Y-120 犬和大鼠6個月長毒報告

1、資料項目編號：23藥品名稱：Y-120資料項目名稱：長期毒性試驗資料及文獻(xiàn)資料研究機構(gòu)名稱：第二軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)院地址：上海市楊浦區(qū)國和路325號電話：究機構(gòu)主要研究者姓名（簽字）： 李鐵軍試驗者姓名：李鐵軍 陸國才 張淑英 邱 彥 焦 勇試驗起止日期：2004年12月2004年7月原始資料保存地點：第二軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)院聯(lián)系人姓名：李鐵軍聯(lián)系電話品注冊申請人名稱： Y-120 po對犬長期毒性試驗摘要 目的：根據(jù)中藥新藥研究指南、新藥審批辦法有關(guān)中藥部分的修訂與補充規(guī)定等有關(guān)文件的要求，對Y-120進(jìn)行犬長期毒性試驗，觀察Beagle犬連續(xù)po

2、 Y-120 6個月后由于蓄積作用對機體產(chǎn)生的毒性反應(yīng)，提供在高劑量給藥情況下出現(xiàn)毒副反應(yīng)的靶器官及其損傷程度，了解毒性作用的延遲反應(yīng)和可逆性，確定無毒性反應(yīng)劑量，為擬定人用安全劑量提供參考。觀察連續(xù)180天po Y-120對犬的長期毒性。方法：32條健康犬分別按體重隨機分為4組：空白對照組、0.1 g/kg組、1.0 g/kg組、2.5 g/kg組，每組8條犬，雌雄各半。每天上午8時po給藥，連續(xù)180天（周日休息），空白對照組po等容量溶媒。給藥容積為10 ml/kg。末次給藥后24h處死24條犬做病理解剖，另8條犬停藥后繼續(xù)觀察30天。觀察癥狀和檢測指標(biāo)包括：（1）一般癥狀及指標(biāo)：觀察犬

3、的外觀，行為，活動，步態(tài)，精神，食欲，大、小便，皮毛，有無流涎，惡心、嘔吐，有無死亡等。一般指標(biāo)包括體重、肛溫、呼吸、瞳孔共4項。（2）心電圖：肢體II導(dǎo)心電圖之心率、P波電壓、P-R間期、R波電壓、QRS時間、T波電壓和Q-T間期共7項指標(biāo)。（3）血液學(xué)指標(biāo)：紅細(xì)胞（RBC）計數(shù)、血紅蛋白（Hb）定量、紅細(xì)胞壓積（Hct）、紅細(xì)胞平均容積（MCV）、紅細(xì)胞平均血紅蛋白含量（MCH）、紅細(xì)胞平均血紅蛋白濃度（MCHC）、血小板（Plat）計數(shù)、網(wǎng)織紅細(xì)胞、白細(xì)胞（WBC）計數(shù)及分類（粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞）和凝血時間（CT）共13項。（4）血液生化指標(biāo)：丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天門冬氨

4、酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、堿性磷酸酶（ALP）、總膽紅素（Tbill）、尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）、總蛋白（TP）、白蛋白（Alb）、血糖（Glu）、總膽固醇（Tch）、-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶(-GT)、乳酸脫氫酶(LDH)、甘油三酯(TG) 、肌酸磷酸激酶(CPK)、Ca2+、P+、K+、Na+、Cl-、凝血酶時間（TT）、部分凝血活酶時間（APTT）、凝血酶原時間(PT)、血漿纖維蛋白原含量(Fib)、血小板聚集率，共檢測24項指標(biāo)。（5）尿液檢查項目：葡萄糖、蛋白質(zhì)、膽紅素、尿膽原、紅細(xì)胞、酮體、亞硝酸鹽和白細(xì)胞共8項。（6）骨髓檢查：觀察各系各階段細(xì)胞有無改變，增生程度。（7）病理檢查：大體

5、觀察各臟器有無明顯病變。對心、肝、脾、肺、腎、腦、腎上腺、胸腺、甲狀腺、前列腺、睪丸、附睪、子宮及卵巢14個臟器稱重，分別計算各臟器的相對重量。（8）病理組織學(xué)檢查：觀察心、肝、脾、肺、腎、腦（大腦、小腦、腦干）、垂體、胃、小腸、大腸、氣管、食管、主動脈、膽囊、唾液腺、甲狀腺、甲狀旁腺、腎上腺、胸腺、胰腺、淋巴結(jié)（給藥局部淋巴結(jié)、腸系膜淋巴結(jié)）、前列腺、膀胱、雄性動物睪丸、雄性動物附睪、雌性動物子宮、雌性動物卵巢、雌性動物乳腺、眼球、視神經(jīng)、坐骨神經(jīng)、脊椎（頸、胸、腰段）和注射部位共33項有無病變。結(jié)果：（1）一般癥狀：給藥后各組犬外觀、行為、活動、步態(tài)、精神、食欲、大小便和皮毛等無明顯變化，

6、也無惡心嘔吐, 注射部位無水腫、出血或感染等變化。體重、食量、肛溫、呼吸、瞳孔無明顯變化，無活動受限、震顫和共濟失調(diào)等癥狀。（2）心電圖：心率、P波電壓、P-R間期、R波電壓、QRS時間、ST段、T波電壓和Q-T間期在給藥前后或與空白對照組相比，各給藥組均無明顯變化。（3）血液學(xué)指標(biāo)：RBC、Hb、Hct、MCV、MCH、MCHC、網(wǎng)織紅細(xì)胞、WBC及分類和CT與d0及空白對照組相比，各給藥組均無明顯差異。與空白對照組相比，中、低劑量組d90 Plat有差異（P0.05)，但均在正常范圍內(nèi)波動。（4）血液生化指標(biāo)：與d0及空白對照組相比，給藥組ALT、ALP、Tbill、BUN、Cr、Tch、

7、Glu、TP、Alb、g-GT、LDH、TG、CPK、Ca2+、P+、K+、Na+、Cl-、TT、APTT、PT、Fig無明顯差異。與空白對照組相比，低劑量組d60 AST、高劑量組d30 AST有差異（P0.05)，但均在正常范圍內(nèi)波動。與空白對照組和d0相比，低、中、高劑量組d30、d60、d90給藥后30 min采集的血樣中，血小板聚集率明顯降低，且存在量效關(guān)系，給藥后24 小時血小板聚集率恢復(fù)正常。(5)尿液檢查：葡萄糖、蛋白質(zhì)、膽紅素、尿膽原、紅細(xì)胞、酮體、亞硝酸鹽和白細(xì)胞給藥前后無明顯差異。（6）骨髓檢查：各系各階段細(xì)胞增生正常，無明顯形態(tài)學(xué)及比例上的改變。（7）病理檢查：各臟器大

8、體觀察無病理變化。心、肝、脾、肺、腎、腦、腎上腺、胸腺、甲狀腺、前列腺、睪丸、附睪、子宮及卵巢的相對重量各組無明顯差異。（8）病理組織學(xué)檢查：空白對照組、低劑量組、中劑量組及高劑量組均有部分動物肺、脾急性淤血，肝、腎實質(zhì)細(xì)胞輕度水樣變性或脂肪變性，肝小葉內(nèi)或匯管區(qū)炎細(xì)胞浸潤，肺臟灶性出血，d90各組均可見部份動物注射部位出現(xiàn)局部炎癥反應(yīng)，d120注射部位炎癥反應(yīng)基本消失。上述病變分布在包括空白對照組在內(nèi)的各組動物中，結(jié)合心、肝、腎相關(guān)的各項生化指標(biāo)檢測未見明顯異常，故分析認(rèn)為這些病變的出現(xiàn)可能是動物的自身感染或處死過程造成的人為損害，非藥物所致。注射部位局部炎癥可能是給藥時針頭機械刺激及動物不

9、配合而引起的藥物滲漏造成的。結(jié)論：Y-120 0.1 g/kg組、1.0 g/kg組、2.5 g/kg連續(xù)po Beagle犬180天，對犬血液系統(tǒng)有一定的藥理毒理作用，主要表現(xiàn)為給藥后使血小板聚集率下降，這種作用是可逆的。Y-120對犬的安全劑量擬定為 1.0 g/kg。1 試驗?zāi)康挠^察Y-120連續(xù)灌胃6個月對犬產(chǎn)生的毒性反應(yīng)及其嚴(yán)重程度，了解毒性反應(yīng)的靶器官及其損害的可逆性，確定無毒性反應(yīng)劑量，為擬定人體應(yīng)用的安全劑量提供參考依據(jù)。2 受試物3.1 名稱：Y-1203.2 批號：3.3 理化性質(zhì)： 3.4 貯存條件：室溫避光密閉保存3.5 包裝：磨口玻璃瓶3.6 提供單位：第二軍醫(yī)大學(xué)藥

10、學(xué)院3.7 配制方法：臨用前用蒸餾水溶解，配成所需濃度。3 動物3.1 來源、種屬、品系、實驗前預(yù)處理由上海第二軍醫(yī)大學(xué)實驗動物中心提供。動物合格證號： SCXK(滬)-2002-006, 等級：普通級。實驗前在動物房馴養(yǎng)一個月。經(jīng)一般行為觀察、五聯(lián)疫苗接種、腸道驅(qū)蟲、二次血液學(xué)、血液生化和心電圖檢查。選用符合國家普通級實驗犬作為實驗動物1。3.2 年齡:實驗開始時為68月齡。3.3 體重:實驗開始時為6.58.2 kg。3.4 性別:雌雄各半。3.5 每組動物數(shù)：每組8條犬，雌雄各半。3.6 飼養(yǎng)條件：飼養(yǎng)于不銹鋼籠內(nèi)，每籠一只。每天每只動物喂犬專用餅干500 g(由上海松江乳業(yè)提供)左右。

11、上、下午各喂食一次，自由飲水。動物房通風(fēng)良好，自然光照。溫度20±5，濕度與大氣一致。4 劑量4.1 劑量設(shè)置及其理由：根據(jù)藥效學(xué)劑量并參考大、小鼠急性毒性試驗結(jié)果，給藥組共設(shè)三個劑量組，低、中、高給藥劑量分別為0.1、1.0和2.5 g/kg。另設(shè)一個空白對照組?？瞻讓φ战Mpo 生理鹽水。4.2 給藥容積：10 ml/kg, 低、中、高給藥濃度分別為0.01、0.1和0.25 g/ml。5 給藥期：180天6 恢復(fù)期：30天7 給藥途徑：po8 方法1,2：每天上午8時，各組動物按不等濃度等容量po給藥。給藥前、d30、d90、d180及給藥結(jié)束后 24 h及停藥后30天分別記錄心

12、電圖II導(dǎo)聯(lián)，測血液學(xué)、血液生化、尿液指標(biāo)。其中給藥前測2次取均數(shù)為d0值,其余時間點測1次。一般癥狀中體重、肛溫、呼吸和瞳孔每2周觀察記錄一次，其余一般癥狀每天觀察記錄。9 觀察指標(biāo)1,29.1 死亡率：如有死亡，記錄死亡數(shù)，及時解剖了解死因。9.2 一般癥狀：觀察犬的外觀，行為，食量，體重，活動，步態(tài)，精神，食欲，大便，小便，肛溫，呼吸，瞳孔，皮毛，有無流涎、惡心、嘔吐、震顫、共濟失調(diào)。9.3 心電圖：犬自然站立于犬臺上，用 XD-7100型心電圖機描記肢體II導(dǎo)聯(lián)。觀察心率、P波電壓、P-R間期、R波電壓、QRS時間、T波電壓和Q-T間期共7項指標(biāo)的變化。9.4 血液學(xué)：每只犬取靜脈抗凝

13、血，用深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司生產(chǎn)的BC-3000型全自動血液細(xì)胞分析儀測定：紅細(xì)胞（RBC）計數(shù)、血紅蛋白（Hb）定量、紅細(xì)胞壓積（Hct）、紅細(xì)胞平均容積（MCV）、紅細(xì)胞平均血紅蛋白含量（MCH）、紅細(xì)胞平均血紅蛋白濃度（MCHC）、血小板（Plat）計數(shù)、白細(xì)胞（WBC）計數(shù)及分類（粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞）共10項。另用2滴血記錄凝血時間（CT），再另取100 l全血與1%煌焦油生理鹽水100 l混勻，推片后進(jìn)行網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測。共檢測13項指標(biāo)。9.5 血液生化：靜脈取血，分離血清，用西班牙產(chǎn)BTS-370 Plus全自動生化分析儀，測定丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天門冬氨

14、酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、堿性磷酸酶（ALP）、總膽紅素（Tbill）、尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）、總蛋白（TP）、白蛋白（Alb）、血糖（Glu）、總膽固醇（Tch）、-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶(-GT)、乳酸脫氫酶(LDH)、甘油三酯(TG) 、肌酸磷酸激酶(CPK)、Ca2+、P+，用美國Medica公司生產(chǎn)的EasyLyte型鈉鉀氯電解質(zhì)分析儀測血清K+、Na+、Cl-。同時取抗凝血，分離血漿，用北京產(chǎn)普利生C2000-4型血凝儀檢測凝血酶時間（TT）、部分凝血活酶時間（APTT）、凝血酶原時間(PT)、血漿纖維蛋白原含量(Fib)。用上海產(chǎn)TYXN-96多功能智能血液凝聚儀測血小板聚集率。共檢

15、測24項指標(biāo)。9.6 尿液分析：用日本京都第一科學(xué)公司生產(chǎn)的micro AUTION MA4260自動尿液分析儀，測試尿液葡萄糖、蛋白質(zhì)、膽紅素、尿膽原、紅細(xì)胞、酮體、亞硝酸鹽和白細(xì)胞共8項。9.7 骨髓檢查：于解剖的同時在胸骨取材，涂片，染色，鏡檢。9.8 病理檢查：末次給藥后24 h 腹腔注射巴比妥鈉1 ml/kg麻醉，用頸總動脈放血及氣管切斷法每組處死一半犬，其余犬停藥觀察30天后同法處死病檢。大體觀察各臟器有無明顯病變。對心、肝、脾、肺、腎、腦、腎上腺、胸腺、甲狀腺、前列腺、睪丸、附睪、子宮及卵巢14個臟器稱重，分別計算各臟器的相對重量。9.9 組織學(xué)檢查：取心、肝、脾、肺、腎、腦（大

16、腦、小腦、腦干）、垂體、胃、小腸、大腸、氣管、食管、主動脈、膽囊、唾液腺、甲狀腺、甲狀旁腺、腎上腺、胸腺、胰腺、淋巴結(jié)（給藥局部淋巴結(jié)、腸系膜淋巴結(jié)）、前列腺、膀胱、雄性動物睪丸、雄性動物附睪、雌性動物子宮、雌性動物卵巢、雌性動物乳腺、眼球、視神經(jīng)、坐骨神經(jīng)、脊椎（頸、胸、腰段）和注射部位共33項。觀察各劑量組和對照組的病理變化，以了解受試物的劑量-毒性關(guān)系。9.10 統(tǒng)計處理方法：組間比較用t檢驗，與d0比較用配對t檢驗。10 結(jié)果10.1 一般指標(biāo)給藥后各組犬外觀、行為、活動、步態(tài)、精神、食欲、大小便和皮毛等無明顯變化，也無惡心嘔吐，無活動受限、震顫和共濟失調(diào)等癥狀。體重稱量結(jié)果見表1，體

17、溫測量結(jié)果見表2，呼吸和瞳孔測量結(jié)果分別見表3和表4。從表14可見，與空白對照組相比及與d0相比，給藥各劑量組體重、肛溫、瞳孔、呼吸均無明顯差異。表明長期給予Y-120對犬的體重、肛溫、呼吸、瞳孔無明顯影響。10.2 心電圖心電圖之心率、P波電壓、P-R間期、R波電壓、QRS時間、T波電壓和Q-T間期測量結(jié)果見表511。表中無論是給藥組與對照組，還是給藥后與給藥前相比，均無統(tǒng)計學(xué)差異 (P>0.05); ST段各組也未見異常抬高或壓低。表明長期給予Y-120對犬的心率，心電圖之P波電壓、P-R間期、R波電壓、QRS時間、ST段、T波電壓和Q-T間期均無明顯影響。10.3 血液學(xué)檢查紅細(xì)胞

18、（RBC）計數(shù)結(jié)果見表12、血紅蛋白（Hb）含量測定結(jié)果見表13、紅細(xì)胞壓積（HCT）測定結(jié)果見表14、紅細(xì)胞平均容積（MCV）測定結(jié)果見表15、紅細(xì)胞平均血紅蛋白含量(MCH) 測定結(jié)果見表16、紅細(xì)胞平均血紅蛋白濃度（MCHC）測定結(jié)果見表17、血小板（Plat）計數(shù)結(jié)果見表18、白細(xì)胞（WBC）及其分類計數(shù)(淋巴細(xì)胞、粒細(xì)胞及單核細(xì)胞)結(jié)果分別見表1922、全血凝固時間（CT）測定結(jié)果見表23、網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)見表24。從表中可見，RBC、Hb、Hct、MCV、MCH、MCHC、WBC及分類、CT及網(wǎng)織紅細(xì)胞與d0及空白對照組相比，各給藥組均無明顯差異。與空白對照組相比，低劑量組及中劑量組

19、d90 Plat有差異（P0.05），但均在正常范圍內(nèi)波動。表明長期給予Y-120對RBC、Hb、Hct、MCV、MCH、MCHC、Plat、WBC及分類、CT及網(wǎng)織紅細(xì)胞無明顯影響。10.4 血液生化指標(biāo)ALT測定結(jié)果見表25、AST測定結(jié)果見表26、ALP測定結(jié)果見表27、Tbill測定結(jié)果見表28、BUN測定結(jié)果見表29、Cr測定結(jié)果見表30、TP測定結(jié)果見表31、Alb測定結(jié)果見表32、Glu測定結(jié)果見表33、Tch測定結(jié)果見表34、LDH測定結(jié)果見表35、g-GT測定結(jié)果見表36、TG測定結(jié)果見表37、CPK測定結(jié)果見表38、Ca2+測定結(jié)果見表39、P+測定結(jié)果見表40、K+測定結(jié)

20、果見表41、Na+測定結(jié)果見表42、Cl-測定結(jié)果見表43、TT測定結(jié)果見表44、APTT測定結(jié)果見表45、PT測定結(jié)果見表46、Fig測定結(jié)果見表47、血小板聚集率測定結(jié)果見表48。從表中可見，與d0及空白對照組相比，給藥組ALT、ALP、Tbill、BUN、Cr、Tch、Glu、TP、Alb、g-GT、LDH、TG、CPK、Ca2+、P+、K+、Na+、Cl-、TT、APTT、PT、Fig無明顯差異。與空白對照組相比，低劑量組d60 AST、高劑量組d30 AST有差異（P0.05)，但均在正常范圍內(nèi)波動。與空白對照組和d0相比，低、中、高劑量組d30、d60、d90給藥后30 min采集

21、的血樣中，血小板聚集率明顯降低，且存在量效關(guān)系，給藥后24 小時血小板聚集率恢復(fù)正常。表明長期給予Y-120對ALT、AST、ALP、Tbill、BUN、Cr、TP、Alb、Glu、Tch、LDH、g-GT、TG、Ca2+、P+、K+、Na+、Cl-、TT、APTT、PT、Fig無明顯影響，給藥后30 min可使血小板聚集率下降，給藥后24小時恢復(fù)正常。10.5 尿液檢查尿液中葡萄糖、蛋白質(zhì)、膽紅素、尿膽原、紅細(xì)胞、酮體、亞硝酸鹽和白細(xì)胞8項檢查結(jié)果見表4953，從表中可見，各項指標(biāo)均在正常范圍內(nèi)波動。表明長期給予Y-120對犬尿中上述指標(biāo)無明顯影響。10.6 骨髓檢查給藥180天后、停藥30

22、天后，各劑量組有核細(xì)胞增生活躍，巨核細(xì)胞增生活躍，以顆粒型為多，成熟型細(xì)胞胞漿豐富，周邊可見血小板形成，全片可見巨核細(xì)胞5080個。粒細(xì)胞系各階段細(xì)胞形態(tài)、比例基本正常，增生活躍，核漿比例正常，胞漿內(nèi)未發(fā)現(xiàn)中毒顆粒及破潰。粒紅比例為(24): 1，在正常范圍。紅系增生活躍，各階段形態(tài)比例無異常，核漿發(fā)育均衡，成熟紅細(xì)胞大小均一，染桔黃色，無寄生蟲感染。淋巴、單核系各階段細(xì)胞形態(tài)比例基本正常，未發(fā)現(xiàn)異常增生細(xì)胞。未發(fā)現(xiàn)其它骨髓異常細(xì)胞增生。上述結(jié)果表明，Y-120 po犬180天，對犬骨髓系無明顯影響。10.7 臟器重量停藥時各組的絕對臟器重量結(jié)果見表54，從表中可見，各組無統(tǒng)計學(xué)差異。相對臟器

23、重量結(jié)果見表55，從表中可見，三個劑量組相對臟器重量與對照組相比，均無顯著的差異（P>0.05）。停藥30天后各組的絕對臟器重量結(jié)果見表56，相對臟器重量結(jié)果見表57。從二表可見，各組間均無統(tǒng)計差異。結(jié)果表明長期給予Y-120對犬的各臟器無明顯影響。10.8 組織學(xué)觀察病理組織學(xué)觀察主要臟器病變結(jié)果見表58?？瞻讓φ战M、低劑量組、中劑量組、高劑量組d90及空白對照組、高劑量組d120的心、肝、脾、肺、腎、腦及注射部位組織照片見圖142。各主要臟器病理組織學(xué)觀察結(jié)果如下：心臟：各組心腔內(nèi)未見血栓形成，心內(nèi)膜無增厚。個別動物見有心肌細(xì)胞空泡變性、肌漿溶解等病理變化（編號：2、9、13）。間質(zhì)

24、無明顯水腫，部分動物心肌間質(zhì)散在性或灶性出血等現(xiàn)象（編號：5、8）。心外膜未出現(xiàn)充血、出血、炎細(xì)胞浸潤等病理變化。肝臟：肝小葉組織學(xué)結(jié)構(gòu)正常，未見小葉結(jié)構(gòu)改建。未見明顯的肝內(nèi)出血，所有動物肝細(xì)胞有輕度水腫（編號：3、4、5、9、10、11、12、14、15、17、18、19）或脂肪變性（編號：22、24、28、31），個別伴有點狀或灶性壞死（編號：23、25、27、29、32）。匯管區(qū)無增寬，無纖維結(jié)締組織增生及炎細(xì)胞浸潤。未見膽管上皮增生。余各劑量組無特殊病理學(xué)改變。肺臟：個別動物可見肺泡腔灶、片狀出血（編號：4）。少數(shù)動物伴有肺泡壁輕度纖維組織增生（編號：3、4、5、6、9、10、11、1

25、2、14、15、17、18、19、22、23、24、28、29、32）。余無特殊病理學(xué)改變。脾臟：脾小體組織結(jié)構(gòu)正常，脾小體數(shù)量及淋巴細(xì)胞數(shù)量未見減少。脾索無增寬，脾竇無擴張充血、出血。對照組與高劑量組之間比較無明顯差異。腎臟：腎小球組織結(jié)構(gòu)正常，未見萎縮、纖維化、玻璃樣變及肥大等病變。腎小管未見擴張，上皮細(xì)胞無變性、壞死。腎間質(zhì)內(nèi)無血管擴張充血、出血，個別動物間質(zhì)見肉芽腫性血管眼炎（編號：3）。余無特殊病理學(xué)改變。大腦：神經(jīng)細(xì)胞未見胞體腫脹、胞核固縮、壞死等病理改變。未見軟化灶形成。膠質(zhì)細(xì)胞無增生，間質(zhì)無水腫、充血、出血、炎細(xì)胞浸潤等病變。對照組與高劑量組之間比較無明顯差異。脊髓：脊髓前角運

26、動神經(jīng)元、后角感覺神經(jīng)元未見胞體腫脹、胞核固縮、壞死等病理改變，未見神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞增生、神經(jīng)纖維脫髓鞘等病變，無炎細(xì)胞浸潤。對照組與高劑量組之間比較無明顯差異。視神經(jīng)：未見神經(jīng)纖維脫髓鞘、神經(jīng)束結(jié)構(gòu)崩解等病理改變，無炎細(xì)胞浸潤、血管擴張充血、出血等病變。對照組與高劑量組之間比較無明顯差異。腎上腺：球狀帶、束狀帶、網(wǎng)狀帶、髓質(zhì)未見實質(zhì)細(xì)胞的變性、壞死、炎細(xì)胞浸潤、血管擴張充血、出血等病理改變。對照組與高劑量組之間比較無明顯差異。胸腺：皮質(zhì)、髓質(zhì)組織結(jié)構(gòu)正常，髓質(zhì)內(nèi)可見胸腺小體。未見細(xì)胞的變性、壞死、充血、出血等病理改變，淋巴細(xì)胞數(shù)量未見減少。對照組與高劑量組之間比較無明顯差異。胰腺：外分泌部未見腺

27、泡上皮細(xì)胞變性、壞死、炎細(xì)胞浸潤、充血、出血、水腫等病理改變。內(nèi)分泌部胰島細(xì)胞未見變性、壞死及炎細(xì)胞浸潤等變化。對照組與高劑量組之間比較無明顯差異。甲狀腺：濾泡上皮細(xì)胞無變性、壞死及增生等變化，濾泡內(nèi)膠質(zhì)無異常吸收。間質(zhì)無血管擴張充血、出血、炎細(xì)胞浸潤。對照組與高劑量組之間比較無明顯差異。腦垂體：腺垂體、神經(jīng)垂體的腺細(xì)胞、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞未見變性、壞死、炎細(xì)胞浸潤等病理改變，間質(zhì)無血管擴張充血、出血。對照組與高劑量組之間比較無明顯差異。睪丸（帶附睪）：曲精小管各級生精上皮細(xì)胞發(fā)育正常，未見變性、壞死、脫落等病變。間質(zhì)未見血管擴張充血、出血、炎細(xì)胞浸潤。附睪組織結(jié)構(gòu)正常。對照組與高劑量組之間比較無明

28、顯差異。前列腺：腺上皮細(xì)胞未見變性、壞死、脫落，腔內(nèi)無壞死物及滲出物。間質(zhì)無炎細(xì)胞浸潤、血管擴張充血、出血等病變。對照組與高劑量組之間比較無明顯差異。卵巢：各級卵泡發(fā)育正常，可見成熟卵泡。黃體組織結(jié)構(gòu)正常，未見細(xì)胞變性、壞死、炎細(xì)胞浸潤等病變。髓質(zhì)未見血管擴張充血、水腫、出血及炎細(xì)胞浸潤。對照組與高劑量組之間比較無明顯差異。子宮：內(nèi)膜上皮細(xì)胞、腺體結(jié)構(gòu)正常，未見細(xì)胞變性、壞死、炎細(xì)胞浸潤等病理變化。肌層、漿膜層結(jié)構(gòu)正常。對照組與高劑量組之間比較無明顯差異。淋巴結(jié)：皮質(zhì)組織結(jié)構(gòu)正常，淋巴小結(jié)、副皮質(zhì)區(qū)無萎縮、結(jié)構(gòu)破壞，淋巴細(xì)胞數(shù)量未見減少。髓索無增寬，髓竇無擴張。對照組與高劑量組之間比較無明顯差

29、異。骨髓：紅細(xì)胞系、中性粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞系、巨核細(xì)胞系、嗜酸細(xì)胞系未見亢進(jìn)、抑制、變異等病理改變，血竇無擴張充血、出血。對照組與高劑量組之間比較無明顯差異。膀胱：粘膜層未見糜爛、潰瘍形成。移行上皮細(xì)胞無變性、壞死、脫落、炎細(xì)胞浸潤等病理變化。肌層、外膜組織結(jié)構(gòu)正常。腔內(nèi)未見滲出物、結(jié)石、寄生蟲。對照組與高劑量組之間比較無明顯差異。胃：粘膜面無潰瘍及糜爛形成。粘膜層上皮細(xì)胞未見變性、壞死、脫落、炎細(xì)胞浸潤。粘膜下層、肌層、外膜組織結(jié)構(gòu)正常，未見明顯病理變化。對照組與高劑量組之間比較無明顯差異。十二指腸：無潰瘍及糜爛形成。粘膜層上皮細(xì)胞未見變性、壞死、脫落，粘膜下層、肌層、外膜組織結(jié)構(gòu)正常，未見明顯

30、病理變化。對照組與高劑量組之間比較無明顯差異?；啬c：無粘膜糜爛及潰瘍形成。粘膜層上皮細(xì)胞未見變性、壞死、脫落，粘膜下層、肌層、外膜組織結(jié)構(gòu)正常，未見明顯病理變化。結(jié)腸：無粘膜糜爛及潰瘍形成。粘膜層上皮細(xì)胞未見變性、壞死、脫落及炎細(xì)胞浸潤，粘膜下層、肌層、外膜結(jié)構(gòu)正常，未見明顯病理變化。對照組與高劑量組之間比較無明顯差異。上述病理組織學(xué)觀察結(jié)果表明：1）存在內(nèi)臟器官淤血性及非特異性的出血性改變；肺泡腔和氣管的灶性出血；肝臟的非特異性水腫或脂肪變性；腎間質(zhì)的非特異性輕度性炎癥等病變情況，這些病變的嚴(yán)重程度或發(fā)生率缺少藥物劑量依賴關(guān)系，而且相關(guān)的各項生物化學(xué)功能等指標(biāo)均在正常值范圍，故分析認(rèn)為這些病

31、變屬動物自身感染或處死及組織處理等所引發(fā)的人為致死性改變，并非藥物的毒副作用，肺泡出血及氣管積血則系動物處死掙扎吸入所致。2）比格犬Y120灌胃給藥毒性試驗中，對其心臟、肝臟、腎臟、脾臟、大腦、脊髓、視神經(jīng)、腎上腺、胸腺、甲狀腺、胰腺、腦垂體、睪丸（帶附睪）、前列腺、卵巢、子宮、淋巴結(jié)、骨髓、膀胱、胃、十二指腸、回腸、結(jié)腸等4個臟器基本無組織學(xué)影響。11.0 結(jié)果評估Y-120 0.12.5 g/kg 連續(xù)po Beagle犬180天，個別指標(biāo)如低、中劑量組d90 Plat有差異（P0.05)，低劑量組d60 AST、高劑量組d30 AST與空白對照組相比有差異（P0.05)，但均在正常范圍內(nèi)

32、波動。未發(fā)現(xiàn)該藥對犬一般癥狀、肢體II導(dǎo)聯(lián)心電圖有明顯影響，未發(fā)現(xiàn)該藥對犬血液學(xué)指標(biāo)有明顯影響；與空白對照組和d0相比，低、中、高劑量組d30、d60、d90給藥后30 min采集的血樣中，血小板聚集率明顯降低，且存在量效關(guān)系，給藥后24 小時血小板聚集率恢復(fù)正常;Y-120對尿液檢查指標(biāo)也無明顯影響；骨髓檢查未見異常骨髓像；主要臟器絕對重量和相對重量各組無明顯差異；病理組織學(xué)檢查提示除內(nèi)臟器官淤血性改變外，僅發(fā)現(xiàn)部分受試犬的肝、腎實質(zhì)細(xì)胞見有水腫變性、脂肪變性及間質(zhì)性炎癥，部分動物肺泡腔有局灶性出血，d90各組均可見部份動物注射部位出現(xiàn)局部炎癥反應(yīng)，d120注射部位炎癥反應(yīng)消失。上述病變分布

33、在包括空白對照組在內(nèi)的各組動物中，結(jié)合心、肝、腎相關(guān)的各項生化指標(biāo)檢測未見明顯異常，故分析認(rèn)為這些病變的出現(xiàn)可能是動物的自身感染或處死過程造成的人為性損害，非藥物所致。注射部位局部炎癥可能是給藥時針頭機械刺激及動物不配合而引起的藥物滲漏造成的。與空白對照組及d0相比，低劑量組d30、d60及d90給藥后30 min血小板聚集率降低顯著（P0.05），而中、高劑量組d30、d60及d90給藥后30 min血小板聚集率降低非常顯著（P0.01），因此Y-120 po對犬的安全劑量擬定為 5 g/kg為宜12.0 結(jié)論Y-120 0.12.5 g/kg連續(xù)po Beagle犬180天，對犬血液系統(tǒng)有

34、一定的藥理毒理作用，主要表現(xiàn)為給藥后使血小板聚集率下降，這種作用是可逆的。Y-120對犬的安全劑量擬定為 1.0g/kg，臨床使用時要注意監(jiān)測血小板聚集率等血液學(xué)指標(biāo)。參考文獻(xiàn)1. 方喜業(yè)主編. 醫(yī)學(xué)實驗動物學(xué). 北京:人民衛(wèi)生出版社, 1995:155156.2. 中藥、天然藥物長期毒性研究技術(shù)指導(dǎo)原則. 中華人民共和國食品藥品監(jiān)督管理局藥品審評中心，2004.表1 Y-120 po對犬長期毒性試驗體重的影響(x±s，kg)犬號d0d30d90d180d210空白對照 14.34.96.88.4 25.05.77.79.8 36.26.68.411.3 47.07.69.311.9

35、 55.05.67.510.5 64.85.56.88.6 75.15.88.110.611.3 86.06.48.312.512.8x5.436.017.8610.4512.05s0.890.830.851.471.06低劑量組 94.75.37.110.2104.85.88.310.2114.95.98.110.7125.16.18.511.0135.66.48.610.911.2145.56.38.610.9156.07.08.810.8166.87.49.812.212.7x5.436.288.4810.8611.95s0.710.670.750.621.06中劑量組174.76.27

36、.79.5185.26.18.211.0195.16.27.79.2205.46.59.312.613.0215.56.27.99.710.2226.06.88.711.7235.86.47.811.0246.67.18.39.8x5.546.448.2010.5611.60s0.590.350.561.201.98高劑量組254.85.67.29.0265.26.39.212.7275.16.28.311.0285.66.69.012.0295.46.37.29.8305.76.27.510.311.0315.56.38.211.412.5326.27.08.612.4x5.446.318.

37、1511.0811.75s0.420.390.781.301.06表2 Y-120 po對犬長期毒性試驗肛溫的影響（x±s，）犬號d0d30d90d180d210空白對照 138.638.738.438.9 238.638.438.538.9 338.338.638.739.1 438.138.238.239.1 538.738.338.339.0 638.338.738.839.0 738.238.738.739.338.9 838.638.238.739.038.9x38.4338.4838.5439.0438.90s0.230.230.220.130.00低劑量組 938.63

38、8.238.839.11038.238.538.638.91138.338.538.838.91238.138.438.739.01338.438.538.538.839.01438.538.638.839.01538.438.438.338.81638.538.538.438.939.5x38.3838.4538.6138.9339.25s0.170.120.200.100.35中劑量組1738.338.738.538.81838.238.838.438.81938.338.638.438.92038.438.538.339.038.92138.738.338.539.239.12238.7

39、38.538.639.02338.838.638.839.22438.238.338.439.1x38.4538.5438.4939.039.00s0.240.180.160.160.14高劑量組2538.538.338.538.82638.438.538.638.92738.138.738.739.02838.738.938.839.32938.238.738.739.13038.438.738.639.039.53138.538.738.539.039.43238.238.538.739.3x38.3838.6338.6439.0539.45s0.200.180.110.180.07表3

40、Y-120 po對犬長期毒性試驗呼吸的影響（x±s，次/分）犬號d0d30d90d180d210空白對照 122252733 228262530 321292031 422272930 526252432 624272533 72629253437 82224273239x23.926.525.331.938s2.51.92.71.51.4低劑量組 92323252610253025271125292425122725292713282523223014282023241529282529162924263436x26.825.52526.8*33s2.23.31.93.64.2中劑

41、量組172428273218242526341926262531202624243035212326282938222428293023242728282423302729x24.326.826.830.436.5s1.21.91.71.92.1高劑量組252932262626292925282728252427282926232329302722243029282425293132292529333229202428x29.42724.126.3*31s1.23.51.22.12.8 * 與空白對照組相比，P<0.01 。表4 Y-120 po對犬長期毒性試驗瞳孔的影響犬號d0d30d

42、90d180d210空白對照 1 2 3 4 5 6 7 8低劑量組 910111213141516中劑量組1718192021222324高劑量組2526272829303132注: 對光反射正常表5 Y-120 po對犬長期毒性試驗心率的影響（x±s，次/分）犬號d0d30d90d180d210空白對照 1181 181 167 143 2148 173 167 181 3124 121 133 130 4101 95 131 104 5201 167 169 119 6173 184 208 157 7181 166 172 154 186 8160 149 187 169 1

43、69 x158.6 154.5 166.8 144.6 177.5 s33.1 31.4 25.5 25.9 12.0 低劑量組 9160 133 152 149 10175 202 205 133 11150 178 175 133 12151 187 176 148 13158 159 179 119 180 14155 144 152 94 15174 200 183 143 16188 186 170 172 149 x163.6 173.6 174.0 136.4 164.5 s13.8 25.6 17.1 23.1 21.9 中劑量組17171 165 191 178 18170

44、179 148 118 19178 195 193 149 20146 188 161 160 157 21201 152 204 128 131 22170 179 172 125 23140 131 163 128 24155 154 161 112 x165.9 167.9 174.1 137.3 144.0 s19.4 21.4 19.6 22.8 18.4 高劑量組25200 166 179 139 26257 163 272 116 27216 138 175 123 28167 109 121 125 29138 124 115 140 30164 181 161 106 127

45、 31144 121 158 187 137 32146 146 154 133 x178.8 143.5 166.9 133.6 132.0 s41.8 25.1 48.3 24.4 7.1 表5 Y-120 po對犬長期毒性試驗P波電壓的影響（x±s，mv）犬號d0d30d90d180d210空白對照 10.21 0.20 0.25 0.29 20.23 0.17 0.20 0.15 30.19 0.18 0.19 0.18 40.24 0.25 0.19 0.23 50.21 0.28 0.28 0.27 60.23 0.26 0.25 0.24 70.25 0.23 0.20 0.18 0.23 80.21 0.24 0.21 0.23 0.25 x0.221 0.226 0.221 0.221 0.240 s0.020 0.039 0.034 0.048 0.014 低劑量組 90.23 0.25 0.22 0.23 100.25 0.27 0.28 0.25 110.20 0.29 0.28 0.25 120.24 0.24 0.19 0.24 130.24 0.28 0.21 0.18 0.25 140.22 0.26 0.26 0.24 150.21 0.19 0.21 0.23 160.22 0.23 0.29