丙泊酚血藥濃度測定

1、分子式： c12h18o。分子量：178.274血漿丙泊酚濃度高效液相色譜法（hplc）測定方法色譜條件 色譜柱為kromasil c18 (5m, 4.6mm×250mm, 柱號：kr- 002545)；柱壓：90100kg·cm-1；柱溫：40，流動相：乙腈-水（70:30）；流速：1ml·min-1；熒光激發(fā)波長為276nm；發(fā)射波長310 nm；內(nèi)標物：麝香草酚；定量方法：峰面積法。高效液相色譜法測定中血漿內(nèi)源性物質(zhì)對測定無干擾，內(nèi)標麝香草酚與丙泊酚完全分離, 內(nèi)標麝香草酚的保留時間約為7.1 min，丙泊酚保留時間約為11.1min。樣品分離色譜圖見圖1

2、。2ba2dc211圖1 丙泊酚和麝香草酚的高效液相色譜圖a 空白血漿 b 丙泊酚的標準溶液c 丙泊酚和麝香草酚的標準溶液 d 樣品血漿1 麝香草酚 2 丙泊酚丙泊酚標準溶液配制 精密稱取丙泊酚對照品10mg,并加入100ml的量瓶中,用乙腈溶解并稀釋至刻度,搖勻后即可得濃度為100 mg·l- 1的丙泊酚標準儲備液。精密量取丙泊酚對照品儲備液1ml，加至10ml量瓶中用乙腈稀釋至刻度,搖勻,配成濃度為10mg·l-1的丙泊酚對照品標準工作液。麝香草酚標準工作液配制 精密稱取麝香草酚10mg,加入100ml的量瓶中,用乙腈溶解并稀釋至刻度,搖勻后即可得濃度為100mg

3、83;l-1的麝香草酚標準工作液。血藥濃度測定 量取待測的肝素抗凝血漿1ml加入試管中，并準確加入內(nèi)標物即100mg·l-1麝香草酚標準儲備液100l ,再加入ph6.0、濃度為0.1mol.l-1的磷酸二氫鉀緩沖溶液100l，搖勻混合后,加入5 ml環(huán)己烷有機溶劑,立即漩渦混和3min。再在低溫離心機中3000r.min-1離心20min,靜置分層，取4ml上層液移至另一尖底試管中，在50下用n2 吹干，用100l 流動相溶解,取20l進樣分析。？乙腈-水（70:30）麝香草酚磷酸二氫鉀緩沖液ph6.0、濃度為0.1mol.l-1環(huán)己烷標準曲線制備 取6支10ml具塞試管，并分別加

4、入1ml空白血漿，再精密量取適量的丙泊酚標準溶液，使其血藥濃度分別相當于0.04g.ml-1，0.1g.ml-1，0.25g.ml-1，1g.ml-1，5g.ml-1，25g.ml-1的6種濃度的含藥血漿（10mg·l-1：4l、10.1l、25.64l、111.1l、1000l，100 mg·l- 1：333.3l），取上述含藥血漿各1ml，按上述的血藥濃度測定方法進行操作，以丙泊酚對內(nèi)表物的峰面積比（x）與丙泊酚的質(zhì)量濃度(g.ml-1)的進行線性回歸。得丙泊酚在0.0425g.ml-1濃度范圍內(nèi)線性回歸方程為y=1.1679x-0.0025，相關(guān)系數(shù)r=0.9979，

5、見圖2圖2 標準曲線和線性方程回收率與精密度實驗提取回收率 在1ml空白人血漿中準確加入適量的丙泊酚標準溶液，分別配制成0.1g.ml-1，1g.ml-1和25g.ml-1低、中、高3種質(zhì)量濃度的丙泊酚標準血樣（10mg·l-1：10.1l、111.1l，100 mg·l- 1：333.3l），經(jīng)萃取后再加內(nèi)標，測定其峰高比r1，同法測定不經(jīng)萃取的標準丙泊酚溶液加內(nèi)標的峰高r2，按r1/r2×100%計算提取回收率，結(jié)果見表1.表1 血漿中丙泊酚提取回收率（，n=5）質(zhì)量濃度（g.ml-1） 回收率/% rsd/%0.1 99.15± 2.38 2.40

6、1 106.88±3.28 3.0725 98.28±4.49 4.58方法回收率 同上述方法分別配制濃度也為0.1g.ml-1，1g.ml-1，25g.ml-1三種濃度的丙泊酚標準血樣各5份（10mg·l-1：10.1l、111.1l，100 mg·l- 1：333.3l），按上述血藥濃度測定方法進行操作，將測定的丙泊酚峰高與內(nèi)標峰高比帶入標準曲線，求出測定藥物濃度，用測定濃度/實際濃度×100%公式求得方法回收率，見表2。表2 測定方法回收率 （，n=5）質(zhì)量濃度（g.ml-1） 回收率/% rsd/%0.1 101.85±1.3

7、6 1.341 101.16±1.64 2.1425 100.01±1.74 1.74精密度實驗 同上述方法分別配制濃度為0.1，1，25g.ml-1三種濃度的丙泊酚標準血樣各5份（10mg·l-1：10.1l、111.1l，100 mg·l- 1：333.3l），按上述血藥濃度測定方法進行操作。以上3種濃度的血漿樣品分別于同一日內(nèi)不同時間內(nèi)測定，共計5次，根據(jù)同一濃度的不同時間點測得的數(shù)值，計算各質(zhì)量濃度的日內(nèi)變異系數(shù)，即為日內(nèi)精密度；另在連續(xù)5日每日測定一次丙泊酚的質(zhì)量濃度，根據(jù)所測得濃度計算日間變異系數(shù)，即為日間精密度，低、中、高三種濃度日內(nèi)、日間

8、變異均小于10%，表明該方法的精密度符合生物樣品的分析要求。結(jié)果見表3。表3丙泊酚測定精密度（，n=5）濃度（g.ml-1） 日內(nèi)精密度 日間精密度 rsd/%rsd/%0.1 0.10±0.02 1.86 0.10±0.01 2.26 1 1.03±0.04 1.36 1.01±0.02 3.1425 24.78±1.65 2.46 24.38±2.03 4.41靈敏度實驗 精密取丙泊酚標準工作液用乙腈稀釋不同濃度后進樣，測得本方法測定丙泊酚最低濃度為0.01g. ml-1，靈敏度為1ng.ml-1?？垢蓴_實驗 本實驗研究表明，正常

9、人無藥空白血漿中內(nèi)源性物質(zhì)不干擾本測定。為考察臨床麻醉中合并用藥對本測定方法的影響,對全麻手術(shù)前和手術(shù)中的一些常用藥物包括阿托品、瑞芬太尼、七氟烷、順式阿曲庫銨等分別作了實驗分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn),在本實驗條件下，這些藥物均不出峰或遠離測定峰,表明這些藥物均不干擾丙泊酚的測定。同上述血藥濃度的檢測方法，依次對本實驗的340個血樣進行進樣檢測，求得各樣品的丙泊酚和內(nèi)表的峰面積，并計算出他們峰面積之間的比值，將其帶入標準曲線方程即可求得各樣品的血藥濃度。3.2 兩組病人丙泊酚的血藥濃度丙泊酚靜脈單次注射后，兩組病人血藥濃度下降均很快；兩組病人的10min以內(nèi)的丙泊酚血藥濃度女性低于男性（p<0.05

10、）；10min以后各時間點女性病人的血藥濃度與男性相比仍有降低趨勢，但差異無統(tǒng)計學意義（p>0.05）。見圖5、6、7和表6。表6 兩組病人不同時間丙泊酚的平均血藥濃度(，n=10)時間（min）血藥濃度（g.ml-1）男性組女性組19.93±1.388.51±1.2325.24±0.554.61±0.4133.79±0.353.38±0.3042.74±0.302.44±0.2461.69±0.181.50±0.17101.15±0.101.01±0.11150.83

11、±0.090.76±0.10300.60±0.070.54±0.06450.41±0.040.39±0.05600.35±0.040.32±0.04900.26±0.040.24±0.051200.21±0.030.20±0.031800.14±0.040.13±0.022400.10±0.020.09±0.013600.061±0.0120.057±0.0187200.028±0.0090.026±0.010經(jīng)兩獨立樣本t 檢驗，與男性組相比， p