核酸類藥物課件

1、1第十二章第十二章 核酸類藥物核酸類藥物2 第一節(jié)第一節(jié) 核酸類物質(zhì)的分離提取及其發(fā)酵生產(chǎn)核酸類物質(zhì)的分離提取及其發(fā)酵生產(chǎn) 一、一、rna與與dna的提取與制備的提取與制備 （一）（一）rna的提取與制備的提取與制備 1、工業(yè)用、工業(yè)用rna的提取的提?。?）rna及其工業(yè)來(lái)源及其工業(yè)來(lái)源從微生物中提取rna是工業(yè)上最實(shí)際和有效的方法。一些最常見的菌體含有豐富的核酸資源，如酵母酵母、白地霉白地霉、多種抗菌素的菌絲菌絲體體青霉素，制霉菌素等菌體。通常在細(xì)菌中通常在細(xì)菌中rna占占525，在酵母中占，在酵母中占2.715，在霉菌中占，在霉菌中占0.7%28。3在菌體內(nèi)rna含量的變化受培養(yǎng)基組成影

2、響，其中關(guān)鍵是銨離子濃度和磷酸鹽濃度銨離子濃度和磷酸鹽濃度。培養(yǎng)酵母菌體收率高，易于提取rna。很顯然在許多酵母中，早期細(xì)胞中的早期細(xì)胞中的rna含量高含量高，其確切數(shù)值取決于碳、氮比例碳、氮比例和培養(yǎng)基組成等。（2）高）高rna含量酵母菌株的篩選含量酵母菌株的篩選可以從自然界篩選篩選到rna含量高的酵母菌株，也可用誘變育種誘變育種的方法提高酵母菌的rna含量。4 稀堿法：稀堿法：是用氫氧化鈉溶液（氫氧化鈉溶液（1%），使細(xì)胞壁變），使細(xì)胞壁變性性，使核酸從細(xì)胞內(nèi)釋放出來(lái)核酸從細(xì)胞內(nèi)釋放出來(lái)。需用酸中和ph7。然后除去菌體除去菌體，將ph調(diào)至rna的等電點(diǎn)等電點(diǎn)（ph2.5），使rna沉淀沉淀

3、出來(lái)。上法的缺點(diǎn)是制得的rnamr較較低低,(磷酸單脂酶、磷酸二脂酶降解磷酸單脂酶、磷酸二脂酶降解rna，90 保持保持34h破壞酶破壞酶)。濃鹽法：濃鹽法：是用高濃度鹽溶液（高濃度鹽溶液（6%8%）處理，同時(shí)加熱加熱，以改變細(xì)胞壁的通透性改變細(xì)胞壁的通透性，使核酸從細(xì)胞內(nèi)核酸從細(xì)胞內(nèi)釋放出來(lái)。釋放出來(lái)。要避免分子降解分子降解，可采用苯酚法苯酚法制備rna。用苯酚處理生物材料，使蛋白質(zhì)變性，然后離心，上層水溶液內(nèi)含有全部全部rna，可用乙醇沉淀乙醇沉淀出來(lái)。5脫氧核糖核蛋白脫氧核糖核蛋白溶于濃鹽溶液濃鹽溶液1mol/l,不溶于0.14mol/l,而核糖核蛋白核糖核蛋白溶于0.14mol/l鹽溶

4、液。（4）rna的提取實(shí)例：啤酒酵母是提取rna的很好的資源。取100g壓榨啤酒酵母（含水份70%），加入230ml含naoh 3g的水，20以下緩慢攪拌30分鐘。用6mollhcl調(diào)至ph7，攪拌15分鐘，離心得清液255m1。冷至10以下，6mollhcl調(diào)ph2.5，置冷過(guò)夜，離心得rnal.8g（純度80）。6 （二）（二）dna的提取與制備的提取與制備 1工業(yè)用工業(yè)用dna的提取的提取取新鮮冷凍魚精20kg，用絞肉機(jī)粉碎2次成漿狀，加入等體積水，攪拌均勻，傾入反應(yīng)鍋內(nèi)，緩慢攪拌，升溫至100，保溫，保溫15分鐘，迅速冷卻至分鐘，迅速冷卻至2025，離心除去魚精蛋白等沉淀物，獲得35l

5、含熱變性含熱變性dna的溶液，經(jīng)精確測(cè)定dna含量后直接可用于酶法降解酶法降解生產(chǎn)脫氧核苷酸。如要制成固體狀dna，在熱變性dna溶液中逐漸加入等體積95乙醇乙醇，離心可獲得纖維狀dna，沉淀用乙醇、丙酮洗滌沉淀用乙醇、丙酮洗滌，減壓低溫干燥得dna粗品，產(chǎn)品含熱變性含熱變性dna5060。72、具有生物活性、具有生物活性dna的制備的制備動(dòng)物內(nèi)臟（肝、脾、胸腺）加4倍重量生理鹽水倍重量生理鹽水經(jīng)組織搗碎機(jī)組織搗碎機(jī)搗碎1分鐘，勻漿于2500rpm離心30分鐘，沉淀用同樣體積的生理鹽水洗滌3次，每次洗后離心，將沉淀懸浮于20倍重量的冷生理鹽水中，再搗碎3分鐘，加入加入2倍量倍量5的（用的（用4

6、5%乙醇作溶劑）十乙醇作溶劑）十二烷基磺酸鈉二烷基磺酸鈉，并攪拌23小時(shí)，在02500rpm離心，在上層液中加入等體積的冷冷95乙醇乙醇，離心即可得到纖維狀dna，再用冷乙醇和丙酮洗滌，減壓低溫干燥得粗品dna。粗品dna溶于適量蒸餾水，加入5十二烷基磺酸鈉十二烷基磺酸鈉達(dá)110體積，攪拌攪拌1小時(shí)小時(shí)，經(jīng)5000rpm離心1小時(shí)，清液中加入加入nacl達(dá)達(dá)1moll，再緩慢加入冷冷95%乙醇乙醇，dna析出，經(jīng)乙醇、丙酮洗滌，真空干燥得具有生物活性的dna（活性（活性dna制制備需在備需在03操作）。操作）。8二、用酶解法、發(fā)酵法和半合成法制備核苷酸二、用酶解法、發(fā)酵法和半合成法制備核苷酸

7、（一）酶解法及堿水解法制備核苷酸（一）酶解法及堿水解法制備核苷酸1、酶解法制備脫氧核苷酸、酶解法制備脫氧核苷酸 桔青霉桔青霉產(chǎn)生5-磷酸二脂酶磷酸二脂酶紅酵母紅酵母產(chǎn)生3-磷酸二脂酶磷酸二脂酶9 102、酶解法制備戊糖核苷酸酶解法制備戊糖核苷酸我國(guó)從60年代開始使用核酸酶核酸酶p1降解核糖核酸生產(chǎn)單核苷酸，日本年產(chǎn)呈味核苷酸呈味核苷酸（肌苷酸和鳥苷酸肌苷酸和鳥苷酸）3000噸，其中60%是使用酶解法生產(chǎn)的。酶解法生產(chǎn)酶解法生產(chǎn)5單核苷酸工藝流程單核苷酸工藝流程11123、雙酶法生產(chǎn)肌苷酸和鳥苷酸（、雙酶法生產(chǎn)肌苷酸和鳥苷酸（ig）呈味核苷酸呈味核苷酸的主要品種是肌苷酸鈉和鳥苷酸鈉肌苷酸鈉和鳥苷

8、酸鈉，商品名簡(jiǎn)稱為（ig），用核酸酶核酸酶pl降解rna可獲得gmp和和amp，其中amp經(jīng)脫氨脫氨生成imp。雙酶法生產(chǎn)（i十g）工藝。134菌體自溶法生產(chǎn)核苷酸菌體自溶法生產(chǎn)核苷酸磷酸二酯酶磷酸二酯酶在合適的條件下降解細(xì)胞內(nèi)的rna可產(chǎn)生5-核苷酸核苷酸。在國(guó)內(nèi)用谷氨酸產(chǎn)生菌體自溶法生產(chǎn)5-核苷酸。（1）菌體自溶法生產(chǎn)核苷酸工藝流程：）菌體自溶法生產(chǎn)核苷酸工藝流程：145堿水解法生產(chǎn)堿水解法生產(chǎn)2，3-混合核苷酸混合核苷酸 rna結(jié)構(gòu)中的磷酸二酯鍵對(duì)于堿性條件不穩(wěn)定，結(jié)構(gòu)中的磷酸二酯鍵對(duì)于堿性條件不穩(wěn)定，很容易生成很容易生成2，3-環(huán)狀磷酸酯，此環(huán)狀磷酸酯對(duì)堿更環(huán)狀磷酸酯，此環(huán)狀磷酸酯對(duì)堿

9、更不穩(wěn)定，很易加水分解生成不穩(wěn)定，很易加水分解生成2，3-混合核苷酸。混合核苷酸。取rna配成33.5%的水溶液，加氫氧化鈉達(dá)0.3moll濃度，升溫至38，保溫，保溫1620小時(shí)小時(shí)，用6moll鹽酸中和至鹽酸中和至ph7.0，從rna水解成水解成2，3-核苷酸的降解率達(dá)核苷酸的降解率達(dá)95以上以上，將2，3-混合核苷酸混合核苷酸制成每片含制成每片含50100mg的片劑的片劑，經(jīng)臨床使用，對(duì)非特異性血小板減少癥、對(duì)白血球減少癥、癌腫的化療和放療后的升白血球均有較好療效。1516（二）發(fā)酵法生產(chǎn)核苷酸二）發(fā)酵法生產(chǎn)核苷酸1發(fā)酵法生產(chǎn)肌苷酸（發(fā)酵法生產(chǎn)肌苷酸（imp）2、發(fā)酵生產(chǎn)黃苷酸（、發(fā)酵生

10、產(chǎn)黃苷酸（xmp）及酶法轉(zhuǎn)化成鳥苷酸）及酶法轉(zhuǎn)化成鳥苷酸17（三）半合成法制備核苷酸（三）半合成法制備核苷酸由于發(fā)酵法生產(chǎn)核苷發(fā)酵法生產(chǎn)核苷的產(chǎn)率很高，核苷懸浮于磷酸核苷懸浮于磷酸三甲酯或磷酸三乙酯中，在冷卻條件下加入氯化氧磷，三甲酯或磷酸三乙酯中，在冷卻條件下加入氯化氧磷，進(jìn)行磷酸化，從核苷生成進(jìn)行磷酸化，從核苷生成5-核苷酸收率可達(dá)核苷酸收率可達(dá)90%。 例一：肌苷例一：肌苷2mmoll懸浮于懸浮于5ml磷酸三乙酯中，溫磷酸三乙酯中，溫度控制度控制0，添加氯化氧磷，添加氯化氧磷6mmoll，水，水2mmoll，反應(yīng)反應(yīng)2h，5-imp摩爾產(chǎn)率達(dá)摩爾產(chǎn)率達(dá)91。 例二：鳥苷例二：鳥苷2mmo

11、ll懸浮于懸浮于5ml磷酸三甲酯中，溫磷酸三甲酯中，溫度控制度控制0，添加氯化氧磷，添加氯化氧磷6mmoll，水，水2mmo/l，反應(yīng)反應(yīng)6h，5-gmp摩爾產(chǎn)率達(dá)摩爾產(chǎn)率達(dá)90%。18三、核苷的制備三、核苷的制備本節(jié)敘述核苷的化學(xué)法化學(xué)法和發(fā)酵法發(fā)酵法生產(chǎn)。（）（）rna化學(xué)水解法制備核苷化學(xué)水解法制備核苷1核苷生產(chǎn)工藝流程核苷生產(chǎn)工藝流程rna經(jīng)甲酰胺化學(xué)水解制備核苷經(jīng)甲酰胺化學(xué)水解制備核苷19（）（）rna化學(xué)水解法制備核苷化學(xué)水解法制備核苷1核苷生產(chǎn)工藝流程（圖核苷生產(chǎn)工藝流程（圖148）2021（二）發(fā)酵法生產(chǎn)核苷（二）發(fā)酵法生產(chǎn)核苷發(fā)酵法生產(chǎn)核苷核苷是近代發(fā)酵工程領(lǐng)域中的杰出成果，

12、產(chǎn)率高，周期短，控制容易，產(chǎn)量大。用發(fā)酵法生產(chǎn)各種核苷的菌株有著許多共同特點(diǎn)共同特點(diǎn)：它們都使用磷酸單酯酶磷酸單酯酶活力很強(qiáng)的枯草芽孢桿菌或短小芽抱桿菌為誘變出發(fā)菌株；它們都是通過(guò)使用物理或化學(xué)誘變物理或化學(xué)誘變方法選育出在遺傳性狀上具有特定標(biāo)記的誘變菌；它們?cè)诎l(fā)酵培養(yǎng)時(shí)必須提供限量的生長(zhǎng)因素限量的生長(zhǎng)因素，并且好氧，在某一特定的范圍內(nèi)累積大量核苷。221發(fā)酵法生產(chǎn)肌苷發(fā)酵法生產(chǎn)肌苷 (枯草桿菌枯草桿菌) 2、發(fā)酵法生產(chǎn)鳥苷和黃苷、發(fā)酵法生產(chǎn)鳥苷和黃苷 (肌苷產(chǎn)生菌肌苷產(chǎn)生菌 )3、發(fā)酵法生產(chǎn)腺苷、發(fā)酵法生產(chǎn)腺苷 (產(chǎn)氨短桿菌產(chǎn)氨短桿菌 ) 第二節(jié)第二節(jié) 核酸類藥物核酸類藥物 核酸類藥物核酸類

13、藥物可分兩大類兩大類。一類一類為具有天然結(jié)構(gòu)天然結(jié)構(gòu)的核酸類物質(zhì)核酸類物質(zhì)，這些品種都是生物體合成生物體合成的原料，或是蛋白質(zhì)、脂肪、糖生物合成蛋白質(zhì)、脂肪、糖生物合成、降解以及能量代謝降解以及能量代謝的輔酶輔酶。缺乏這類物質(zhì)會(huì)使生物體代謝造成障礙，發(fā)生病態(tài)。提供這一類藥物，有助于改善機(jī)體的物有助于改善機(jī)體的物質(zhì)代謝和能量平衡質(zhì)代謝和能量平衡，加速受損組織的修復(fù)，促使缺氧組織恢復(fù)正常生理機(jī)能。23 第二類為自然結(jié)構(gòu)堿基、核苷、核苷酸結(jié)構(gòu)的類第二類為自然結(jié)構(gòu)堿基、核苷、核苷酸結(jié)構(gòu)的類似物或聚合物似物或聚合物，這一類核酸類藥物是當(dāng)今人類治療病毒、腫瘤、艾滋病的重要手段，也是產(chǎn)生干擾素、產(chǎn)生干擾素、

14、免疫抑制免疫抑制的臨床藥物。第二類核酸類藥物第二類核酸類藥物大部分由自然結(jié)構(gòu)的核酸類物自然結(jié)構(gòu)的核酸類物質(zhì)質(zhì)進(jìn)行半合成為結(jié)構(gòu)改造物合成為結(jié)構(gòu)改造物，近年來(lái)發(fā)展為化學(xué)化學(xué)-酶酶合成法合成法。大大提高收率，降低成本。24一、疊氮胸苷（一、疊氮胸苷（azidothymidine，azt）（一）結(jié)構(gòu)與性質(zhì)（一）結(jié)構(gòu)與性質(zhì) azt是1987美國(guó)fda批準(zhǔn)的治療艾滋病艾滋病的新藥 。 azt的藥理作用是人體內(nèi)經(jīng)磷酸化磷酸化后生成了3-疊氮-2-脫氧胸腺嘧啶核苷酸，后者取代了正常的胸腺嘧取代了正常的胸腺嘧啶核苷酸參與病毒啶核苷酸參與病毒dna的合成，含有的合成，含有azt成份的成份的dna不能繼續(xù)復(fù)制，從而

15、達(dá)到阻止病毒增殖的目的不能繼續(xù)復(fù)制，從而達(dá)到阻止病毒增殖的目的。（二）生產(chǎn)工藝（二）生產(chǎn)工藝此合成路線的起始原料是胸苷原料是胸苷，目前主要是從dna水解法水解法制備，由于原料來(lái)源少，合成路線較復(fù)雜，成本很高。25 已見報(bào)道的胸苷合成方法還有兩條途徑：已見報(bào)道的胸苷合成方法還有兩條途徑： 從2-脫氧胞苷或2-脫氧鳥苷或2-脫氧腺苷與胸胸腺嘧啶腺嘧啶反應(yīng)，經(jīng)大腸桿菌產(chǎn)生的磷酸化酶磷酸化酶催化生成胸胸苷苷。從鳥苷（300mmoll）與胸腺嘧啶（300mmoll）反應(yīng)，在歐文氏菌ajz992所產(chǎn)生的嘌呤核苷磷嘌呤核苷磷酸化酶酸化酶和嘧啶核苷磷酸化酶嘧啶核苷磷酸化酶的催化下生成5-甲基尿苷，然后經(jīng)化學(xué)法

16、合成胸苷。2627二、阿糖腺苷二、阿糖腺苷adenine arabinoside（一）結(jié)構(gòu)與性質(zhì)（一）結(jié)構(gòu)與性質(zhì) 阿糖腺苷阿糖腺苷的化學(xué)名稱為9-d-阿拉伯呋喃糖腺嘌呤，或稱腺嘌呤阿拉伯糖苷腺嘌呤阿拉伯糖苷。早在1960年就在實(shí)驗(yàn)室合成了阿糖腺苷，1969年美國(guó)用streptomycesantibioticusnrrl3238菌株，1972年日本用streptomyceshebacecus4334菌株發(fā)酵法發(fā)酵法分別制備了阿糖腺苷分別制備了阿糖腺苷。1979年用從ecoli中分離得到的尿嘧啶磷酸化酶尿嘧啶磷酸化酶和嘌呤核苷磷酸化酶嘌呤核苷磷酸化酶，以固相酶固相酶的方法將阿糖脲苷將阿糖脲苷轉(zhuǎn)化為

17、阿糖腺苷轉(zhuǎn)化為阿糖腺苷。28（二）生產(chǎn)工藝（二）生產(chǎn)工藝1、酶、酶-化學(xué)合成法化學(xué)合成法最新的阿糖腺苷阿糖腺苷的合成法是酶酶-化學(xué)合成法化學(xué)合成法：用用尿苷尿苷為原料經(jīng)氧氯化磷氧氯化磷和二甲基甲酰胺二甲基甲酰胺反應(yīng)，生成氧橋化合物氧橋化合物，在堿性水溶液中水解成阿糖尿苷，然后利用阿糖尿苷中的阿拉伯糖阿拉伯糖經(jīng)酶法酶法轉(zhuǎn)化成阿糖腺苷阿糖腺苷。經(jīng)選育從阿糖尿苷酶法合成阿糖腺苷的優(yōu)秀菌株是產(chǎn)氣腸桿菌產(chǎn)氣腸桿菌（enterbacteraerogens），這株菌能產(chǎn)生尿苷磷酸化酶尿苷磷酸化酶（upase）和嘌呤核苷磷酸化酶嘌呤核苷磷酸化酶（pynpase），用這個(gè)菌株的休止細(xì)胞休止細(xì)胞作為酶源，從阿糖尿

18、苷和腺嘌呤能高效地合成阿糖腺苷，菌體也可制成固定化細(xì)胞進(jìn)行連續(xù)生產(chǎn)。29302、以、以5-amp為原料的化學(xué)合成為原料的化學(xué)合成（三）作用與用途（三）作用與用途 阿糖腺苷阿糖腺苷是近年來(lái)引人注目的廣譜廣譜dna病毒抑制病毒抑制劑劑，對(duì)單純皰疹皰疹、型，帶狀皰疹，巨細(xì)，牛痘型，帶狀皰疹，巨細(xì)，牛痘等等dna病毒，在體內(nèi)外都有明顯抑制作用病毒，在體內(nèi)外都有明顯抑制作用。目前認(rèn)為，阿糖腺苷是治療單純皰疹腦炎最好的抗病毒藥物。阿糖腺苷在體內(nèi)受激酶作用生成的阿糖腺三磷，阿糖腺三磷，是脫氧腺三磷（是脫氧腺三磷（datp）的拮抗物）的拮抗物，從而阻抑了以從而阻抑了以datp為底物的病毒為底物的病毒dna聚合

19、酶的活力聚合酶的活力。而且阿糖腺三磷對(duì)于病毒dna聚合酶的親和性比宿主細(xì)胞的同一個(gè)酶的親和性高。因此這個(gè)藥物對(duì)于抑制病毒具有較高選擇性。31 三、三氮唑核苷三、三氮唑核苷（一）結(jié)構(gòu)與性質(zhì)（一）結(jié)構(gòu)與性質(zhì)三氮唑核苷商品名病毒唑病毒唑，對(duì)dna病毒，rna病毒都有廣泛作用。本品為白色結(jié)晶，熔點(diǎn)174176，易溶于水。這個(gè)化合物經(jīng)x線解析線解析，它的立體結(jié)構(gòu)與腺苷、鳥苷非常類似，在體內(nèi)被磷酸化成三氮唑核苷酸在體內(nèi)被磷酸化成三氮唑核苷酸，抑制肌苷酸脫氫酶阻斷鳥苷酸的生物合成阻斷鳥苷酸的生物合成，從而抑制病毒dna合成。它的另一特點(diǎn)是對(duì)病毒作用點(diǎn)多，不易使病毒產(chǎn)生抗藥性。32（二）生產(chǎn)工藝（二）生產(chǎn)工藝

20、酶合成法酶合成法 使用產(chǎn)氣腸桿菌產(chǎn)氣腸桿菌，以（尿苷尿苷）肌苷和肌苷和tca為底物可以用酶法簡(jiǎn)易地合成三氮唑核苷33采用前段與后段由兩個(gè)不同的酶催化，即前段使用嘧啶核苷磷酸化酶嘧啶核苷磷酸化酶，后段使用嘌呤核苷磷酸化酶嘌呤核苷磷酸化酶。34四、阿糖胞苷（四、阿糖胞苷（cytarabine，cytosine arabinoside，arabinosyl cytosine，aracytidine）（一）結(jié)構(gòu)與性質(zhì)（一）結(jié)構(gòu)與性質(zhì)阿糖胞苷阿糖胞苷又稱胞嘧啶阿拉伯糖苷胞嘧啶阿拉伯糖苷，糖的組成部分是阿拉伯糖阿拉伯糖。白色或類自色結(jié)晶性粉末，無(wú)臭，易溶于水，略溶于甲醇、乙醇中，乙醚中極微溶。35阿糖胞苷

21、進(jìn)入體內(nèi)轉(zhuǎn)變?yōu)榘⑻前账幔种芼na聚合酶，阻止胞二磷轉(zhuǎn)變?yōu)槊撗醢讖亩肿柚拱邹D(zhuǎn)變?yōu)槊撗醢讖亩种浦芼na的合成的合成，干擾dna病毒繁殖和腫瘤細(xì)胞增殖。只能注射只能注射。36（二）生產(chǎn)工藝（二）生產(chǎn)工藝 1以以5cmp為原料的合成法為原料的合成法（1）工藝路線：）工藝路線：37382、工藝過(guò)程：、工藝過(guò)程：水解水解：并加入處理好的6.5l氫氧化鑭凝膠，總體積為7.5l，升溫至90，在不斷攪拌下，于ph9下進(jìn)行水解。在不同的反應(yīng)時(shí)間內(nèi)，均勻取出2ml凝膠溶液，離心分離，取上清液5至10l，ph9.2電泳分析，檢查水解程度。氧橋化氧橋化：氧橋化后總od光譜高峰位置移至264nm（ph

22、2）氨解氨解：使氧橋斷裂3，5-乙?；撀?。成鹽成鹽：2鹽酸-甲醇2、以葡萄糖酸鈣為原料的合成路線、以葡萄糖酸鈣為原料的合成路線39五、聚肌胞苷酸（聚肌胞）（五、聚肌胞苷酸（聚肌胞）（poyinosinic，polycytidylic acid，poly1：c）（一）結(jié)構(gòu)與性質(zhì)（一）結(jié)構(gòu)與性質(zhì)1967年美國(guó)人field發(fā)現(xiàn)聚肌胞聚肌胞是干擾素誘導(dǎo)物干擾素誘導(dǎo)物，而且具有廣譜抗病毒作用。本品是人工合成的干擾素人工合成的干擾素誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)劑，系由多聚肌苷酸和多聚胞苷酸組成的雙股多聚核苷酸。本品可溶于溶于0.85氯化鈉氯化鈉溶液。（二）生產(chǎn)工藝（二）生產(chǎn)工藝70年代中期我國(guó)開始研制聚肌胞，其生產(chǎn)工藝如

23、下：1、底物、底物5-核苷二磷酸吡啶鹽的制備核苷二磷酸吡啶鹽的制備2、固定化多核苷酸磷酸化酶的制備、固定化多核苷酸磷酸化酶的制備40（3）、固定化多核苷酸磷酸化酶多核苷酸磷酸化酶，將分離純化的酶液滴加入冰浴中的載體，得到共價(jià)結(jié)合的固定化多核苷酸磷酸化。3、polyi：c制備（1）底物預(yù)處理：cdp吡啶鹽轉(zhuǎn)成鋰鹽，吡啶鹽轉(zhuǎn)成鋰鹽，idp轉(zhuǎn)成轉(zhuǎn)成鈉鹽。鈉鹽。（2）酶促反應(yīng)：（每毫升反應(yīng)液含moll數(shù)）idp或cdp15；tris150；mgc126；41edta1；聚合酶5單位，ph9.0，37，34小時(shí)。用鹽酸調(diào)鹽酸調(diào)ph1.52.0，使polyi（或polyc）沉淀，立即離心。此后在磷酸液沖液

24、中溶解，等摩爾polyi與polyc混合，生成產(chǎn)品。（三）作用與用途（三）作用與用途 本品具有抗病毒，抗腫瘤，增強(qiáng)淋巴細(xì)胞免疫功本品具有抗病毒，抗腫瘤，增強(qiáng)淋巴細(xì)胞免疫功能和抑制核酸代謝等作用能和抑制核酸代謝等作用。本品注入人體誘導(dǎo)產(chǎn)生誘導(dǎo)產(chǎn)生干擾素。干擾素。臨床已試用于腫瘤、血液病、病毒性肝炎及痘類毒性感染等多種疾患。42六、胞二磷膽堿（六、胞二磷膽堿（cdp-膽堿）膽堿） （citico line，cdpcholine，cytidine diphosphocholine）（一）結(jié)構(gòu)與性質(zhì)（一）結(jié)構(gòu)與性質(zhì)胞二磷膽堿其化學(xué)名稱為胞嘧啶核苷-5-二磷酸膽堿鈉鹽本品為白色無(wú)定形粉末，易吸濕易吸濕，易溶于易溶于水，幾不溶于乙醇、氯仿、丙酮等多數(shù)有機(jī)溶劑水，幾不溶于乙醇、氯仿、丙酮等多數(shù)有機(jī)溶劑。1水溶液ph2.53.5，注射液ph7.0。43（二）生產(chǎn)工藝（二）生產(chǎn)工藝1、酶合成法、酶合成法 胞二磷膽堿由微生物菌體所提供的酶系催化胞苷酸胞苷酸和磷酸膽堿磷酸膽堿而合成，國(guó)內(nèi)使用啤酒生產(chǎn)中廢棄的酵母廢棄的酵母，反應(yīng)體系為：磷酸二氫鉀氫氧化鈉緩沖液（ph8.0）200molml，cmp 20molml，磷酰膽堿磷酰膽堿30molml，葡萄糖1000molml，mgso4.7h2