對免疫金標法檢測血清結核抗體的些改良

1、對免疫金標法檢測血清結核抗體的某些改良【關鍵詞】 肺結核 Improvement of Immunity Gold Mark Methold Examination Serum Tuberde Antibody Key words:Immunity gold mark method; Serum; Tuberde antibody我們在工作中發(fā)觀，應用免疫金標滲濾法(以下簡稱金標法)快速檢測血清結核抗體時，重度黃疸、溶血、乳糜血清等樣本在實驗過程中滲入反應膜的速度慢，觀察結果時反應膜背景偏紅、有的無法判斷結果。因此，對原實驗方法進行改進，克服樣本因素對實驗結果的干擾?，F(xiàn)將結果報告如下。1 材料

2、與方法1.1 材料 肺結核患者，按中華醫(yī)學會結核病分會關于“肺結核診斷與治療指南”1確診。選擇重度黃疸血清43例、溶血血清12例，乳糜血清6例，共計61例血清，-20 保存?zhèn)錂z。1.2 方法1.2.1 原方法 試劑盒由福建籃波生物研究所提供、按說明使用。1.2.2 改良方法(以下稱本法) 改良要點：第一，將15稀釋后的(黃疸血清、溶血、乳糜血清)樣本0.6 ml10 ml經(jīng)G6除菌濾膜(注射器式)，取濾液檢測。第二，待濾液完全滲入濾膜后，加A液1滴2滴洗滌后加金標二抗。第三，觀察結果時，如果反應膜有殘留影響結果判斷，用棉簽沾A液輕輕擦拭除去殘留物，加A液1滴2滴洗滌后觀察結果。第四，可用酶免中

3、PBST替代A液使用。2 結果2.1 本法與原方法在觀察結果時金標二抗殘留情況比較 我們對61例肺結核患者的血清樣本(包括重度黃疸血清43例、溶血血清12例、乳糜血清6例)，用本法和原方法進行平行實驗，結果如表1所示。表1：本法與原方法在結果觀察時反應膜背景比方法（略）本文在應用原方法檢測的21例實驗結果背景偏紅樣本中，有14例為重度黃疸血清，6例為中度溶血血清，1例為重度乳糜血清。在6例無法判斷結果的樣本，分別為重度黃疸血清5例，重度溶血血清1例。2.2 兩種方法的樣本完全滲入反應膜所用時間的比較 本文對22例重度黃疸血清用生理鹽水15稀釋后直接加入實驗濾膜上，樣本滲入反應膜所用的時間為(8

4、2±24)min；取上述22例15稀釋血清經(jīng)G6除菌過濾后的濾液加入實驗濾膜上，樣本完全滲入反應膜所用的時間為(40±22)min。二者進行統(tǒng)計學處理，差異非常顯著(P<001)。2.3 本法對61例肺結核患者血清結核抗體的檢測結果 我們應用本法對61例血清為重度黃疸、溶血、乳糜血清的肺結核患者血清結核抗體進行檢測，其結果為陽性52例，陽性率為85.1，與文獻報道一致2。3 討論本文實驗結果表明，應用本法對61例血清為重度黃疸、溶血、乳糜血清的肺結核患者血清結核抗體進行檢測，觀察結果時反應膜背景偏紅者為7/61(114)，與原方法(343)相比明顯減少(P&a

5、mp;lt;001)。我們對22例重度黃疸血清15稀釋樣本完全滲入反應膜的時間進行比較，原方法為(8.2±34)min；本法為(4.0±22)min，二者差異非常顯著(P<001)。提示本法對15稀釋的重度黃疸、溶血、乳糜血清樣本進行過濾，取濾液進行測定，減少了樣本中大分子物質對實驗的干擾，使樣本滲透入反應膜的速度加快，觀察結果時反應膜背景更為清晰。我們在研究中發(fā)現(xiàn)，部分經(jīng)過G6除菌過濾后的重度黃疸、溶血樣本，在樣本完全滲入反應膜后，其膜上仍有部分黃色、紅色殘留物，滴加1滴2滴A液洗滌可除去上述殘留物，再加B液，實驗結果容易判斷。我們在工作中曾經(jīng)用本法對結核性胸膜炎患者胸腔積液結核抗體進行檢測3，獲得了滿意的效果。我們用棉簽沾少量A液擦拭殘留在反應膜上的金標二抗時發(fā)現(xiàn)，特異性結合(陽性反應)金標二抗不容易被擦拭；而殘留在反應膜上的金標二抗容易被擦拭。我們應用本法對61例血清為重度黃疸、溶血、乳糜血清的肺結核患者血清結核抗體進行檢測，其結果為陽性52例，陽性率851，與文獻報道一致。表明本法可以減少或克服黃疸、溶血、乳糜血清對實驗的干擾，實驗結果可靠。參考文獻：1 中華醫(yī)學會結核病分會.肺結核診斷與治療指南S.中華結核和呼吸雜志，2001，24：70.2 唐少華，鄭延迪.斑點免疫金滲濾法檢測結核抗體J.上海醫(yī)學檢驗雜志