實驗二細菌單染與復(fù)染

1、實驗二實驗二 細菌細菌簡單簡單染色染色法法 革蘭氏革蘭氏染色法染色法一、目的要求一、目的要求n1鞏固油鏡的使用方法；鞏固油鏡的使用方法；n2學(xué)習(xí)微生物涂片、染色基本技術(shù)，掌握細學(xué)習(xí)微生物涂片、染色基本技術(shù)，掌握細菌的簡單染色法；菌的簡單染色法；n3學(xué)習(xí)、掌握細菌的革蘭氏染色法；學(xué)習(xí)、掌握細菌的革蘭氏染色法；n4建立建立“無菌操作無菌操作”的概念，學(xué)習(xí)其技術(shù)。的概念，學(xué)習(xí)其技術(shù)。二、實驗原理二、實驗原理n簡單染色法：是利用單一染料對細菌進行簡單染色法：是利用單一染料對細菌進行染色的方法，常用堿性染料。染色的方法，常用堿性染料。只能觀察微只能觀察微生物的大小、形狀、和細胞排列狀況，但生物的大小、形

2、狀、和細胞排列狀況，但不能鑒別微生物以及它的特殊構(gòu)造等。不能鑒別微生物以及它的特殊構(gòu)造等。n復(fù)染色法：復(fù)染色法：用兩種或兩種以上染色液進行用兩種或兩種以上染色液進行染色，有協(xié)助鑒別微生物的作用，故也稱染色，有協(xié)助鑒別微生物的作用，故也稱鑒別染色法。常用的有：鑒別染色法。常用的有：革蘭氏染色法革蘭氏染色法、抗酸染色法、芽孢染色法、抗酸染色法、芽孢染色法、鞭毛染色法等。鞭毛染色法等。革蘭氏染色革蘭氏染色n丹麥c.gram創(chuàng)立，用于細菌分類學(xué)研究n細菌細胞壁的結(jié)構(gòu)ng肽聚糖層較薄，交聯(lián)度低，含較多脂質(zhì)，肽聚糖層較薄，交聯(lián)度低，含較多脂質(zhì)，故用乙醇等有機溶劑脫色時融解了類脂質(zhì)，故用乙醇等有機溶劑脫色時

3、融解了類脂質(zhì)，增加了細胞的通透性，使初染的結(jié)晶紫和增加了細胞的通透性，使初染的結(jié)晶紫和碘的復(fù)合物易于滲出，經(jīng)沙黃復(fù)染呈紅色。碘的復(fù)合物易于滲出，經(jīng)沙黃復(fù)染呈紅色。ng細胞壁結(jié)構(gòu)致密，用脫色劑處理后，肽細胞壁結(jié)構(gòu)致密，用脫色劑處理后，肽聚糖層孔徑縮小，通透性降低，故細菌仍聚糖層孔徑縮小，通透性降低，故細菌仍保留初染時的紫色。保留初染時的紫色。三、實驗材料三、實驗材料n變形桿菌、表皮葡萄球菌變形桿菌、表皮葡萄球菌n載玻片、接種環(huán)、酒精燈載玻片、接種環(huán)、酒精燈、香柏油、二甲、香柏油、二甲苯、擦鏡紙、吸水紙等。苯、擦鏡紙、吸水紙等。n革蘭氏染色液一套革蘭氏染色液一套四、實驗步驟四、實驗步驟1簡單染色簡

4、單染色 載玻片載玻片中心加半滴水中心加半滴水無菌操作無菌操作取菌取菌涂布于涂布于水中使均勻并成薄膜狀水中使均勻并成薄膜狀干燥干燥火焰固定火焰固定染色染色（12min）水洗水洗干燥干燥鏡檢鏡檢2. .革蘭氏（革蘭氏（gram）染色）染色 涂片涂片干燥干燥固定固定結(jié)晶紫初染結(jié)晶紫初染（12min） 水洗水洗碘液碘液媒染媒染1min水洗水洗95%酒精酒精脫色脫色（約（約2030秒）秒）立即立即水洗水洗番紅番紅復(fù)染復(fù)染約約2分鐘分鐘水洗水洗干燥干燥鏡檢鏡檢 （混合涂片染色）（混合涂片染色）left: 單菌染色結(jié)果(g+或 g-)right: 混合菌染色結(jié)果(g+和 g-)細菌細胞結(jié)構(gòu)革蘭氏染色結(jié)果及細菌分類革蘭氏染色陰性五、實驗結(jié)果n文字記錄所觀察到的革蘭氏染色文字記錄所觀察到的革蘭氏染色結(jié)果的差別，判斷是結(jié)果的差別，判斷是g/ g。n繪圖描述各菌形態(tài)（可在一個視繪圖描述各菌形態(tài)（可在一個視野中）。野中）。六、問題與討論六、問題與討論n1革蘭氏染色涂片為何不宜太濃厚？革蘭氏染色涂片為何不宜太濃厚？