菌種的接種及菌懸液制備操作程序

1、-作者xxxx-日期xxxx菌種的接種及菌懸液制備操作程序【精品文檔】菌種的接種及菌懸液制備操作程序一、 菌種的接種：1、 菌種的復(fù)蘇：1.1把凍干菌種管、滅菌1ml毛細(xì)滴管、雙碟、鑷子、營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、營養(yǎng)瓊脂斜面數(shù)支，移入接種室或超凈工作臺。1.2將凍干菌種管外壁用碘酒擦洗消毒、稍干，用75%乙醇棉擦凈，放在滅菌雙碟內(nèi)，待干。點燃酒精燈，將菌種管的封口一端在火焰上，燒灼紅熱，用滅菌毛細(xì)滴管吸取營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，滴在灼熱的菌種管封口一端，使冷而炸裂。1.3取滅菌鑷子，在火焰旁，將炸裂的管口打開，放入滅菌雙碟內(nèi)，另取一支滅菌毛細(xì)滴管，在火焰旁吸取營養(yǎng)肉湯少許，加至菌種管底部，將凍干菌塊攪動促使溶

2、解，隨即吸出管內(nèi)菌液，分別接種至營養(yǎng)瓊脂斜面置3537培養(yǎng)2224小時。1.4取出培養(yǎng)物，仔細(xì)觀察菌苔形態(tài)、有無雜菌、涂片、革蘭氏染色鏡檢，呈典型菌落后，轉(zhuǎn)種3代即可應(yīng)用。如發(fā)現(xiàn)菌形不典型，可進(jìn)行平板分離單菌落。2、菌種的接種：2.1準(zhǔn)備需用的培養(yǎng)基，培養(yǎng)基應(yīng)新鮮制備，如斜面已無冷凝水者，不宜再使用。標(biāo)簽上注明菌名及接種日期。自冰箱取出的菌種斜面，應(yīng)在室溫放置約30分鐘，待溫度平衡后再移入接種室或超凈工作臺。2.2點燃酒精或其他燈，在左手握住菌種斜面，將管口靠近火焰旁，右手拿接種棒后端，將接種環(huán)燒紅30分鐘，隨后將全部接種棒金屬部分在火焰上燒灼，往返通過3次。右手用無名指、小指及掌部夾住棉塞，

3、左手將管口在火焰上旋轉(zhuǎn)燒灼，右手再輕輕撥開棉塞，將接種環(huán)伸入管內(nèi)先在近壁的瓊脂斜面上靠一下，稍冷卻再移至菌苔上，刮取少量菌苔，隨即取出接種棒，并將菌種管品移至火焰旁。堵上棉塞，左手將菌種管放下，取營養(yǎng)瓊脂斜面1支，照上述操作打開棉塞，將接種環(huán)伸入管內(nèi)至瓊脂斜面的底部，由底向上，將接種環(huán)輕貼斜面的表面曲折移動，使細(xì)菌劃在斜面的表面上。2.3取出接種棒，在火焰旁將培養(yǎng)基管棉塞堵上，然后將接種過細(xì)菌的接種棒在火焰上燒灼滅菌。2.4將已接種畢的細(xì)菌管置3537培養(yǎng)2224小時，霉菌管一般置2425霉菌培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)7日。二、 菌懸液的制備：1、短小芽孢桿菌懸液取短小芽孢桿菌工作用菌種營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物加滅菌水12ml將菌苔洗下，制成懸液，用吸管將此懸液種至盛有營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的扁培養(yǎng)瓶內(nèi)，均勻攤布。在3537培養(yǎng)7日。取菌苔少許涂片，革蘭氏染色鏡檢，應(yīng)有芽孢85%以上，用滅菌水10ml將芽孢洗下，制成芽孢懸液，合并至滅菌大試管內(nèi)，在7075水浴內(nèi)加熱30分鐘將菌體殺死，待冷后冰箱貯藏為濃菌液。2、大腸桿菌懸液取大腸桿菌工作用菌種的營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物，用接種環(huán)取菌苔少許接種至營養(yǎng)瓊脂斜面上，在3537培養(yǎng)2022小時，臨用時，取大腸桿菌的營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物少許，接種至5ml營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基內(nèi)，制成懸液，在36±1培養(yǎng)1824h后使用。此菌液只