水質(zhì)檢測(cè)微生物指標(biāo)

1、2011年農(nóng)村飲用水水質(zhì)微生物檢測(cè)技術(shù)微生物指標(biāo)v菌落總數(shù)v總大腸菌群v耐熱大腸菌群一、菌落總數(shù)v1.方法平皿計(jì)數(shù)法v2.定義: 菌落總數(shù)（standard plate-count bacteria）水樣在營(yíng)養(yǎng)瓊脂上有氧條件下37培養(yǎng)48h后，所得1mL水樣所含細(xì)菌的總數(shù)。 厭氧或微需氧菌、有特殊營(yíng)養(yǎng)要求的以及非嗜中溫的細(xì)菌，由于現(xiàn)有條件不能滿足其生理需求，故難以繁殖生長(zhǎng)。因此菌落總數(shù)并不表示實(shí)際中的所有細(xì)菌總數(shù)，菌落總數(shù)并不能區(qū)分其中細(xì)菌的種類，所以有時(shí)被稱為雜菌數(shù)，需氧菌數(shù)等。v3.主要培養(yǎng)基：營(yíng)養(yǎng)瓊脂v4.主要儀器：培養(yǎng)箱36 +1 等5.檢驗(yàn)步驟v生活飲用水生活飲用水 1mL水樣+15

2、mL45左右瓊脂 搖勻，做平行樣和空白對(duì)照。冷卻后，翻轉(zhuǎn)平板，36 +1 培養(yǎng)48h后計(jì)數(shù)。v水源水水源水 先制成1：10，1：100等稀釋液，再按生活飲用水的檢驗(yàn)步驟進(jìn)行檢驗(yàn)。注意事項(xiàng)v（1）操作要快而準(zhǔn)，包括材料、加樣、倒培養(yǎng)基。v（2）吸液體時(shí)液體不能進(jìn)入吸頭。v（3）樣品稀釋時(shí)一定要混勻。v（4）倒培養(yǎng)基前，瓶口要過(guò)火焰。v（5）一定要有空白對(duì)照。v（6）培養(yǎng)基溫度控制，培養(yǎng)基薄厚。6.菌落計(jì)數(shù)及報(bào)告方法 作平皿菌落計(jì)數(shù)時(shí)，可用眼睛直接觀察，必要時(shí)用放大鏡檢查，以防遺漏。在記下各平皿的菌落數(shù)后，應(yīng)求出同稀釋度的平均菌落數(shù)，供下一步計(jì)算時(shí)應(yīng)用。在求同稀釋度的平均數(shù)時(shí)，若其中一個(gè)平皿有較大

3、片狀菌落生長(zhǎng)時(shí)，則不宜采用，而應(yīng)以無(wú)片狀菌落生長(zhǎng)的平皿作為該稀釋度的平均菌落數(shù)。若片狀菌落不到平皿的一半，而其余一半中菌落數(shù)分布又很均勻，則可將此平皿計(jì)數(shù)后乘2以代表全皿菌落數(shù)。然后再求該稀釋度的平均菌落數(shù)。7.不同稀釋度的選擇及報(bào)告方法首選30300之間進(jìn)行計(jì)算，若只有一個(gè)稀釋度的平均菌落數(shù)符合此范圍時(shí)，則將該菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之（見(jiàn)表1實(shí)例1）。若有兩個(gè)稀釋度，其生長(zhǎng)的菌落數(shù)均在30300之間，則視二者之比值來(lái)決定，若其比值小于2應(yīng)報(bào)告兩者的平均數(shù)（見(jiàn)表1實(shí)例2），若大于或等于2則報(bào)告其中稀釋度較小的菌落數(shù)（見(jiàn)表1實(shí)例3、4）。若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均大于300，則應(yīng)按稀釋度最高的平

4、均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之（見(jiàn)表1實(shí)例5）。若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均小于30，則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之（見(jiàn)表1實(shí)例6）。若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均不在30300之間，則應(yīng)以最接近30或300的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之（見(jiàn)表1實(shí)例7）。若所以稀釋度的平板上均無(wú)菌落生長(zhǎng)，則以未檢出報(bào)告之。如果所以平板上都菌落密布，不要用“多不可計(jì)”報(bào)告，而應(yīng)在稀釋度最大的平板上，任意數(shù)其中2個(gè)平板1cm2中的菌落數(shù)，除2求出每平方厘米內(nèi)平均菌落數(shù)，乘以皿底面積63.6cm2，再乘其稀釋倍數(shù)作報(bào)告。菌落計(jì)數(shù)的報(bào)告：菌落數(shù)在100以內(nèi)時(shí)按實(shí)有數(shù)報(bào)告，大于100時(shí)，采用兩位有效數(shù)字，在兩位有

5、效數(shù)字后面的數(shù)值，以四舍五入方法計(jì)算，為了縮短數(shù)字后面的零數(shù)也可用10的指數(shù)來(lái)表示。表1 稀釋度選擇及菌落總數(shù)報(bào)告方式實(shí)例實(shí)例不同稀釋度的平均菌落數(shù)不同稀釋度的平均菌落數(shù)兩個(gè)稀釋度兩個(gè)稀釋度菌落數(shù)之比菌落數(shù)之比菌落總數(shù)菌落總數(shù)/（CFU/mL）報(bào)告方式報(bào)告方式/(CFU/mL)1010-1-11010-2-21010-3-31 113651365164164202016400164001600016000或或1.6104 42 22760276029529546461.61.637750377503800038000或或3.8104 43 32890289027127160602.22.227

6、100271002700027000或或2.7104 44 415015030308 82 21500150015001500或或1.5103 35 5多不可計(jì)多不可計(jì)16501650513513513000513000510000510000或或5.1105 56 6272711115 5270270270270或或2.7102 27 7多不可計(jì)多不可計(jì)305305121230500305003100031000或或3.1104 4二、總大腸菌群v1.方法多管發(fā)酵法（另有濾膜法和酶底物法）v2.定義 總大腸菌群（total coliforms）指一群在37培養(yǎng)24h能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣、需氧

7、和兼性厭氧的革蘭氏陰性無(wú)芽孢桿菌。v3.主要培養(yǎng)基：乳糖蛋白胨培養(yǎng)液、伊紅美蘭培養(yǎng)基和革蘭氏染液。v4.主要儀器：培養(yǎng)箱、平皿和試管等。5.檢驗(yàn)步驟v乳糖發(fā)酵試驗(yàn) 取1mL水樣接種到10mL雙料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液中，取1mL水樣接種到10mL單料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液中，另取1mL水樣注入9mL滅菌生理鹽水中，混勻后吸取1mL（即0.1mL水樣）注入到10mL單料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液中，每一稀釋度接種5管。 對(duì)已處理過(guò)的出廠自來(lái)水，需經(jīng)常檢驗(yàn)或每天檢驗(yàn)一次的，可直接接種5份10mL水樣雙料培養(yǎng)基，每份接種10mL水樣。 檢驗(yàn)水源水時(shí)，如污染較嚴(yán)重，應(yīng)加大稀釋度，可接種1，0.1，0.01mL甚至0.1，

8、0.01，0.001mL，每個(gè)稀釋度接種5管，每個(gè)水樣共接種15管。接種1mL以下水樣時(shí)，必須作10倍遞增稀釋后，取1mL接種，每遞增稀釋一次，換用1支1mL滅菌刻度吸管。 接種管置36 +1 培養(yǎng)箱內(nèi)，培養(yǎng)24h+2h后,如所有乳糖蛋白胨培養(yǎng)管都不產(chǎn)酸產(chǎn)氣，則可報(bào)告為總大腸菌群陰性，如有產(chǎn)酸產(chǎn)氣者，則按下列步驟進(jìn)行。v分離培養(yǎng) 將產(chǎn)酸產(chǎn)氣的發(fā)酵管分別轉(zhuǎn)鐘在伊紅美蘭瓊脂平板上，于36 +1 培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)18h24h，觀察菌落形態(tài)，挑取符合下列特征的菌落作革蘭染色、鏡檢和證實(shí)試驗(yàn)。 深紫黑色、具有金屬光澤的菌落； 紫黑色、不帶或略帶金屬光澤的菌落； 淡紫紅色、中心較深的菌落v證實(shí)試驗(yàn) 經(jīng)上述染色

9、鏡檢為革蘭氏陰性無(wú)芽孢桿菌，同時(shí)接種乳糖蛋白胨培養(yǎng)液，置36 +1 培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24 h+2h,有產(chǎn)酸產(chǎn)氣者，即證實(shí)有總大腸菌群存在。6.結(jié)果報(bào)告v查表 根據(jù)證實(shí)為總大腸菌群陽(yáng)性的管數(shù)，查MPN（most probable number,最可能數(shù)）檢索表，報(bào)告每100mL水樣中的總大腸菌群最可能數(shù)（MPN）值。5管法結(jié)果見(jiàn)表2,15管結(jié)果見(jiàn)表3.稀釋樣品查表后所得結(jié)果應(yīng)乘稀釋倍數(shù)。如所有乳糖發(fā)酵管均為陰性時(shí)，可報(bào)告總大腸菌群未檢出。（表3略）表2 用5份10mL水樣時(shí)各種陽(yáng)性和陰性結(jié)果組合時(shí)的最可能數(shù)（MPN）5 5個(gè)個(gè)10mL管中陽(yáng)性管數(shù)管中陽(yáng)性管數(shù)最可能數(shù)（最可能數(shù)（MPN）0 02.21

10、 12.22.22 25.15.13 39.29.24 416.016.05 51616三、耐熱大腸菌群v1.方法多管發(fā)酵法（另有濾膜法）v2.定義 耐熱大腸菌群（thermotolerant coliform bacteria）用提高培養(yǎng)溫度的方法將自然環(huán)境匯中的大腸菌群與糞便中的大腸菌群區(qū)分開，在44.5 仍能生長(zhǎng)的大腸菌群，稱為耐熱大腸菌群。v3.主要培養(yǎng)基：EC培養(yǎng)基和伊紅美蘭瓊脂v4.主要儀器：恒溫水浴培養(yǎng)箱5.檢驗(yàn)步驟 自總大腸菌群乳糖發(fā)酵試驗(yàn)中的陽(yáng)性管（產(chǎn)酸產(chǎn)氣）中取1滴轉(zhuǎn)鐘于EC培養(yǎng)基中，置44.5 水浴箱或隔水式恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)（水浴箱的水面應(yīng)高于試管中培養(yǎng)液面），培養(yǎng)24 h+

11、2h后，如所有管均不產(chǎn)氣，則可報(bào)告為陰性，如有產(chǎn)氣者，則轉(zhuǎn)鐘于伊紅美蘭瓊脂平板上，置44.5 培養(yǎng)18h24h，凡平板上有典型菌落者，則證實(shí)為耐熱大腸菌群陽(yáng)性。v如檢測(cè)未經(jīng)氯化消毒的水，且只想檢測(cè)耐熱大腸菌群時(shí)，或調(diào)查水源水的耐熱大腸菌污染時(shí)，可直接多管耐熱大腸菌群方法，即在第一步乳糖發(fā)酵試驗(yàn)時(shí)按總大腸菌群接種乳糖蛋白胨培養(yǎng)液在44.5 +0.5 水浴中培養(yǎng)。6.結(jié)果報(bào)告v根據(jù)證實(shí)為耐熱大腸菌群的陽(yáng)性管數(shù)，查最可能數(shù)（MPN）檢索表，報(bào)告每100mL水樣中耐熱大腸菌群的最可能值。耐熱大腸菌群的衛(wèi)生學(xué)意義v作為一種衛(wèi)生指標(biāo)菌，耐熱大腸菌群中很可能含有糞源微生物，因此耐熱大腸菌群的存在表明可能受到

12、了糞便污染，可能存在大腸桿菌。但是，耐熱大腸菌群的存在并不代表對(duì)人有什么直接的危害。v 通常情況下耐熱大腸菌群與總大腸菌群相比，在人和動(dòng)物糞便中所占的比例較大，而且由于在自然界容易死亡等原因，耐熱大腸菌群的存在可認(rèn)為近期水體直接或間接地受到了糞便污染。因而，與總大腸菌群相比，耐熱大腸菌群在水體中的檢出，說(shuō)明水體更為不清潔，存在腸道致病菌和食物中毒菌的可能性更大。v耐熱大腸菌群是總大腸菌群的一部分將培養(yǎng)溫度提高到4445，在此條件下仍能生長(zhǎng)和發(fā)酵乳糖的菌群被稱為耐熱大腸菌群。它們由埃希氏菌屬以及克雷伯菌屬、腸桿菌屬和檸檬酸桿菌屬中的一些菌種組成。這些生物中只有埃希氏大腸桿菌是糞源特異性的，就是指通常大量存在于人類、其它哺乳動(dòng)物和鳥類糞便中，很少在不是糞便污染主體的土壤和水中發(fā)現(xiàn) 耐熱大