沉降菌監(jiān)測規(guī)程

1、 沉降菌監(jiān)測規(guī)程一、目的建立沉降菌監(jiān)測方法，規(guī)范沉降菌監(jiān)測操作。二、范圍適用于西廠區(qū)車間潔凈室、無菌檢查室、陽性室、洗衣房、取樣間、微生物室的沉降菌監(jiān)測。三、職責(zé)檢驗中心人員負責(zé)車間潔凈室、洗衣房、取樣間的采樣工作；負責(zé)各部分所需的材料準(zhǔn)備、培養(yǎng)、菌落計數(shù)，以及無菌檢查室、陽性室、微生物室監(jiān)測的采樣內(nèi)容的執(zhí)行。質(zhì)量中心負責(zé)人負責(zé)本規(guī)程執(zhí)行情況的監(jiān)督檢查。四、內(nèi)容：1.儀器與用具1.1 培養(yǎng)皿（90mm）1.2 恒溫培養(yǎng)箱1.3 高壓蒸汽滅菌鍋2.監(jiān)測程序2.1 將已準(zhǔn)備好的合格的空白培養(yǎng)皿放入物料緩沖間。2.2 檢測人員按人員進入潔凈區(qū)的要求穿好潔凈服，戴好口罩進入潔凈室。2.3 按此沉降菌監(jiān)

2、測規(guī)程（西廠區(qū)）對環(huán)境進行監(jiān)測。3.測試規(guī)則3.1測試條件3.1.1溫度和相對濕度沉降菌測試前，被測試潔凈室（區(qū)）的溫度和相對濕度應(yīng)與生產(chǎn)工藝等要求相適應(yīng)（溫度控制在1826，相對濕度控制在45%65%之間）。3.1.2壓差沉降菌測試前，潔凈區(qū)與非潔凈區(qū)之間、不同級別潔凈室（區(qū)）之間的壓差應(yīng)當(dāng)不低于10帕斯卡，空氣潔凈度級別要求高的潔凈室（區(qū)）對相鄰的空氣潔凈級別低的潔凈室（區(qū)）一般要求相對正壓。3.1.3換氣次數(shù)、空氣流速潔 凈 級 別換 氣 次 數(shù)（風(fēng) 速）A級0.36-0.54m/sC 級25次/hD級15次/h3.2測試狀態(tài)靜態(tài)測試：靜態(tài)測試時，室內(nèi)測試人員不得多于2人。動態(tài)測試：潔凈

3、室（區(qū)）已處于正常生產(chǎn)狀態(tài)下進行的測試。測試狀態(tài)有靜態(tài)和動態(tài)兩種，測試狀態(tài)的選擇必須符合生產(chǎn)的要求，并在報告中注明測試狀態(tài)。（在正常的生產(chǎn)操作監(jiān)測外，可在系統(tǒng)驗證、清潔或消毒等操作完成后增加微生物監(jiān)測。）3.3測試時間3.3.1對單向流，如C級背景下的局部A級凈化房間及層流工作臺，測試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運行不少于10min后開始。3.3.2 對非單向流，如C級、D級以上的凈化房間，測試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運行不少于30min后開始。3.4測試方法采用沉降法，即通過自然沉降原理收集在空氣中的生物粒子于培養(yǎng)基平皿，經(jīng)若干時間，在適宜的條件下讓其繁殖到可見的菌落進行計數(shù)，以平板培養(yǎng)皿中的菌落數(shù)來判

4、定潔凈環(huán)境內(nèi)的活微生物數(shù)，并以此來評定潔凈室（區(qū)）的潔凈度。3.4.1采樣方法靜態(tài)：將已制備好的培養(yǎng)皿按4項的要求及采樣點平面圖逐個放置，然后從里到外逐個打開培養(yǎng)皿蓋，使培養(yǎng)基表面暴露在空氣中0.5h后，再將培養(yǎng)皿蓋蓋上。動態(tài)：將已制備好的培養(yǎng)皿按4項的要求及采樣點平面圖逐個放置，然后從里到外逐個打開培養(yǎng)皿蓋，使培養(yǎng)基表面暴露在空氣中4h后，再將培養(yǎng)皿蓋蓋上。動態(tài)取樣應(yīng)當(dāng)避免對潔凈區(qū)造成不良影響。3.4.2培養(yǎng)3.4.2.1全部采樣結(jié)束后,將培養(yǎng)皿倒置于3035恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時間不少于72h。3.4.2.2用于檢測的培養(yǎng)皿應(yīng)經(jīng)過預(yù)培養(yǎng)合格后使用，為避免運輸過程造成影響，在每次取樣時，取3個

5、培養(yǎng)皿與其他采樣皿同法操作但不暴露采樣，然后與采樣后的培養(yǎng)皿同時培養(yǎng)，結(jié)果應(yīng)無菌生長。3.4.3菌落計數(shù)3.4.3.1用肉眼直接計數(shù)，標(biāo)記或在菌落計數(shù)器上點計，然后用510倍放大鏡檢查是否有遺漏。3.4.3.2若培養(yǎng)皿上有2個或2個以上的菌落重疊，可分辨時仍以2個或2個以上菌落計數(shù)。3.5 測試人員要求測試人員必須穿戴符合環(huán)境潔凈度級別的工作服。靜態(tài)測試時，室內(nèi)測試人員不得多于2人。4.采樣點數(shù)目及布置4.1采樣次數(shù)每個采樣點一般取樣一次。4.2最少采樣點數(shù)目參照表：面 積（m2）潔 凈 度 級 別A級C級D級102322102042220408224010016421002004010320

6、0400802064001604013注：表中的面積，對于單向流潔凈室，是指送風(fēng)面面積。對于非單向流潔凈室是指房間的面積。4.3潔凈區(qū)灌裝間、配制間的沉降菌取樣點監(jiān)測位置根據(jù)沉降菌取樣風(fēng)險評估報告確定。不能確定的點根據(jù)GB/T 16294-2010和2010版GMP附錄要求均勻分布沉降菌的取樣監(jiān)控點，具體分布規(guī)則如下：注： 為采樣點4.4工作區(qū)采樣點的位置離地0.81.5m左右（略高于工作面）?？稍陉P(guān)鍵設(shè)備或關(guān)鍵工作活動范圍處增加采樣點。4.5 最少培養(yǎng)皿數(shù) 滿足最少測點數(shù)的同時，還宜滿足最少培養(yǎng)皿數(shù)。潔凈度級別所需培養(yǎng)皿數(shù)（90mm）（靜態(tài)以沉降0.5h計，動態(tài)以沉降4h計。）A級14C級2

7、D級25.監(jiān)測頻率表1：監(jiān)測頻次一車間二車間三車間六車間無菌室微生物室陽性室取樣間洗衣房周測（動態(tài)）灌裝間A級區(qū)； 灌裝間C級區(qū)；配制間；物料稱量間；男/女二更。灌裝間A級區(qū)；灌裝間C級區(qū)；配制間；物料稱量間；男女二更。灌裝間A級區(qū)；灌裝間C級區(qū)；配制一室；配制二室。灌裝間A級區(qū)；灌裝間C級區(qū)；配制間無菌室所有房間微生物室所有房間陽性室所有房間取樣間所有房間一二車間潔凈洗衣房每三個月動態(tài)測試一次。三車間潔凈洗衣房在生產(chǎn)潔凈區(qū)，故每月動態(tài)測試一次。月測（動態(tài)）潔凈區(qū)所有房間潔凈區(qū)所有房間潔凈區(qū)所有房間潔凈區(qū)所有房間5.1 車間恢復(fù)生產(chǎn)前進行沉降菌監(jiān)測時，對所有潔凈區(qū)房間進行靜態(tài)測試。5.2采樣點

8、見附件,監(jiān)測結(jié)果記錄于相應(yīng)的沉降菌監(jiān)測記錄中，記錄應(yīng)包括：房間溫度、相對濕度、壓差及測試狀態(tài)等項目。6.結(jié)果計算6.1用計數(shù)方法得出各個培養(yǎng)皿的菌落數(shù)。6.2平均菌落數(shù)的計算，見下式：M1+M2+Mn平均菌落數(shù) M = _ n 式中：M 平均菌落數(shù)； M1 1號培養(yǎng)皿菌落數(shù)； M2 2號培養(yǎng)皿菌落數(shù)； Mn n號培養(yǎng)皿菌落數(shù) n 培養(yǎng)皿總數(shù)。 7.結(jié)果評定用平均菌落數(shù)判斷潔凈室（區(qū)）空氣中的微生物。7.1每個測點的平均菌落數(shù)不得超過所選定的評定標(biāo)準(zhǔn)。7.2 若某個測點的平均菌落數(shù)超過評定標(biāo)準(zhǔn)，則必須對此區(qū)域先進行消毒，然后重新連續(xù)采樣兩次，兩次測試結(jié)果均須合格。8.合格標(biāo)準(zhǔn)和糾偏限、警戒限8.

9、1合格標(biāo)準(zhǔn)潔凈級別靜態(tài)（在空氣中暴露0.5h）動態(tài)(在空氣中暴露4h)微生物最大允許數(shù)微生物最大允許數(shù)沉降菌（CFU/皿）沉降菌（CFU/皿）A級11C級350D級10（1）表中各數(shù)值均為平均值。（2）單個沉降碟的暴露時間可以少于4小時，同一位置可使用多個沉降碟連續(xù)進行監(jiān)測,并累積計數(shù)。(即：同一位置多個沉降碟監(jiān)測的時間總和符合要求,靜態(tài)要求：各沉降碟暴露時間總和為0.5h；動態(tài)要求：各沉降碟暴露時間總和為4h。) 8.2 糾偏限和警戒限項目沉降菌糾偏限A級(動態(tài))1cfu/4小時C級(動態(tài))20cfu/4小時（一車間灌裝間為10 cfu/4小時，二車間灌裝間為6cfu/4小時）警戒限C級(動

10、態(tài))一車間灌裝間為8 cfu/4小時，二車間灌裝間為5cfu/4小時9.不合格處理程序若沉降菌檢測不符合要求，檢驗人員將檢測結(jié)果反饋相關(guān)部門進行原因分析并采取必要措施整改，按照偏差處理規(guī)程處理。10.相關(guān)文件 偏差處理規(guī)程（Q/HR GL04010）11.變更歷史版本號變更原因及內(nèi)容執(zhí)行日期修訂人A新文件下發(fā) 2013.03.04姚盛凱B增加微生物室沉降菌監(jiān)測內(nèi)容2013.06.03姚盛凱C增加六車間沉降菌檢測內(nèi)容2013.9.24姚盛凱12.附件附件1：一車間沉降菌采樣點房 間 名 稱房 間面積（m2）位置采樣點數(shù)培養(yǎng)皿數(shù)月測周測C級化驗室1222322原料緩沖間1021122物料暫存間33

11、22物料稱量室10312222包材儲存室1052222氣閘室106722清潔室107722活性炭稱量室1081822清洗室1092922男二更（穿潔凈衣）11412222女二更（穿潔凈衣）11212222配件室121322二更緩沖間115222潔凈走廊1161621010辦公室1358221503線配制室11751投料處411331503線灌封間118105內(nèi)包材暫存處1011門口附近的回風(fēng)口11881504線稀配間12452投料處411331504線濃配間12552投料處411331504線灌封間13190內(nèi)包材暫存處411門口附近的回風(fēng)口11221507線配制間12635投料處211111

12、505/1506線灌封間12724內(nèi)包材暫存處211門口附近的回風(fēng)口111507線灌封間12838內(nèi)包材暫存處211門口附近的回風(fēng)口11辦公室135822A級1503線灌封間11816灌裝頭444口蓋軌道口蓋震蕩筐44口管震蕩筐口管軌道44221504線灌封間13112.1灌裝頭444加藥塞震蕩筐輸液塞震蕩筐44加軟管工位44221505/1506線灌封間1276.29灌裝頭444加藥塞震蕩筐輸液塞震蕩筐44加軟管工位44221507線灌封間12813.77灌裝頭444加藥塞震蕩筐輸液塞震蕩筐44加軟管工位4422陰性對照33為保證碟子數(shù)目及監(jiān)測及時，每次監(jiān)測時碟子多取3個33總計：13210

13、0備注：微生物室采樣點房間名稱面積（m2）采樣點數(shù)培養(yǎng)皿數(shù)C級更衣一室3.2022更衣二室3.5222緩沖間2.8822微生物一室6.9622微生物二室10.2022A級超凈工作臺（一）（微）1.05214超凈工作臺（二）（微）1.05214陰性對照3培養(yǎng)皿總數(shù)41J/HR GC03265 B 一車間沉降菌監(jiān)測記錄(一)日期： 取樣人： 培養(yǎng)基批號： 培養(yǎng)箱編號： 放置時間： 取出時間 ： 監(jiān)測項目取樣區(qū)（點）位置編號結(jié)果觀察取樣時間監(jiān)測結(jié)果合格標(biāo)準(zhǔn)房間溫濕度、壓差1d2d3dA級沉降菌1181503線灌封間灌裝頭靜態(tài)：1CFU/皿動態(tài)：1CFU/皿（90mm）-口管震蕩筐 口管軌道口蓋震蕩筐

14、 口蓋軌道 1311504線灌封間灌裝頭-加藥塞震蕩筐輸液塞震蕩筐加軟管工位 1271505/1506線灌封間灌裝頭-加藥塞震蕩筐輸液塞震蕩筐加軟管工位 1281507線灌封間灌裝頭-加藥塞震蕩筐輸液塞震蕩筐加軟管工位 無菌室沉降菌監(jiān)測記錄取樣日期： 取樣人： 培養(yǎng)基批號： 培養(yǎng)箱編號： 放置時間： 取出時間：監(jiān)測項目取樣區(qū)（點）編號結(jié)果觀察取樣時間監(jiān)測結(jié)果合格標(biāo)準(zhǔn)房間溫濕度、相對壓差1d2d3dA級超凈工作臺（一）（微）1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14靜態(tài)：1CFU/皿動態(tài)：1CFU/皿（90mm） -超凈工作臺（二）（微）15 16 17 18 19 20

15、21 22 23 24 25 26 27 28 -超凈工作臺（一）（無）29 30 31 32 33 34 3536 37 38 39 40 41 42 -超凈工作臺（二）（無）43 44 45 46 47 48 4950 51 52 53 54 55 56 -超凈工作臺（三）（無）57 58 59 60 61 62 6364 65 66 67 68 69 70 -超凈工作臺（四）（無）71 72 73 74 75 76 7778 79 80 81 82 83 84 -C級微生物一室85 86靜態(tài)：3CFU/皿動態(tài)：50CFU/皿（90mm）微生物二室87 88無菌一室89 90無菌二室91 92無菌三室93 94無菌四室95 96緩沖二97 98緩沖二（無菌室）99 100D級緩沖一101 102靜態(tài)：10CFU/皿陰性對照陰性-1 陰性-2 陰性-3無菌生長測試狀態(tài)：靜態(tài)0.5h 動態(tài)4h 監(jiān)測時間： 結(jié)束時間：監(jiān)測人： 復(fù)核人： 日期：結(jié)論： 評價人： 日期： 微生物室沉降菌監(jiān)測記錄取樣日期： 取樣人： 培養(yǎng)基批號： 培養(yǎng)箱編號： 放置時間： 取出時間監(jiān)測項目取樣區(qū)（點）編號結(jié)果觀察取樣時間監(jiān)測結(jié)果合格標(biāo)準(zhǔn)房間溫濕度、相對壓差1d2d3dA級超凈工作臺（一）（微）1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 1