大腸菌群總數(shù)的測(cè)定

1、 實(shí)實(shí) 驗(yàn)驗(yàn) 八八 大腸菌群最近似數(shù)的測(cè)定大腸菌群最近似數(shù)的測(cè)定大腸菌群大腸菌群:coliforms:coliforms最近似數(shù)最近似數(shù):most probable number,mpn:most probable number,mpn 概念：大腸菌群系指一群在37 24h能 發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，需氧或兼性 厭氧的革蘭氏陰性無(wú)芽胞桿菌， 包括腸桿菌科的埃希氏菌屬、檸 檬酸細(xì)菌屬、克雷伯氏菌屬、腸 桿菌屬。 單位：mpn/100ml（g）1.1.掌握掌握大腸菌群最近似數(shù)大腸菌群最近似數(shù)檢驗(yàn)技術(shù)的檢驗(yàn)技術(shù)的 要點(diǎn)要點(diǎn)2. 2. 學(xué)會(huì)發(fā)酵法檢驗(yàn)學(xué)會(huì)發(fā)酵法檢驗(yàn)大腸菌群最近似數(shù)大腸菌群最近似數(shù)樣品樣品37

2、37恒溫培養(yǎng)箱、接種環(huán)、酒恒溫培養(yǎng)箱、接種環(huán)、酒精燈、試管架、記號(hào)筆等精燈、試管架、記號(hào)筆等培養(yǎng)基培養(yǎng)基三、方法1、樣品及其稀釋?zhuān)ㄍ?xì)菌總數(shù)測(cè)定）2、接種乳糖膽鹽發(fā)酵管（33=9支）3、鑒別培養(yǎng)（伊紅美蘭）4、乳糖復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)l1. 1. 采樣采樣: :無(wú)菌操作無(wú)菌操作l2. 2. 初發(fā)酵試驗(yàn)：吸取待檢樣品接種于乳糖膽初發(fā)酵試驗(yàn)：吸取待檢樣品接種于乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，鹽發(fā)酵管內(nèi)，10ml10ml接種量采用雙料發(fā)酵管，而接種量采用雙料發(fā)酵管，而lmllml及及l(fā)mllml以下接種量采用單料管。每一接種量以下接種量采用單料管。每一接種量接種接種3 3管，置于管，置于35353737培養(yǎng)培養(yǎng)2424士士

3、2h2h。將產(chǎn)酸、。將產(chǎn)酸、產(chǎn)氣的發(fā)酵管按下列程序繼續(xù)進(jìn)行檢驗(yàn)。產(chǎn)氣的發(fā)酵管按下列程序繼續(xù)進(jìn)行檢驗(yàn)。3. 3. 分離培養(yǎng)：將產(chǎn)氣的發(fā)酵管中的發(fā)分離培養(yǎng)：將產(chǎn)氣的發(fā)酵管中的發(fā)酵液在酵液在embemb平板上劃線(xiàn)分離，置于平板上劃線(xiàn)分離，置于353537c37c培養(yǎng)培養(yǎng)18 18 24h 24h 革蘭氏染色及鏡檢：于上述平板上革蘭氏染色及鏡檢：于上述平板上長(zhǎng)出的菌落中挑取長(zhǎng)出的菌落中挑取1 12 2個(gè)大腸菌群可個(gè)大腸菌群可疑菌落進(jìn)行鏡檢和革蘭氏染色疑菌落進(jìn)行鏡檢和革蘭氏染色4. 4. 復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)：將上述鏡檢之菌復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)：將上述鏡檢之菌 落同時(shí)接種于乳糖發(fā)酵管，置落同時(shí)接種于乳糖發(fā)酵管，置 于于35 35 3737培養(yǎng)培養(yǎng)2424土土2h2h，觀(guān)察，觀(guān)察 產(chǎn)氣情況。產(chǎn)氣情況。四、結(jié)果報(bào)告四、結(jié)果報(bào)告（按照國(guó)標(biāo)及有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)） 凡是在乳糖膽鹽發(fā)酵管產(chǎn)酸、產(chǎn)氣，在指示性培養(yǎng)基上能生長(zhǎng)的，革蘭氏染色為陰性的無(wú)芽抱桿菌，在復(fù)發(fā)酵管中產(chǎn)酸、產(chǎn)氣的，即說(shuō)明有大腸菌群的細(xì)菌存在大腸菌群陽(yáng)性； 有一項(xiàng)不符的，即說(shuō)明無(wú)大腸菌群的細(xì)菌存在大腸菌群陰性。 根