專(zhuān)接本生物工程導(dǎo)論考試題目

1、（一）36.限制性?xún)?nèi)切酶識(shí)別和切割dsdna分子內(nèi)特殊核苷酸順序的酶統(tǒng)稱(chēng)為限制性?xún)?nèi)切酶，簡(jiǎn)稱(chēng)限制酶37.代謝工程利用基因重組技術(shù)強(qiáng)化細(xì)胞中某一代謝途徑或賦予細(xì)胞新的代謝能力是代謝工程的主要研究?jī)?nèi)容38.愈傷組織植物體受到切割等傷害后會(huì)產(chǎn)生愈傷組織，愈傷組織的形成實(shí)際上是一種創(chuàng)傷反應(yīng)，使植物脫分化的結(jié)果，產(chǎn)生愈傷組織的植物器官可以是種子，根，莖葉等。39.神經(jīng)干細(xì)胞 神經(jīng)干細(xì)胞位于成體神經(jīng)組織中，具有再生神經(jīng)元。星形膠質(zhì)細(xì)胞和少突狀細(xì)胞的潛在能力40.基因組重排育種基因組重排技術(shù)可以用來(lái)改造細(xì)菌的基因組，實(shí)現(xiàn)表型的改良。重排技術(shù)具有多親本雜交的優(yōu)勢(shì)。對(duì)細(xì)菌群體進(jìn)行重復(fù)的基因組重排可以有

2、效構(gòu)建新菌株的組合文庫(kù)。如果將它應(yīng)用到帶表型篩選的細(xì)菌群體中，就會(huì)產(chǎn)生很多表型有顯著改良的新菌株酵母菌的生長(zhǎng)特性酵母菌是一類(lèi)最簡(jiǎn)單的真核微生物。細(xì)胞中有結(jié)構(gòu)完整的細(xì)胞核。絕大多數(shù)酵母菌是單細(xì)胞，但體積比細(xì)菌要大得多，一般呈球形，卵形或檸檬型。出芽生殖是酵母菌最常見(jiàn)的生殖方式。有些酵母細(xì)胞也能以與細(xì)菌類(lèi)似的裂殖方式來(lái)產(chǎn)生后代。這兩種生殖方式都是無(wú)性繁殖。很多酵母菌還能通過(guò)產(chǎn)生子囊孢子的形式進(jìn)行有性繁殖。若出芽形成的字細(xì)胞未能與母細(xì)胞分開(kāi)，又長(zhǎng)了新芽，形成成串的細(xì)胞，看起來(lái)像絲狀，稱(chēng)為假菌絲，這類(lèi)酵母稱(chēng)為假絲酵母。酵母菌在自然界中分布很廣，尤其喜歡偏酸性且含糖較多的環(huán)境。我們每天吃的面包饅頭，喝的

3、啤酒葡萄酒等各類(lèi)酒類(lèi)飲料，是酵母菌參與制造的，酵母菌還可以用于生產(chǎn)微生物，甘油，酶制劑，菌體蛋白。基因組文庫(kù)的篩選方法構(gòu)建基因文庫(kù)后，就要鑒定出文庫(kù)中帶有目的基因序列的克隆。有三種通用的鑒定方法：1是用標(biāo)記的dna探針進(jìn)行dna雜交。2是用抗體對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行免疫雜交。3是對(duì)蛋白質(zhì)的活性進(jìn)行鑒定1）dna雜交法：熱處理或減變性后的雙鏈dna分子會(huì)變成單鏈dna分子。加熱后若緩慢降低溫度，那么dna雙鏈結(jié)構(gòu)就會(huì)在堿基配對(duì)作用下重新恢復(fù)（復(fù)性）退火后的dna分子探針和目的序列之間的堿基應(yīng)能形成穩(wěn)定的堿基配對(duì)2）免疫反應(yīng)法：若一目的基因dna序列可以轉(zhuǎn)錄或翻譯成蛋白質(zhì)，那么只要出現(xiàn)這種蛋白質(zhì)，甚至只需要

4、該蛋白質(zhì)的一部分，就可以用免疫的方法檢測(cè)3）酶活性法，若目的基因編碼一種酶，而這種酶又是宿主細(xì)胞所不能編碼的，那么就可以通過(guò)檢查酶活性來(lái)篩選目的基因的重組子微生物工程的發(fā)展史人類(lèi)利用微生物的歷史非常悠久。我們的先人很早就知道一些采摘的野果存放一段時(shí)間后會(huì)有酒味。大約在9000年前就已經(jīng)開(kāi)始了原始的啤酒生產(chǎn) 。公元前2400年左右，埃及第五王朝的墓葬壁畫(huà)上，就有烤制面包和釀酒的大幅浮雕。我國(guó)利用微生物釀酒起源于公元前2200-2600年，已經(jīng)有4000多年的歷史。早期的發(fā)酵源自對(duì)于自然發(fā)酵的模擬。17世紀(jì)下半葉，隨著顯微鏡的發(fā)明，人們才逐漸認(rèn)識(shí)到微生物的存在。19世紀(jì)中葉，法國(guó)著名生物學(xué)家巴斯德

5、證明酒精發(fā)酵是活的酵母引起。其他發(fā)酵過(guò)程也是各種微生物作用的結(jié)果。隨著人們對(duì)發(fā)酵過(guò)程原理的認(rèn)識(shí)逐步加深，以及純種培養(yǎng)技術(shù)的發(fā)明，從19世紀(jì)末-20世紀(jì)30年代，相繼出現(xiàn)了乳酸，丙酮/丁醇，甘油等工業(yè)化生產(chǎn)的發(fā)酵產(chǎn)品。特別是丙酮-丁醇發(fā)酵和甘油發(fā)酵的出現(xiàn)，標(biāo)志著人類(lèi)開(kāi)始有目的的利用人工篩選的微生物生產(chǎn)新的工業(yè)產(chǎn)品。20世紀(jì)40年代的抗生素革命，它標(biāo)志發(fā)酵工程作為一門(mén)獨(dú)立的工程學(xué)科誕生，具有劃時(shí)代的意義。近30年來(lái)，隨著人類(lèi)在基因水平上改造微生物的技術(shù)-基因工程，代謝工程，組合生物合成等技術(shù)的突飛猛進(jìn)，發(fā)酵工業(yè)的應(yīng)用領(lǐng)域迅速擴(kuò)展，研究?jī)?nèi)容也日益豐富。酶的活力酶是催化劑，酶的活力是指酶催化特定底物轉(zhuǎn)

6、化成產(chǎn)物的速率。一般而言，酶活力是在規(guī)定的環(huán)境條件，化學(xué)因素和生物因素下，根據(jù)酶所催化反應(yīng)的初速度而測(cè)定的。酶活力的單位一般是：?jiǎn)挝粫r(shí)間，單位質(zhì)量酶蛋白所催化的底物反應(yīng)或產(chǎn)物生成的物質(zhì)的量（或質(zhì)量）。胚胎干細(xì)胞干細(xì)胞的研究最早是從胚胎干細(xì)胞開(kāi)始的。3-5天的胎兒（或囊胚中），有幾十個(gè)內(nèi)層細(xì)胞是非常特殊的細(xì)胞，經(jīng)過(guò)6個(gè)月的增殖，這幾十個(gè)內(nèi)層細(xì)胞能分化出千萬(wàn)個(gè)不同的細(xì)胞。這些內(nèi)層細(xì)胞就是胚胎干細(xì)胞，胚胎干細(xì)胞具有形成所有組織和器官的能力，具有全能性。造血干細(xì)胞 造血干細(xì)胞分布于骨髓，外周血和臍血中。尤其臍血中含有豐富的造血千細(xì)胞，造血干細(xì)胞是造血細(xì)胞的“種子”，體內(nèi)所有血細(xì)胞，包括紅細(xì)胞

7、白細(xì)胞血小板等部由它分化發(fā)育而來(lái)，它是人們認(rèn)識(shí)最早的干細(xì)胞之一。在間歇發(fā)酵過(guò)程中如何結(jié)合微生物的生長(zhǎng)特征實(shí)現(xiàn)發(fā)酵過(guò)程中的優(yōu)化操作。在間歇培養(yǎng)中，當(dāng)微生物種子罐接種到發(fā)酵罐后，為了適應(yīng)新的環(huán)境需要一段緩沖期稱(chēng)為遲滯期。為接下來(lái)的快速生長(zhǎng)做好必要的準(zhǔn)備工作，適應(yīng)了新的環(huán)境后，微生物數(shù)量開(kāi)始成倍增長(zhǎng)，這個(gè)時(shí)期稱(chēng)為指數(shù)生長(zhǎng)期。在間歇培養(yǎng)過(guò)程中，當(dāng)微生物對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期維持一段時(shí)間后，由于某些養(yǎng)分消耗殆盡，微生物生長(zhǎng)代謝過(guò)程中產(chǎn)生了抑制微生物生長(zhǎng)的代謝產(chǎn)物，以及因?yàn)槲⑸锩芏纫呀?jīng)很高造成氧供應(yīng)不足等原因，微生物生長(zhǎng)速度開(kāi)始減慢，而同時(shí)有一部分微生物逐漸死亡。此時(shí)為了延長(zhǎng)細(xì)胞處于穩(wěn)定期的時(shí)間，極大可能的增加某些

8、代謝產(chǎn)物的生成，有必要對(duì)發(fā)酵罐內(nèi)為環(huán)境進(jìn)行調(diào)整，比如補(bǔ)加酸堿以維持恒定的ph環(huán)境，補(bǔ)加c,n以滿(mǎn)足微生物生長(zhǎng)代謝的營(yíng)養(yǎng)需要，這都要求對(duì)發(fā)酵過(guò)程的參數(shù)進(jìn)行實(shí)時(shí)控制和優(yōu)化。過(guò)程控制是保證發(fā)酵過(guò)程穩(wěn)定，降低成本，提高效益的主要手段之一。過(guò)程控制的兩個(gè)基本要素如下：1過(guò)程參數(shù)的測(cè)量與操作變量的調(diào)節(jié)。準(zhǔn)確的參數(shù)測(cè)量是了解和掌握過(guò)程當(dāng)前狀態(tài)的基礎(chǔ)，操作變量的調(diào)節(jié)技術(shù)是實(shí)現(xiàn)控制的基本手段，這些都構(gòu)成過(guò)程控制的硬件2過(guò)程的模型化與控制策略。通過(guò)模型可以將不同的過(guò)程參數(shù)動(dòng)態(tài)的關(guān)聯(lián)起來(lái)，了解這些參數(shù)反映的過(guò)程變化情況。根據(jù)控制目標(biāo)和實(shí)際狀況的差別，可以采用合適的策略調(diào)節(jié)某些可以控制的參數(shù)。過(guò)程參數(shù)的測(cè)量是了解發(fā)酵

9、過(guò)程的窗口?？蓽y(cè)量的參數(shù)可分為環(huán)境參數(shù)和操作變量?jī)纱箢?lèi)。在環(huán)境參數(shù)方面，ph值，溫度，溶氧值，出口co2濃度的在線(xiàn)測(cè)量技術(shù)已經(jīng)成熟。菌體濃度和部分底物或產(chǎn)物的在線(xiàn)測(cè)量技術(shù)也已經(jīng)基本成熟。操作變量方面，攪拌轉(zhuǎn)速，通氣量，冷卻水流量，罐壓，酸堿泵流速，流加速率等的測(cè)定和控制也已經(jīng)不存在技術(shù)問(wèn)題。只要知道了間歇培養(yǎng)時(shí)細(xì)胞生長(zhǎng)的動(dòng)力學(xué)模型和細(xì)胞生長(zhǎng)和次級(jí)代謝生成兩者之間的關(guān)系，就可以通過(guò)參數(shù)優(yōu)化控制的方式進(jìn)行發(fā)酵過(guò)程的優(yōu)化操作如何實(shí)現(xiàn)基因工程菌的高效表達(dá)要實(shí)現(xiàn)基因工程菌的高效表達(dá)，第一要選擇適宜的啟動(dòng)子。真核細(xì)胞的啟動(dòng)子不能被大腸桿菌rna聚合酶識(shí)別，因此必須將外源基因置于大腸桿菌啟動(dòng)子控制下。翻譯水

10、平影響外源基因表達(dá)的重要因素是翻譯起始區(qū)。二目的基因的不溶性高效表達(dá)。采用目的蛋白與帶純化標(biāo)記的細(xì)菌蛋白融合的新策略，所得到的融合蛋白不僅能夠抵抗蛋白酶的進(jìn)攻，而且可以利用純化標(biāo)簽的蛋白與相應(yīng)的抗體之間的親和反應(yīng)，實(shí)現(xiàn)目的蛋白的高效親和分離。三目的基因的高效可溶性表達(dá)。若目的蛋白能夠抵抗蛋白酶的進(jìn)攻或采用蛋白酶缺失的宿主菌，目的基因有可能在細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行高水平的可溶性表達(dá)。四目的基因的高效分泌型表達(dá)。當(dāng)采用大腸桿菌作為表達(dá)系統(tǒng)時(shí)，如果在質(zhì)粒設(shè)計(jì)時(shí)加上一段信號(hào)肽基因，就有可能實(shí)現(xiàn)目的蛋白質(zhì)的分泌型表達(dá)。五基因工程宿主菌的改造。通過(guò)代謝工程的方法改變宿主菌的代謝途徑以提高目的產(chǎn)物的合成六利用細(xì)胞培養(yǎng)工

11、程手段提高基因表達(dá)水平。1提高工程菌的質(zhì)粒穩(wěn)定性。2。實(shí)現(xiàn)重組菌的高密度培養(yǎng)。3 減少乙酸等抑制性副產(chǎn)物的形成。4。提高目的蛋白表達(dá)的質(zhì)量（二）逆轉(zhuǎn)錄酶是從mrna逆轉(zhuǎn)錄形成互補(bǔ)dna（cdna）的酶，或稱(chēng)為依賴(lài)于rna的dna聚合酶。分子印跡技術(shù)是指制備對(duì)某一特定分子具有選擇性的聚合物的過(guò)程，該特定分子通常稱(chēng)為印跡分子或模版。分子印跡技術(shù)借助模板在高分子物質(zhì)上形成特異的識(shí)別位點(diǎn)和催化位點(diǎn)。誘變育種的基本原理是利用一些物理或化學(xué)的因素處理微生物細(xì)胞，使其遺傳性狀發(fā)生隨機(jī)的突變，得到大量形狀各異的突變株，然后再?gòu)谋姸嗤蛔冎曛幸砸欢ǖ姆椒êY選出生產(chǎn)性能改善的個(gè)體。用于處理微生物以使其發(fā)生突變的物理

12、或化學(xué)因素稱(chēng)為誘變劑。 組織工程的研究幾乎遍及肌體的所有組織和器官。組織工程安組織器官的構(gòu)筑方式可以分為兩個(gè)部分：組織再生工程和組織替代工程。組織再生工程采用自體細(xì)胞，借助人工細(xì)胞外基質(zhì)，在各種生長(zhǎng)因子的促進(jìn)下使細(xì)胞分裂，增殖，分化，以構(gòu)建患者自己的組織。植物細(xì)胞具有全能性，即單一的離體細(xì)胞在一定環(huán)境下能分化成不同的細(xì)胞組織乃至整個(gè)植株。胚胎干細(xì)胞也具有全能性，它具有形成所有組織器官的能力。非水系統(tǒng)的酶催化特點(diǎn)與傳統(tǒng)的水溶液中酶催化反應(yīng)相比，非水系統(tǒng)的酶催化有以下的一些特點(diǎn)：1絕大多數(shù)有機(jī)化合物在非水系統(tǒng)中的溶解度高于水溶液2。根據(jù)熱力學(xué)原理，一些在水中不可能進(jìn)行的反應(yīng)，有可能在非水

13、系統(tǒng)中進(jìn)行3。與水相比，酶在非水系統(tǒng)中的穩(wěn)定性比較高4。從非水系統(tǒng)中回收反應(yīng)產(chǎn)物比水相中容易。5在非水系統(tǒng)中酶很容易回收和反復(fù)使用。酶的修飾方法酶的結(jié)構(gòu)決定了酶的性質(zhì)和功能，只要酶的結(jié)構(gòu)發(fā)生某些精細(xì)的變化，就能使酶的特性和功能隨之改變。在研究酶的結(jié)構(gòu)-功能關(guān)系的基礎(chǔ)上，在分子水平上對(duì)酶進(jìn)行化學(xué)修飾的方法有：金屬離子置換修飾，大分子結(jié)合修飾，肽鏈有限水解修飾，酶蛋白側(cè)鏈基團(tuán)修飾，氨基酸置換修飾以及物理修飾等。金屬離子置換修飾是通過(guò)改變酶分子所含的金屬離子，使酶的特性和功能發(fā)生改變。大分子結(jié)合修飾利用水溶性大分子與酶結(jié)合，使酶的空間結(jié)構(gòu)發(fā)生某些精細(xì)的改變。蛋白質(zhì)側(cè)鏈基團(tuán)修飾可以改變蛋白質(zhì)表面電荷和

14、疏水性，從而影響其催化活性和穩(wěn)定性。酶蛋白中個(gè)別氨基酸的置換可以采用點(diǎn)突變的方法很容易就可以完成。點(diǎn)突變是研究蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能關(guān)系的重要工具。 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng) 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)分貼壁與懸浮培養(yǎng)兩種。只有在固體基質(zhì)上付著才能增長(zhǎng)或存活的細(xì)胞稱(chēng)為貼壁依賴(lài)型細(xì)胞，而可在懸浮狀態(tài)下生長(zhǎng)的細(xì)胞為非貼壁型細(xì)胞。而動(dòng)物細(xì)胞的懸浮培養(yǎng)方式有間歇培養(yǎng)，補(bǔ)料-分批培養(yǎng)和灌流培養(yǎng)等從基因表達(dá)系統(tǒng)構(gòu)建和目的基因表達(dá)過(guò)程兩個(gè)方面分析，目的基因的表達(dá)效率不僅取決于宿主菌的特性和表達(dá)載體的構(gòu)建，還取決于重組菌的培養(yǎng)工程。從表達(dá)系統(tǒng)來(lái)看，主要表現(xiàn)在轉(zhuǎn)錄和翻譯兩個(gè)水平上。影響活性淤泥活性的主要因素影響活性淤泥活性

15、的主要因素包括:溶解氧，營(yíng)養(yǎng)物，ph值和溫度1溶解氧。氧是好氧微生物生存和代謝的必要條件，供氧不足會(huì)妨礙微生物代謝過(guò)程，造成絲狀菌等耐低溶解氧的微生物滋長(zhǎng)，是污泥不易沉淀，這種現(xiàn)象稱(chēng)為污泥膨脹。2營(yíng)養(yǎng)物。微生物生長(zhǎng)繁殖需要一定的營(yíng)養(yǎng)物。碳元素的需要量以bod5負(fù)荷率表示，它直接影響到淤泥增長(zhǎng)，有機(jī)物降解速率，需氧量和沉淀性能。3ph和溫度，為維持活性淤泥法處理設(shè)施正常運(yùn)轉(zhuǎn)，混合液的ph值應(yīng)控制在6。5-9。0范圍內(nèi)，溫度是20-30c為宜。純種培養(yǎng)的意義微生物細(xì)胞從環(huán)境中吸收營(yíng)養(yǎng)物后，通過(guò)細(xì)胞的新陳代謝作用合成新的細(xì)胞成分，并向環(huán)境釋放代謝產(chǎn)物，某些細(xì)胞組分和代謝產(chǎn)物就成了我們需要的目標(biāo)產(chǎn)物。

16、不同微生物的代謝產(chǎn)物不同，而混菌培養(yǎng)時(shí)由于爭(zhēng)奪養(yǎng)分，或者受不同微生物代謝產(chǎn)物的抑制或殺害作用。會(huì)造成一次工業(yè)生產(chǎn)過(guò)程，投入和目標(biāo)產(chǎn)物的產(chǎn)出不能符合工業(yè)經(jīng)濟(jì)預(yù)期值的問(wèn)題，甚至在某些情況下，由于生長(zhǎng)繁殖能力的差異，會(huì)造成目標(biāo)產(chǎn)物產(chǎn)生菌在生長(zhǎng)過(guò)程中完全處于抑制狀態(tài)，而非目標(biāo)產(chǎn)物產(chǎn)生菌大量繁殖，這會(huì)造成極大的工業(yè)損失。所有這一切都要求我們?cè)诎l(fā)酵過(guò)程中完成純種培養(yǎng)。干細(xì)胞是一類(lèi)極特殊的來(lái)自胚胎或成體的未分化細(xì)胞,同時(shí)具有不斷增長(zhǎng)繁殖的功能以及向多種功能細(xì)胞分化的潛能.正是這種雙重功能,干細(xì)胞具有可用于組織器官生產(chǎn)或新藥篩選的巨大潛能.機(jī)體的各種細(xì)胞,組織和器官,甚至完整的生物都是通過(guò)干細(xì)胞分化發(fā)育而成的

17、.干細(xì)胞分為胚胎干細(xì)胞和組織干細(xì)胞.胚胎干細(xì)胞干細(xì)胞研究最早是從胚胎干細(xì)胞開(kāi)始.3-5天的胎兒（或囊胚中），有幾十個(gè)內(nèi)層細(xì)胞是非常特殊的細(xì)胞，經(jīng)過(guò)6個(gè)月的增殖，這幾十個(gè)內(nèi)層細(xì)胞能分化出千萬(wàn)個(gè)不同的細(xì)胞。這些內(nèi)層細(xì)胞就是胚胎干細(xì)胞，具有形成所有組織和器官的能力，具有全能性。多能干細(xì)胞胚胎干細(xì)胞逐漸定向分化，朝著特定的組織器官發(fā)展，失去全能性而變得比較專(zhuān)一，他們能繼續(xù)發(fā)育成器官組織，它們只能發(fā)育分化成一個(gè)系統(tǒng)中的幾種細(xì)胞，但不能生成其它系統(tǒng)的細(xì)胞，因此這些干細(xì)胞稱(chēng)為“多能干細(xì)胞”。專(zhuān)能干細(xì)胞多能干細(xì)胞繼續(xù)分化發(fā)育,將生成更加專(zhuān)門(mén)化的細(xì)胞,即他們只能再增殖分化為一種類(lèi)型的終端細(xì)胞,如紅細(xì)胞,肌細(xì)胞,

18、神經(jīng)細(xì)胞等.多能及專(zhuān)能干細(xì)胞統(tǒng)稱(chēng)為組織干細(xì)胞,如造血干細(xì)胞,皮膚干細(xì)胞及神經(jīng)干細(xì)胞干細(xì)胞的研究進(jìn)展主要集中在胚胎干細(xì)胞,造血干細(xì)胞,神經(jīng)干細(xì)胞和間充質(zhì)干細(xì)胞.胚胎干細(xì)胞不能發(fā)育成單獨(dú)的生物體,但可以發(fā)育成多個(gè)組織器官的多能性細(xì)胞。（三）36原代細(xì)胞原代細(xì)胞是直接從組織器官中分離得到的，原代細(xì)胞培養(yǎng)一般由組織器官解剖分離解聚和離體細(xì)胞培養(yǎng)三個(gè)步驟組成。37. 核酸酶20世紀(jì)80年代初cech和altman各自獨(dú)立的發(fā)現(xiàn)了rna具有生物催化功能，人們發(fā)現(xiàn)除蛋白質(zhì)具有酶的催化功能外，某些rna 和dna分子也具有催化功能，這種具有催化功能的核酸就是核酸酶38. dna的復(fù)制dna攜帶著生物細(xì)胞的全部

19、遺傳信息，作為遺傳物質(zhì)，dna分子必須能夠準(zhǔn)確地自我復(fù)制一個(gè)dna分子可以通過(guò)半保留復(fù)制機(jī)制精確的復(fù)制完成兩個(gè)完全相同的dna分子，并分配到兩個(gè)子細(xì)胞中，從而將親代細(xì)胞所含的遺傳信息原原本本的傳導(dǎo)子代細(xì)胞39. 細(xì)菌細(xì)菌是單細(xì)胞原核生物，各體極小，沒(méi)有成型的細(xì)胞核，一般以典型的“一分為二“的裂殖方式繁殖。40. dna重排dna重排的基本原理是首先將同源基因（單一基因或基因家族）切成隨機(jī)dna片斷，然后進(jìn)行pcr重聚。那些帶有同源性但核苷酸序列有差異的隨機(jī)dna片段，在每一輪pcr循環(huán)中互為引物和模板，經(jīng)多次pcr循環(huán)后能迅速產(chǎn)生大量的重組dna，創(chuàng)造出新基因發(fā)酵過(guò)程操作方式根據(jù)發(fā)酵過(guò)程操作方

20、式的不同，可以將工業(yè)發(fā)酵分為三種模式：間歇發(fā)酵，連續(xù)發(fā)酵和流加發(fā)酵。間歇發(fā)酵階段，將發(fā)酵罐和培養(yǎng)基滅菌后，向發(fā)酵罐中接入種子，開(kāi)始發(fā)酵過(guò)程。在發(fā)酵過(guò)程中，除氣體進(jìn)出外，一般不與外界發(fā)生其他物質(zhì)交換，在某些情況下，根據(jù)發(fā)酵體系的要求，須對(duì)發(fā)酵過(guò)程的ph值進(jìn)行控制。發(fā)酵結(jié)束后，整批放罐。連續(xù)發(fā)酵是在發(fā)酵過(guò)程中向生物反應(yīng)器連續(xù)的提供新鮮培養(yǎng)基（進(jìn)料）并排出發(fā)酵液（出料）的操作方式。穩(wěn)定操作時(shí)，進(jìn)料和出料的流量基本相等，因而反映器內(nèi)發(fā)酵液體積和組成保持恒定。流加發(fā)酵介于間歇發(fā)酵和連續(xù)發(fā)酵之間的一種操作方式。流加發(fā)酵的特點(diǎn)是在流加階段按一定規(guī)律向發(fā)酵罐中連續(xù)的補(bǔ)加營(yíng)養(yǎng)物和或前體，發(fā)酵罐不向外排放產(chǎn)物，罐

21、中發(fā)酵液體積不斷增加，直到規(guī)定體積后放罐。流加發(fā)酵適合于細(xì)胞高密度培養(yǎng)也廣泛用于次級(jí)代謝產(chǎn)物的生成。微生物的生長(zhǎng)特征微生物的個(gè)體雖然微小，但由于其群體數(shù)量驚人的龐大，因而具有極強(qiáng)的代謝能力。微生物大都具有極大的比表面積，這使得微生物與外部環(huán)境之間進(jìn)行物質(zhì)和能量交換的能力非常強(qiáng)。這樣強(qiáng)的代謝能力也使微生物具有驚人的繁殖速率。當(dāng)然當(dāng)微生物數(shù)量接近某一限制量時(shí)，由于微生物相互競(jìng)爭(zhēng)養(yǎng)分和氧氣等，使微生物數(shù)量難以繼續(xù)增加。微生物個(gè)體小，繁殖快，數(shù)量多，使微生物具有分布廣，種類(lèi)多，容易變異，適應(yīng)能力強(qiáng)等特點(diǎn)。微生物代謝能力強(qiáng)，生長(zhǎng)繁殖快的特點(diǎn)使其非常適于工業(yè)和其他領(lǐng)域。地球上微生物種類(lèi)繁多，性能各異，針對(duì)

22、特定的用途，通過(guò)大范圍的篩選，我們能夠從環(huán)境中找到所需代謝途徑的微生物?；蚪M重排技術(shù)基因組重排技術(shù)可以用來(lái)改造細(xì)菌的基因組，實(shí)現(xiàn)表型的改良。重排技術(shù)具有多親本雜交的優(yōu)勢(shì)。對(duì)細(xì)菌群體進(jìn)行重復(fù)的基因組重排可以有效構(gòu)建新菌株的組合文庫(kù)。如果將它應(yīng)用到帶表型篩選的細(xì)菌群體中，就會(huì)產(chǎn)生很多表型有顯著改良的新菌株。dna重排的基本原理是首先將同源基因（單一基因或基因家族）切成隨機(jī)dna片斷，然后進(jìn)行pcr重聚。那些帶有同源性但核苷酸序列有差異的隨機(jī)dna片段，在每一輪pcr循環(huán)中互為引物和模板，經(jīng)多次pcr循環(huán)后能迅速產(chǎn)生大量的重組dna，創(chuàng)造出新基因。在重聚pcr過(guò)程中，當(dāng)來(lái)自一種拷貝的小片斷與另一種

23、拷貝的小片斷相互為引物時(shí)，即可發(fā)生模板的移位，這樣可使親本基因群中的突變發(fā)生多種組合，導(dǎo)致各種各樣的突變體，這些變異的dna分別轉(zhuǎn)移入宿主細(xì)胞后，就會(huì)形成很多具有不同性狀的重組菌株，從中可以篩選出符合目標(biāo)的陽(yáng)性突變重組子。常見(jiàn)的反應(yīng)器發(fā)酵工業(yè)常用細(xì)胞為微生物細(xì)胞，而動(dòng)植物細(xì)胞也已成為最常用發(fā)酵對(duì)象。在發(fā)酵工業(yè)中攪拌器是最常用的反應(yīng)器。在機(jī)械攪拌式反應(yīng)器中，實(shí)現(xiàn)物質(zhì)混合傳遞最常用的部件是攪拌漿。用空氣分布器實(shí)現(xiàn)發(fā)酵罐中細(xì)胞對(duì)于氧氣的需求。根據(jù)培養(yǎng)細(xì)胞對(duì)于剪切力耐受能力的不一樣，對(duì)于植物細(xì)胞和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，他們的攪拌器和微生物細(xì)胞培養(yǎng)的攪拌器常做了不同的改進(jìn)，特別是動(dòng)物細(xì)胞，他所用的是籠式攪拌器

24、裝置以保證發(fā)酵過(guò)程中動(dòng)物細(xì)胞不受剪切力的損傷。其他鼓泡塔和氣升式反應(yīng)器也是最常見(jiàn)的生物反應(yīng)器類(lèi)型。而對(duì)于固定化的微生物細(xì)胞或者植物細(xì)胞除了普通的攪拌罐外還可以采用流化床反應(yīng)器和填充床反應(yīng)器或中空纖維與膜反應(yīng)器。根據(jù)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)分為懸浮培養(yǎng)和貼壁依賴(lài)型培養(yǎng)，可以用中空纖維進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞的固定化培養(yǎng)或者使用微載體進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞的貼壁培養(yǎng)，但后者是動(dòng)物細(xì)胞才具有的培養(yǎng)類(lèi)型誘變育種誘變育種的基本原理是利用一些物理或化學(xué)的因素處理微生物細(xì)胞，使其遺傳性狀發(fā)生隨機(jī)的突變，得到大量形狀各異的突變株，然后再?gòu)谋姸嗤蛔冎曛幸砸欢ǖ姆椒êY選出生產(chǎn)性能改善的個(gè)體。用于處理微生物以使其發(fā)生突變的物理或化學(xué)因素稱(chēng)為誘變劑。

25、常見(jiàn)的誘變劑類(lèi)型及其特征常見(jiàn)的誘變劑可以分為物理誘變劑和化學(xué)誘變劑兩大類(lèi)。常見(jiàn)的物理誘變劑如紫外線(xiàn)，x射線(xiàn),r射線(xiàn)，快中子，常見(jiàn)的化學(xué)誘變劑如堿基類(lèi)似物，羥化劑，脫氨劑，烷化劑和誘發(fā)移碼突變的誘變劑。他的缺點(diǎn)是可以引起微生物dna發(fā)生突變的誘變劑往往也能造成人和動(dòng)物dna的變異。經(jīng)過(guò)誘變處理后，變異細(xì)胞一般只占存活細(xì)胞的百分之幾甚至更低，由于誘變劑誘發(fā)的突變是隨機(jī)的，可發(fā)生正突變或副突變，而誘變?cè)斐傻淖儺愇稽c(diǎn)位于dna的一條鏈上，而一個(gè)dna分子有兩條鏈，多核微生物體內(nèi)還有多個(gè)相同功能的dna分子，因此誘變處理后需要對(duì)微生物進(jìn)行短時(shí)間的培養(yǎng)，以保證每個(gè)細(xì)胞中基本上只含有一種類(lèi)型的dna，篩選突

26、變株的工作量十分巨大，可分為初篩和復(fù)篩兩種。酶的來(lái)源酶的來(lái)源可以是從動(dòng)植物細(xì)胞，微生物細(xì)胞或微生物的發(fā)酵液中產(chǎn)生的酶。對(duì)于胞內(nèi)酶必須經(jīng)過(guò)細(xì)胞破碎，固液分離，提純濃縮和產(chǎn)品精致幾個(gè)階段。而對(duì)于胞外酶除了不需要細(xì)胞破碎外，其他步驟一致。除了天然酶外，還可以通過(guò)酶修飾的方式來(lái)獲得一些結(jié)構(gòu)和功能獲得改進(jìn)或提高的酶。這些方法包括金屬離子置換修飾，大分子結(jié)合修飾，肽鏈有限水解修飾，酶蛋白側(cè)鏈基團(tuán)修飾，氨基酸置換修飾以及物理修飾等。金屬離子置換修飾是通過(guò)改變酶分子所含的金屬離子，使酶的特性和功能發(fā)生改變。大分子結(jié)合修飾利用水溶性大分子與酶結(jié)合，使酶的空間結(jié)構(gòu)發(fā)生某些精細(xì)的改變。蛋白質(zhì)側(cè)鏈基團(tuán)修飾可以改變蛋白

27、質(zhì)表面電荷和疏水性，從而影響其催化活性和穩(wěn)定性。酶蛋白中個(gè)別氨基酸的置換可以采用點(diǎn)突變的方法很容易就可以完成。根據(jù)酶的作用原理，用人工方法合成的具有活性中心和催化作用的非蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的化合物稱(chēng)為人工合成酶或人工模擬酶，簡(jiǎn)稱(chēng)人工酶或模擬酶。最簡(jiǎn)單的模擬酶無(wú)疑是利用現(xiàn)有酶或蛋白質(zhì)為母體，并在此基礎(chǔ)上引入相應(yīng)的催化基團(tuán)。也可以參照酶的活性結(jié)構(gòu)合成一些簡(jiǎn)單的小肽作為模擬酶，包括利用環(huán)糊精構(gòu)建模擬酶和分子印跡制備出的人工酶。環(huán)糊精可提供一個(gè)疏水的結(jié)合部位并能與一些無(wú)機(jī)和有機(jī)分子包接形成絡(luò)合物，以此影響和催化一些反應(yīng)?；蛘咧苽淇贵w酶?？贵w酶是指通過(guò)一系列化學(xué)與生物方法制備的具有催化活性的抗體。這種抗體除了具

28、有相應(yīng)的免疫學(xué)性之外，還具有類(lèi)似于酶催化某些反應(yīng)的特性，因此也稱(chēng)為催化抗體?；蛘呃镁哂写呋δ艿哪承﹔na 和dna分子，即核酸酶。以及從自然界中存在著一類(lèi)能在超常生態(tài)環(huán)境下生存的嗜極微生物里尋找大量適應(yīng)極端條件的極端酶。分子印跡技術(shù)是指制備對(duì)某一特定分子具有選擇性的聚合物的過(guò)程，該特定分子通常稱(chēng)為印跡分子或模版。分子印跡技術(shù)借助模板在高分子物質(zhì)上形成特異的識(shí)別位點(diǎn)和催化位點(diǎn)。常見(jiàn)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物方法常見(jiàn)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物方法有顯微注射法,逆轉(zhuǎn)錄病毒法與干細(xì)胞法等1） 顯微注射法.利用顯微操作系統(tǒng)和顯微注射技術(shù)將外源基因直接注入實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的受精卵原核,將外源基因整合到動(dòng)物基因組,再通過(guò)胚胎移植技術(shù)將整合外源

29、基因的受精卵移植到手提的子宮里繼續(xù)發(fā)育,進(jìn)而得到轉(zhuǎn)基因動(dòng)物。2） 逆轉(zhuǎn)錄病毒感染法.對(duì)于雞受精卵,無(wú)法對(duì)其進(jìn)行顯微注射操作,適合采用逆轉(zhuǎn)錄病毒的操作方式3） 胚胎干細(xì)胞法.胚胎干細(xì)胞打靶技術(shù)的成熟,為利用胚胎干細(xì)胞建立轉(zhuǎn)基因動(dòng)物獲得了進(jìn)展4)精子載體法.將外源基因與精子共同培養(yǎng),再通過(guò)電穿孔或脂質(zhì)體介導(dǎo)的方法將外源基因?qū)氤墒斓木?使精子攜帶的外源dna進(jìn)入卵中并受精，從而使外源dna整合到染色體中5）體細(xì)胞核移植法，該技術(shù)以動(dòng)物體細(xì)胞為受體，將目的基因?qū)肽軅鞔囵B(yǎng)的動(dòng)物體細(xì)胞，再以這些動(dòng)物體細(xì)胞為核供體，進(jìn)行動(dòng)物克隆，進(jìn)而得到帶有外源基因的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物（四）36.造血干細(xì)胞造血干細(xì)胞分布于

30、骨髓，外周血和臍血中。尤其臍血中含有豐富的造血千細(xì)胞，造血干細(xì)胞是造血細(xì)胞的“種子”，體內(nèi)所有血細(xì)胞，包括紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板等都由它分化發(fā)育而來(lái)，它是人們認(rèn)識(shí)最早的千細(xì)胞之一?；蛭膸?kù)基因文庫(kù)，也叫cdna文庫(kù)。首先獲得mrna，反轉(zhuǎn)錄得cdna，經(jīng)克隆后形成文庫(kù)。cdna文庫(kù)和基因庫(kù)的不同之處在于 ，cdna文庫(kù)在mrna拼接過(guò)程中已經(jīng)除去了內(nèi)含子等成分，便于dna重組時(shí)直接使用。38. 人工模擬酶根據(jù)酶的作用原理，用人工方法合成的具有活性中心和催化作用的非蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的化合物稱(chēng)為人工合成酶或人工模擬酶，簡(jiǎn)稱(chēng)人工酶或模擬酶。39. 生物修復(fù)生物修復(fù)就是利用生物的吸收，富集，代謝等功能作用將

31、污染物轉(zhuǎn)化或降解為無(wú)害物質(zhì)甚至有用物質(zhì)，從而加速消除環(huán)境污染物，恢復(fù)生態(tài)系統(tǒng)的一種生物技術(shù)40. 蛋白質(zhì)工程蛋白質(zhì)工程是通過(guò)定位突變的方法使所表達(dá)的蛋白質(zhì)產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)和功能發(fā)生變化，根據(jù)需要設(shè)計(jì)新的蛋白質(zhì)氨基酸序列。真核生物基因組比原核生物要大得多，一般選擇識(shí)別6個(gè)或更多個(gè)堿基序列的限制性?xún)?nèi)切酶來(lái)酶解真核生物基因組dna。可通過(guò)cdna方法，化學(xué)合成法和pcr法來(lái)獲得真核生物目的基因放線(xiàn)菌是最主要的抗生素產(chǎn)生菌，它是原核生物，細(xì)胞構(gòu)造和細(xì)胞壁的化學(xué)組成都與細(xì)菌類(lèi)似。因其菌落呈放射狀而得名。放線(xiàn)菌具有很多真菌家族的特點(diǎn)，如菌絲呈纖細(xì)的絲狀，有分枝。從生物進(jìn)化的角度，他介于細(xì)菌與真菌之間的過(guò)渡類(lèi)型。

32、而霉菌是一類(lèi)比酵母更高級(jí)也更復(fù)雜的小型絲狀真菌，他在培養(yǎng)基上形成絨毛狀，網(wǎng)狀或絮狀的菌絲體。菌絲比細(xì)菌和放線(xiàn)菌的細(xì)胞粗幾倍到幾十倍。代謝工程，又稱(chēng)為代謝途徑工程或途徑工程，是基于代謝流分析和基因重組技術(shù)改善菌主遺傳性狀的一種先進(jìn)的工程技術(shù)。代謝工程可以在對(duì)細(xì)胞的整個(gè)代謝網(wǎng)絡(luò)的代謝流進(jìn)行定性，定量分析的基礎(chǔ)上，找出制約目標(biāo)產(chǎn)物積累的關(guān)鍵酶催化反應(yīng)，并利用基因重組技術(shù)直接對(duì)代謝途徑中的關(guān)鍵酶進(jìn)行修飾，相對(duì)于誘變育種來(lái)說(shuō)，這種方法具有方向性強(qiáng)，目標(biāo)明確，效率高，技術(shù)手段先進(jìn)，過(guò)程可控性和重復(fù)性很好的優(yōu)點(diǎn)，缺點(diǎn)是對(duì)相應(yīng)微生物的代謝和遺傳機(jī)理知識(shí)以及基因操作工具的依賴(lài)性太強(qiáng)。組織工程的三種基本要素是細(xì)胞

33、、支架材料與調(diào)節(jié)因子。其中每一種酶都有一些特性的抑制劑，通常將這種酶稱(chēng)為該抑制劑的靶酶。隨著人類(lèi)基因組計(jì)劃完成及對(duì)疾病引發(fā)機(jī)理的深入研究，人們發(fā)現(xiàn)很多疾病的發(fā)生都是由于基因突變引起的酶蛋白表達(dá)水平的變化引起。這樣一來(lái)，只要對(duì)這些酶蛋白的活性水平進(jìn)行調(diào)節(jié)，就可能治愈疾病。這種對(duì)疾病具有關(guān)鍵作用的酶就是靶酶，篩選得到的能影響和調(diào)節(jié)靶酶活性并能治療疾病的藥物就是酶標(biāo)藥物。為什么要進(jìn)行酶的固定化（酶的固定化的意義）酶是蛋白質(zhì)，在水中具有很高的溶解度，因此傳統(tǒng)酶催化反應(yīng)幾乎在水溶液中進(jìn)行，催化結(jié)束后溶液中的游離酶只能一次性使用，難以回收，造成了酶的浪費(fèi)，也會(huì)增加目的產(chǎn)物分離的難度和費(fèi)用，并影響到產(chǎn)物的質(zhì)

34、量，此外溶液中酶的穩(wěn)定性差，容易變性和失活。為了適應(yīng)工業(yè)化生產(chǎn)的需要，人們模仿生物體中酶的作用方式，通過(guò)固定化技術(shù)將酶加以改造固定。酶的結(jié)構(gòu)決定了酶的性質(zhì)和功能，只要酶的結(jié)構(gòu)發(fā)生某些精細(xì)的變化，就能使酶的特性和功能隨之改變。在研究酶的結(jié)構(gòu)-功能關(guān)系的基礎(chǔ)上，在分子水平上對(duì)酶進(jìn)行化學(xué)修飾的方法有：金屬離子置換修飾，大分子結(jié)合修飾，肽鏈有限水解修飾，酶蛋白側(cè)鏈基團(tuán)修飾，氨基酸置換修飾以及物理修飾等。金屬離子置換修飾是通過(guò)改變酶分子所含的金屬離子，使酶的特性和功能發(fā)生改變。大分子結(jié)合修飾利用水溶性大分子與酶結(jié)合，使酶的空間結(jié)構(gòu)發(fā)生某些精細(xì)的改變。蛋白質(zhì)側(cè)鏈基團(tuán)修飾可以改變蛋白質(zhì)表面電荷和疏水性，從而

35、影響其催化活性和穩(wěn)定性。酶蛋白中個(gè)別氨基酸的置換可以采用點(diǎn)突變的方法很容易就可以完成。點(diǎn)突變是研究蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能關(guān)系的重要工具。重組體篩選的方法重組體篩選的方法很多，歸納起來(lái)可分為：在核酸水平和蛋白質(zhì)水平上篩選。從核酸水平篩選克隆子可以通過(guò)核酸雜交的方法。這類(lèi)方法根據(jù)dna-dna,dna-rna堿基配對(duì)的原理，以使用基因探針技術(shù)為核心，發(fā)展了原位雜交，southern雜交,northern雜交等方法。從蛋白質(zhì)水平上篩選克隆字的方法主要有：檢測(cè)抗生素抗性及營(yíng)養(yǎng)缺陷型，觀測(cè)嗜菌斑的形成，檢測(cè)目標(biāo)酶的活性，目標(biāo)蛋白的免疫特性和生物活性等。即：1、 利用抗生素抗性基因2、 營(yíng)養(yǎng)缺陷互補(bǔ)法3、核酸雜

36、交法4、通過(guò)免疫反應(yīng)篩選5、通過(guò)酶活性篩選（五）抗體酶是指通過(guò)一系列化學(xué)與生物方法制備的具有催化活性的抗體。這種抗體除了具有相應(yīng)的免疫學(xué)性之外，還具有類(lèi)似于酶催化某些反應(yīng)的特性，因此也稱(chēng)為催化抗體?；驇?kù)，也叫基因組文庫(kù)，是指用克隆的方法將一種生物的全部基因組長(zhǎng)期以重組體方式保存在適當(dāng)?shù)乃拗髦?。?xì)胞株細(xì)胞系中往往存在有若干表型相似或相異的細(xì)胞世系，若其中一世系，經(jīng)過(guò)選殖克隆，物理性細(xì)胞分離，或其他選擇技術(shù)，而在培養(yǎng)的細(xì)胞群體中辨識(shí)出其特殊表型性質(zhì)，該細(xì)胞系便稱(chēng)為細(xì)胞株。能夠種間共處的微生物各自利用不同的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，他們釋放到環(huán)境中的代謝產(chǎn)物也不會(huì)影響其它微生物的生長(zhǎng)。在間歇培養(yǎng)中，首先將細(xì)胞接種

37、入培養(yǎng)基中，伴隨細(xì)胞的生長(zhǎng)過(guò)程，細(xì)胞逐漸消耗著培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)物，同時(shí)，又分泌著產(chǎn)物和副產(chǎn)物。當(dāng)培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)物消耗殆盡或者不良副產(chǎn)物積累過(guò)多時(shí)，細(xì)胞停止生長(zhǎng)。污水的生化處理污水的生化處理過(guò)程分為好氧和厭氧處理兩大類(lèi)。污水好氧生化處理過(guò)程利用好氧微生物群和原生生物群的共同作用將有機(jī)物降解，降低污水的bod和cod。污水的厭氧生化處理是利用厭氧微生物將污水中的有機(jī)物分解降解的方法。很多厭氧微生物還具有降解一般好氧微生物很難代謝的有機(jī)化合物或有毒物質(zhì)。廢水進(jìn)入?yún)捬鯀^(qū)，由廉性厭氧發(fā)酵菌在厭氧環(huán)境下將可生物降解有機(jī)物轉(zhuǎn)化為較低分子量的揮發(fā)性脂肪酸，聚磷菌將其體內(nèi)的聚磷酸鹽分解釋放能量供轉(zhuǎn)性好氧聚磷微生物吸收

38、并降解有機(jī)基質(zhì)，以phb形式在其體內(nèi)儲(chǔ)存。然后進(jìn)入缺氧區(qū)，反硝化細(xì)菌利用好氧區(qū)回流液中硝酸鹽以及廢水中的有機(jī)基質(zhì)進(jìn)行反硝化，達(dá)到同時(shí)降低bod5和脫氮的目的，在好氧區(qū)，聚磷菌通過(guò)分解其體內(nèi)phb所釋放的能量維持生長(zhǎng)，同時(shí)過(guò)量攝取環(huán)境中的溶解態(tài)磷，使水中溶解磷濃度降低。bod生化需氧量。在氧的存在下，微生物將有機(jī)物降解并且達(dá)到穩(wěn)定化所消耗的氧量。一般以20度、5天的生化需氧量作為度量污染水體中的有機(jī)物濃度。cod化學(xué)需氧量。指在一定條件下水中有機(jī)物與強(qiáng)氧化劑作用所消耗的氧量。能客觀反映水中有機(jī)物的含量?；蚬こ梯d體外源基因必須先同某種傳遞者結(jié)合后才能進(jìn)入細(xì)菌和動(dòng)植物受體細(xì)胞，這種能承載外源dna片斷（基因）并帶入受體細(xì)胞的傳遞者就是基因工程載體?；蚬こ梯d體的類(lèi)型基因工程載體決定了外源基因的復(fù)制，擴(kuò)增，傳代乃至表達(dá)。目前已構(gòu)建應(yīng)用的基因工程載體有：質(zhì)粒載體，噬菌體載體，病毒載體以及由它們相互結(jié)合或與其他基因組dna組合合成的載體。這些載體可分為克隆載體和表達(dá)載體，其中表達(dá)載體又分細(xì)胞內(nèi)表達(dá)和分泌表達(dá)兩種。根據(jù)載體轉(zhuǎn)移的受體細(xì)胞不同，可分為真核細(xì)胞和原核細(xì)胞表達(dá)載體，根據(jù)載體功能不同可分為測(cè)序載體，克