關(guān)于孤束核在針刺“足三里”調(diào)節(jié)胃運(yùn)動(dòng)中的作用機(jī)制(精)

1、關(guān)于孤束核在針刺“足三里”調(diào)節(jié)胃運(yùn)動(dòng)中的作用機(jī)制作者：王述菊 , 孫國(guó)杰 , 杜艷軍 , 胡和平 , 吳 緒平, 孔立紅 【摘要】目的 探討迷走神經(jīng)中樞孤束核在針刺“足三里”對(duì)胃運(yùn)動(dòng)障礙大鼠胃內(nèi)壓影響中的作用。方法 采用神經(jīng)電生理學(xué)方法 , 用微電 極細(xì)胞外記錄大鼠孤束核單個(gè)神經(jīng)元的活動(dòng) , 在正常生理狀態(tài)下及經(jīng)血管注射抑 制胃運(yùn)動(dòng)的藥物阿托品或促進(jìn)胃運(yùn)動(dòng)的藥物胃復(fù)安后 , 觀察針刺“足三里”對(duì)孤 束核神經(jīng)元放電及胃內(nèi)壓的影響。結(jié)果 在正常生理狀態(tài)下 , 針刺“足三里”有 效激活了孤束核神經(jīng)元放電 , 并明顯促進(jìn)胃運(yùn)動(dòng)。靜脈注射阿托品后 , 孤束核神 經(jīng)元背景放電減少 , 但針刺對(duì)放電的影響與

2、藥物前相比變化不大 , 靜脈注射阿 托品后針刺“足三里”仍有效激活了孤束核神經(jīng)元放電 , 且靜脈注射阿托品后針 刺“足三里”能明顯促進(jìn)胃運(yùn)動(dòng)(http:/ 。在靜脈注射胃復(fù)安 后, 孤束核神經(jīng)元背景放電增加 , 但針刺對(duì)放電的影響與藥物前相比 , 變化也不 大, 靜脈注射胃復(fù)安后針刺“足三里”仍有效激活了孤束核神經(jīng)元放電, 而且靜脈注射胃復(fù)安后針刺“足三里”更明顯促進(jìn)胃運(yùn)動(dòng)。結(jié)論 針刺“足三里” 對(duì)胃功能的調(diào)節(jié)作用以促進(jìn)胃運(yùn)動(dòng)為主 , 其調(diào)節(jié)作用與孤束核神經(jīng)元的激活密切 相關(guān), 且針刺“足三里”引起孤束核相關(guān)神經(jīng)元放電增加幅度不受周圍膽堿能受 體阻滯劑阿托品及多巴胺受體拮抗劑胃復(fù)安的影響。 【

3、關(guān)鍵詞】 孤束 核；足三里；針刺；胃運(yùn)動(dòng)；大鼠 Abstract ： Objective To research the function of the vagus nerve center nucleus ofsolitarytract (NTS) in the influence of gastric pressure by acupuncture at “ Zusanli ” in rats with motili ty disturbances of thestomach. Methods Adopting electrophysio logical methods, the extr

4、acellular dischargesignals of neuron ic action in NTS were recorded with glass microelectrode. Th einfluence of the discharges of NTS neurons and gastric pr essure responding to theacupuncture at “Zusanli ” point wer e observed in normal status and the condition ofAtropine o r Metoclopramide intrave

5、nous injection. Results In the normal status,acupuncture at “Zusanli ” activated the discharges of NTS neurons and promote thegastric pressure remarkably. After Atropine intravenous injection, the backgrounddischarges of NTS neurons decreased. There was no statistical differen ce in thedischarges re

6、sponding to the effect of acupuncture before and after Atropineadministration. And the gastric m otion reinforced obviously by acupuncture at“Zusanli ” after Atropine administration. But after intravenous injection ofMetoclopramide, the background discharges of NTS neurons incre ased. There wasalso

7、no statistical difference in the discha rges responding to the effect of acupuncturebefore and afte r Metoclopramide administration. Moreover, the function of promoting gastric motion by acupuncture at “Zusanli ” got moreobviously after Metoclopramide administration. Conclusion The function of adjus

8、tinggastric motion by acupuncture at“Zu sanli”point has close relation to the activation ofNTS n eurons, and the increasing amplitude of the discharges of NT S neurons wasntinfluenced by cholinergic receptor blocker Atropine and dopamine- receptor antagonistMetoclopramide. Key words：nucleus of solit

9、ary tract；Zusanli；acupuncture；gastricmotion；rat “足三里”是足陽(yáng)明胃經(jīng)五輸穴中的合穴 , 是四總穴之首。 臨床和實(shí)驗(yàn) 研究均表明 ,“足三里”對(duì)胃功能和疾患有顯著的調(diào)整和治療作用 1-2, 但以往 的研究多集中于周圍神經(jīng)系統(tǒng)的作用 , 而對(duì)中樞的作用研究甚少。因此 , 本研究 旨在觀察針刺“足三里”穴對(duì)孤束核神經(jīng)元放電的影響 , 探討腦的低級(jí)中樞延髓 孤束核 （nucleus of solitarytract,NTS） 在“足三里”穴調(diào)節(jié)胃運(yùn)動(dòng)中的 作用機(jī)制。 1 材料與方法 1.1 動(dòng)物 健康成年 Sprague- Dawley 雄性大鼠 32

10、 只,體重 300350 g 之間,中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心 提供, 為清潔級(jí)動(dòng)物。測(cè)量胃內(nèi)壓實(shí)驗(yàn)前禁食 12 h, 飼以 5%葡萄糖鹽水 （ 醫(yī)藥學(xué) / 臨床醫(yī)學(xué)論文 http:/ 。手術(shù)及實(shí)驗(yàn)過(guò)程中動(dòng)物體溫用計(jì)算 機(jī)溫度時(shí)間控制儀維持在（37 1）C。1.2 儀器及藥物 腦立體定位儀 （ 日本 ） 、微電極操縱器、微電極推進(jìn)器 （PF5-1, 日本光電 ） 、微電極放大器 （MEZ-8301, 日本光電 ） 、載波放大器 （AP-601G, 日本光電 ） 、生物放大器（AB-621G, 日本光電 ）、 雙線記憶示波器（Vc-10, 日本光電 ）、 刺激器（SEN-7203,日本光 電）、

11、 隔離器（SSI02J,日本光電）、 雙芯玻璃毛坯（長(zhǎng)度 100 mm 外徑 1.5 mm,內(nèi)徑 1.2 mm 南京）、玻璃微電極拉制儀（Model P-97,美國(guó)）、壓力換能器 （yp200,北京）、 PowerLab 計(jì)算機(jī)數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)（愛德公司,澳大利亞）、 華佗牌 針灸針具（蘇州）、計(jì)算機(jī)溫度時(shí)間控制儀（STARC ST-360, 日本）、臺(tái)式牙鉆車（307-6,上海）、37C液體石蠟、0.5 mol/L 滂胺天蘭醋酸鈉溶液、0.2%肝 素、 0.01%阿托品、 0.1%胃復(fù)安、 0.3%中性紅水溶液。1.3 孤束核細(xì)胞外記錄手術(shù) 在室溫條件下 , 大鼠稱重后用 10%烏拉坦腹腔注射麻

12、醉 （urethane,1.0 1.2 g/kg） 。大鼠頭部用耳棒固定 , 頭頂部剃毛 , 沿正中矢狀線 切開皮膚 , 分離皮下組織 , 刮除骨膜 , 暴露前后囟 , 將前后囟調(diào)至同一水平。根據(jù) 大鼠腦立體定位圖譜（Paxinos 和 Watson,1998）, 在孤束核 （A-11.3 -14.3 mm L 02.3 mm H 47 mm 所在顱骨部位用臺(tái)式牙鉆車鉆孔，手 下有落空感即停止。顯微鏡下分層剝離硬腦膜和軟腦膜 , 暴露的腦組織用溫的石 蠟油覆蓋。在記錄孤束核實(shí)驗(yàn)中 , 大鼠俯臥 , 將大鼠頭部用耳棒固定于腦立體定 位儀上 , 下齒鉤掛在鼠頭夾中 , 口鼻部用鼠頭夾壓緊。1.4

13、血壓記錄手術(shù) 動(dòng)物仰臥 , 于頸部中線偏左側(cè)一字切口切開皮膚 , 分離皮下組織和肌肉 , 暴露左側(cè)頸靜脈、頸總動(dòng)脈。用動(dòng)脈夾在頸總動(dòng)脈中段夾住血管阻斷血流 , 注意 松緊適度以免夾傷血管。將頸靜脈、頸總動(dòng)脈的遠(yuǎn)心端用手術(shù)線結(jié)扎 , 眼科剪將 血管剪開一斜口（大約為直徑的 1/2）, 將靜脈插管和動(dòng)脈插管分別向心性插入頸 靜脈、頸動(dòng)脈內(nèi)約 810mm 注意不能太深以避免動(dòng)脈插管對(duì)頸動(dòng)脈竇的機(jī)械 刺激。動(dòng)脈插管內(nèi)預(yù)先充滿 0.2%的肝素 , 排除懸浮氣泡。動(dòng)脈插管通過(guò)三通裝 置與注射器和壓力傳感器相聯(lián) , 注射器內(nèi)留置 2 mL 0.2%的肝素 , 動(dòng)脈血管堵 塞時(shí)少量推注。靜脈插管直接與注射器相

14、連 , 以備靜脈用藥。1.5 胃內(nèi)壓記錄手術(shù) 動(dòng)物仰臥 , 上腹部剃除毛 , 于劍突下腹正中矢狀線偏左側(cè) 5 mm一字切口切開腹腔 , 以溫和的生理鹽水紗布推開肝臟暴露胃幽門部及十二指腸上 段。將避孕套套在塑料導(dǎo)管一端 , 導(dǎo)管前端與避孕套之間留有一定空隙 , 在距離 避孕套前端 1 mm 處用外科線結(jié)扎將兩者固定,制成直徑為 20 mm 勺胃內(nèi)留置 氣囊。胃囊內(nèi)及插管內(nèi)充滿雙蒸水，排除氣泡。在十二指腸距胃竇部 1.5 2 mn#,避開腸壁上可見的血管,在腸系膜的對(duì)側(cè)做一個(gè) 23 mn 左右的一字 型切口 , 將氣囊放入胃竇部 , 切口處荷包縫合固定。插管另一端通過(guò)三通裝置與 注射器和壓力傳感

15、器相連。 1.6 孤束核神經(jīng)元細(xì)胞外記錄 在記錄孤束核的實(shí)驗(yàn)中 , 根據(jù)大鼠腦立體定位圖譜 , 通過(guò)微電極操縱器控制微電極推進(jìn) 器 , 將玻璃微電極由顱骨孔經(jīng)小腦插入孤束核 , 探查記錄神經(jīng)元放電。玻璃微電 極參數(shù)選用外徑 1.5 mm 內(nèi)徑 1.2 mm 尖端 11.5 卩 m,阻抗 1020 MQ。 當(dāng)誘發(fā)或自發(fā)的神經(jīng)元放電信號(hào)出現(xiàn)時(shí) , 上下調(diào)節(jié)推進(jìn)器位置至信噪比較大 , 停 止推進(jìn) , 使電極尖端停留在放電神經(jīng)元處 , 待其放電穩(wěn)定后開始記錄。神經(jīng)元放 電信號(hào)經(jīng)微電極放大器、 Vc-l0生物物理放大器 （AVB-10） 二級(jí)放大后顯示在示 波器上,并輸入 PowerLab 計(jì)算機(jī)數(shù)據(jù)采

16、集系統(tǒng)。免費(fèi)論文下載中心 http:/1.7 血壓記錄 手術(shù)后連續(xù)記錄30 min 動(dòng)脈血壓 , 待動(dòng)物血壓平穩(wěn)、波動(dòng)小于 5%范圍的情況下開始實(shí)驗(yàn)。動(dòng)物 頸總動(dòng)脈血壓由動(dòng)脈插管經(jīng)三通裝置輸入壓力換能器 , 將液體壓力信號(hào)轉(zhuǎn)變?yōu)殡?信號(hào),經(jīng)載波放大器放大，輸入 PowerLab 計(jì)算機(jī)數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)。管道堵塞時(shí)經(jīng)三 通裝置推注少量 0.2%肝素。1.8 胃內(nèi)壓記錄 手術(shù)后連續(xù)記錄30 min 胃內(nèi)壓 , 待動(dòng)物胃蠕動(dòng)波穩(wěn)定后開始實(shí)驗(yàn)。記錄不到基礎(chǔ)蠕動(dòng)波時(shí)通過(guò) 注射器經(jīng)三通裝置調(diào)節(jié)胃內(nèi)水囊大小。胃內(nèi)壓由插管經(jīng)三通裝置輸入壓力換能 器,將液體壓力信號(hào)轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘?hào)，經(jīng)生物放大器放大后，輸入 Power

17、Lab 計(jì)算機(jī) 數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)。1.9 實(shí)驗(yàn)程序 出現(xiàn)神經(jīng)元放電信號(hào)時(shí) , 上下調(diào)節(jié)推進(jìn)器位置至信噪比較大 , 停止推進(jìn)。完整的神經(jīng)元放電記錄的程序?yàn)椋河涗?15 s 背景放電后 , 進(jìn)行針刺程序 , 刺激時(shí)間為 30 s, 刺激停止后再記錄 15 s 背景。 針刺下肢“足三里”穴觀察對(duì)孤束核神經(jīng)元放電、血壓、胃運(yùn)動(dòng)的影響, 針刺自始至終由同一個(gè)人操作 , 采用平補(bǔ)平瀉手法 , 垂直進(jìn)針 , 均勻地提插 捻轉(zhuǎn) ,順時(shí)針捻針時(shí)插入 , 逆時(shí)針捻轉(zhuǎn)時(shí)提出 , 手法平和 , 不輕不重 , 頻率不快不 慢。正常大鼠的實(shí)驗(yàn)程序結(jié)束后 , 靜脈推注 0.01%的阿托品 （0.18 mg/kg 體重） 或 0

18、.1%的胃復(fù)安 （1.8 mg/kg 體重）, 待藥物引起的血壓波動(dòng)及胃基礎(chǔ)波動(dòng)恢復(fù) 平穩(wěn), 重復(fù)上述針刺“足三里”程序 , 繼續(xù)記錄神經(jīng)元放電、血壓和胃內(nèi)壓的變 化。 1.10 記錄部位的組織學(xué)定位 單細(xì)胞記錄結(jié)束后 , 用刺激器通過(guò)隔離器經(jīng)微電極放大器向玻璃微電極通以20 卩 A 的逆向直流電，將玻璃微電極內(nèi)的醋酸滂胺天蘭電極液導(dǎo)入腦組織以記錄位置。留取動(dòng)物心臟灌流固定 , 取 腦組織冰凍切片 , 做中型紅染色觀察 , 參考大鼠腦定位圖譜確認(rèn)記錄電極所在的 位置 , 將記錄部位在孤束核以外的數(shù)據(jù)刪去不用。1.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法PowerLab 計(jì)算機(jī)數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)及 Chart5.0 for

19、Win dows 分析軟件進(jìn)行數(shù)據(jù) 整理分析,數(shù)據(jù)采用 SPSS13.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理。觀察正常生理狀態(tài)下和靜脈 注射阿托品或胃復(fù)安后針刺大鼠“足三里”對(duì)孤束核神經(jīng)元放電、胃內(nèi)壓的影 響。神經(jīng)元對(duì)刺激的反應(yīng)有三種情形：興奮、抑制和無(wú)反應(yīng) , 刺激后頻率變化增 加 15%為興奮 , 頻率變化減少 15%為抑制 , 頻率變化在 15%內(nèi)為無(wú)反應(yīng)。各組針刺 前、針刺后及差值 （針刺前針刺后 ） 做描述性統(tǒng)計(jì)表示為 xs, 針刺前后數(shù)值 做配對(duì) t 檢驗(yàn), 以觀察針刺對(duì)孤束核神經(jīng)元放電、胃內(nèi)壓的影響。用藥前后相應(yīng) 組做針刺前后數(shù)值配對(duì) t 檢驗(yàn), 觀察藥物對(duì)針刺效應(yīng)的影響。各統(tǒng)計(jì)均以P0.05 為

20、有顯著性差異標(biāo)準(zhǔn)。 2 結(jié)果 ( 見表 1、圖 1、圖 2)表 1 針刺“足三里”對(duì)不同狀態(tài)下大鼠孤束核神經(jīng)元放電及胃內(nèi)壓的影響 (略)注：與針刺前比較 ,*P0.05,*P0.01 。 3 討論 “足三 里”屬足陽(yáng)明經(jīng)脈 , 四總穴歌記載“肚腹三里留” , 一直是古代醫(yī)家和現(xiàn)代臨床 針灸醫(yī)生治療胃腸疾病的首選穴 , 具有健脾和胃、扶正培氣、通經(jīng)活絡(luò)、開降氣 機(jī)的功效 , 對(duì)胃功能障礙有顯著的調(diào)整和治療作用。針刺“足三里”可同時(shí)影響 中樞及周圍腦腸肽的變化 , 共同參與對(duì)胃腸功能的調(diào)整作用3-4 。 本實(shí)驗(yàn) 研究在正常生理狀態(tài)下及經(jīng)血管注射抑制胃運(yùn)動(dòng)的藥物阿托品或促進(jìn)胃運(yùn)動(dòng)的 藥物胃復(fù)安后 , 針刺調(diào)節(jié)胃運(yùn)動(dòng)的穴位“足三里”對(duì)中樞核團(tuán)孤束核神經(jīng)元放電 及胃內(nèi)壓的影響。研究結(jié)果表明 , 在正常生理狀態(tài)下 , 針刺“足三里”有效激活 了孤束核神經(jīng)元放電 , 并明顯促進(jìn)胃運(yùn)動(dòng)。靜脈注射阿托品后 , 孤束核神經(jīng)元背 景放電減少 , 但針刺對(duì)放電的影響與藥物前相比 , 變化不大 , 阿托品后針刺“足三 里”仍有效激活了孤束核神經(jīng)元放