第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法

1、第三章第三章 細(xì)胞生物學(xué)研究方法細(xì)胞生物學(xué)研究方法chapter 3 methods and techniques in cell biology preparatory observe put forward theoretics design control testscollect data explain results devise conclusionrefer to knowledge 生物學(xué)研究一般規(guī)律生物學(xué)研究一般規(guī)律outline第三節(jié)第三節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)及細(xì)胞工程細(xì)胞培養(yǎng)及細(xì)胞工程 一、動(dòng)物細(xì)胞的分離及培養(yǎng)一、動(dòng)物細(xì)胞的分離及培養(yǎng) 二、植物細(xì)胞的培養(yǎng)二、植物細(xì)胞的培養(yǎng) 三、細(xì)

2、胞工程三、細(xì)胞工程 （一）細(xì)胞融合與細(xì)胞雜交技術(shù)（一）細(xì)胞融合與細(xì)胞雜交技術(shù) （二）單克隆抗體技術(shù)（二）單克隆抗體技術(shù) （三）細(xì)胞顯微技術(shù)（三）細(xì)胞顯微技術(shù)第四節(jié)第四節(jié) 模式生物模式生物第一節(jié)第一節(jié) 形態(tài)學(xué)研究方法形態(tài)學(xué)研究方法 一、光學(xué)顯微鏡技術(shù)一、光學(xué)顯微鏡技術(shù) 二、電子顯微鏡技術(shù)二、電子顯微鏡技術(shù) 三、掃描隧道顯微鏡技術(shù)三、掃描隧道顯微鏡技術(shù)第二節(jié)第二節(jié) 細(xì)胞組分的分析方法細(xì)胞組分的分析方法 一、細(xì)胞組分的分離一、細(xì)胞組分的分離 二、細(xì)胞組分的化學(xué)染色二、細(xì)胞組分的化學(xué)染色 三、放射自顯影技術(shù)三、放射自顯影技術(shù) 四、顯微分光光度技術(shù)四、顯微分光光度技術(shù) 五、分子雜交技術(shù)五、分子雜交技術(shù)

3、六、流式細(xì)胞技術(shù)六、流式細(xì)胞技術(shù) 七、免疫學(xué)方法對(duì)細(xì)胞組分的分析七、免疫學(xué)方法對(duì)細(xì)胞組分的分析第一節(jié)第一節(jié) 形態(tài)學(xué)研究方法形態(tài)學(xué)研究方法一、光學(xué)顯微鏡技術(shù)一、光學(xué)顯微鏡技術(shù)（一）普通光學(xué)顯微鏡及其標(biāo)本的制備（一）普通光學(xué)顯微鏡及其標(biāo)本的制備（二）熒光顯微鏡及其應(yīng)用（二）熒光顯微鏡及其應(yīng)用（三）掃描激光共聚焦顯微鏡及其應(yīng)用（三）掃描激光共聚焦顯微鏡及其應(yīng)用（四）相差顯微鏡（四）相差顯微鏡（五）暗視場(chǎng)顯微鏡（五）暗視場(chǎng)顯微鏡（六）微分干涉顯微鏡（六）微分干涉顯微鏡（七）熒光能量共振轉(zhuǎn)移技術(shù)（七）熒光能量共振轉(zhuǎn)移技術(shù)（八）熒光漂白恢復(fù)技術(shù)（八）熒光漂白恢復(fù)技術(shù)1 1、構(gòu)成、構(gòu)成照明系統(tǒng)：照明系統(tǒng)：光

4、源光源光學(xué)放大系統(tǒng)：光學(xué)放大系統(tǒng)：物鏡、目鏡、聚光器和物鏡、目鏡、聚光器和光闌光闌機(jī)械裝置：機(jī)械裝置：鏡筒、鏡筒、物鏡轉(zhuǎn)換器、鏡臂鏡座、物鏡轉(zhuǎn)換器、鏡臂鏡座、 載物臺(tái)、調(diào)焦螺旋載物臺(tái)、調(diào)焦螺旋olympus顯微鏡的結(jié)構(gòu)圖顯微鏡的結(jié)構(gòu)圖（一）普通光學(xué)顯微鏡（一）普通光學(xué)顯微鏡2、原理、原理：經(jīng)物鏡形成倒立實(shí)像，經(jīng)目鏡進(jìn)一經(jīng)物鏡形成倒立實(shí)像，經(jīng)目鏡進(jìn)一步放大成像。步放大成像。光學(xué)顯微鏡的放大原理和光路圖光學(xué)顯微鏡的放大原理和光路圖普通光學(xué)顯微鏡光路圖普通光學(xué)顯微鏡光路圖3、主要的性能參數(shù)、主要的性能參數(shù)（2 2）孔徑角）孔徑角：由標(biāo)本上一點(diǎn)發(fā)出的進(jìn)入物鏡最邊緣光線由標(biāo)本上一點(diǎn)發(fā)出的進(jìn)入物鏡最邊緣光

5、線l l和進(jìn)入物鏡和進(jìn)入物鏡中心光線中心光線oaoa之間的夾角之間的夾角 /2/2稱為孔徑角。稱為孔徑角。（3 3）數(shù)值孔徑：）數(shù)值孔徑：令令n na = nsina = nsin ( ( /2/2) ), , 叫物鏡的數(shù)值孔徑。叫物鏡的數(shù)值孔徑。 數(shù)值孔徑與顯微鏡的分辨率有密切關(guān)系，數(shù)值孔徑與顯微鏡的分辨率有密切關(guān)系， 越短，越短，n n a a越大，越大，分辨率分辨率越高。越高。（1 1）分辨率：分辨率：顯微鏡能分辨的最小距離，用顯微鏡能分辨的最小距離，用d d表示。顯微鏡的鑒別距表示。顯微鏡的鑒別距離越小，分辨率越高。離越小，分辨率越高。 d=0.61/ nsind=0.61/ nsin

6、 ( ( /2/2) ) d d：分辨率：分辨率 :光波的波長光波的波長 n:n:介質(zhì)折射率介質(zhì)折射率 :物鏡鏡口角物鏡鏡口角( (標(biāo)本在光軸的一標(biāo)本在光軸的一 點(diǎn)對(duì)于物鏡鏡口的張角點(diǎn)對(duì)于物鏡鏡口的張角) ) sin/2sin/2的最大值必然小于的最大值必然小于1 1；介質(zhì)為空氣，鏡口率一般；介質(zhì)為空氣，鏡口率一般為為0.050.050.950.95；油鏡頭用香柏油為介質(zhì)，鏡口率可接近；油鏡頭用香柏油為介質(zhì)，鏡口率可接近1.51.5。 普通光線的波長為普通光線的波長為400 400 700nm700nm，分辨力數(shù)值不會(huì)小于，分辨力數(shù)值不會(huì)小于0.2m0.2m，人眼的分辨力為，人眼的分辨力為0.

7、2mm,0.2mm,因此顯微鏡的最大設(shè)計(jì)倍數(shù)因此顯微鏡的最大設(shè)計(jì)倍數(shù)為為1000x1000x。 制作光學(xué)鏡頭所用的玻璃折射率為制作光學(xué)鏡頭所用的玻璃折射率為1.65 1.65 1.781.78，所用，所用介質(zhì)的折射率越接近玻璃的越好。介質(zhì)的折射率越接近玻璃的越好。幾種介質(zhì)的折射率幾種介質(zhì)的折射率4、顯微鏡的幾個(gè)光學(xué)特點(diǎn)、顯微鏡的幾個(gè)光學(xué)特點(diǎn)5、觀察標(biāo)本的制備：、觀察標(biāo)本的制備：復(fù)水復(fù)水染色染色脫水脫水透明透明封片封片觀察觀察取材取材固定固定脫水脫水包埋包埋切片切片脫蠟脫蠟可見光可見光紫外光紫外光紅外光紅外光shortlong （二）熒光顯微鏡（二）熒光顯微鏡 (fluorescence mic

8、roscope)1. 1. 原理原理: : 熒光分子在受到光照射后，可吸收特定波長的熒光分子在受到光照射后，可吸收特定波長的短波光線，并發(fā)射出比原來吸收波長更長的光。短波光線，并發(fā)射出比原來吸收波長更長的光。2.2.基本構(gòu)造：基本構(gòu)造： a a 光源光源 b b 二向色鏡：反射短波光線，透過長波光線二向色鏡：反射短波光線，透過長波光線 c c 一組濾光片：得到純的激發(fā)光和發(fā)射光一組濾光片：得到純的激發(fā)光和發(fā)射光 熒光顯微鏡光路圖熒光顯微鏡光路圖3. 熒光的觀察熒光的觀察:1. 某些天然物質(zhì)本身能發(fā)出熒光，如葉綠某些天然物質(zhì)本身能發(fā)出熒光，如葉綠素。素。2.二次熒光二次熒光綠色熒光蛋白綠色熒光蛋

9、白圖示：圖示：鼠主動(dòng)脈平滑肌鼠主動(dòng)脈平滑肌的熒光染色。的熒光染色。核核:blue:blue線粒體線粒體:green:green肌動(dòng)蛋白肌動(dòng)蛋白:red:red 200ng/ml adm 處理處理bnl-cl2后細(xì)胞微絲骨架的熒光觀察后細(xì)胞微絲骨架的熒光觀察對(duì)照組對(duì)照組發(fā)光原理發(fā)光原理: : 藍(lán)色光藍(lán)色光 gfp gfp 綠色熒光綠色熒光特點(diǎn)特點(diǎn): : 可在光鏡水平，對(duì)特異蛋白質(zhì)等生物大可在光鏡水平，對(duì)特異蛋白質(zhì)等生物大分子進(jìn)行定位及顯示一些細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)。分子進(jìn)行定位及顯示一些細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)。應(yīng)用應(yīng)用: : a a. .特異蛋白質(zhì)等大分子的定位特異蛋白質(zhì)等大分子的定位 b b. .觀察過氧化物酶體

10、觀察過氧化物酶體載體載體(gfp(gfp基因待定位蛋白基因基因待定位蛋白基因) ) 導(dǎo)入特定的細(xì)胞導(dǎo)入特定的細(xì)胞 熒光顯微鏡下觀察熒光顯微鏡下觀察 待定蛋白質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)的位置分布待定蛋白質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)的位置分布特異蛋白質(zhì)生物大分子定位特異蛋白質(zhì)生物大分子定位觀察過氧化物酶體觀察過氧化物酶體 gfp gfp 過氧化物體內(nèi)的酶（有定位信號(hào)）過氧化物體內(nèi)的酶（有定位信號(hào)）導(dǎo)入不同細(xì)胞導(dǎo)入不同細(xì)胞 熒光顯微鏡下觀察各種細(xì)胞的過氧化物酶體熒光顯微鏡下觀察各種細(xì)胞的過氧化物酶體（三）激光共聚焦掃描顯微鏡（三）激光共聚焦掃描顯微鏡 （laser confocal scanning microscope, lcsm

11、） 顯微ct 激光作掃描光源激光作掃描光源 掃描焦平面上樣品，得樣品切面像掃描焦平面上樣品，得樣品切面像分辨率：因激光束波長較短，光束很細(xì)，所以共分辨率：因激光束波長較短，光束很細(xì)，所以共焦激光掃描顯微鏡有較高的分辨率，約是普通焦激光掃描顯微鏡有較高的分辨率，約是普通光鏡的光鏡的3 3倍。倍。應(yīng)用：應(yīng)用： 觀察細(xì)胞形態(tài)觀察細(xì)胞形態(tài) 統(tǒng)計(jì)光密度來定量細(xì)胞內(nèi)成分統(tǒng)計(jì)光密度來定量細(xì)胞內(nèi)成分 三維重建三維重建（四）相差顯微鏡（四）相差顯微鏡 可用以觀察活細(xì)胞?？捎靡杂^察活細(xì)胞。 波長波長 顏色顏色 振幅振幅 亮度亮度 速度速度 相位相位普通顯微鏡普通顯微鏡: 光通過染色標(biāo)本時(shí)，波長和振幅發(fā)生變化，人光

12、通過染色標(biāo)本時(shí)，波長和振幅發(fā)生變化，人眼才能觀察到。但光通過活細(xì)胞時(shí)，波長和振幅幾眼才能觀察到。但光通過活細(xì)胞時(shí)，波長和振幅幾乎無改變，這就無法用人眼觀察。乎無改變，這就無法用人眼觀察。相差顯微鏡相差顯微鏡 細(xì)胞內(nèi)的各結(jié)構(gòu)可細(xì)胞內(nèi)的各結(jié)構(gòu)可因密度不同因密度不同而產(chǎn)生相位差而產(chǎn)生相位差(即即光程差光程差)，不過人眼無法鑒別這種微小的變化。相差，不過人眼無法鑒別這種微小的變化。相差顯微鏡能夠把這種顯微鏡能夠把這種“相位差相位差”變成變成“振幅差振幅差”，即，即圖像的明暗差。圖像的明暗差。通過致密部分通過致密部分(如細(xì)胞核如細(xì)胞核),速度慢速度慢通過疏松部位通過疏松部位(如細(xì)胞質(zhì)如細(xì)胞質(zhì)),速度快速

13、度快倒置相差顯微鏡倒置相差顯微鏡 載物臺(tái)的上方：載物臺(tái)的上方： 光源光源 長焦距長焦距聚光器聚光器 載物臺(tái)的下方：載物臺(tái)的下方： 物鏡物鏡應(yīng)用：直接對(duì)培養(yǎng)的應(yīng)用：直接對(duì)培養(yǎng)的 細(xì)胞進(jìn)行觀察細(xì)胞進(jìn)行觀察培養(yǎng)中的上皮細(xì)胞培養(yǎng)中的上皮細(xì)胞活細(xì)胞的有絲分裂活細(xì)胞的有絲分裂 在日常生活中，室內(nèi)飛揚(yáng)的微粒塵土是不易被看見的，但在暗的在日常生活中，室內(nèi)飛揚(yáng)的微粒塵土是不易被看見的，但在暗的房間中若有一束從光線從門縫斜射過來，灰塵便粒粒可見了，這是光房間中若有一束從光線從門縫斜射過來，灰塵便粒?？梢娏?，這是光學(xué)上的學(xué)上的丁達(dá)爾現(xiàn)象丁達(dá)爾現(xiàn)象。 制造暗視野顯微鏡的靈感制造暗視野顯微鏡的靈感 （五）暗視野顯微鏡（

14、五）暗視野顯微鏡原理原理: 顯微電影攝影顯微電影攝影 記錄細(xì)胞或細(xì)胞器運(yùn)動(dòng)過程和速度記錄細(xì)胞或細(xì)胞器運(yùn)動(dòng)過程和速度 用顯微電影攝影術(shù)或電視錄像以一定間隔拍攝一次細(xì)胞用顯微電影攝影術(shù)或電視錄像以一定間隔拍攝一次細(xì)胞狀態(tài)，當(dāng)影片或電視錄像以正常速度反映時(shí)，所拍攝的情節(jié)狀態(tài)，當(dāng)影片或電視錄像以正常速度反映時(shí)，所拍攝的情節(jié)就被大大加快了，用這種方法可以準(zhǔn)確地記錄細(xì)胞或細(xì)胞其就被大大加快了，用這種方法可以準(zhǔn)確地記錄細(xì)胞或細(xì)胞其的運(yùn)動(dòng)過程和速度。的運(yùn)動(dòng)過程和速度。（六）微分干涉顯微鏡（六）微分干涉顯微鏡a普通明視場(chǎng)顯微鏡；普通明視場(chǎng)顯微鏡；b相差顯微鏡；相差顯微鏡；c微分干涉顯微鏡微分干涉顯微鏡 微分干涉

15、顯微鏡以微分干涉顯微鏡以平面偏振光為光源平面偏振光為光源。光。光線經(jīng)棱鏡折射后分成兩線經(jīng)棱鏡折射后分成兩束，在不同時(shí)間經(jīng)過樣束，在不同時(shí)間經(jīng)過樣品的相鄰部位，然后在品的相鄰部位，然后在經(jīng)過另一棱鏡將這兩束經(jīng)過另一棱鏡將這兩束光會(huì)合，從而樣品中厚光會(huì)合，從而樣品中厚度上的微小區(qū)別就會(huì)轉(zhuǎn)度上的微小區(qū)別就會(huì)轉(zhuǎn)化成明暗區(qū)別，增加了化成明暗區(qū)別，增加了樣品反差并且極有很強(qiáng)樣品反差并且極有很強(qiáng)立體感，適于研究細(xì)胞立體感，適于研究細(xì)胞中較大的細(xì)胞器。中較大的細(xì)胞器。熒光共振能量轉(zhuǎn)移原理圖熒光共振能量轉(zhuǎn)移原理圖（七）熒光能量共振轉(zhuǎn)移技術(shù)（七）熒光能量共振轉(zhuǎn)移技術(shù)（fret）（八）熒光漂白恢復(fù)技術(shù)（八）熒光漂白

16、恢復(fù)技術(shù)(frap)熒光漂白恢復(fù)技術(shù)原理圖熒光漂白恢復(fù)技術(shù)原理圖二、電子顯微鏡二、電子顯微鏡（一）透射電子顯微鏡（一）透射電子顯微鏡 （ transmission electron microscope, tem）1. 原理原理 以電子束作光源，電磁場(chǎng)作透鏡以電子束作光源，電磁場(chǎng)作透鏡。電子束波長短，且波。電子束波長短，且波長與加速電壓長與加速電壓(通常為通常為50120kv)的平方根成反比。的平方根成反比。由電子照明系統(tǒng)、電磁透鏡成像系統(tǒng)、真空系統(tǒng)、記錄由電子照明系統(tǒng)、電磁透鏡成像系統(tǒng)、真空系統(tǒng)、記錄系統(tǒng)、電源系統(tǒng)等系統(tǒng)、電源系統(tǒng)等5部分構(gòu)成。部分構(gòu)成。分辨力分辨力0.2nm，放大倍數(shù)可達(dá)百

17、萬倍。，放大倍數(shù)可達(dá)百萬倍。用于觀察超微結(jié)構(gòu)（用于觀察超微結(jié)構(gòu)（ultrastructure），即小于），即小于0.2m、光、光學(xué)顯微鏡下無法看清的結(jié)構(gòu)，學(xué)顯微鏡下無法看清的結(jié)構(gòu)， 又稱亞顯微結(jié)構(gòu)又稱亞顯微結(jié)構(gòu)（submicroscopic structures）。）。透射電鏡透射電鏡光學(xué)顯微鏡光學(xué)顯微鏡 電子束通過標(biāo)本時(shí)，根據(jù)標(biāo)本各部位密度的不同，部分電子發(fā)生散射，電子束通過標(biāo)本時(shí)，根據(jù)標(biāo)本各部位密度的不同，部分電子發(fā)生散射，只有剩余的電子成像，經(jīng)物鏡和投射鏡放大后投射到照相底片或熒屏上。只有剩余的電子成像，經(jīng)物鏡和投射鏡放大后投射到照相底片或熒屏上。 由于散射的電子不參加成像，故標(biāo)本中密度

18、大的部分成像后形成電子由于散射的電子不參加成像，故標(biāo)本中密度大的部分成像后形成電子流量減少的暗區(qū)；相反密度小的部分散射電子少而形成明區(qū)。流量減少的暗區(qū)；相反密度小的部分散射電子少而形成明區(qū)。2. 透射電鏡生物標(biāo)本制作：透射電鏡生物標(biāo)本制作：3 3、透射電鏡提高樣品反差的方法、透射電鏡提高樣品反差的方法 原理：原理：用只用只比樣品密度高的物質(zhì)比樣品密度高的物質(zhì)(如如磷鎢酸磷鎢酸)對(duì)樣品進(jìn)行染色，對(duì)樣品進(jìn)行染色，。 應(yīng)用：應(yīng)用：適用于顆?；蚶w維適用于顆?；蚶w維等游離的樣品。特別是在病毒等游離的樣品。特別是在病毒性致病因子的超微病理診斷中性致病因子的超微病理診斷中廣泛應(yīng)用。廣泛應(yīng)用。（1）負(fù)染技術(shù)）

19、負(fù)染技術(shù)冰凍蝕刻冰凍蝕刻freeze-etchingfreeze-etching 標(biāo)本置于干冰或液氮中冰標(biāo)本置于干冰或液氮中冰凍。然后斷開，升溫后，冰凍。然后斷開，升溫后，冰升華，暴露出了斷面結(jié)構(gòu)。升華，暴露出了斷面結(jié)構(gòu)。向斷裂面上噴涂一層蒸汽碳向斷裂面上噴涂一層蒸汽碳和鉑。然后將組織溶掉，把和鉑。然后將組織溶掉，把碳和鉑的膜剝下來，此膜即碳和鉑的膜剝下來，此膜即為復(fù)膜（為復(fù)膜（replicareplica）。）。4、電鏡三維重建技術(shù)、電鏡三維重建技術(shù)（二）掃描電子顯微鏡（二）掃描電子顯微鏡（ scanning electron microscope，sem）1、掃描電鏡的成像原理、掃描電鏡的

20、成像原理 陰極鎢絲加熱后產(chǎn)生的電子束經(jīng)陰極鎢絲加熱后產(chǎn)生的電子束經(jīng)過柵極和陽極加速和會(huì)聚，再經(jīng)二級(jí)過柵極和陽極加速和會(huì)聚，再經(jīng)二級(jí)聚光鏡及物鏡會(huì)聚形成聚光鏡及物鏡會(huì)聚形成具有一定能量、具有一定能量、一定束流強(qiáng)度和束斑直徑的微細(xì)電子一定束流強(qiáng)度和束斑直徑的微細(xì)電子束；束； 電子束在掃描線圈驅(qū)動(dòng)下，在試樣表面按一定時(shí)間、空間順序作柵電子束在掃描線圈驅(qū)動(dòng)下，在試樣表面按一定時(shí)間、空間順序作柵網(wǎng)式掃描。聚焦電子束與試樣相互作用，產(chǎn)生二次電子發(fā)射。網(wǎng)式掃描。聚焦電子束與試樣相互作用，產(chǎn)生二次電子發(fā)射。二次電子二次電子發(fā)射量隨試樣表面形貌而變化發(fā)射量隨試樣表面形貌而變化； 二次電子信號(hào)被收集、轉(zhuǎn)換、放大，

21、在電視熒光屏上同步掃描成像。二次電子信號(hào)被收集、轉(zhuǎn)換、放大，在電視熒光屏上同步掃描成像。scanning electron microscopy. scanning electron micrograph of the stereocilia projecting from a hair cell in the inner ear of a bullfrog (a). for comparison, the same structure is shown by differential-interference-contrast light microscopy (b) and by thin

22、-section electron microscopy (c).蛙的內(nèi)耳毛細(xì)胞蛙的內(nèi)耳毛細(xì)胞（三）掃描隧道顯微鏡（三）掃描隧道顯微鏡 （scanning tunneling microscope，stm）1、原理：、原理：根據(jù)隧道效應(yīng)而設(shè)計(jì)，當(dāng)原子尺度的針尖在根據(jù)隧道效應(yīng)而設(shè)計(jì)，當(dāng)原子尺度的針尖在一定高度（一定高度（100nm以內(nèi)）上掃描樣品時(shí)，此處電子云重以內(nèi)）上掃描樣品時(shí)，此處電子云重疊，外加一電壓（疊，外加一電壓（2mv2v），針尖與樣品之間形成），針尖與樣品之間形成隧隧道電流道電流。電流強(qiáng)度與針尖和樣品間的距離有函數(shù)關(guān)系，。電流強(qiáng)度與針尖和樣品間的距離有函數(shù)關(guān)系，將掃描過程中電流的變

23、化轉(zhuǎn)換為圖像，即可顯示出原子將掃描過程中電流的變化轉(zhuǎn)換為圖像，即可顯示出原子水平的凹凸形態(tài)。水平的凹凸形態(tài)。2、分辨率：、分辨率：橫向?yàn)闄M向?yàn)?.10.2nm，縱向可達(dá)，縱向可達(dá)0.001nm。3、用途：、用途：三態(tài)（固態(tài)、液態(tài)和氣態(tài)）物質(zhì)均可進(jìn)行觀三態(tài)（固態(tài)、液態(tài)和氣態(tài)）物質(zhì)均可進(jìn)行觀察。察。第二節(jié)第二節(jié)細(xì)胞組分的分離及分析技術(shù)細(xì)胞組分的分離及分析技術(shù)一、細(xì)胞組分的分離一、細(xì)胞組分的分離離心技離心技術(shù)術(shù) 是分離細(xì)胞器（如細(xì)胞核、線粒體、高爾基體）是分離細(xì)胞器（如細(xì)胞核、線粒體、高爾基體）及各種大分子基本手段及各種大分子基本手段。 轉(zhuǎn)速為轉(zhuǎn)速為1025kr/min的離心機(jī)稱為的離心機(jī)稱為高速離

24、心機(jī)高速離心機(jī)。 轉(zhuǎn)速轉(zhuǎn)速25kr/min，離心力，離心力89k者稱為者稱為超速離心超速離心機(jī)機(jī)。 目前超速離心機(jī)的最高轉(zhuǎn)速可達(dá)目前超速離心機(jī)的最高轉(zhuǎn)速可達(dá)100000r/min100000r/min。（一）差速離心（一）差速離心differential centrifugation1 1、特點(diǎn)：、特點(diǎn)： 介質(zhì)密度均一；介質(zhì)密度均一； 速度由低向高，逐級(jí)離心。速度由低向高，逐級(jí)離心。2 2、用途：、用途： 分離大小相差懸殊的細(xì)胞和細(xì)胞器。分離大小相差懸殊的細(xì)胞和細(xì)胞器。 沉降順序：沉降順序：核核線粒體線粒體溶酶體與過氧化物酶溶酶體與過氧化物酶體體內(nèi)質(zhì)網(wǎng)與高基體內(nèi)質(zhì)網(wǎng)與高基體核蛋白體。核蛋白體。

25、 可將細(xì)胞器初步分離，常需進(jìn)一步通過密度梯可將細(xì)胞器初步分離，常需進(jìn)一步通過密度梯離心再行分離純化。離心再行分離純化。（二）密度梯度離心（二）密度梯度離心 用介質(zhì)在離心管內(nèi)形成一連續(xù)或不連續(xù)的密度梯度，用介質(zhì)在離心管內(nèi)形成一連續(xù)或不連續(xù)的密度梯度，將細(xì)胞混懸液或勻漿置于介質(zhì)的頂部，通過離心力場(chǎng)將細(xì)胞混懸液或勻漿置于介質(zhì)的頂部，通過離心力場(chǎng)的作用使細(xì)胞分層、分離。的作用使細(xì)胞分層、分離。 類型：類型：速度沉降、等密度沉降。速度沉降、等密度沉降。 常用介質(zhì)：常用介質(zhì)：氯化銫、蔗糖、多聚蔗糖。氯化銫、蔗糖、多聚蔗糖。 分離活細(xì)胞的分離活細(xì)胞的介質(zhì)要求介質(zhì)要求：1 1）能產(chǎn)生密度梯度，且密度高時(shí)，粘度

26、不高；）能產(chǎn)生密度梯度，且密度高時(shí)，粘度不高；2 2）phph中性或易調(diào)為中性；中性或易調(diào)為中性；3 3）濃度大時(shí)滲透壓不大；）濃度大時(shí)滲透壓不大；4 4）對(duì)細(xì)胞無毒。）對(duì)細(xì)胞無毒。1 1、速度沉降、速度沉降velocity sedimentation 用途用途：分離：分離密度相近而大小不等密度相近而大小不等的細(xì)胞或的細(xì)胞或細(xì)胞器。細(xì)胞器。 原理原理：介質(zhì)密度梯度平緩，分離物按各自：介質(zhì)密度梯度平緩，分離物按各自的的沉降系數(shù)沉降系數(shù)以不同的速度沉降而達(dá)到分離的目以不同的速度沉降而達(dá)到分離的目的。的。 特點(diǎn)特點(diǎn)：介質(zhì)密度較低，：介質(zhì)密度較低，介質(zhì)的最大密度應(yīng)介質(zhì)的最大密度應(yīng)小于被分離生物顆粒的最

27、小密度小于被分離生物顆粒的最小密度。2.2.等密度沉降等密度沉降 isopycnic sedimentation用途：用途：分離分離密度不等密度不等的顆粒。的顆粒。原理：原理：樣品各成分在樣品各成分在連續(xù)梯度的介質(zhì)連續(xù)梯度的介質(zhì)中經(jīng)過一定時(shí)中經(jīng)過一定時(shí)間的離心則沉降到與自身密度相等的介質(zhì)處，并停間的離心則沉降到與自身密度相等的介質(zhì)處，并停留在那里達(dá)到平衡，從而將不同密度的成分分離。留在那里達(dá)到平衡，從而將不同密度的成分分離。特點(diǎn)：特點(diǎn)： 1 1）介質(zhì)密度較高，陡度大，）介質(zhì)密度較高，陡度大，介質(zhì)的最高密度應(yīng)介質(zhì)的最高密度應(yīng)大于被分離組分的最大密度大于被分離組分的最大密度。 2 2）所需的力場(chǎng)通

28、常比速率沉降法大）所需的力場(chǎng)通常比速率沉降法大1010100100倍，倍，往往需要高速或超速離心。往往需要高速或超速離心。velocity (a) and equilibrium (b) sedimentation 組織化學(xué)和細(xì)胞化學(xué)染色方法組織化學(xué)和細(xì)胞化學(xué)染色方法（histochemical and cytochemical staining method）用于對(duì)某些）用于對(duì)某些細(xì)胞成分進(jìn)行定性和定位研究。細(xì)胞成分進(jìn)行定性和定位研究。（一）固定（一）固定1. 物理固定：血膜空氣快速干燥、冷凍干燥。物理固定：血膜空氣快速干燥、冷凍干燥。2. 化學(xué)固定：如甲醇、乙醇、丙酮、甲醛、戊二醛化學(xué)固定

29、：如甲醇、乙醇、丙酮、甲醛、戊二醛和鋨酸等試劑。顯示多糖常用乙醇固定，顯示酶類多和鋨酸等試劑。顯示多糖常用乙醇固定，顯示酶類多用甲醛丙酮緩沖液固定。用甲醛丙酮緩沖液固定。（二）顯示方法（二）顯示方法二、細(xì)胞組分的化學(xué)染色二、細(xì)胞組分的化學(xué)染色1. 1. 金屬沉淀法金屬沉淀法：如磷酸酶分解磷酸酯底物后，反應(yīng)產(chǎn)物最終生：如磷酸酶分解磷酸酯底物后，反應(yīng)產(chǎn)物最終生成成cos或或pbs有色沉淀，而顯示出酶活性。有色沉淀，而顯示出酶活性。2.2. schiff反應(yīng)：細(xì)胞中的醛基可使反應(yīng)：細(xì)胞中的醛基可使schiff試劑中的無色品紅變?cè)噭┲械臒o色品紅變?yōu)榧t色。用于顯示糖和脫氧核糖核酸（為紅色。用于顯示糖和脫

30、氧核糖核酸（feulgen反應(yīng)）。反應(yīng)）。3. 3. 聯(lián)苯胺反應(yīng)聯(lián)苯胺反應(yīng)：過氧化物酶分解：過氧化物酶分解h202，產(chǎn)生新生氧，后者再將，產(chǎn)生新生氧，后者再將無色聯(lián)苯胺氧化成聯(lián)苯胺藍(lán)，進(jìn)而變成棕色化合物。無色聯(lián)苯胺氧化成聯(lián)苯胺藍(lán)，進(jìn)而變成棕色化合物。4. 4. 脂溶染色法脂溶染色法：借蘇丹染料溶于脂類而使脂類顯色。：借蘇丹染料溶于脂類而使脂類顯色。5. 5. 茚三酮反應(yīng)茚三酮反應(yīng)：顯示蛋白質(zhì)。：顯示蛋白質(zhì)。三、放射自顯影術(shù)三、放射自顯影術(shù) 用于研究用于研究標(biāo)記化合物在機(jī)體、組織和細(xì)胞中的標(biāo)記化合物在機(jī)體、組織和細(xì)胞中的分布、定位、排出以及合成、更新、作用機(jī)理、分布、定位、排出以及合成、更新、作

31、用機(jī)理、作用部位等等作用部位等等。 原理：原理：將放射性同位素標(biāo)記的化合物導(dǎo)入生物將放射性同位素標(biāo)記的化合物導(dǎo)入生物體內(nèi)，經(jīng)過一段時(shí)間后，制取切片，涂上鹵化銀體內(nèi)，經(jīng)過一段時(shí)間后，制取切片，涂上鹵化銀乳膠，經(jīng)放射性曝光，使乳膠感光。乳膠，經(jīng)放射性曝光，使乳膠感光。 一般用一般用14c和和3h標(biāo)記。常用標(biāo)記。常用3h-tdr來顯示來顯示dna，用用3h-udr顯示顯示rna；用；用3h氨基酸研究蛋白質(zhì)，用氨基酸研究蛋白質(zhì)，用3h甘露糖、甘露糖、3h巖藻糖研究多糖。巖藻糖研究多糖。 14c半衰期為半衰期為5730年，年，3h為為12.5年。年。四、顯微光譜分析技術(shù)四、顯微光譜分析技術(shù) 細(xì)胞中一些成

32、分具有特定的吸收光譜，核酸、細(xì)胞中一些成分具有特定的吸收光譜，核酸、蛋白質(zhì)、細(xì)胞色素、維生素等都有自己特征性的蛋白質(zhì)、細(xì)胞色素、維生素等都有自己特征性的吸收譜線。吸收譜線。 可利用顯微分光光度計(jì)對(duì)某些成分進(jìn)行定位、可利用顯微分光光度計(jì)對(duì)某些成分進(jìn)行定位、定性和定量測(cè)定。定性和定量測(cè)定。五、分子雜交技術(shù)五、分子雜交技術(shù) 具有互補(bǔ)核苷酸序列的兩條單鏈核苷酸分子片段，具有互補(bǔ)核苷酸序列的兩條單鏈核苷酸分子片段，在適當(dāng)條件下，通過氫鍵結(jié)合，形成在適當(dāng)條件下，通過氫鍵結(jié)合，形成dna-dna，dna-rna或或rna-rna雜交的雙鏈分子。這種技術(shù)雜交的雙鏈分子。這種技術(shù)可用來測(cè)定單鏈分子核苷酸序列間是

33、否具有互補(bǔ)關(guān)系?？捎脕頊y(cè)定單鏈分子核苷酸序列間是否具有互補(bǔ)關(guān)系。（一）原位雜交（一）原位雜交（in situ hybridization） 用于檢測(cè)染色體上的特殊用于檢測(cè)染色體上的特殊dna序列。最初是使用序列。最初是使用帶放射性的帶放射性的dna探針，后來又發(fā)明了熒光探針法。探針，后來又發(fā)明了熒光探針法。人類染色體端人類染色體端粒粒dnadna的熒光的熒光原位雜交照片原位雜交照片（二）（二）southern雜交雜交 是是體外分析特異體外分析特異dna序列的方法序列的方法，操作時(shí)先用限，操作時(shí)先用限制性內(nèi)切酶將核制性內(nèi)切酶將核dna或線粒體或線粒體dna切成切成dna片段，片段，經(jīng)凝膠電泳分離

34、后，轉(zhuǎn)移到醋酸纖維薄膜上，再用探經(jīng)凝膠電泳分離后，轉(zhuǎn)移到醋酸纖維薄膜上，再用探針雜交，通過放射自顯影，即可針雜交，通過放射自顯影，即可辨認(rèn)出與探針互補(bǔ)的辨認(rèn)出與探針互補(bǔ)的特殊核苷序列特殊核苷序列。 將將rna轉(zhuǎn)移到薄膜上，轉(zhuǎn)移到薄膜上， 用探針雜交，用探針雜交， 則稱為則稱為northern雜交雜交。1、pcr：polymerase chain reaction2、反應(yīng)體系：、反應(yīng)體系：樣品樣品dna；引物（引物（primer），約），約15-20個(gè)個(gè)核苷酸；核苷酸；4種種dntp；tag dna聚合酶，來自于嗜熱水生聚合酶，來自于嗜熱水生菌菌thermus aquaticus，最適作用溫度，

35、最適作用溫度7580，短時(shí)間在，短時(shí)間在95下不失活。下不失活。緩沖體系和緩沖體系和mg2+。3、反應(yīng)過程、反應(yīng)過程：變性：約變性：約90-95；復(fù)性：約復(fù)性：約60左右；左右；延伸：延伸：70-75；重復(fù)重復(fù)“變性變性-復(fù)性復(fù)性-延伸延伸” 過程過程20-30次次循環(huán)。循環(huán)。（三）（三）pcr技術(shù)技術(shù)pcr原理六、流式細(xì)胞技術(shù)六、流式細(xì)胞技術(shù) 用途：用途：對(duì)對(duì)單個(gè)細(xì)胞進(jìn)行快速定量分析與分選單個(gè)細(xì)胞進(jìn)行快速定量分析與分選的一門技的一門技術(shù)。術(shù)。 原理：原理：包在鞘液中的細(xì)胞通過高頻振蕩控制的噴嘴，包在鞘液中的細(xì)胞通過高頻振蕩控制的噴嘴，形成包含單個(gè)細(xì)胞的液滴，在激光束的照射下，這些細(xì)胞形成包含

36、單個(gè)細(xì)胞的液滴，在激光束的照射下，這些細(xì)胞發(fā)出散射光和熒光，經(jīng)探測(cè)器檢測(cè)，轉(zhuǎn)換為電信號(hào)，送入發(fā)出散射光和熒光，經(jīng)探測(cè)器檢測(cè)，轉(zhuǎn)換為電信號(hào)，送入計(jì)算機(jī)處理，輸出統(tǒng)計(jì)結(jié)果，并可根據(jù)這些性質(zhì)分選出高計(jì)算機(jī)處理，輸出統(tǒng)計(jì)結(jié)果，并可根據(jù)這些性質(zhì)分選出高純度的細(xì)胞亞群，分離純度可達(dá)純度的細(xì)胞亞群，分離純度可達(dá)99%。包被細(xì)胞的液流稱。包被細(xì)胞的液流稱為鞘液，所用儀器稱為流式細(xì)胞儀（為鞘液，所用儀器稱為流式細(xì)胞儀（flow cytometer）。）。細(xì)胞電泳細(xì)胞電泳 原理：原理：在一定在一定phph值下細(xì)胞表面帶有凈的正或負(fù)電值下細(xì)胞表面帶有凈的正或負(fù)電荷，能在外加電場(chǎng)的作用下發(fā)生泳動(dòng)。荷，能在外加電場(chǎng)的作

37、用下發(fā)生泳動(dòng)。 各種細(xì)胞或處于不同生理狀態(tài)的同種細(xì)胞荷電量各種細(xì)胞或處于不同生理狀態(tài)的同種細(xì)胞荷電量有所不同，故在一定的電場(chǎng)中的泳動(dòng)速度不同。有所不同，故在一定的電場(chǎng)中的泳動(dòng)速度不同。 用途：用途：檢測(cè)細(xì)胞生理狀態(tài)和病理狀態(tài)、分離不同檢測(cè)細(xì)胞生理狀態(tài)和病理狀態(tài)、分離不同種類的細(xì)胞，如分離哺乳動(dòng)物的種類的細(xì)胞，如分離哺乳動(dòng)物的xyxy精子。精子。單細(xì)胞凝膠電泳單細(xì)胞凝膠電泳單細(xì)胞水平的單細(xì)胞水平的dna損傷檢測(cè)損傷檢測(cè) 原理：原理：真核真核細(xì)胞的細(xì)胞的dna分子量很大，分子量很大，dna超螺旋結(jié)構(gòu)附著在核基超螺旋結(jié)構(gòu)附著在核基質(zhì)中，該方法用瓊脂糖凝膠將細(xì)胞包埋在載玻片上，在細(xì)胞裂解液作用質(zhì)中，該

38、方法用瓊脂糖凝膠將細(xì)胞包埋在載玻片上，在細(xì)胞裂解液作用下，細(xì)胞膜、核膜及其它生物膜破壞，細(xì)胞內(nèi)的下，細(xì)胞膜、核膜及其它生物膜破壞，細(xì)胞內(nèi)的rna、蛋白質(zhì)及其它成、蛋白質(zhì)及其它成分進(jìn)入凝膠，繼而擴(kuò)散到裂解液中，唯獨(dú)核分進(jìn)入凝膠，繼而擴(kuò)散到裂解液中，唯獨(dú)核dna仍保持纏繞的環(huán)區(qū)仍保持纏繞的環(huán)區(qū)(loop)附著在剩余的核骨架上，并留在原位。如果細(xì)胞未受損傷，電泳附著在剩余的核骨架上，并留在原位。如果細(xì)胞未受損傷，電泳中核中核dna因其分子量大停留在核基質(zhì)中，經(jīng)熒光染色后呈現(xiàn)圓形的熒光因其分子量大停留在核基質(zhì)中，經(jīng)熒光染色后呈現(xiàn)圓形的熒光團(tuán)，無拖尾現(xiàn)象。若細(xì)胞受損，在中性電泳液團(tuán)，無拖尾現(xiàn)象。若細(xì)胞受

39、損，在中性電泳液(ph=8)中，核中，核dna仍保持仍保持雙螺旋結(jié)構(gòu)，偶有單鏈斷裂雙螺旋結(jié)構(gòu)，偶有單鏈斷裂(ssbs)并不影響并不影響dna雙螺旋大分子的連續(xù)性。雙螺旋大分子的連續(xù)性。只有當(dāng)只有當(dāng)dna雙鏈斷裂雙鏈斷裂(dsbs)時(shí)，其斷片進(jìn)入凝膠中，電泳時(shí)斷片向陽極時(shí)，其斷片進(jìn)入凝膠中，電泳時(shí)斷片向陽極遷移，形成熒光拖尾現(xiàn)象，形似彗星。遷移，形成熒光拖尾現(xiàn)象，形似彗星。 用途：用途：檢測(cè)單細(xì)胞水平的檢測(cè)單細(xì)胞水平的dnadna損傷損傷。小鼠胚胎肝細(xì)胞經(jīng)不同濃度阿霉素處理后小鼠胚胎肝細(xì)胞經(jīng)不同濃度阿霉素處理后dna損傷情況損傷情況對(duì)照組對(duì)照組 100ng/ml阿霉素阿霉素 200ng/ml阿霉

40、素阿霉素（一）免疫細(xì)胞化學(xué)（一）免疫細(xì)胞化學(xué) immunocytochemistry 根據(jù)免疫學(xué)原理，利用抗體同特定抗原專一結(jié)合，對(duì)抗原根據(jù)免疫學(xué)原理，利用抗體同特定抗原專一結(jié)合，對(duì)抗原進(jìn)行定位測(cè)定的技術(shù)。常用的標(biāo)記物有熒光素和酶。進(jìn)行定位測(cè)定的技術(shù)。常用的標(biāo)記物有熒光素和酶。 免疫熒光法免疫熒光法（immunofluorescent technique）：常用的：常用的螢光素有異硫氰酸熒光素、羅丹明等。螢光素有異硫氰酸熒光素、羅丹明等。 酶標(biāo)免疫法酶標(biāo)免疫法（enzyme-labeled antibody method）：常：常用的酶有辣根過氧化物酶，酶與底物發(fā)生反應(yīng)后形成不透明用的酶有辣根

41、過氧化物酶，酶與底物發(fā)生反應(yīng)后形成不透明的沉積物，從而顯示出抗原存在的部位。的沉積物，從而顯示出抗原存在的部位。七、免疫學(xué)方法對(duì)細(xì)胞組分的分析七、免疫學(xué)方法對(duì)細(xì)胞組分的分析（二）免疫電鏡技術(shù)（二）免疫電鏡技術(shù)gold particles coated with protein a are used to detect an antibody-bound protein by transmission electron microscopy. （三）免疫印跡（三）免疫印跡western blotting 技技術(shù)術(shù)八、其它生化分析方法八、其它生化分析方法1.三維結(jié)構(gòu)的分析三維結(jié)構(gòu)的分析x射線晶體衍

42、射射線晶體衍射2.蛋白質(zhì)的分離純化蛋白質(zhì)的分離純化電泳、層析、電泳、層析、色譜等色譜等第三節(jié)第三節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)及細(xì)胞工程細(xì)胞培養(yǎng)及細(xì)胞工程一、細(xì)胞培養(yǎng)一、細(xì)胞培養(yǎng)（一）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)（一）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng) 群體培養(yǎng)群體培養(yǎng)（mass culture）：將含有一定數(shù)量細(xì)：將含有一定數(shù)量細(xì)胞的懸液置于培養(yǎng)瓶中，讓細(xì)胞貼壁生長，匯合胞的懸液置于培養(yǎng)瓶中，讓細(xì)胞貼壁生長，匯合（confluence）后形成均勻的單細(xì)胞層；后形成均勻的單細(xì)胞層； 克隆培養(yǎng)克隆培養(yǎng)（clonal culture）：培養(yǎng)高度稀釋的細(xì)：培養(yǎng)高度稀釋的細(xì)胞懸液，細(xì)胞貼壁生長，每一個(gè)細(xì)胞形成一個(gè)細(xì)胞胞懸液，細(xì)胞貼壁生長，每一個(gè)細(xì)胞形成一個(gè)

43、細(xì)胞集落，稱為克隆。集落，稱為克隆。 population cell culturecloning cell culture 原代培養(yǎng)（原代培養(yǎng)（primary culture）：即培養(yǎng)直接來自動(dòng)物機(jī)：即培養(yǎng)直接來自動(dòng)物機(jī)體的細(xì)胞群，將細(xì)胞從一個(gè)培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)移到另外一個(gè)培養(yǎng)瓶稱體的細(xì)胞群，將細(xì)胞從一個(gè)培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)移到另外一個(gè)培養(yǎng)瓶稱為傳代或傳代培養(yǎng)（為傳代或傳代培養(yǎng)（passage）。）。 細(xì)胞系（細(xì)胞系（cell line）：具有特定生物學(xué)與遺傳學(xué)特征，：具有特定生物學(xué)與遺傳學(xué)特征，且能在體外穩(wěn)定永久生生長的細(xì)胞群體。通?？蓙碜阅[瘤組且能在體外穩(wěn)定永久生生長的細(xì)胞群體。通常可來自腫瘤組織的細(xì)胞群或培

44、養(yǎng)中發(fā)生突變或轉(zhuǎn)化的細(xì)胞。織的細(xì)胞群或培養(yǎng)中發(fā)生突變或轉(zhuǎn)化的細(xì)胞。 有限細(xì)胞系有限細(xì)胞系 永生化細(xì)胞系永生化細(xì)胞系 細(xì)胞株（細(xì)胞株（cell strain）：從原代培養(yǎng)細(xì)胞群中篩選出的：從原代培養(yǎng)細(xì)胞群中篩選出的具有特定性質(zhì)或標(biāo)志的細(xì)胞群。具有特定性質(zhì)或標(biāo)志的細(xì)胞群。常用的幾種細(xì)胞系常用的幾種細(xì)胞系（二）植物細(xì)胞培養(yǎng)（二）植物細(xì)胞培養(yǎng) 1. 1. 外植體培養(yǎng)：外植體培養(yǎng)：誘發(fā)產(chǎn)生愈傷組織。用于研究植物的生誘發(fā)產(chǎn)生愈傷組織。用于研究植物的生長發(fā)育、分化和變異；進(jìn)行無性繁殖；制取代謝產(chǎn)物。長發(fā)育、分化和變異；進(jìn)行無性繁殖；制取代謝產(chǎn)物。 2. 2. 懸浮細(xì)胞培養(yǎng)：懸浮細(xì)胞培養(yǎng)：適合于進(jìn)行產(chǎn)業(yè)化大規(guī)

45、模細(xì)胞培養(yǎng)，適合于進(jìn)行產(chǎn)業(yè)化大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)，制取植物代謝產(chǎn)物。制取植物代謝產(chǎn)物。 3. 3. 原生質(zhì)體培養(yǎng)：原生質(zhì)體培養(yǎng)：培養(yǎng)脫壁后的細(xì)胞，特點(diǎn)：培養(yǎng)脫壁后的細(xì)胞，特點(diǎn)： 比較容易攝取外來的遺傳物質(zhì)，如比較容易攝取外來的遺傳物質(zhì)，如dnadna； 便于進(jìn)行細(xì)胞融合，形成雜交細(xì)胞；便于進(jìn)行細(xì)胞融合，形成雜交細(xì)胞； 適宜條件下可產(chǎn)生細(xì)胞壁，經(jīng)誘導(dǎo)分化成完整植株。適宜條件下可產(chǎn)生細(xì)胞壁，經(jīng)誘導(dǎo)分化成完整植株。 4. 4. 單倍體培養(yǎng)：單倍體培養(yǎng)：通過花藥或花粉培養(yǎng)可獲得單倍體植株。通過花藥或花粉培養(yǎng)可獲得單倍體植株。二、細(xì)胞工程二、細(xì)胞工程（一）細(xì)胞融合（一）細(xì)胞融合 通過培養(yǎng)和介導(dǎo)，兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞合并通過培養(yǎng)和介導(dǎo)，兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞合并成一個(gè)雙核或多核細(xì)胞的過程稱為成一個(gè)雙核或多核細(xì)胞的過程稱為細(xì)胞融合細(xì)胞融合（cell fusion）或細(xì)胞雜交。）或細(xì)胞雜交。 同核體同核體：相同基因型的細(xì)胞融合而成