)生哮喘，故小鼠哮喘模型不宜應(yīng)用于基因多態(tài)性研究。 2)小鼠與人類存在呼吸系統(tǒng)的解剖、生理學(xué)上的差異。呼吸頻率快

17、，但潮氣量低。 3)小鼠與人類還存在免疫學(xué)機制上的差異。大多數(shù)小鼠哮喘模型會出現(xiàn)過敏性肺泡炎和超敏性肺炎，而掩蓋了氣道病變。應(yīng)用：適用于需要大規(guī)模實驗的情況，如:評價預(yù)防效果或哮喘療效。dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型34大鼠哮喘模型優(yōu)、缺點和應(yīng)用優(yōu)點： 1)大鼠品系純且全，易于繁殖，獲得容易。 2)價格較便宜，能減輕研究經(jīng)費壓力。 3)與小鼠相比，可獲取的標(biāo)本量大很多。 4)大鼠生物學(xué)特性與人有較多的相似性。缺點： 1)國際上哮喘研究論文主要采用brown norway品系大鼠，但其價格較貴。bn大鼠哮喘模型的主要優(yōu)勢在于能產(chǎn)生針對吸入性變應(yīng)原的特異性ige抗體，且更易誘發(fā)哮喘

18、癥狀、明顯的氣道炎癥和氣道高反應(yīng)性。應(yīng)用： 1)是最常用的哮喘動物模型之一。 2)適用于皮質(zhì)激素治療哮喘作用機理研究，以用非皮質(zhì)激素類抗哮喘免疫抑制劑的療效觀察和評價。dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型35豚鼠哮喘模型優(yōu)、缺點和應(yīng)用優(yōu)點： 1)豚鼠價格較便宜；體型較大，方便實驗操作；獲取標(biāo)本量大。 2)變應(yīng)原誘發(fā)的支氣管哮喘與人類支氣管哮喘中的氣管收縮特點相同。包括：接觸抗原后的支氣管收縮反應(yīng)；氣道對介質(zhì)的高反應(yīng)性；以及嗜酸性細(xì)胞浸潤的特征。缺點： 1)由于近交系豚鼠罕見，不利于用來研究遺傳因素的影響。 2)皮質(zhì)激素對豚鼠哮喘模型的支氣管痙攣影響不顯著。 3)可能出現(xiàn)種群依賴性的夸

19、大反應(yīng)，如：過敏性休克，導(dǎo)致豚鼠死亡。應(yīng)用： 1)是使用最廣泛的變應(yīng)原性支氣管哮喘模型。 2)致敏性豚鼠的過敏性支氣管收縮(包括速發(fā)相和遲發(fā)相)在研究抗過敏藥、支氣管擴(kuò)張藥藥物療效方面就用非常廣泛。dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型36（二） 甲苯二異氰酸甲酯(tdi)誘發(fā)的職業(yè)性哮喘模型1. tdi誘發(fā)哮喘方法動物造模因素致敏方法誘發(fā)哮喘時間與觀察時間豚鼠250-300g/只tdi/bsa抗原腹腔注射tdi/bsa抗原1次，每次0.5ml；2-3周后再重復(fù)加強免疫1-2次，致敏在初次免疫5-8周后，做抗原激發(fā)試驗。先用1%bsa激發(fā)，無反應(yīng)后再用tdi/bsa激發(fā)。約有30%豚鼠

20、會出現(xiàn)明顯哮喘反應(yīng)。dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型372. tdi誘發(fā)哮喘特點1)經(jīng)tdi/bsa激發(fā)后，動物呼吸頻率加快、幅度增大，哮喘時伴有咳嗽、躁動不安，甚至出現(xiàn)痙攣性呼吸。2)85%動物可同時出現(xiàn)不同滴度的抗原特異性ige、igg抗體。3)tdi是重要的職業(yè)性致哮喘化學(xué)品之一。dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型383. tdi誘發(fā)哮喘優(yōu)點、缺點和應(yīng)用優(yōu)點： 是tdi致職業(yè)性哮喘的重要動物模型。從事tdi作業(yè)者中約有5%-10%的人可發(fā)生職業(yè)性哮喘。缺點： 1)tdi/bsa抗原制備難度大，步驟繁鎖。 2)屬職業(yè)性哮喘，應(yīng)用范圍窄。應(yīng)用：適用于tdi職業(yè)性哮喘

21、方面研究。dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型39（三） 鄰苯二甲酸酐(pa)誘發(fā)的哮喘模型1. pa誘發(fā)哮喘模型方法動物造模因素致敏方法誘發(fā)哮喘時間與觀察時間豚鼠250-300g/只，2-3月齡pa-bsa抗原 和pa-hsa抗原腹腔或后腿肌肉注射pa-bsa抗原或pa-hsa抗原1次，每次0.2-0.3ml，致敏在免疫3-8周后，做抗原吸入激發(fā)試驗。先用1%hsa生理鹽水溶液霧化吸入1-3分鐘，激發(fā)。哮喘持續(xù)30-50分鐘。dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型402. pa誘發(fā)哮喘模型的特點1) 苯酐(pa)為固體化學(xué)品，也可引起哮喘。為什么？2)霧化吸入激發(fā)后1-10

22、分鐘，動物呼吸頻率加快(由100-120次/分，上升至140-160次/分)，幅度增大，伴咳嗽、噴嚏，重癥者呼吸費力，掙扎，可有暫窒息或死亡。苯酐dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型413. pa誘發(fā)哮喘模型的優(yōu)點、缺點和應(yīng)用優(yōu)點： pa是重要白色固體化工原料，也是一種常見的職業(yè)性致哮喘物質(zhì)。缺點： 與tdi至哮喘一樣，屬職業(yè)性哮喘，應(yīng)用范圍窄。應(yīng)用：適用于pa所致職業(yè)性哮喘方面研究dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型42例二、卵清蛋白誘導(dǎo)小鼠建立支氣管哮喘模型dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型43dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型44dgh呼吸系統(tǒng)

23、疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型45dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型46b:模型組病理切片dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型47結(jié) 論dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型48一、肺心病概述1. 肺心病的定義： 肺心病是指由慢性支氣管炎、肺氣腫和肺纖維化，以及肺血管病變而引起的心臟病。2. 肺心病的病理特點：1)肺動脈高壓；2)右心室肥大和右心衰竭。第三節(jié) 肺心病動物模型dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型49 二、肺心病造模方法（一） 肺循環(huán)高壓模型 肺循環(huán)高壓：指包括肺動脈高壓、肺靜脈高壓和混合性肺動脈高壓的總稱。 肺動脈高壓：指肺動脈壓增高，而

24、肺靜脈壓正常。也稱為動脈型肺動脈高壓。 特發(fā)性肺動脈高壓：指沒有任何原因(包括遺傳、病毒、藥物)而發(fā)生的肺動脈高壓。肺循環(huán)高壓診斷標(biāo)準(zhǔn)：在海平面靜息狀態(tài)下經(jīng)右心導(dǎo)管檢查 1)肺動脈收縮壓30mmhg 2)肺動脈平均壓25mmhg 3)運動時，肺動脈平均壓30mmhg 以上三項，居其一即可dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型50(1) 方法1、缺氧型肺循環(huán)高壓動物模型動物造模因素致艙內(nèi)低氧方法肺循環(huán)高壓觀察時間大鼠150-250g/只低氧氣體1. 100%氮氣2. 10%氧氣 90%氮氣將10-15只大鼠置入動物艙室后，通入n2，使艙內(nèi)o2濃度降低至10%左右。以2升/分的速度通入低氧

25、混合氣體(10%o2，90%n2)大鼠在缺氧5周后，出現(xiàn)低氧性肺血管收縮及肺血管形態(tài)改變。動物艙室(250-300升) ： 1)頂部有三通，便于氣體樣本，檢測o2和n2濃度。使o2濃度保持在10%左右，co2濃度保持在3%以下。 2)底部有一小裂隙，便于艙內(nèi)、外氣體交換，氣壓相等。 3)艙內(nèi)co2用鈉石灰吸收，水蒸氣用無水氯化鈣吸收。 4)艙內(nèi)有小風(fēng)扇將通入氣體混均。dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型51(2)缺氧型肺循環(huán)高壓模型的特點1)動物艙室設(shè)計和制作有點難度。2)需要o2分析儀和co2分析儀，且檢測麻煩。3)艙內(nèi)溫度難保持恒定，也難以消除co2和水蒸氣的影響。dgh呼吸系統(tǒng)

26、疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型52(3)缺氧型肺循環(huán)高壓模型的優(yōu)點、缺點和應(yīng)用優(yōu)點： 艙室設(shè)計，操作簡單，能保持艙內(nèi)長時間低氧狀態(tài)。如能通過自動化設(shè)計，時實動態(tài)檢測o2和co2濃度，控制好艙內(nèi)溫度、濕度和氣壓，將是一個好的造模方法。缺點： 1)每天檢測o2和co2濃度很煩。 2)通過調(diào)節(jié)艙室通氣量保持o2濃度和氣壓有難度。應(yīng)用：適用于因長期缺氧導(dǎo)致肺循環(huán)高壓，繼發(fā)右心肥大，右心衰的肺心病模型。dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型53(1) 方法2、缺氧型肺循環(huán)高壓動物模型動物造模因素野百合堿注射方法肺循環(huán)高壓、右心肥大和右心衰觀察大鼠150-250g/只野百合堿 將2%野百合堿(6

27、0mg/kg體重)，一次性腹腔注射。野百合堿入血后引起肺血管內(nèi)皮損傷，從而導(dǎo)致缺氧和肺血管重塑。大鼠在缺氧5周后，出現(xiàn)低氧性肺血管收縮及肺血管形態(tài)改變。注謝后第14天，21天和28天行右心導(dǎo)管術(shù)檢測肺動脈和右心室壓力，以及心功能檢測。(2) 特點1)肺動脈壓升高顯著，可達(dá)正常值3倍。2)伴右心室肥厚和體重減輕。3)光鏡下可見肺血管重塑明顯，表現(xiàn)為：血管內(nèi)膜增生，中層增厚。4)野百合堿可重復(fù)誘導(dǎo)產(chǎn)生嚴(yán)重的進(jìn)展性肺動脈高壓。dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型54(2) 優(yōu)點、缺點和應(yīng)用優(yōu)點： 1)方法簡便易行 2)本模型為常壓缺氧肺循環(huán)高壓模型，更類似于平原地區(qū)的肺心病發(fā)病情況。缺點：

28、 與缺氧、酸中毒、內(nèi)毒素導(dǎo)致的肺血管損傷相比，野百合堿屬于化學(xué)品或藥物導(dǎo)致的肺血管損傷。應(yīng)用：適用于常壓缺氧肺循環(huán)高壓的肺心病方面研究dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型55（二） 慢性阻塞性肺部疾病(copd)模型1.方法動物造模因素被動吸煙方法支氣管、肺組織病變觀察大鼠150-250g/只煙霧吸入 每個煙熏箱放入大鼠3只，每天上午、下午各被動吸煙1次。每箱每次點燃香煙2支，每次持續(xù)吸入新鮮香煙煙霧1小時煙熏10周后，纖毛上皮異常并伴粘液高分泌；12周后，可見纖毛皮細(xì)胞部分脫落；12-24周后，可見少量肺泡融合形成肺大泡。24-36周后，上述病變更明顯；36周后，肺泡腔明顯擴(kuò)大，氣

29、道管壁明顯增厚和纖維化，并可見大量炎癥細(xì)胞浸潤。動物煙熏箱(202530 cm3) ： 1)煙熏箱的一側(cè)下部留有一個直徑為0.5cm的通氣管，與箱外側(cè)的不銹鋼燃煙室相通。 2)燃煙室進(jìn)氣孔連接一個小電風(fēng)扇。電扇風(fēng)力助燃并推動煙霧和o2進(jìn)入煙熏箱。香煙：采用市售無過濾嘴的香煙(每支約含焦油25mg，煙氣煙堿量1.4mg)dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型56(2) copd模型特點1)采用香煙煙熏36周以上的方法制備大鼠copd模型。是一個較長期的慢性實驗，更符合人類copd的臨床實際情況。2)多種炎癥細(xì)胞參與。氣道內(nèi)主要是pmn和m為主，肺細(xì)胞內(nèi)以m (cd68+)和t-淋巴細(xì)胞浸

30、潤為主。3) 多種炎癥因子參與。如：ifn、mcp-1、et-1、il-2，4，6，10等。4)氣道高分泌，炎癥細(xì)胞增多，管壁增厚，膠原等細(xì)胞外基質(zhì)增多并過度沉積、纖維化(copd氣道重塑的重要病理改變)。dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型57(2) copd模型的優(yōu)點、缺點和應(yīng)用優(yōu)點： 1)方法簡便易行，不需要貴重儀器設(shè)備和藥品。 2)屬較長期的慢性實驗，因此更符合人類copd的臨床實際情況。缺點： 1)長期的慢性實驗，考驗的是人的耐心、恒心和毅力。 2)能否導(dǎo)致繼發(fā)性肺心病，還需要更長的煙熏時間和耐心等待。應(yīng)用：適用于copd病理、病生及藥物療效方面的研究dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物

31、模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型58例三、低氧性肺動脈高壓大鼠模型的建立研究目的dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型59dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型60dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型61dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型62dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型63結(jié) 論本研究結(jié)果提示肺動脈高壓的大鼠模型成功建立。本研究模型的建立較好地模擬了 患者肺動脈高壓發(fā)生的病理過程，可以應(yīng)用于 患者的臨床研究。陳麗英等 低氧性肺動脈高壓大鼠模型的建立中華危重癥醫(yī)學(xué)雜志 2015，vol. 8 (5): 312-314dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系

32、統(tǒng)疾病動物模型64一、肺栓塞概述肺栓塞的定義： 肺栓塞：指以各種栓子阻塞肺動脈系統(tǒng)為其發(fā)病原因的一組疾病或臨床綜合征的總稱。包括：血栓、脂肪、羊水、胎糞、空氣等栓子。 肺血栓栓塞：是指來自靜脈系統(tǒng)或右心的血栓栓子阻塞肺動脈或其分支所致肺部疾病。主要表現(xiàn)為：肺循環(huán)障礙和呼吸功能障礙。 急性肺血栓栓塞導(dǎo)致較為廣泛肺動脈阻塞時，可引起肺動脈高壓，甚至發(fā)生急性肺源性心臟病。而缺血區(qū)可能發(fā)生肺梗死。由于肺組織多重供血、供氧機制，只有大約15%患者發(fā)生肺梗死。第四節(jié) 肺栓塞動物模型dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型65二、肺栓塞造模方法（一） 血栓栓塞法動物造模因素血栓形成栓塞方法觀察家兔或犬

33、 血栓栓子1.動物麻醉后，分離一側(cè)的頸外v和頸總a，并分別插管。2.頸外v與頸總a連接在同一個三通管上。三通管余下的一個通道接上一個注射器(內(nèi)含10u/ml凝血酶0.6ml)。3.用注射器從動脈插管抽取動脈血1ml。4.將注射器內(nèi)動脈血與凝血酶充分混勻。5.將混勻后的血液通過靜脈插管注入頸外v，立即夾閉頸外v近心端。6.等待10分鐘，讓血栓在頸外v內(nèi)形成。待頸外v內(nèi)血栓明顯形成后，松開頸外v近心端的靜脈夾，血栓栓了入血后，栓塞肺動脈。1. 方法dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型662.血栓栓塞法模型的特點：家兔血栓栓塞法： 1)家兔體型適中，價格不高，性格溫順，插管較方便。 2)與

34、其它動物相比，家兔的纖溶系統(tǒng)與人類的更接近。故，本模型是最普遍、最成熟的肺血栓栓塞模型。犬血栓栓塞法： 1)犬體型大，血管粗，插管手術(shù)操作非常方便。 2)犬血量大，多次抽血樣也不易發(fā)生低血容量的情況 。dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型673.血栓栓塞法模型的優(yōu)點、缺點和應(yīng)用：優(yōu)點： 兔血栓栓塞法模型是最普遍、最成熟的肺血栓栓塞模型。因為與其它動物相比，家兔的纖溶系統(tǒng)與人類的更接近。缺點： 1)本法的血栓主要是在體外形成，與臨床上肺血栓栓塞時，體內(nèi)處于高凝狀態(tài)不一樣。 2)用犬做實驗，有被咬傷或感染狂犬病的可能。應(yīng)用： 1)兔模型適用性廣，是最常用的肺血栓栓塞模型。 2)犬模型更適

35、用于取樣量多、需要動態(tài)觀察的肺栓塞實驗研究。dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型68（一） 藥物注射法動物造模因素血栓形成及栓塞方法小鼠，也可用兔和犬膠原與腎上腺素的混合液小鼠尾靜脈注射制備好的膠原與腎上腺素的混合液1次，每次100l。該混合液可導(dǎo)致體內(nèi)血液呈高狀態(tài)，先是形成血小板血栓，后者阻塞肺小血管并導(dǎo)致肺栓塞。1. 方法2.藥物注射法模型的特點：1)藥物注射法致肺血栓栓塞，簡單快捷，方法可靠，穩(wěn)定性好。2)利用藥物在體內(nèi)形成靜脈血栓，然后導(dǎo)致肺栓塞，比栓子栓塞法更符合臨床實際情況。dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型693.藥物注射法模型的優(yōu)點、缺點和應(yīng)用：優(yōu)點： 此

36、方法簡單快捷，可靠性和穩(wěn)定性好。缺點： 血小板血栓栓子較小，難以摸擬人肺內(nèi)大血管栓塞情況。應(yīng)用： 1)小鼠肺栓塞模型，適合需要大規(guī)模樣體的實驗研究。 2)兔和犬肺栓塞模型，適合需要多次采樣、動態(tài)觀察指標(biāo)變化的實驗研究。dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型70目的 通過建立操作簡便、成功率高、使用經(jīng)濟(jì)的急性肺血栓栓塞大鼠動物模型,掌握自體肺血栓栓塞動物模型的制備,檢測自體肺血栓栓塞的持久性。例四、大鼠自體肺血栓栓塞模型的成功制備一、材料dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型71二、方法(體外制備血栓栓子)dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型722 大鼠麻醉后,行氣插管

37、,連接呼吸機dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型73dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型74dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型75dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型76 本實驗研究發(fā)現(xiàn)：大鼠自血栓注入后并沒有表現(xiàn)持續(xù)的肺動脈壓升高或氧分壓降低,因為大鼠具有極高的纖溶能力,所以自體血栓不能產(chǎn)生一個持久固定的肺栓塞模型。結(jié) 論 因此與臨床肺血栓栓塞的病理生理過程更符的、持久固定血栓模型的研究應(yīng)成為今后肺栓塞動物模型的主要研究方向。馮偉等 大鼠自體肺血栓栓塞模型的成功制備臨床肺科雜志 2015年5月 第20卷第5期：785-788dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型

38、呼吸系統(tǒng)疾病動物模型77the end謝謝！dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型78混合煙霧制煙方法：1. 配方：鋸末200g，煙葉15-20g，辣椒6-7g，硫黃1g。2. 點燃后，在20-30分鐘燃化，混合煙霧含塵量 150-200mg/m3，顆粒大小0.5-1.0m以上。dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型79香煙煙霧制煙方法：1. 用香煙1.5支，在21l容器中燃化，豚鼠吸氣10分鐘。2. 換氣5分鐘。3. 用香煙1支，再次燃化，豚鼠再吸氣10分鐘。dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型80流感病菌菌液制作方法：1. 接種流感病毒后， 37 培育48小時的雞

39、胚液，病毒液血凝滴度為1：320。2. 接種流感桿菌后， 37 培養(yǎng)18-24小時，收集菌液備用。在滴鼻使用前，將菌液中流感桿菌的濃度稀釋為7108個/ml 。dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型81混合細(xì)菌菌液制作方法：1. 流感桿菌，9 108個/ml 。甲型鏈球菌，6108個/ml ?？ㄋ匝仔跃?， 9108個/ml 。肺炎雙球菌， 6108個/ml 。2. 將上述4種菌液以4：3：2：1的比例混合，備用。dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型821. 溶液：卵清蛋白1000 g/ml2. 溶液：氫氧化鋁10 mg/ml3. 將溶液與溶液以1：1的比例混合。注意混合液要

40、新鮮配制1號卵清蛋白抗原液配制方法：2號卵清蛋白抗原液配制方法：1. 溶液：卵清蛋白300 mg/ml2. 溶液：滅活百日咳桿菌疫苗15109個/ml3. 溶液：氫氧化鋁300 mg/ml4. 將溶液、和，以1：1：1的比例混合。注意混合液要新鮮配制dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型83tdi-bsa抗原制備：1. 溶液a：1%tdi/1,4-二氧六環(huán)液2. 溶液b：1%bsa/碳酸氫鈉溶液3. 將溶液b置于冰水浴中，開磁力攪拌，逐滴加入溶液a，調(diào)節(jié)該溶液的ph值至8.5。4. 1小時后移至透析袋中過夜，使1,4-二氧六環(huán)揮發(fā)。5. 在ph為7.4的pbs中徹底透析6次，使溶液在紫

41、外分光光度計245nm處有高吸收峰。6. 將制備成的上述抗原，加卡介苗、費氏完全佐劑混合，用乳缽研磨成油包水乳劑備用。dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型84pa-bsa抗原制備：1. 溶液a：pa丙酮溶液(30mgpa溶解于1ml丙酮中)。2. 溶液b：2%bsa/碳酸氫鈉溶液(9%)。3. 將溶液b置于冰水浴(4)中，開磁力攪拌器，攪拌1小時。4. 將制備好的pa-bsa抗原與弗氏完全佐劑1：1混合，乳缽中研磨，形成油包水乳劑備用。pa-hsa抗原制備：1. 溶液a：pa丙酮溶液(30mgpa溶解于1ml丙酮中)。2. 溶液b：2%hsa/碳酸氫鈉溶液(9%)。3. 將溶液b置于冰水浴(4)中，開磁力攪拌器，攪拌1小時。4. 將制備好的pa-hsa抗原與弗氏完全佐劑1：1混合，乳缽中研磨，形成油包水乳劑備用。dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型85膠原和腎上腺素混合液制備：1. 膠原溶液：200 g/ml2. 腎上腺素溶液：100 g/ml3. 將以上兩種溶液以1：1比例混合、搖勻。dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型86以下是附錄1-5dgh呼吸系統(tǒng)疾病動物模型呼吸系統(tǒng)疾病動物模型87 常用藥物的最大給藥量常用藥物的最大給藥量動物動物項項 目目 灌灌 胃胃 皮