自制L-亮氨酸手性柱分離5種農(nóng)藥

1、河南科技學(xué)院2016屆本科畢業(yè)論文自制L-亮氨酸手性柱分離5種農(nóng)藥 學(xué)生姓名： 趙 微 麗 所在學(xué)院： 資源與環(huán)境學(xué)院 所學(xué)專業(yè)： 植 物 保 護(hù) 導(dǎo)師姓名： 劉 潤(rùn) 強(qiáng) 王 建 華 完成時(shí)間： 2016年05月13日自制L-亮氨酸手性柱分離5種農(nóng)藥摘 要高效液相色譜法是近年研究手性農(nóng)藥拆分最常用的方法之一。該手性選擇子合成是3,5-二甲基苯甲酰氯、L-亮氨酸與環(huán)氧丙烷在四氫呋喃中反應(yīng)制得的。用紅外和核磁共振對(duì)所獲得的手性選擇子進(jìn)行了表征，選擇氨丙基化硅膠并制備了鍵合型DNB-L亮氨酸手性固定相整體柱。通過UPLC對(duì)所準(zhǔn)備的色譜柱進(jìn)行色譜分析，基于五種農(nóng)藥在正己烷/異丙醇，正己烷/乙醇兩種流動(dòng)

2、相組成及多種流動(dòng)相比例下進(jìn)行分析。實(shí)驗(yàn)證明，該手性柱對(duì)多種農(nóng)藥有較強(qiáng)拆分能力。關(guān)鍵詞：高效液相色譜；手性固定相；手性農(nóng)藥；手性拆分IISeparation of five Pesticides on homemadeL-leucine chiral columnAbstractChloride, L-leucine and epoxy propane in tetrahydrofuran reaction. Using infrared and nuclear magnetic resonance (NMR) high-performance liquid chromatography (HP

3、LC) is one of the most commonly used method in study of chiral pesticides split. The synthesis of chiral selection is 3,5 - dimethyl benzene armour of chiral selector for the characterization, choose ammonia propyl silica gel and the preparation of the DNB bond type - L leucine chiral stationary pha

4、se column as a whole.By UPLC was carried out on the preparation of chromatographic column chromatographic analysis,based on five kinds of pesticides in n-hexane/isopropanol, two kinds of mobile phase composition and n-hexane/ethanol under a variety of mobile phase ratio were analysed. Experiments sh

5、ow that the chiral column of a variety of pesticides have strong separation ability.Key words: high performance liquid chromatography (HPLC), chiral stationary phase, chiral pesticides, chiral separation目 錄引言11.試驗(yàn)部分11.1試驗(yàn)試劑和儀器11.2 樣品21.3色譜條件21.4色譜參數(shù)31.41保留因子（ k´）31.42分離因子（）31.43分離度（Rs）31.5 鍵合型D

6、NB-L-亮氨酸的合成31.6 制備1.7m氨丙基硅烷41.7手性固定相的制備41.8裝柱41.9 DNB-L-亮氨酸手性固定相的結(jié)果表征42.結(jié)果與討論42.1流動(dòng)相異丙醇的含量對(duì)5手性農(nóng)藥的對(duì)映體分離的影響42.2流動(dòng)相乙醇的含量對(duì)5手性農(nóng)藥的對(duì)映體分離的影響72.3流動(dòng)相組成及其比例對(duì)5種農(nóng)藥的對(duì)映體分離的影響83.結(jié)論10參考文獻(xiàn)11致謝13III引言隨著生命科學(xué)和有機(jī)立體化學(xué)的發(fā)展，提供藥效低毒副作用小的光學(xué)純農(nóng)藥已成為現(xiàn)代農(nóng)藥學(xué)研究的重要內(nèi)容，手性農(nóng)藥對(duì)映體的分離受到人們?cè)絹碓蕉嗟闹匾?。一些國(guó)家，如丹麥和荷蘭，已經(jīng)制定法律規(guī)定在未來的幾年內(nèi)劇減 50 %的農(nóng)藥消費(fèi)量，為了控制農(nóng)藥

7、生產(chǎn)中的評(píng)價(jià)商品化手性農(nóng)藥的手性純度，了解環(huán)境中農(nóng)藥不同對(duì)映體的降解狀況，以及認(rèn)識(shí)手性農(nóng)藥的環(huán)境手性識(shí)別的差異，研究手性拆分方法十分重要2。因此，本課題組對(duì)手性農(nóng)藥及其對(duì)映體的拆分進(jìn)行了系統(tǒng)的研究。近年來對(duì)映體分離是手性化合物研究的中心3。國(guó)內(nèi)外研究手性物質(zhì)的對(duì)映體分離方法主要是高效液相色譜（HPLC）、氣相色譜（GC）為主的色譜方法和電泳技術(shù)，其中高效液相色譜手性固定相分離測(cè)定對(duì)映體速度快、柱效高、適用范圍廣（可以用于對(duì)熱穩(wěn)定性差和極性農(nóng)藥的分析）且分離能力強(qiáng)，HPLC 比 GC 法更具有優(yōu)越性4- 10，也是目前使用最多的一種對(duì)映體分離方法。由于高效液相色譜法有流速低，耐壓范圍窄等缺點(diǎn)，人

8、們進(jìn)一步開發(fā)出超高效液相色譜法（UPLC）。與HPLC相比，UPLC流速更高，耐壓范圍更寬，靈敏度，穩(wěn)定性和重現(xiàn)性也更好等。無論是HPLC，還是UPLC，手性固定相的制備是高效液相色譜手性分離技術(shù)中的關(guān)鍵。傳統(tǒng)的固定相大多是多糖及其衍生物，如淀粉及其衍生物和纖維素衍生物。在所查閱到的資料中，尚未發(fā)現(xiàn)有將氨基酸衍生物作為手性固定相進(jìn)行農(nóng)藥拆分研究的報(bào)道。在本次課題研究中，首次合成并制備了亞1.7m DNB-L-亮氨酸手性固定相。利用紅外和核磁進(jìn)行了元素分析，并利用UPLC對(duì)炔螨特、高效氟氯氰菊酯、敵草胺、萘丙胺、高效氯氰菊酯五種農(nóng)藥進(jìn)行了手性拆分，在正己烷/異丙醇與正己烷/乙醇兩種流動(dòng)相比例下，

9、均有較良好的拆分效果。1試驗(yàn)部分1.1 試驗(yàn)試劑和儀器99% -亮氨酸、四氫呋喃（THF）、3.5-二硝基苯甲酰氯（DNB-Cl）、99%環(huán)氧丙烷（propylene oxide）、甲苯、正己烷、異丙醇、石油醚、甲醇均購(gòu)自阿拉丁公司 98%（3-氨丙基） 三乙氧基硅烷 、1.7m硅膠球顆粒、碳酸氫鈉、乙醚、無水硫酸鎂、鹽酸、EEDQ、丙酮。Agilent1290超高效液相色譜儀UPLC（配有VWD紫外檢測(cè)器，四元泵，20L進(jìn)樣器，Agilent公司），數(shù)據(jù)處理在Agilent化學(xué)工作站進(jìn)行；鍵合型（3，5-二硝基苯甲酰）苯丙氨酸手性色譜柱;（150mm×2.1mm

10、，孔徑100nm，粒徑亞1.9 m，實(shí)驗(yàn)室自制）；KQ-E型超聲波清洗器（蘇州市超聲儀器有限公司）； FT-IR 7600紅外吸收光譜儀（天津港東科技）；色譜柱填充機(jī)（美國(guó)Alltech公司）；磁力攪拌器、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、離心機(jī)、冷水循環(huán)泵。流動(dòng)相：甲醇、正己烷、異丙醇、乙醇都是分析純，均來自天津市凱通化學(xué)試劑有限公司，超純水（實(shí)驗(yàn)室自制）。所有流動(dòng)相均經(jīng)0.45µm濾膜過濾并超聲脫氣后使用。1.2 樣品實(shí)驗(yàn)中用到的手性農(nóng)藥的分子結(jié)構(gòu)式見圖1。 圖1五種手性農(nóng)藥的化學(xué)結(jié)構(gòu)圖本試驗(yàn)拆分的5種手性農(nóng)藥樣品分別為：1號(hào)樣品為炔螨特（98%）、2號(hào)樣為高效氯氰菊酯（98%）、3號(hào)樣品為敵草胺（9

11、8%）、4號(hào)樣品為萘丙胺（97%）、5號(hào)樣品為高效氯氰菊酯（98%）均由湖南省藥檢所提供，5種手性農(nóng)藥的化學(xué)結(jié)構(gòu)如圖1所示。1.3 色譜條件五種手性農(nóng)藥的紫外檢測(cè)波長(zhǎng)炔螨特、高效氟氯氰菊酯、敵草胺、萘丙胺、高效氯氰菊酯均固定為220nm。在考察流動(dòng)相正己烷和異丙醇的含量對(duì)5手性農(nóng)藥的對(duì)映體分離的影響中，柱溫和流速分別固定在20、0.5mL，流動(dòng)相中IPA含量分別為2%、5%、10%。在考察流動(dòng)相正己烷和乙醇的含量對(duì)5手性農(nóng)藥的對(duì)映體分離的影響中，柱溫和流速分別固定在20、0.5mL，流動(dòng)相乙醇含量分別為2%、5%、10%。1.4 色譜參數(shù)1.41 保留因子（k´）保留因子（k

12、0;）：指在一定的壓力和溫度下，固定相和流動(dòng)相平衡時(shí)，被分離的化合物在固定相和流動(dòng)相中的質(zhì)量之比。 （2-1）其中t0為死時(shí)間；tR表示被分離化合物（即溶質(zhì)）對(duì)映體的保留時(shí)間。1.42 分離因子（）分離因子（），是臨近兩峰調(diào)整保留時(shí)間之比，該參數(shù)常用來顯示固定相對(duì)被研究的兩個(gè)異構(gòu)體的分離性能，該參數(shù)主要受被分離化合物的對(duì)映體在流動(dòng)相和固定相中的溫度以及分配性質(zhì)影響。 （2-2）其中k´1是譜圖上第一個(gè)洗脫峰的保留因子，k´2是第二個(gè)洗脫峰的保留因子。1.43 分離度（Rs）分離度（Rs ），即在一定色譜條件下色譜柱對(duì)混合物的拆分能力，常用的峰底R(shí)s是指相鄰兩對(duì)映體色譜峰保留

13、時(shí)間之差再除以相鄰兩對(duì)映體的色譜峰的平均底寬。 （2-3） 其中t1為第一個(gè)洗脫峰的保留時(shí)間，t2表示第二個(gè)洗脫峰的保留時(shí)間；w1是指第一個(gè)洗脫峰的基線寬度，w2是指第二個(gè)洗脫峰的基線寬度；通常，當(dāng)Rs =1時(shí)兩峰的峰面積有5%的重疊，即兩峰分開的程度為95%，當(dāng)Rs =1.5時(shí)兩峰分開的程度為99.7%，當(dāng)Rs1.5時(shí)即兩峰獲得基線拆分。1.5 鍵合型DNB-L-亮氨酸的合成取99% -亮氨酸2.3064g亮氨酸（10mmol/L）DNB CL和2.1ml（0）環(huán)氧丙烷于50mL底燒瓶中，并向其中加入適量四氫呋喃。在室溫，氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下磁力攪拌1h，使混合物充分反應(yīng)。將反應(yīng)產(chǎn)物用G6 砂芯漏

14、斗過濾，得到濾液，在40條件下將得到的濾液旋蒸，將旋蒸所得物用5%碳酸氫鈉溶解，溶液用乙醚萃取，留下混合物的下層水相液體，重復(fù)萃取三次后用鹽酸調(diào)pH至5.3。之后再用乙醚萃取，留下上層有機(jī)相，同樣萃取三次。得到的有機(jī)相加入適量無水硫酸鎂干燥去水，之后用同樣方法過濾旋蒸。用乙腈重結(jié)晶，得產(chǎn)物2.20g。1.6 制備1.7m氨丙基硅烷首先，對(duì) SiO2進(jìn)行無水處理。取5.0g1.7m SiO2 于100mL圓底燒瓶中，加入60mL甲苯，在 N2保護(hù)下冷凝回流3h，然后加入10mL含量為98%的（3-氨丙基）三乙氧基硅烷 ，在N2 保護(hù)下回流3天。將所得的反應(yīng)產(chǎn)物離心洗滌，先用甲苯30mL

15、離心洗滌2次，再分別用正己烷，異丙醇，石油醚，甲醇30mL各離心洗滌一次，離心條件為轉(zhuǎn)速4000r，每次10min。將洗滌后的物質(zhì)真空干燥24h，溫度為50，即得SiO2-NH2。1.7手性固定相的制備分別稱取自制1.7m SiO2-NH2 0.7g，自制DNB-苯丙氨酸 0.7g ，然后加入0.553g EEDQ和15mL THF混合均勻，在室溫下磁力攪拌反應(yīng)8h。將反應(yīng)產(chǎn)物在轉(zhuǎn)速4000r條件下離心洗滌，依次使用甲醇，丙酮，乙醚各30mL，洗滌兩次，每次10分鐘。將洗滌后的產(chǎn)物在50條件下干燥24h，即可得所需亞1.7m DNB-亮氨酸手性固定相。反應(yīng)式如下。注：a：3.5-二硝基苯甲酰氯

16、，b：L-亮氨酸，c：DNB-L-亮氨酸 ，d：亞1.7m氨丙基硅膠，e：DNB-L-亮氨酸CSP1.8 裝柱 以異丙醇（IPA）為勻漿液，正己烷為頂替液。將勻漿于10000 psi壓力下裝入不銹鋼柱色譜（150mm×2.1mm）。2 結(jié)果與討論2.1 流動(dòng)相異丙醇的含量對(duì)5手性農(nóng)藥的對(duì)映體分離的影響表1流動(dòng)相中異丙醇含量變化對(duì)5種農(nóng)藥的對(duì)映體拆分的影響樣品H：IPA（V/V）k1k2Rs90/100.55 0.63 1.14 0.83 炔螨特95/50.71 0.83 1.16 1.08 98/21.00 1.18 1.18 1.34 90/101.01 1.11 1.09 0.8

17、5 高效氟氯氰菊酯95/51.28 1.42 1.11 1.27 98/21.74 1.96 1.13 1.42 90/104.51 5.98 1.33 2.45 敵草胺95/57.44 10.01 1.35 2.77 98/214.95 20.84 1.39 3.20 90/104.44 4.70 1.06 0.49 萘丙胺95/56.38 6.80 1.07 0.49 98/29.65 10.43 1.08 0.90 90/100.97 1.07 1.10 0.90 高效氯氰菊酯95/51.22 1.36 1.12 1.20 98/21.73 1.95 1.13 1.41 注：色譜條件：柱

18、溫20，流速為 0.5 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為220 nm從表1中可以看出，這五種農(nóng)藥化合物炔螨特、高效氟氯氰菊酯、敵草胺、萘丙胺、高效氯氰聚酯在正己烷和異丙醇的比例中分離度基本都大于0.5，如下圖3。炔螨特在流動(dòng)相正己烷與異丙醇的比例為90/10（V/V）時(shí)，分離度（Rs）為0.83，保留因子（）為0.55、0.63，分離因子（）為1.14，在流動(dòng)相正己烷與異丙醇的比例為95/5（V/V）時(shí)，分離度（Rs）為1.08，保留因子（）為0.71、0.83，分離因子（）為1.16，在流動(dòng)相正己烷與異丙醇的比例為98/2（V/V）時(shí)，分離度（Rs）為1.34，保留因子（）為1.00、1.18，分離

19、因子（）為1.18，由此可以看出當(dāng)炔螨特IPA的體積含量從2%增加到5%、10%，樣品的保留因子（）、分離因子（）、分離度（Rs）均隨之減小。同樣，高效氟氯氰菊酯，敵草胺，萘丙胺，高效氯氰菊酯四種樣品隨著IPA的體積含量從2%增加到5%、10%時(shí)，樣品的保留因子（）、分離因子（）、分離度（Rs）均隨之減小11。這5種農(nóng)藥（炔螨特，高效氟氯氰菊酯，敵草胺，萘丙胺，高效氯氰菊酯）在流動(dòng)相正己烷與異丙醇的比例中分離度（Rs）基本都大于0.5，有較好的拆分效果，因敵草胺在流動(dòng)相正己烷和異丙醇的比例為90/10（V/V），95/5（V/V），98/2（V/V）時(shí)，分離度（Rs）均大于1.5，所以是5種農(nóng)

20、藥樣品中拆分效果最好的。通過改變流動(dòng)相中異丙醇含量對(duì)5種農(nóng)藥（炔螨特，高效氟氯氰菊酯，敵草胺，萘丙胺，高效氯氰菊酯）的對(duì)映體拆分的研究表明：鍵合型DNB-L-亮氨酸手固定相對(duì)炔螨特，高效氟氯氰菊酯，敵草胺，萘丙胺，高效氯氰菊酯這五種農(nóng)藥均有較好的拆分效果。 注：流動(dòng)相組成正己烷/異丙醇（V/V）：a，90/10（V/V）；b，95/5（V/V）；c，98/2（V/V）；d，90/10（V/V）；e，95/5（V/V）；f，98/2（V/V）；g，90/10（V/V）；h，95/5（V/V）；i，98/2（V/V）；j，90/10（V/V）；k，95/5（V/V）；l，98/2（V/V）；m，9

21、0/10（V/V）；n，95/5（V/V）；o，98/2（V/V）2.2 流動(dòng)相乙醇的含量對(duì)5手性農(nóng)藥的對(duì)映體分離的影響表2流動(dòng)相中乙醇含量變化對(duì)5種農(nóng)藥的對(duì)映體拆分的影響樣品H/ IPA（V/V）k1k2Rs90/100.44 0.49 1.12 0.59 炔螨特95/50.59 0.67 1.14 0.91 98/20.89 1.03 1.16 1.32 90/100.740.821.100.89高效氟氯氰菊酯95/51.04 1.15 1.11 1.08 98/21.50 1.68 1.121.41 90/102.40 2.89 1.20 2.43 敵草胺95/54.10 5.09 1.

22、24 2.71 98/25.236.441.272.8290/102.78 2.88 1.04 0.49 萘丙胺95/54.57 4.79 1.05 0.62 98/27.56 8.05 1.06 0.70 90/100.75 0.82 1.10 0.74 高效氯氰菊酯95/51.04 1.15 1.11 1.13 98/21.51 1.69 1.12 1.35 注：色譜條件：柱溫20，流速為 0.5 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為220 nm從表2可以看出，這五種農(nóng)藥化合物炔螨特、敵草胺、高效氟氯氰菊酯、敵草胺、萘丙胺、高效氯氰菊酯在流動(dòng)相正己烷和乙醇的比例中分離度（Rs）基本都大于0.5。炔螨特

23、在流動(dòng)相正己烷和乙醇的比例為90/10（V/V）時(shí)，分離度（Rs）為0.59，保留因子（）為0.44、0.49，分離因子（）為1.12，在流動(dòng)相正己烷和乙醇的比例為95/5（V/V）時(shí)，分離度（Rs）為0.91，保留因子（）為0.59、0.67，分離因子（）為1.14，在流動(dòng)相正己烷和乙醇的比例為98/2（V/V）時(shí)，分離度（Rs）為1.32，保留因子（）為0.89、1.03，分離因子（）為1.16，由此可以看出當(dāng)炔螨特乙醇的體積含量從2%增加到5%、10%，樣品的保留因子（）、分離因子（）、分離度（Rs）均隨之減小。同樣，高效氟氯氰菊酯，敵草胺，萘丙胺，高效氯氰菊酯種樣品隨著乙醇的體積含量從

24、2%增加到5%、10%時(shí)，樣品的保留因子（）、分離因子（）、分離度（Rs）均隨之減小。炔螨特，高效氟氯氰菊酯，敵草胺，萘丙胺，高效氯氰菊酯五種農(nóng)藥在流動(dòng)相正己烷和乙醇的比例中分離度（Rs）基本都大于0.5，有較好的拆分效果，因敵草胺在流動(dòng)相正己烷和乙醇的比例為90/10（V/V），95/5（V/V），98/2（V/V）時(shí)，分離度（Rs）均大于1.5，所以是5種農(nóng)藥樣品中拆分效果最好的。如下圖3。通過改變流動(dòng)相中乙醇含量對(duì)5種農(nóng)藥（炔螨特，高效氟氯氰菊酯，敵草胺，萘丙胺，高效氯氰菊酯）的對(duì)映體拆分的研究表明：鍵合型DNB-L-亮氨酸手固定相對(duì)炔螨特，高效氟氯氰菊酯，敵草胺，萘丙胺，高效氯氰菊酯這

25、五種農(nóng)藥均有較好的拆分效。圖3 正己烷和乙醇流動(dòng)相三種比例下的敵草胺2.3 流動(dòng)相組成及其比例對(duì)5種農(nóng)藥的對(duì)映體分離的影響從表1和表2中顯示了在流速為0.5mL/min，柱溫為20時(shí)，流動(dòng)相正己烷/異丙醇和正己烷/乙醇組成比例分別為90/10（V/V）， 95/5（V/V），98/2（V/V）條件下，自制色譜柱對(duì)手性農(nóng)藥五種手性農(nóng)藥對(duì)映體拆分的情況。從表1和表2可以看出，對(duì)炔螨特來說，在流動(dòng)相正己烷/異丙醇中，流動(dòng)相組成比例從90/10（V/V）上升到98/2（V/V）的過程中，手性固定相的保留因子（）從0.55增加到1.00，分離因子（）從0.83增加到1.34，分離度（Rs）從1.14增加

26、到1.18。對(duì)其他四種農(nóng)藥也有同樣的表現(xiàn)。在流動(dòng)相正己烷/乙醇中，流動(dòng)相組成比例從90/10（V/V）上升到98/2（V/V）的過程中，手性固定相的保留因子（）從0.44增加到0.89，分離因子（）從0.59增加到1.32，分離度（Rs）從1.12增加到1.16，對(duì)其他四種農(nóng)藥也有同樣的表現(xiàn)?？偟膩碚f，無論在哪一種農(nóng)藥的任何流動(dòng)相組成中，隨著改性劑（異丙醇或乙醇）在流動(dòng)相中濃度的減小，溶質(zhì)保留時(shí)間逐漸延長(zhǎng)，化合物的保留因子（）值，分離因子（），分離度（Rs）值逐漸增大，這說明有機(jī)改性劑的濃度比例對(duì)調(diào)節(jié)保留值和對(duì)映體選擇性起著重要的作用。一般情況下，分離度（Rs）的大小與流動(dòng)相中極性調(diào)節(jié)劑（改性

27、劑）的種類和極性大小有關(guān)。通常認(rèn)為，流動(dòng)相中極性調(diào)節(jié)劑（改性劑）的極性越小，手性固定相對(duì)化合物對(duì)映體的拆分和保留能力就越強(qiáng)，從而分離度（Rs）就越大3。通過深入研究-亮氨酸手性色譜柱對(duì)這五種農(nóng)藥（長(zhǎng)炔螨特、高效氟氯氰菊酯、敵草胺、萘丙胺、高效氯氰菊酯）的對(duì)映體分離效果及流動(dòng)相組分極性對(duì)農(nóng)藥拆分的影響，得出五種手性農(nóng)藥在用異丙醇作流動(dòng)相組分極性改性劑時(shí)比乙醇的分離因子（）、保留因子（）及分離度（Rs）都要大。這是由于異丙醇的極性比乙醇的小，異丙醇作為流動(dòng)相改性劑時(shí)與手性固定相的氫鍵作用力小，使流動(dòng)相的洗脫能力減弱，因此樣品的出峰時(shí)間較長(zhǎng)，分離度（Rs）較大3。例如表1表2所示，在正己烷/異丙醇9

28、0/10（V/V）時(shí)，炔螨特的保留因子（）和分離度（Rs）分別為0.55和1.44，在正己烷/乙醇90/10（V/V）中，炔螨特的保留因子（）和分離度（Rs）分別0.44和1.12。由此得出流動(dòng)相組分改性劑為異丙醇的農(nóng)藥比乙醇的大。在正己烷/異丙醇90/10（V/V）時(shí)，高效氯氰菊酯的保留因子（）和分離度（Rs）分別為0.97和1.1，在正己烷/乙醇90/10（V/V）中，高效氯氰菊酯的保留因子（）和分離度（Rs）分別0.75和1.1。由此得出流動(dòng)相組分改性劑為異丙醇的農(nóng)藥比乙醇的大12-13，如下圖4。從表1表2中得出在五種手性農(nóng)藥中，流動(dòng)相為正己烷/異丙醇的任何組成比例中，其保留因子（）和

29、分離度（Rs），都大于在流動(dòng)相為正己烷/乙醇對(duì)應(yīng)比例的數(shù)值。所以在選擇流動(dòng)相組分改性劑時(shí)，應(yīng)盡可能選擇極性小的改性劑參與到流動(dòng)相中。圖4 不同流動(dòng)相比例下的兩種農(nóng)藥注：a，炔螨特，H/IPA=90/10（V/V）； b，炔螨特，H/ETOH=90/10（V/V）c，高效氯氰菊酯，H/IPA=90/10（V/V）；d，高效氯氰菊酯H/ETOH=90/10（V/V）3 結(jié)論本實(shí)驗(yàn)首次利用3,5-二甲基苯甲酰氯、L-亮氨酸與環(huán)氧丙烷在四氫呋喃中反應(yīng)制得DNB-亮氨酸手性固定相色譜柱。屬氨基酸類衍生物，通過UPLC對(duì)所制備的色譜柱進(jìn)行色譜分析，基于五種農(nóng)藥在正己烷/異丙醇，正己烷/乙醇兩種流動(dòng)相組成及

30、多種流動(dòng)相比例下進(jìn)行分析的結(jié)果。結(jié)論如下：1.樣品隨著流動(dòng)相中異丙醇和乙醇的體積含量逐漸增加，樣品的分離度（Rs）、保留因子（）、分離因子（）均隨之減小。2.無論在哪一種農(nóng)藥的任何流動(dòng)相組成中，隨著改性劑（異丙醇或乙醇）在流動(dòng)相中濃度的減小，溶質(zhì)保留時(shí)間逐漸延長(zhǎng)，化合物的保留因子（）值，分離因子（），分離度（Rs）值逐漸增大。3.通過深入研究-亮氨酸手性色譜柱對(duì)這五種農(nóng)藥（炔螨特、敵草胺、高效氟氯氰菊酯、敵草胺、萘丙胺、高效氯氰菊酯）的對(duì)映體分離效果及流動(dòng)相組分極性對(duì)農(nóng)藥拆分的影響，得出這五種手性農(nóng)藥在用異丙醇作流動(dòng)相組分極性改性劑時(shí)比乙醇的保留因子（）、分離因子（）及分離度（Rs）都要大，這

31、是由于異丙醇的極性比乙醇的小，異丙醇作為流動(dòng)相改性劑時(shí)與手性固定相的氫鍵作用力小，使流動(dòng)相的洗脫能力減弱，因此樣品的出峰時(shí)間較長(zhǎng)，分離度（Rs）較大。所以在選擇流動(dòng)相組分改性劑時(shí)，應(yīng)盡可能選擇極性小的改性劑參與到流動(dòng)相中。參考文獻(xiàn)1 武彤, 李朝陽(yáng), 李巧玲, 等. 三唑類手性農(nóng)藥高效液相色譜分離的研究J. 河北科技大學(xué)學(xué)報(bào), 2008, 29(4): 279-182.2 孟磊, 袁超. 高效液相色譜在手性農(nóng)藥分析分離上的應(yīng)用研究進(jìn)展J. 河南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào), 2006, 40(2): 216-220.3 聶銘, 趙國(guó)虎, 趙軍. 四種手性農(nóng)藥在CHIRALPAK AS-H 柱上的直接拆分J.甘

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