結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室診斷方法標(biāo)準(zhǔn)化及其注意事項(xiàng)

1、中國(guó)中國(guó)CDCCDC結(jié)核病防治臨床中心結(jié)核病防治臨床中心王王 甦甦 民民結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室診斷方法標(biāo)準(zhǔn)化及其注意事項(xiàng)現(xiàn)代結(jié)核病控制策略現(xiàn)代結(jié)核病控制策略DOTS政府承諾政府承諾開展以痰檢為主的病人發(fā)現(xiàn)工作開展以痰檢為主的病人發(fā)現(xiàn)工作應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)短程化療并實(shí)施督導(dǎo)管理應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)短程化療并實(shí)施督導(dǎo)管理建立正規(guī)的藥物供應(yīng)系統(tǒng)建立正規(guī)的藥物供應(yīng)系統(tǒng)建立監(jiān)測(cè)系統(tǒng)建立監(jiān)測(cè)系統(tǒng)結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室診斷方法標(biāo)準(zhǔn)化及其注意事項(xiàng)我國(guó)結(jié)核病控制目標(biāo)我國(guó)結(jié)核病控制目標(biāo) 20052005年全球結(jié)年全球結(jié)核病控制目標(biāo)核病控制目標(biāo)20032003年全年全國(guó)現(xiàn)狀國(guó)現(xiàn)狀20042004年年全國(guó)目標(biāo)全國(guó)目標(biāo)20052005年年全國(guó)目標(biāo)全國(guó)目標(biāo) DO

2、TS DOTS 策略策略覆蓋率（覆蓋率（% %）10010085859595100100涂陽(yáng)病人涂陽(yáng)病人發(fā)現(xiàn)率（發(fā)現(xiàn)率（% %）70704545 60 60 7070涂陽(yáng)病人治涂陽(yáng)病人治愈率（愈率（% %）8585858585858585分枝桿菌生物學(xué)概述分枝桿菌生物學(xué)概述分枝桿菌屬裂殖菌綱，放線菌目，種類甚多，目前已命分枝桿菌屬裂殖菌綱，放線菌目，種類甚多，目前已命名的有名的有5050多種，一般可分為緩慢生長(zhǎng)和快速生長(zhǎng)兩大類。多種，一般可分為緩慢生長(zhǎng)和快速生長(zhǎng)兩大類。結(jié)核分枝桿菌是結(jié)核分枝桿菌是18821882年郭霍（年郭霍（Robert KochRobert Koch）從肺結(jié)核）從肺結(jié)核病

3、人痰標(biāo)本中發(fā)現(xiàn)。是人類結(jié)核病的主要病原菌。病人痰標(biāo)本中發(fā)現(xiàn)。是人類結(jié)核病的主要病原菌。分枝桿菌呈分支狀生長(zhǎng)，分枝桿菌呈分支狀生長(zhǎng)， 營(yíng)養(yǎng)要求比普通細(xì)菌高，是一營(yíng)養(yǎng)要求比普通細(xì)菌高，是一種生長(zhǎng)緩慢的革蘭氏陽(yáng)性桿菌。種生長(zhǎng)緩慢的革蘭氏陽(yáng)性桿菌。經(jīng)石炭酸復(fù)紅染液染色后，可以抵抗鹽酸酒精脫色，故經(jīng)石炭酸復(fù)紅染液染色后，可以抵抗鹽酸酒精脫色，故稱此類細(xì)菌為稱此類細(xì)菌為分枝桿菌分類分枝桿菌分類類類別別 Rubyun 分分群群 對(duì)對(duì)人人致致病病的的分分枝枝桿桿菌菌 緩緩 結(jié)結(jié)核核分分枝枝桿桿菌菌復(fù)復(fù)合合群群 人人型型、牛牛型型、非非洲洲型型 慢慢 非非結(jié)結(jié)核核分分枝枝桿桿菌菌 I 群群 堪堪薩薩斯斯、海海、

4、猿猿 生生 非非結(jié)結(jié)核核分分枝枝桿桿菌菌 II 群群 瘰瘰疬疬 長(zhǎng)長(zhǎng) 非非結(jié)結(jié)核核分分枝枝桿桿菌菌 III 群群 鳥鳥-胞胞內(nèi)內(nèi)、蟾蟾 快快速速生生長(zhǎng)長(zhǎng) 非非結(jié)結(jié)核核分分枝枝桿桿菌菌 IV 群群 偶偶發(fā)發(fā)、龜龜 結(jié)核分枝桿菌結(jié)構(gòu)結(jié)核分枝桿菌結(jié)構(gòu) 在電子顯微鏡下可見菌體微細(xì)結(jié)構(gòu)。在電子顯微鏡下可見菌體微細(xì)結(jié)構(gòu)。結(jié)核分枝桿菌由細(xì)胞壁、細(xì)胞膜、細(xì)胞結(jié)核分枝桿菌由細(xì)胞壁、細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)、核物質(zhì)組成。質(zhì)、核物質(zhì)組成。細(xì)細(xì) 胞胞 壁壁厚度為厚度為1035nm，較一般細(xì)菌的細(xì)胞壁厚。，較一般細(xì)菌的細(xì)胞壁厚。含有大量脂類，具有堅(jiān)韌性和疏水性。含有大量脂類，具有堅(jiān)韌性和疏水性。功能：功能：保護(hù)細(xì)菌的固有形態(tài)保護(hù)

5、細(xì)菌的固有形態(tài)抵抗酸堿物質(zhì)及宿主細(xì)胞對(duì)細(xì)菌的破壞和抵抗酸堿物質(zhì)及宿主細(xì)胞對(duì)細(xì)菌的破壞和 殺傷殺傷如果細(xì)胞壁有缺陷，細(xì)菌只能在高滲環(huán)境如果細(xì)胞壁有缺陷，細(xì)菌只能在高滲環(huán)境下生存，則稱此類細(xì)菌為下生存，則稱此類細(xì)菌為L(zhǎng)型細(xì)菌。型細(xì)菌。細(xì)細(xì) 胞胞 膜膜細(xì)胞壁內(nèi)層圍繞于細(xì)胞質(zhì)外的富于彈性細(xì)胞壁內(nèi)層圍繞于細(xì)胞質(zhì)外的富于彈性的半透膜。的半透膜。主要成分是脂類（磷脂）和蛋白質(zhì)。主要成分是脂類（磷脂）和蛋白質(zhì)。功能：功能：細(xì)菌與外界環(huán)境進(jìn)行物質(zhì)交換細(xì)菌與外界環(huán)境進(jìn)行物質(zhì)交換在細(xì)胞內(nèi)一系列代謝活動(dòng)中起重要作用在細(xì)胞內(nèi)一系列代謝活動(dòng)中起重要作用細(xì)細(xì) 胞胞 質(zhì)質(zhì)是帶粘滯性的液體，充滿了細(xì)胞膜內(nèi)的整是帶粘滯性的液體，

6、充滿了細(xì)胞膜內(nèi)的整個(gè)空間。個(gè)空間。細(xì)胞漿內(nèi)含有核糖體及其他多種顆粒。細(xì)胞漿內(nèi)含有核糖體及其他多種顆粒。功能：功能：細(xì)胞合成蛋白質(zhì)和核酸等生命活性物質(zhì)的細(xì)胞合成蛋白質(zhì)和核酸等生命活性物質(zhì)的 場(chǎng)所場(chǎng)所細(xì)菌對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)進(jìn)行同化作用和異化作用細(xì)菌對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)進(jìn)行同化作用和異化作用的場(chǎng)所的場(chǎng)所核核 質(zhì)質(zhì)由單一雙股由單一雙股DNA組成。組成。電鏡下由極細(xì)的纖維物質(zhì)所組成，電鏡下由極細(xì)的纖維物質(zhì)所組成，與細(xì)胞質(zhì)不分開，無核膜、核仁。與細(xì)胞質(zhì)不分開，無核膜、核仁。功能：細(xì)胞遺傳的物質(zhì)基礎(chǔ)。功能：細(xì)胞遺傳的物質(zhì)基礎(chǔ)。 菌體主要成分菌體主要成分 脂類脂類 多糖多糖 蛋白質(zhì)蛋白質(zhì) 核酸核酸 鹽類鹽類 脂脂 類（類（1）

7、 結(jié)核菌體脂類含量比其他細(xì)菌高，占細(xì)胞壁干結(jié)核菌體脂類含量比其他細(xì)菌高，占細(xì)胞壁干重的重的60，是引起結(jié)核病特征性變化與表現(xiàn)的，是引起結(jié)核病特征性變化與表現(xiàn)的物質(zhì)基礎(chǔ)。物質(zhì)基礎(chǔ)。 脂質(zhì)含量與細(xì)菌毒力相關(guān)，毒力強(qiáng)的結(jié)核分枝脂質(zhì)含量與細(xì)菌毒力相關(guān)，毒力強(qiáng)的結(jié)核分枝桿菌（桿菌（Mtb）含脂最高。）含脂最高。 脂質(zhì)主要有磷脂、脂肪酸、蠟質(zhì)等成分，多與脂質(zhì)主要有磷脂、脂肪酸、蠟質(zhì)等成分，多與蛋白質(zhì)、多糖以結(jié)合形式存在。蛋白質(zhì)、多糖以結(jié)合形式存在。脂脂 類（類（2） 磷脂：刺激機(jī)體單核細(xì)胞增生，增強(qiáng)菌體成分磷脂：刺激機(jī)體單核細(xì)胞增生，增強(qiáng)菌體成分誘導(dǎo)機(jī)體致敏的作用。誘導(dǎo)機(jī)體致敏的作用。 索狀因子：與索狀因

8、子：與Mtb毒力密切相關(guān)。毒力密切相關(guān)。 硫脂：含有硫脂：含有S元素的脂類，與細(xì)菌抵抗力有關(guān)。元素的脂類，與細(xì)菌抵抗力有關(guān)。 蠟質(zhì)：占脂質(zhì)總量蠟質(zhì)：占脂質(zhì)總量48，分，分A、B、C、D。 結(jié)核菌酸：促進(jìn)機(jī)體形成結(jié)核結(jié)節(jié)。結(jié)核菌酸：促進(jìn)機(jī)體形成結(jié)核結(jié)節(jié)。 分枝菌酸：為結(jié)核菌菌體的重要成分，與結(jié)核分枝菌酸：為結(jié)核菌菌體的重要成分，與結(jié)核菌的抗酸性有關(guān)。菌的抗酸性有關(guān)。多多 糖糖 由阿拉伯半乳聚糖、阿拉伯甘露聚糖、由阿拉伯半乳聚糖、阿拉伯甘露聚糖、甘露聚糖和葡聚糖等組成。甘露聚糖和葡聚糖等組成。 多以脂類、蛋白質(zhì)和核酸等結(jié)合形式多以脂類、蛋白質(zhì)和核酸等結(jié)合形式存在。存在。 是免疫反應(yīng)的重要抗原物質(zhì)。

9、是免疫反應(yīng)的重要抗原物質(zhì)。蛋蛋 白白 質(zhì)質(zhì) Mtb含多種蛋白質(zhì)組分，由不同菌體蛋白及活含多種蛋白質(zhì)組分，由不同菌體蛋白及活菌在分泌過程中分泌于細(xì)胞外的多種蛋白組成。菌在分泌過程中分泌于細(xì)胞外的多種蛋白組成。 結(jié)核菌的主要抗原性物質(zhì)。結(jié)核菌的主要抗原性物質(zhì)。 結(jié)核菌素結(jié)核菌素(OT)、純蛋白衍生物（、純蛋白衍生物（PPD）為多種）為多種蛋白的復(fù)合抗原，可蛋白的復(fù)合抗原，可刺激刺激機(jī)體免疫應(yīng)答。機(jī)體免疫應(yīng)答。核核 酸酸 RNA含量比含量比DNA高高45倍。倍。 RNA分布于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，分布于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，DNA存在于細(xì)胞存在于細(xì)胞核區(qū)域內(nèi)。核區(qū)域內(nèi)。 DNA是遺傳物質(zhì)，將遺傳信息傳給子代，是遺傳物質(zhì)，將

10、遺傳信息傳給子代，并指導(dǎo)并指導(dǎo)RNA的合成。的合成。 RNA是蛋白質(zhì)和其他細(xì)胞成分合成所必是蛋白質(zhì)和其他細(xì)胞成分合成所必須的物質(zhì)。須的物質(zhì)。鹽鹽 類類鈣、鉀、鎂、鐵、磷等，約占菌體成鈣、鉀、鎂、鐵、磷等，約占菌體成分的分的 6。 結(jié)核菌是兼性需氧菌，在有氧和含有比較低氧的結(jié)核菌是兼性需氧菌，在有氧和含有比較低氧的環(huán)境下均能生存，比如骨結(jié)核，淋巴結(jié)核。環(huán)境下均能生存，比如骨結(jié)核，淋巴結(jié)核。 在少量二氧化碳的環(huán)境中生長(zhǎng)的也很好。在少量二氧化碳的環(huán)境中生長(zhǎng)的也很好。 結(jié)核菌生長(zhǎng)的適宜溫度和人體相近為結(jié)核菌生長(zhǎng)的適宜溫度和人體相近為370C 結(jié)核菌生長(zhǎng)所必需的元素有氧、碳、氮、氫、磷、結(jié)核菌生長(zhǎng)所必需

11、的元素有氧、碳、氮、氫、磷、鉀、鎂等。鉀、鎂等。結(jié)核分枝桿菌形態(tài)結(jié)核分枝桿菌形態(tài) 結(jié)核菌是兼性需氧菌，無鞭毛、莢膜，無運(yùn)動(dòng)能力；結(jié)核菌是兼性需氧菌，無鞭毛、莢膜，無運(yùn)動(dòng)能力； 形狀：形狀：0.3 - 0.60.3 - 0.61 - 41 - 4微米的細(xì)長(zhǎng)桿狀，直或稍彎，微米的細(xì)長(zhǎng)桿狀，直或稍彎，鏡下常堆積成團(tuán)、成束、排列雜亂無章，也有呈串珠鏡下常堆積成團(tuán)、成束、排列雜亂無章，也有呈串珠樣、鏈狀、索狀者。樣、鏈狀、索狀者。 革蘭氏染色陽(yáng)性，萋革蘭氏染色陽(yáng)性，萋- -尼氏染色鏡下的抗酸桿菌為淡蘭尼氏染色鏡下的抗酸桿菌為淡蘭色背景下的紅色或粉紅色細(xì)長(zhǎng)桿菌。熒光染色鏡下的色背景下的紅色或粉紅色細(xì)長(zhǎng)桿菌

12、。熒光染色鏡下的抗酸桿菌在暗色背景下呈黃綠色或橙色熒光。抗酸桿菌在暗色背景下呈黃綠色或橙色熒光。 分枝桿菌不易著色，一旦著色可以抵抗鹽酸酒精的脫色，分枝桿菌不易著色，一旦著色可以抵抗鹽酸酒精的脫色，稱為稱為“抗酸性抗酸性”。 抗酸性是分枝桿菌的重要特征。其化學(xué)基礎(chǔ)是分枝菌屬的抗酸性是分枝桿菌的重要特征。其化學(xué)基礎(chǔ)是分枝菌屬的細(xì)胞壁脂質(zhì)含量較高，并含有大量分枝菌酸。細(xì)胞壁脂質(zhì)含量較高，并含有大量分枝菌酸。 抗酸性與細(xì)菌細(xì)胞壁的完整性關(guān)系密切，若菌體自溶（如抗酸性與細(xì)菌細(xì)胞壁的完整性關(guān)系密切，若菌體自溶（如標(biāo)本保存時(shí)間過長(zhǎng)、溫度過高）、結(jié)核菌的異型性（如：標(biāo)本保存時(shí)間過長(zhǎng)、溫度過高）、結(jié)核菌的異型

13、性（如：L-L-型菌、干酪或膿液中的結(jié)核菌）可能失去抗酸性。型菌、干酪或膿液中的結(jié)核菌）可能失去抗酸性。 生長(zhǎng)適宜溫度生長(zhǎng)適宜溫度37C37C，PH6.8-7.2PH6.8-7.2。營(yíng)養(yǎng)要求較高。在常。營(yíng)養(yǎng)要求較高。在常用的羅氏（用的羅氏（Lowenstein-JensenLowenstein-Jensen）培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌）培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落粗糙、凸起、致密，有表面皺折，呈顆粒、結(jié)節(jié)或菜落粗糙、凸起、致密，有表面皺折，呈顆粒、結(jié)節(jié)或菜花樣，乳白色或米色，不透明?；?，乳白色或米色，不透明。 結(jié)核菌生長(zhǎng)緩慢，在一般培養(yǎng)基上分裂一代需要結(jié)核菌生長(zhǎng)緩慢，在一般培養(yǎng)基上分裂一代需要10-1810-1

14、8小時(shí)，根據(jù)接種菌量的多少，一般小時(shí)，根據(jù)接種菌量的多少，一般10-3010-30天肉眼可見菌天肉眼可見菌落生長(zhǎng)。落生長(zhǎng)。結(jié)核病細(xì)菌實(shí)驗(yàn)室布局原則結(jié)核病細(xì)菌實(shí)驗(yàn)室布局原則1 1、結(jié)核病細(xì)菌學(xué)檢查要有獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)室，不得與其他實(shí)、結(jié)核病細(xì)菌學(xué)檢查要有獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)室，不得與其他實(shí)驗(yàn)室混用；驗(yàn)室混用；2 2、培養(yǎng)基制備、洗刷等相對(duì)潔凈的操作與涂片鏡檢、培、培養(yǎng)基制備、洗刷等相對(duì)潔凈的操作與涂片鏡檢、培養(yǎng)前處理、藥敏試驗(yàn)等污染操作要有獨(dú)立分開的場(chǎng)所，養(yǎng)前處理、藥敏試驗(yàn)等污染操作要有獨(dú)立分開的場(chǎng)所，最好分別在專用的房間進(jìn)行；最好分別在專用的房間進(jìn)行；3 3、基層只從事涂片鏡檢的實(shí)驗(yàn)室只擁有一間獨(dú)立房舍的、基

15、層只從事涂片鏡檢的實(shí)驗(yàn)室只擁有一間獨(dú)立房舍的情況下，相對(duì)潔凈區(qū)（鏡檢區(qū)、登記區(qū)）與污染區(qū)（涂情況下，相對(duì)潔凈區(qū)（鏡檢區(qū)、登記區(qū)）與污染區(qū)（涂片、染色區(qū)）要有明顯區(qū)分。片、染色區(qū)）要有明顯區(qū)分?；鶎隅R實(shí)驗(yàn)室布局范例基層鏡實(shí)驗(yàn)室布局范例染色池染色池收集標(biāo)本收集標(biāo)本用的桌子用的桌子工作臺(tái)工作臺(tái)采采光光用用窗窗戶戶（固定）（固定）實(shí)驗(yàn)室門實(shí)驗(yàn)室門試試劑劑柜柜顯微鏡顯微鏡記錄用記錄用的桌子的桌子可以開關(guān)的窗戶可以開關(guān)的窗戶痰標(biāo)本的收集和運(yùn)送痰標(biāo)本的收集和運(yùn)送q 干酪痰、血痰或粘液痰為合格標(biāo)本，痰量應(yīng)為干酪痰、血痰或粘液痰為合格標(biāo)本，痰量應(yīng)為3-5毫升。毫升。q 難以獲得合格標(biāo)本時(shí)，也應(yīng)進(jìn)行細(xì)菌學(xué)檢查，但

16、應(yīng)注難以獲得合格標(biāo)本時(shí)，也應(yīng)進(jìn)行細(xì)菌學(xué)檢查，但應(yīng)注明標(biāo)本性狀，以供分析結(jié)果時(shí)參考。明標(biāo)本性狀，以供分析結(jié)果時(shí)參考。q 收集標(biāo)本的容器應(yīng)采用國(guó)家參比室推薦的標(biāo)準(zhǔn)痰瓶，收集標(biāo)本的容器應(yīng)采用國(guó)家參比室推薦的標(biāo)準(zhǔn)痰瓶，或采用直徑或采用直徑4厘米、高厘米、高2厘米的廣口塑料（或蠟紙）的厘米的廣口塑料（或蠟紙）的可密閉容器?？擅荛]容器。q 容器上應(yīng)注明與檢驗(yàn)單一致的病人姓名、編號(hào)及日期。容器上應(yīng)注明與檢驗(yàn)單一致的病人姓名、編號(hào)及日期。q 需送上一級(jí)實(shí)驗(yàn)室檢查的痰標(biāo)本應(yīng)置需送上一級(jí)實(shí)驗(yàn)室檢查的痰標(biāo)本應(yīng)置4C冰箱保存，外冰箱保存，外送前認(rèn)真核對(duì)檢驗(yàn)單與痰瓶上標(biāo)注，放專用的冰盒內(nèi)送前認(rèn)真核對(duì)檢驗(yàn)單與痰瓶上標(biāo)注，

17、放專用的冰盒內(nèi)運(yùn)送，或用紙袋、塑料袋封裝扎牢后順序放入包裝盒，運(yùn)送，或用紙袋、塑料袋封裝扎牢后順序放入包裝盒，盒外注明請(qǐng)勿倒置標(biāo)志。盒外注明請(qǐng)勿倒置標(biāo)志。廢棄標(biāo)本和污染物的處理廢棄標(biāo)本和污染物的處理q廢棄標(biāo)本、痰盒和污染物均須經(jīng)高壓蒸汽滅菌廢棄標(biāo)本、痰盒和污染物均須經(jīng)高壓蒸汽滅菌后方能丟棄或清洗；后方能丟棄或清洗；q如需焚燒處理，須置于焚燒爐內(nèi)徹底焚化。焚如需焚燒處理，須置于焚燒爐內(nèi)徹底焚化。焚化不徹底或暴露焚燒是危險(xiǎn)的；化不徹底或暴露焚燒是危險(xiǎn)的；q專業(yè)化處理專業(yè)化處理q試驗(yàn)操作工作面應(yīng)以試驗(yàn)操作工作面應(yīng)以3%石炭酸或其他可靠的石炭酸或其他可靠的消毒液擦拭，再用紫外線滅菌燈照射消毒液擦拭，再

18、用紫外線滅菌燈照射2小時(shí)，小時(shí)，結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室診斷方法標(biāo)準(zhǔn)化及其注意事項(xiàng)痰涂片檢查的重要性痰涂片檢查的重要性 發(fā)現(xiàn)結(jié)核病人、特別是傳染性肺結(jié)核病人發(fā)現(xiàn)結(jié)核病人、特別是傳染性肺結(jié)核病人 評(píng)價(jià)傳染性肺結(jié)核病人的化療效果評(píng)價(jià)傳染性肺結(jié)核病人的化療效果 為結(jié)核病疫情的流行病學(xué)統(tǒng)計(jì)服務(wù)為結(jié)核病疫情的流行病學(xué)統(tǒng)計(jì)服務(wù)痰涂片鏡檢操作流程痰涂片鏡檢操作流程涂涂痰痰膜膜自自然然干干燥燥復(fù)復(fù)紅紅加加熱熱初初染染5 5分分鐘鐘自自然然干干燥燥鏡鏡檢檢流流水水沖沖洗洗美美蘭蘭復(fù)復(fù)染染3030秒秒鹽鹽酸酸酒酒精精脫脫色色流流水水沖沖洗洗流流水水沖沖洗洗痰涂片鏡檢報(bào)告方式痰涂片鏡檢報(bào)告方式0 0條條/300/300視野：視

19、野： 萋萋- -尼氏抗酸桿菌陰性尼氏抗酸桿菌陰性1-81-8條條/300/300視野：實(shí)報(bào)菌數(shù)視野：實(shí)報(bào)菌數(shù)3-93-9條條/100/100視野：萋視野：萋- -尼氏抗酸桿菌陽(yáng)性（尼氏抗酸桿菌陽(yáng)性（+ +）1-91-9條條/10/10視野：視野： 萋萋- -尼氏抗酸桿菌陽(yáng)性（尼氏抗酸桿菌陽(yáng)性（2+2+）1-91-9條條/1/1視野：視野： 萋萋- -尼氏抗酸桿菌陽(yáng)性（尼氏抗酸桿菌陽(yáng)性（3+3+） 1010條條/1/1視野：視野： 萋萋- -尼氏抗酸桿菌陽(yáng)性（尼氏抗酸桿菌陽(yáng)性（4+4+）痰涂片鏡檢注意事項(xiàng)痰涂片鏡檢注意事項(xiàng) 選擇痰標(biāo)本中膿性、血樣、干酪樣的部分涂片陽(yáng)性率選擇痰標(biāo)本中膿性、血樣、干

20、酪樣的部分涂片陽(yáng)性率較高；較高； 一張玻片只涂一份標(biāo)本，玻片一次性使用，防止交叉一張玻片只涂一份標(biāo)本，玻片一次性使用，防止交叉污染；污染； 打開痰盒、涂抹痰膜、燒灼接種環(huán)時(shí)容易產(chǎn)生氣溶膠，打開痰盒、涂抹痰膜、燒灼接種環(huán)時(shí)容易產(chǎn)生氣溶膠，應(yīng)注意正確操作和自身防護(hù)；應(yīng)注意正確操作和自身防護(hù)； 石炭酸復(fù)紅初染時(shí)必須加溫。石炭酸復(fù)紅初染時(shí)必須加溫。痰涂片鏡檢的優(yōu)點(diǎn)痰涂片鏡檢的優(yōu)點(diǎn) 是直接發(fā)現(xiàn)原菌的檢查方法，適用于痰、尿、便、體液、是直接發(fā)現(xiàn)原菌的檢查方法，適用于痰、尿、便、體液、組織等幾乎一切標(biāo)本，有重要的臨床診斷價(jià)值。組織等幾乎一切標(biāo)本，有重要的臨床診斷價(jià)值。 是發(fā)現(xiàn)和確定傳染源的途徑，是考核和評(píng)價(jià)

21、療效的重要是發(fā)現(xiàn)和確定傳染源的途徑，是考核和評(píng)價(jià)療效的重要指標(biāo)，有重要的流行病學(xué)意義；指標(biāo)，有重要的流行病學(xué)意義； 操作簡(jiǎn)便，價(jià)格低廉，適于各級(jí)實(shí)驗(yàn)室開展；操作簡(jiǎn)便，價(jià)格低廉，適于各級(jí)實(shí)驗(yàn)室開展； 快速，數(shù)小時(shí)可報(bào)告結(jié)果?？焖伲瑪?shù)小時(shí)可報(bào)告結(jié)果。痰涂片鏡檢的缺點(diǎn)痰涂片鏡檢的缺點(diǎn) 敏感性低：通常每毫升含敏感性低：通常每毫升含5000-100005000-10000條以上抗酸菌條以上抗酸菌才可得到陽(yáng)性結(jié)果；才可得到陽(yáng)性結(jié)果； 特異性較低：只能報(bào)告特異性較低：只能報(bào)告“抗酸菌陽(yáng)性抗酸菌陽(yáng)性”，不能區(qū)分結(jié)，不能區(qū)分結(jié)核和非結(jié)核分枝桿菌；核和非結(jié)核分枝桿菌； 鏡下只能觀察菌體形態(tài)，不能辨別死、活菌。鏡下

22、只能觀察菌體形態(tài)，不能辨別死、活菌。結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室診斷方法標(biāo)準(zhǔn)化及其注意事項(xiàng)分離培養(yǎng)的重要意義分離培養(yǎng)的重要意義 是結(jié)核病病原學(xué)診斷的是結(jié)核病病原學(xué)診斷的“金標(biāo)準(zhǔn)金標(biāo)準(zhǔn)” 是開展進(jìn)一步檢測(cè)的基礎(chǔ)是開展進(jìn)一步檢測(cè)的基礎(chǔ)分離培養(yǎng)的操作流程分離培養(yǎng)的操作流程 渦旋振蕩渦旋振蕩1-21-2分鐘分鐘痰標(biāo)本中加入痰標(biāo)本中加入1-21-2倍體積倍體積4%NaOH4%NaOH分別接種分別接種0.1ml0.1ml前處理液至前處理液至2 2只培養(yǎng)基斜面只培養(yǎng)基斜面接種后接種后3 3天、天、7 7天天觀察，此后每周觀察，此后每周觀察一次觀察一次置置37C37C溫溫箱培養(yǎng)箱培養(yǎng)有菌落生長(zhǎng)需經(jīng)有菌落生長(zhǎng)需經(jīng)抗酸染色確認(rèn)，

23、抗酸染色確認(rèn)，至第至第8 8周無菌落周無菌落生長(zhǎng)報(bào)告陰性生長(zhǎng)報(bào)告陰性室溫靜置室溫靜置1515分鐘分鐘4 43 32 25 56 67 71 1分離培養(yǎng)的注意事項(xiàng)分離培養(yǎng)的注意事項(xiàng) 選擇痰標(biāo)本中膿性、血樣、干酪樣的部分進(jìn)行培養(yǎng)陽(yáng)選擇痰標(biāo)本中膿性、血樣、干酪樣的部分進(jìn)行培養(yǎng)陽(yáng)性率較高；性率較高；從加入前處理液到接種的時(shí)間不得多于從加入前處理液到接種的時(shí)間不得多于2020分鐘，否則分鐘，否則影響陽(yáng)性率；影響陽(yáng)性率；渦旋振蕩、離心、傾倒上清液、接種時(shí)容易產(chǎn)生氣溶渦旋振蕩、離心、傾倒上清液、接種時(shí)容易產(chǎn)生氣溶膠，應(yīng)注意使用安全儀器，正確操作。膠，應(yīng)注意使用安全儀器，正確操作。發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基上菌落生長(zhǎng)需經(jīng)抗酸

24、染色確認(rèn)后方可報(bào)告發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基上菌落生長(zhǎng)需經(jīng)抗酸染色確認(rèn)后方可報(bào)告陽(yáng)性。陽(yáng)性。 培養(yǎng)基斜面無菌落生長(zhǎng)：培養(yǎng)基斜面無菌落生長(zhǎng)： 分枝桿菌生長(zhǎng)陰性（分枝桿菌生長(zhǎng)陰性（- -） 培養(yǎng)基斜面上菌落數(shù)少于培養(yǎng)基斜面上菌落數(shù)少于2020個(gè)：報(bào)實(shí)際菌落個(gè)數(shù)；個(gè)：報(bào)實(shí)際菌落個(gè)數(shù)； 菌落約占斜面面積菌落約占斜面面積1/41/4： 分枝桿菌生長(zhǎng)陽(yáng)性（分枝桿菌生長(zhǎng)陽(yáng)性（+ +） 菌落約占斜面面積菌落約占斜面面積1/21/2： 分枝桿菌生長(zhǎng)陽(yáng)性（分枝桿菌生長(zhǎng)陽(yáng)性（2+2+） 菌落約占斜面面積菌落約占斜面面積3/43/4： 分枝桿菌生長(zhǎng)陽(yáng)性（分枝桿菌生長(zhǎng)陽(yáng)性（3+3+） 菌落滿斜面或菌苔樣生長(zhǎng)：菌落滿斜面或菌苔樣生長(zhǎng)：

25、分枝桿菌生長(zhǎng)陽(yáng)性（分枝桿菌生長(zhǎng)陽(yáng)性（4+4+）分離培養(yǎng)的結(jié)果報(bào)告方式分離培養(yǎng)的結(jié)果報(bào)告方式 敏感性較直接涂片法高，理論上敏感性較直接涂片法高，理論上10-10010-100條菌條菌/ /毫升可毫升可檢出陽(yáng)性；檢出陽(yáng)性； 特異性較直接涂片法高，可以從菌落生長(zhǎng)速度、色素特異性較直接涂片法高，可以從菌落生長(zhǎng)速度、色素產(chǎn)生初步判斷非結(jié)核分枝桿菌；產(chǎn)生初步判斷非結(jié)核分枝桿菌； 分離出具有活力的純培養(yǎng)物，為進(jìn)一步試驗(yàn)提供基礎(chǔ)。分離出具有活力的純培養(yǎng)物，為進(jìn)一步試驗(yàn)提供基礎(chǔ)。分離培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)分離培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn) 需時(shí)長(zhǎng)，根據(jù)接種量的大小，一般需時(shí)長(zhǎng)，根據(jù)接種量的大小，一般2-82-8周才能得到肉眼周才能得到肉眼可見

26、菌落?？梢娋洹?結(jié)果受標(biāo)本保存運(yùn)送時(shí)間、培養(yǎng)基成分和質(zhì)量、前處結(jié)果受標(biāo)本保存運(yùn)送時(shí)間、培養(yǎng)基成分和質(zhì)量、前處理方法等影響，理方法等影響， 操作較直接涂片法復(fù)雜，需經(jīng)嚴(yán)格培操作較直接涂片法復(fù)雜，需經(jīng)嚴(yán)格培訓(xùn)訓(xùn) 。 需培養(yǎng)基凝固滅菌器、離心機(jī)、渦旋振蕩器、恒溫培需培養(yǎng)基凝固滅菌器、離心機(jī)、渦旋振蕩器、恒溫培養(yǎng)箱等設(shè)備。養(yǎng)箱等設(shè)備。 成本是直接涂片法的成本是直接涂片法的7-87-8倍。倍。分離培養(yǎng)的缺點(diǎn)分離培養(yǎng)的缺點(diǎn)結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室診斷方法標(biāo)準(zhǔn)化及其注意事項(xiàng)藥物敏感性測(cè)定的重要意義藥物敏感性測(cè)定的重要意義 臨床治療的重要參考臨床治療的重要參考 流行病學(xué)的重要指標(biāo)流行病學(xué)的重要指標(biāo)絕對(duì)濃度法：由德國(guó)科學(xué)

27、家絕對(duì)濃度法：由德國(guó)科學(xué)家G.MeissnerG.Meissner于于19631963年首先年首先提出，是我國(guó)三十多年來一直沿用的藥敏試驗(yàn)方法。提出，是我國(guó)三十多年來一直沿用的藥敏試驗(yàn)方法。比例法：由法國(guó)科學(xué)家比例法：由法國(guó)科學(xué)家G.canettiG.canetti和和 J.GrosseteJ.Grossete首先提首先提出，是出，是WHOWHO耐藥監(jiān)測(cè)項(xiàng)目推薦藥敏試驗(yàn)方法。耐藥監(jiān)測(cè)項(xiàng)目推薦藥敏試驗(yàn)方法?？剐员嚷史ǎ河捎?guó)科學(xué)家抗性比率法：由英國(guó)科學(xué)家 D.A.MitchisonD.A.Mitchison首先提出，首先提出，由于方法比較繁瑣，現(xiàn)已不多用。由于方法比較繁瑣，現(xiàn)已不多用。藥物敏感性

28、試驗(yàn)常用標(biāo)準(zhǔn)方法藥物敏感性試驗(yàn)常用標(biāo)準(zhǔn)方法藥敏試驗(yàn)流程：藥敏試驗(yàn)流程：2-32-3周新鮮周新鮮純培養(yǎng)物純培養(yǎng)物報(bào)告結(jié)果報(bào)告結(jié)果磨菌，制備磨菌，制備1mg/ml1mg/ml菌懸液菌懸液37C37C培養(yǎng)培養(yǎng)4 4周周稀釋至適當(dāng)濃度稀釋至適當(dāng)濃度接種適當(dāng)菌量至接種適當(dāng)菌量至含藥培養(yǎng)基和含藥培養(yǎng)基和無藥對(duì)照斜面無藥對(duì)照斜面培養(yǎng)基制備：培養(yǎng)基制備：（1 1）藥物稱量、效價(jià)計(jì)算、溶解、稀釋要準(zhǔn)確；）藥物稱量、效價(jià)計(jì)算、溶解、稀釋要準(zhǔn)確；（2 2）用標(biāo)準(zhǔn)化的儀器和材料：培養(yǎng)基蒸汽凝固滅菌器、）用標(biāo)準(zhǔn)化的儀器和材料：培養(yǎng)基蒸汽凝固滅菌器、螺旋蓋培養(yǎng)管；螺旋蓋培養(yǎng)管；（3 3）凝固滅菌時(shí)間、溫度嚴(yán)格掌握；）凝固

29、滅菌時(shí)間、溫度嚴(yán)格掌握；（4 4）每次制作培養(yǎng)基應(yīng)標(biāo)明批次，使用時(shí)同時(shí)用）每次制作培養(yǎng)基應(yīng)標(biāo)明批次，使用時(shí)同時(shí)用HH3737R RV V作為敏感對(duì)照考核含藥培養(yǎng)基質(zhì)量。作為敏感對(duì)照考核含藥培養(yǎng)基質(zhì)量。藥敏試驗(yàn)注意事項(xiàng)藥敏試驗(yàn)注意事項(xiàng)試驗(yàn)操作：試驗(yàn)操作：應(yīng)在生物安全操作臺(tái)內(nèi)進(jìn)行操作；應(yīng)在生物安全操作臺(tái)內(nèi)進(jìn)行操作；要使用標(biāo)準(zhǔn)化的磨菌管、吸管、接種環(huán)進(jìn)行稀釋和要使用標(biāo)準(zhǔn)化的磨菌管、吸管、接種環(huán)進(jìn)行稀釋和接種；接種；要使用新鮮菌落，取菌落時(shí)要刮取整個(gè)斜面，不要要使用新鮮菌落，取菌落時(shí)要刮取整個(gè)斜面，不要只取單個(gè)菌落；只取單個(gè)菌落；菌液制備、稀釋、接種要力求準(zhǔn)確，以保證接種量菌液制備、稀釋、接種要力求準(zhǔn)

30、確，以保證接種量在要求范圍內(nèi)；在要求范圍內(nèi)；注意觀察溫箱溫度注意觀察溫箱溫度。藥敏試驗(yàn)注意事項(xiàng)藥敏試驗(yàn)注意事項(xiàng) 在得到純細(xì)菌的培養(yǎng)物后仍需在得到純細(xì)菌的培養(yǎng)物后仍需4 4周可報(bào)告結(jié)果，遠(yuǎn)遠(yuǎn)滯周可報(bào)告結(jié)果，遠(yuǎn)遠(yuǎn)滯后于臨床診治的需要；后于臨床診治的需要； 試驗(yàn)比較繁瑣，結(jié)果受多種因素影響，可重復(fù)性較差；試驗(yàn)比較繁瑣，結(jié)果受多種因素影響，可重復(fù)性較差； 實(shí)驗(yàn)室耐藥與臨床耐藥之間的有一定差距實(shí)驗(yàn)室耐藥與臨床耐藥之間的有一定差距。藥敏試驗(yàn)方法局限性藥敏試驗(yàn)方法局限性結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室診斷方法標(biāo)準(zhǔn)化及其注意事項(xiàng)我國(guó)結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室工作網(wǎng)絡(luò)我國(guó)結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室工作網(wǎng)絡(luò)國(guó)家結(jié)核病參比實(shí)驗(yàn)室國(guó)家結(jié)核病參比實(shí)驗(yàn)室National Reference Laboratory (NRL)省級(jí)結(jié)核病參比實(shí)驗(yàn)室省級(jí)結(jié)核病參比實(shí)驗(yàn)室Provincial Reference Laboratory (PRL)地市級(jí)結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室地市級(jí)結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室Prefecture Laboratory (PL)縣級(jí)結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室縣級(jí)結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室County Laboratory (CL) 鄉(xiāng)鎮(zhèn)衛(wèi)生院查痰點(diǎn)鄉(xiāng)鎮(zhèn)衛(wèi)生院查痰點(diǎn)Sputum smear examination sites at township衛(wèi)生部衛(wèi)生部國(guó)家國(guó)家CDC 國(guó)家參比實(shí)驗(yàn)室國(guó)家參比實(shí)驗(yàn)室省