中藥分析實驗教案1

1、中藥分析實驗教案實驗一 中藥制劑的理化定性鑒別（4學時）一、目的要求1、掌握TLC的鑒別方法。2、熟悉中成藥分析的理化定性方法。二、實驗內(nèi)容（一）化學定性鑒別和紫外分光光度法定性鑒別 1、牛黃解毒片： （1）鑒別方法 取本品1片，研細，進行微量升華，所得的白色升華物，加新制的1香草醛的硫酸溶液12滴，液滴邊緣漸顯玫瑰紅色。取本品6片（包衣者除去包衣），研細，加乙醇10ml，溫熱10分鐘，濾過，取濾液5ml，加鎂粉少量與鹽酸0.5ml，加熱，即顯紅色；另取濾液4ml，加氫氧化鈉試液，即顯紅色，再加30過氧化氫溶液，紅色不消失，加酸成酸性時，則紅色變?yōu)辄S色。（2）思考題試述法的化學定性原理。2、復

2、方丹參片（1）鑒別方法分光光度法：取本品1片，研細，分次加水少量，攪拌，濾過，濾液移置100ml量瓶中，并加水至刻度，取溶液2ml，加水至25ml。在283±2nm的波長處有最大吸收。取本品1片，研細，進行微量升華，所得白色升華物，加新制的1香草醛的硫酸溶液1滴，液滴邊緣漸濕玫瑰紅色。（3）思考題試述法的化學定性原理。3、穿心蓮片（1）本品為穿心蓮浸膏片（2）鑒別方法取本品5片，除去包衣，研細，加乙醇10ml，置水浴中加熱至沸，加活性炭0.5g，攪拌，濾過。取濾液1ml，加二硝基苯甲酸試液與乙醇制氫氧化鉀試液的等容混合溶液2滴，搖勻，即顯紫色；另取濾液1ml，加堿性三硝基苯酚試液35

3、滴，顯橙紅色。取本品3片，除去包衣，研細，加無水乙醇25ml，置水浴中加熱回流1小時，放冷，濾過，濾液蒸干，加水5ml，再加2鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至1.0，在水浴上加熱30分鐘，濾過。取濾液，加10亞硝酸鈉溶液和10硝酸鋁溶液各3滴，搖勻，再加氫氧化鈉試液0.51ml，顯橙紅色。（3）思考題試述法的化學定性原理。4、銀黃口服液（1）本品為金銀花提取物、黃芩提取物經(jīng)加工制成的口服液。（2）鑒別方法取本品1ml，加5硝酸鈉溶液與10硝酸鋁溶液各0.3ml，生成黃色沉淀，再加5氫氧化鈉溶液使成堿性，沉淀即溶解，溶液顯棕紅色。取本品0.1ml，加水10ml，搖勻，取溶液2ml，加5二氯氧化鋯溶液12滴，

4、溶液顯黃色，再加鹽酸12滴，黃色不褪。（3）思考題試述法的化學定性原理。5、板藍根顆粒劑（1）本品為板藍根制成的顆粒劑。（2）鑒別方法取本品0.5g，加5ml甲醇使溶解，靜置，取上清液點于濾紙上，晾干，置紫外光燈（365nm）下觀察，顯藍紫色。取本品0.5g，加10ml甲醇使溶解，濾過，取濾液1ml，加茚三酮試液0.5ml，置水浴中加熱數(shù)分鐘，顯藍紫色。（3）思考題試述第（2）點中法的鑒別原理。（二）薄層色譜鑒別1、牛黃解毒片（1）薄層板制備 參看本書附錄。（2）供試品溶液制備：取本品2片，粉碎，加氯仿10ml研磨，濾液蒸干，加乙醇0.5ml使溶解，作為供試品溶液。（3）對照品溶液制備：取膽酸

5、對照品，加乙醇制成每1ml中含1mg的溶液，作為對照品溶液。（4）點樣與展開：吸取上述兩種溶液各5l，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正已烷醋酸乙酯醋酸甲醇（20：25：2：3）的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10硫酸乙醇溶液，在105烘約10分鐘。置紫外光燈（365nm）下檢視。在供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。（5）思考題：試述本法分析原理？是鑒別處方中何種中藥材？2、銀翹解毒片薄層色譜法。（1）薄層板制備：同1、（1）項。（2）供試液制備：取本品10片，研細，加石油醚（6090）20ml，密塞，時時振搖，浸漬過夜，濾過，濾液揮散至1ml，作為供試品

6、溶液。（3）對照溶液制備：取荊芥對照藥材0.8g，加石油醚（6090）20ml，按供試品溶液制備法制備。再取薄荷腦對照品，加乙醇，制成每1ml含2mg的溶液，作為對照品溶液。（4）點樣、展開、顯色：吸取上述三種溶液各10l, 分別點于同一含羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以正已浣一醋酸乙酯（17：3）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以茴香醛試液，于105加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，分別在與對照品相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。（5）思考題：試述本法測定原理，并說明本法與牛黃解毒片的薄層色譜法的區(qū)別要點。實驗二 甲苯法測定中藥制劑中水分含量（4學時）一、目的要求掌握甲苯法測定中藥制劑

7、中水分的原理和操作方法。二、基本原理中藥制劑水分測定的常用方法有烘干法和甲苯法，烘干法適用于不含或少含揮發(fā)性成分的藥品，甲苯法用于含揮發(fā)性成分的藥品。香砂養(yǎng)胃丸是由木香、砂仁、白術(shù)、陳皮、香附、廣藿香、茯苓、半夏等十二味中藥制成的水丸，其中有多味中藥中含揮發(fā)性成分，應(yīng)選用甲苯法測定該制劑中水分的含量。三、儀器與試藥1、甲苯法水分測定裝備（見附圖）（包括500ml短頸圓底燒瓶、水分測定管、直形冷凝管、外管長40cm）。2、電熱套、分析天平。 3、甲苯、亞甲藍（AR）。4、銅絲。5、香砂養(yǎng)胃丸（市售品）。甲苯法水分測定裝置四、操作步驟將香砂養(yǎng)胃丸研碎，取約25g（約相當于含水量14ml），精密稱定

8、，置A瓶中，加甲苯約200ml，必要時加入玻璃珠數(shù)粒，將儀器各部分連接，自冷凝管頂端加入甲苯，至充滿B管的狹細部分。將A瓶置電熱套中或用其他適宜方法緩緩加熱，待甲苯開始沸騰時，調(diào)節(jié)溫度，使每秒鐘餾出2滴。待水分完全餾出，即測定管刻度部分的水量不再增加時，將冷凝管內(nèi)部先用甲苯?jīng)_洗，再用飽蘸甲苯的長刷或其他適宜的方法，將管壁上附著的甲苯推下，繼續(xù)蒸餾5分鐘，放冷至定溫，拆卸裝置，如有水黏附在B管的管壁上，可用蘸甲苯的銅絲推下，放置，使水分與甲苯完全分離（可加亞甲藍粉末少量，使水染成藍色，以便分離觀察）。檢讀水量，并計算供試品中的含水量（）。五、注意事項1、用化學純甲苯直接測定，必要時甲苯可先加水少

9、量，充分振搖后，將水層分離棄去，經(jīng)蒸餾后使用。2、樣品應(yīng)先粉碎成直徑不超過3mm的顆粒。六、思考題1、實驗中所用儀器、器皿是否要烘干？為什么？2、為什么說本法適用于含揮發(fā)性成分的中藥制劑中水分的測定？實驗三 礦物藥石膏與玄明粉中重金屬的檢查（4學時）一、目的要求 1、掌握重金屬檢查的方法與原理。 2、熟悉目視比色法的操作與判斷。二、基本原理 目視比色法是以肉眼直接觀察比較樣品溶液與標準品溶液的顏色深淺，判斷樣品所含雜質(zhì)是否超出規(guī)定限度。重金屬在實驗條件下都能與硫代乙酰胺或硫化鈉反應(yīng)顯色，生成黑色硫化物沉淀，標準溶液常以Pb2+為代表，其原理為： 在酸性溶液中 CH3CSNH2+H20 CH3C

10、ONH2+H2S Pb2+H2S pbS(黑色)在堿性溶液中 Pb2+Na2S pbS(黑色)+2Na+ 三、儀器與試藥 1、電爐、25ml納氏比色管及比色管架。 2、萬分之一分析天平。3、量瓶、刻度吸管、燒杯、錐形瓶、量筒等。4、其他試劑均為AR級。 5、石膏、玄明粉（市售品）。 四、操作步驟 1.石膏重金屬檢查 取樣品16g，加冰醋酸4ml與水96ml，煮沸10分鐘，放冷，濾過，用水洗滌并定容至100ml。取25ml納氏比色管2支，甲管中加標準鉛溶液2ml與醋酸鹽緩沖液(pH=3.5)2ml后加水使成25ml。乙管加樣品濾液25ml，在甲乙兩管中分別加硫代乙酰胺試液2ml，搖勻，放置2分鐘

11、，同置白紙上，自上向下透視，乙管中顯出的顏色與甲管比較，不得更深。 2.玄明粉重金屬檢查 取25ml納氏比色管2支，甲管中加標準鉛溶液2ml與醋酸鹽緩沖液(pH=3.5)2ml后，加水使成25ml，乙管取玄明粉1.0g，加醋酸鹽緩沖液2ml與適量水溶解成25ml。在甲乙兩管中分別加入硫代乙酰胺試液各2ml，搖勻，同置白紙上，自上向下透視，乙管中顯出的顏色與甲管比較，不得更深。 附 注 1.標準鉛溶液的配制 精密稱取在105干燥至恒重的硝酸鉛0.1598g置1000ml量瓶中，加硝酸5ml，水50ml溶解后，用水稀釋至刻度，搖勻，作為儲備液。 臨用前，精密量取儲備液10ml，置100ml量瓶中，

12、加水稀釋至刻度，搖勻，即得(每1ml相當于10g的Pb)。 2.硫代乙酰胺試液的配制 取硫代乙酰胺4g，加水使溶解成100ml，置冰箱中保存，臨用前取混合液(由1mol/L 氫氧化鈉溶液15ml，水5.0ml及甘油20ml組成)5.0ml，加上述硫代乙酰胺溶液1.0ml，置水浴上加熱20秒鐘，冷卻，立即使用。 3.醋酸鹽緩沖液的配制(pH3.5) 取醋酸銨25g加水25ml溶解后，加7mol/L鹽酸溶液38ml，用2mol/L鹽酸溶液或5mol/L氨溶液準確調(diào)節(jié)pH值至3.5(電位法指示)，用水稀釋至100ml，即得。 五、思考題 1石膏及玄明粉的重金屬限量分別是多少?2在酸性溶液中重金屬能否

13、用Na2S作顯色劑?為什么?實驗三 冰片中砷鹽限量檢查（4學時）一、 目的要求1、熟悉砷鹽檢查法的基本操作。2、了解砷鹽檢查的原理和方法（古蔡法）。二、 基本原理 本法為中國藥典規(guī)定砷鹽檢查第一法。鋅和酸作用所產(chǎn)生的初生態(tài)氫與供試品中微量砷鹽化合物反應(yīng)生成揮發(fā)性砷化氫，再與溴化汞試紙作用生成黃色至棕色砷斑。與同條件下一定量標準砷溶液所產(chǎn)生的砷斑比較，以判定供試品的砷鹽限量。AsO33-+3Zn+9H+AsH3+3Zn2+3H2O產(chǎn)生的砷化氫與溴化汞試紙作用。AsH3+2HgBr22HBr+AsH(HgBr)2 (黃色)AsH3+3HgBr23HBr +As(HgBr)3 (棕色)因為AsO43

14、-在酸性溶液中被Zn還原的速度很慢，為提高反應(yīng)速度，常在反應(yīng)液中加入KI及酸性SnC12將AsO43還原為AsO33，KI被氧化生成I2，以SnC12來還原，使反應(yīng)液中維持有KI的還原劑存在。AsO43-+2I-+2H+ AsO33-+I2+H2O AsO43-+Sn2+2H+AsO33-+Sn4+H2OI2+Sn2+2I-+ Sn4+溶液中的碘離子，與反應(yīng)中產(chǎn)生的鋅離子能形成配合物，使生成砷化氫的反應(yīng)不斷進行。4I-+Zn2+ZnI42-供試品和鋅粒中可能含有少量硫化物，在酸性溶液中產(chǎn)生H2S氣體，干擾實驗，故需采用醋酸鉛棉花吸收除去H2S。H2S+Pb(CH3COO)2 PbS+2CH3C

15、OOH三、 儀器與試藥1、古蔡法測砷裝置（見附圖）。2、標準砷試液（1µgAs/ml）；碘化鉀試液；酸性氯化亞錫試液；醋酸鉛棉花；鋅粒；溴化汞試紙。3、冰片（市售品）。四、 操作步驟測試前，先于導氣管C中裝入醋酸鉛棉花60mg（裝管高度為6080mm）；再于旋塞D的頂端平面上放一片溴化汞試紙（試紙大小以能覆蓋孔徑而不露出平面為宜），蓋上旋塞E并旋緊，即得。1. 標準砷斑的制備 精密量取標準砷溶液2ml，置A瓶中，加鹽酸5ml與水2ml，再加碘化鉀試液5ml與酸性氯化亞錫試液5滴，在室溫放置10分鐘后，加鋅粒2g，立即將照上法裝妥的導氣管C密塞于A瓶上，并將A瓶置2540水浴中反應(yīng)45

16、分鐘，取出溴化汞試紙，即得。2. 供試品的檢查 取冰片1g，加氫氧化鈣0.5g與水2ml，混勻，置水浴上加熱使冰片揮發(fā)后，放冷，加鹽酸中和，再加鹽酸5ml與水適量使成28ml，照標準砷斑的制備，自“再加碘化鉀試液5ml”起，依法操作。將生成的砷斑與標準砷斑比較，不得更深。五、 注意事項1、標準砷斑的制備應(yīng)與樣品檢查法平行操作。2、制備標準砷斑應(yīng)與供試品檢查同時進行。因砷斑不穩(wěn)定，反應(yīng)中應(yīng)保持干燥及避光，并立即比較。3、浸入乙醇制溴化汞試液的濾紙的質(zhì)量，對生成砷斑的色澤有影響，因此必須選用質(zhì)量較好，組織疏松的中速定量濾紙，溴化汞試紙一般宜新鮮制備。六、思考題1、砷鹽檢查第一法和第二法的異同何在？

17、各自的關(guān)鍵環(huán)節(jié)是什么？實驗四 左金丸質(zhì)量標準制定（8學時）一、目的要求掌握中藥制劑質(zhì)量標準的主要內(nèi)容和制定方法學習設(shè)計實驗的思路和方法了解中藥制劑分析常用定性鑒別和含量測定方法二、提要1. 處方 黃連 600g 吳茱萸 100g2. 制法 以上二味，粉碎成細粉，過篩，混勻，用水泛丸，干燥，即得。性狀 本品為黃褐色的水丸；氣特異，味苦、辛。功能與主治 瀉火，疏肝，和胃，止痛。用于肝火犯胃，腕脅疼痛，口苦嘈雜，嘔吐酸水，不喜熱飲。三、方法1. 質(zhì)量標準方案設(shè)計：根據(jù)以上條件請學生設(shè)計本品的定性鑒別、檢查和含量測定分析方案。定性鑒別要寫明所用對照品或?qū)φ账幉?、鑒別方法。檢查要寫明檢查內(nèi)容及方法。含量

18、測定要寫明樣品提取凈化方法、所測成分、測定條件、測定方法及含量計算方法。 2. 在了解中藥制劑質(zhì)量標準制定基本方法和左金丸中各味藥的定性鑒別和含量測定方法基礎(chǔ)上，參照2000版藥典左金丸項下定性鑒別及含量測定方法擬定實驗方法供學生練習。四、實驗用品分析天平恒溫水浴鍋容量瓶、三角瓶、燒杯、量筒、色譜柱等中性氧化鋁（層析用）分光光度計樣品：左金丸（市售品）其他試劑均為AR級五、實驗步驟1. 定性鑒別 取左金丸1g，研細，加乙醇10ml，超聲處理20分鐘，放冷，濾過，濾液作為供試品溶液。另取吳茱萸對照藥材0.1g、黃連對照藥材0.6g，分別同法制成對照藥材溶液。再取鹽酸小檗堿對照品，加乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。