作物抗病性鑒定

1、實(shí)驗(yàn)六 作物抗病性鑒定作物抗病性鑒定(evaluation of disease resistance )是作物抗病育種的重要基礎(chǔ)，從抗原篩選、后代選擇、直到品種推廣的全過(guò)程都離不開(kāi)抗病性鑒定。狹義的抗病性鑒定是評(píng)價(jià)寄主品種、品系或種質(zhì)對(duì)特定病害抵抗或感染程度，廣義的抗病性鑒定還應(yīng)包括病原物的致病性評(píng)價(jià)。鑒定方法包括自然鑒定、接種鑒定、田間成株鑒定、室內(nèi)苗期鑒定、離體鑒定及間接鑒定等，在實(shí)際工作中則需根據(jù)作物、病害種類(lèi)，目的要求和設(shè)備條件而定。常用方法如下：1、田間自然鑒定 自然發(fā)病條件下的田間鑒定是鑒定抗病性的最基本方法，尤其是在各種病害的常發(fā)區(qū)，進(jìn)行多年、多點(diǎn)的聯(lián)合鑒定是一種有效方法。它能

2、對(duì)育種材料或品種的抗性進(jìn)行最全面、嚴(yán)格的考驗(yàn)。田間鑒定的方法因作物種類(lèi)而異，大田作物的田間鑒定一般要進(jìn)行人工接種，接種方法又因病菌而異。對(duì)于稻瘟病等氣傳病害，可分別用涂抹、噴霧及注射等方法進(jìn)行接種，以使具有抗接觸、抗侵入等抗病機(jī)制的品種也得以發(fā)病。2、溫室或田間接種鑒定 這種方法是將病原菌孢子或病毒直接接種到溫室或田間植株的葉片、果實(shí)或根上，它適合對(duì)所有作物進(jìn)行抗病性鑒定。由于抗病現(xiàn)象是寄主、病原物及環(huán)境條件三者共同作用的結(jié)果，因此，這種鑒定結(jié)果也能真實(shí)地反映被鑒定材料的抗病性，可靠性強(qiáng)。接種鑒定的技術(shù)規(guī)程包括育苗、接種體的制備(病菌的分離、保存與抱子誘發(fā))及接種3個(gè)環(huán)節(jié)，接種的方法有點(diǎn)滴法、

3、噴霧法、摩擦法及注射法等。3、離體接種鑒定 為鑒定以組織、細(xì)胞或分子水平的抗病機(jī)制為主的病害，可選用離體接種鑒定。具有操作簡(jiǎn)便，鑒定結(jié)果可靠等優(yōu)點(diǎn)?？赏瑫r(shí)分別鑒定同一材料對(duì)不同病原菌的抗性。因直接從植株上取下子葉、葉片或果實(shí)進(jìn)行鑒定，不影響幼苗正常生長(zhǎng)發(fā)育和開(kāi)花結(jié)實(shí)。鑒定方法不僅因作物、病菌種類(lèi)而異，而且抗病性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)也因作物、病原菌的種類(lèi)不同而存在很大的差別。以下則針對(duì)水稻稻瘟病、小麥條銹病、玉米大斑病等部分主要作物的最重要病害分別學(xué)習(xí)各種鑒定方法和技術(shù)。i 水稻苗瘟抗性的鑒定一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、熟悉水稻苗期稻瘟病的癥狀特征。2、學(xué)習(xí)和初步掌握水稻苗瘟抗性鑒定技術(shù)。二、內(nèi)容說(shuō)明水稻稻瘟病是一種世

4、界性的真菌病害，被列為水稻三大病害之首。水稻稻瘟病具有傳播快、發(fā)生范圍廣、流行頻率高、災(zāi)變嚴(yán)重等特點(diǎn)。在我國(guó)水稻各稻區(qū)常年均有不同程度的發(fā)病，給水稻生產(chǎn)帶來(lái)極大的損失。稻瘟病原菌（圖6-1）為稻梨孢菌（pyricularic oryzae），無(wú)性世代：pyrcularia grisea sacc.，半知菌亞門(mén)梨孢屬。有性世代：magnaporthe grisea barr yaegash，子囊菌亞門(mén)。分生孢子梗不分 枝，從寄主表皮或氣孔伸出，具28個(gè)隔膜，基部稍膨大，淡褐色，向上色淡， 圖6-1 稻瘟病原菌頂端曲狀，上生分生孢子。分生孢子無(wú)色，洋梨形或棍棒形，常有13個(gè)隔膜，基部有腳胞。我國(guó)稻

5、瘟病菌有7群43個(gè)生理小種，為za群、zb群、zc群、zd群、ze群、zf群和zg群，其中zg小種為優(yōu)勢(shì)小種，分布最廣。 稻瘟病在水稻整個(gè)生育階段皆可發(fā)生，具有為害時(shí)間長(zhǎng)、侵染部位多和癥狀多樣性等特點(diǎn)。按其為害時(shí)期和部位的不同，可分為苗瘟、葉瘟、節(jié)瘟、穗頸瘟和谷粒瘟，其中以穗頸瘟對(duì)產(chǎn)量的影響最大。稻株容易感病的生育期是4葉期、分蘗期和抽穗期。品種是稻瘟病發(fā)生和流行的基礎(chǔ)。稻瘟病菌群體大、繁殖快，其高度的變異性使新的生理小種不斷更替出現(xiàn)，導(dǎo)致選育的高抗品種很容易喪失抗性。因此，必須堅(jiān)持長(zhǎng)期研究病原菌的變化，并不斷地選育新的抗病品種。溫度和濕度是影響稻瘟病發(fā)生流行的主要環(huán)境條件，以氣溫為2528對(duì)

6、菌絲發(fā)育、分生孢子形成最為適宜，相對(duì)濕度96%最適合病菌孢子的形成和侵入。陰雨連綿，日照不足或時(shí)晴時(shí)雨，或早晚有云霧或結(jié)露條件，病情擴(kuò)展迅速。光照對(duì)孢子形成、萌發(fā)及侵入都有抑制作用，缺氧時(shí)孢子不能萌發(fā)。在飽和濕度和適溫條件下，病菌侵入稻葉后經(jīng)4d的潛育期就可出現(xiàn)病斑。偏施過(guò)施氮肥有利發(fā)病。放水早或長(zhǎng)期深灌根系發(fā)育差，抗病力弱發(fā)病重。稻瘟病的抗性鑒定方法可分自然誘發(fā)鑒定和人工接種鑒定兩種。其中人工接種鑒定根據(jù)菌株的接種方式不同，又可分為： 抗譜測(cè)定，即多個(gè)菌株單個(gè)接種； 多個(gè)菌株混合接種。自然誘發(fā)鑒定適于苗瘟、葉瘟穗、頸瘟和枝梗瘟鑒定，人工接種鑒一般適于對(duì)苗瘟和葉瘟的鑒定。一般來(lái)說(shuō)，苗瘟與穗瘟有

7、極顯著正相關(guān)，因而抗瘟性鑒定常采用苗期人工接種鑒定。但人工接種鑒定時(shí)，一般應(yīng)用多個(gè)種群代表小種的混合菌種，以增加鑒定準(zhǔn)確性和普遍性。三、材料儀器藥品1供試材料 供試水稻育種材料若干以及抗病對(duì)照品種和感病對(duì)照品種各一個(gè)。 供試稻瘟病菌菌種 從當(dāng)?shù)厮鸭植紡V、致病力強(qiáng)的主要稻瘟病菌的代表性生理小種若干個(gè)。分別進(jìn)行小種培養(yǎng)繁殖。2儀器用品 病菌培養(yǎng)器具 高壓滅菌鍋、超凈工作臺(tái)、酒精燈、恒溫培養(yǎng)箱、三角瓶（或茄子瓶)、培養(yǎng)皿、接種環(huán)、搪瓷盆、紗布等。 菌液接種和制備器具 顯微鏡、載玻片、蓋玻片、搪瓷盤(pán)、普通專(zhuān)用噴霧器或醫(yī)用喉頭噴霧器、醫(yī)用皮下注射器、橡膠管和保溫、保濕的遮蔭設(shè)備。3病菌培養(yǎng)基 酵母淀粉

8、瓊脂培養(yǎng)基（酵母2g、可溶性淀粉10g、瓊脂1520g，加水1000ml）。 大麥或高粱種子。四、方法步驟（一）人工接種鑒定1菌種制備 將供試稻瘟病菌菌種各生理小種分別培養(yǎng)，混合接種。2病原菌培養(yǎng)繁殖 培養(yǎng)方法包括一級(jí)培養(yǎng)繁殖和二級(jí)培養(yǎng)繁殖兩個(gè)步驟： 一級(jí)培養(yǎng)繁殖 采用酵母淀粉瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)。方法為：將瓊脂1015g放入1000ml水中加熱溶化，再加可溶性淀粉（或煎糖）10g，酵母2g，裝入試管，經(jīng)消毒滅菌后，取出制成斜面，接種病原菌，放在2628恒溫箱中培養(yǎng)10d左右即可取用。 二級(jí)培養(yǎng)繁殖 將病原菌轉(zhuǎn)移到大麥（或高粱）粒培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)擴(kuò)大繁殖，用于接種鑒定。其方法是將大麥粒加水后煮到半熟

9、狀態(tài)或用水浸泡24h，然后倒去多余的水分，裝入三角瓶?jī)?nèi)（或茄子瓶），高壓滅菌，滅菌后立即將麥粒搖散防止結(jié)塊。然后在無(wú)菌操作條件下接種病菌，放在2628恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)。培養(yǎng)45d時(shí)應(yīng)搖動(dòng)三角瓶?jī)?nèi)的大麥粒，使菌絲生長(zhǎng)均勻。待灰色菌絲長(zhǎng)滿(mǎn)大麥粒并開(kāi)始變黑時(shí)，用自來(lái)水沖洗大麥粒上的菌絲，隨后攤放薄層于搪瓷盤(pán)中，盤(pán)上覆蓋12層紗布以保濕，置于2528變溫條件下培養(yǎng)2d左右，即可見(jiàn)到麥粒上產(chǎn)生大量灰色的分生孢子，就可供接種使用。擴(kuò)大繁殖時(shí)，應(yīng)注意搪瓷盤(pán)內(nèi)的濕度不宜過(guò)高，否則只長(zhǎng)菌絲，較少產(chǎn)生分生孢子。3育秧 前期準(zhǔn)備 每個(gè)盤(pán)中同時(shí)安排感病和抗病品種作對(duì)照。將各供試水稻材料的種子進(jìn)行粒選，各取3040粒種子，

10、經(jīng)消毒、沖洗、催芽后準(zhǔn)備播種。 培育方法 在盛有肥沃泥土的搪瓷盤(pán)中育秧。幼苗2葉期定株，每個(gè)材料選留10株生長(zhǎng)一致的秧苗。定株后酌施23次氮肥，最后一次施氮肥應(yīng)在接種前34d施用，使幼苗生長(zhǎng)嫩綠。如采用注射接種鑒定法，可在秧田中育秧，移植于大田后進(jìn)行接種鑒定。4接種 噴霧接種 一般在34葉期。日平均氣溫2528和陰雨高濕，葉面長(zhǎng)時(shí)間（12h以上）常有水珠的時(shí)期接種，最有利于發(fā)病。具體步驟是：將產(chǎn)生不同病菌小種孢子的大麥粒放入盛有自來(lái)水的燒杯中攪拌，分別配制成孢子懸浮液，用100倍顯微鏡檢孢子密度，平均每個(gè)視野應(yīng)有孢子2025個(gè)（孢密度則為2025萬(wàn)個(gè)/ml）。然后將不同生理小種的孢子懸浮液混合

11、，用于接種。采用專(zhuān)用噴霧器噴霧接種。噴霧時(shí)要將葉片充分均勻濕潤(rùn)。接種后，在2628下，用薄膜覆蓋保濕24小時(shí)。然后移至室外，在2030下保持高濕，培養(yǎng)7天，進(jìn)行病情鑒定。 注射接種：一般在水稻67葉期分蘗進(jìn)行，接種的分蘗必須有一張未展開(kāi)的嫩心葉。將按上述方法配制好孢子懸浮液，使用醫(yī)用皮下注射器從葉鞘外側(cè)注入孢子懸浮液，直到多余菌液從心葉中冒出為止。接種后7d調(diào)查植株的發(fā)病情況。（二）自然誘發(fā)鑒定該方法適于多霧天氣和陰雨的條件下的稻瘟病重病區(qū)，可種植鑒定材料，采用自然誘發(fā)抗病鑒定。具體操作：將鑒定材料種植在重病區(qū)肥沃土壤上，施氮水平略高于當(dāng)?shù)刎S產(chǎn)田。如有必要可進(jìn)行人工田間接種，以誘導(dǎo)發(fā)病。每個(gè)鑒

12、定材料一般栽植1020叢，可移栽或直播，重復(fù)三次。以當(dāng)?shù)乜埂⒏衅贩N作對(duì)照。在鑒定區(qū)周?chē)鷳?yīng)種植若干行咸感病的品種作誘發(fā)行，以增加感染強(qiáng)度。保持高濕條件。（三）病情鑒定一般是接種后7d即進(jìn)行病情鑒定，或當(dāng)感病對(duì)照品種達(dá)到高度發(fā)病時(shí)調(diào)查。并按全國(guó)水稻稻瘟病抗病性鑒定分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)（見(jiàn)表6-1）逐株鑒定和記載，表6-1 苗瘟和葉瘟抗性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)級(jí) 別抗性類(lèi)型癥 狀rms抗病中抗感病葉片上未見(jiàn)病斑或產(chǎn)生針頭狀或稍大褐點(diǎn)葉片上產(chǎn)生圓形或橢圓形病斑，中間灰白色，邊緣黃褐色，病斑大小在兩葉脈之間，病斑直徑在3mm以?xún)?nèi)葉片上產(chǎn)生典型梭型病斑，中心灰白色，邊緣黃褐色，病斑超過(guò)兩條葉脈間的寬度然后用加權(quán)法求其平均病級(jí)。國(guó)際

13、水稻研究所采用10級(jí)制稻瘟病抗性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)（見(jiàn)表6-2）。表6-2 苗葉瘟抗性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)（irri）病 級(jí)受害情況抗性水平0123456789葉上無(wú)病斑病斑為針頭大小的褐點(diǎn)褐點(diǎn)稍大圓形至橢圓形的灰色病斑，邊緣褐色，病斑直徑12mm梭形病斑，長(zhǎng)12cm，通常局限于兩條葉脈間，受害面積不超過(guò)葉面積的2%梭形病斑，受害面積不超過(guò)葉面積的10%梭形病斑，受害面積為葉面積的1125%梭形病斑，受害面積為葉面積的2650%梭形病斑，受害面積為葉面積的5175%全葉枯死高抗（hr）抗（r）中抗（mr）感（ms）感（s）高感（hs）五、實(shí)驗(yàn)作業(yè)1分組進(jìn)行稻瘟病的苗期人工噴霧接種鑒定。先配制病菌孢子懸浮液，在100

14、倍顯微鏡下檢查孢子液濃度，即檢查3個(gè)視野內(nèi)的孢子數(shù)，明確是否符合所要求的孢子懸浮液。2進(jìn)行噴霧接種和噴霧接種后的保溫、保濕和遮光等管理工作。3接種7d后，進(jìn)行發(fā)病情況檢查，確定供試水稻品種的抗性。4水稻抗瘟性鑒定應(yīng)注意哪些問(wèn)題?ii 小麥條銹病抗性鑒定一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、熟悉小麥條銹病的癥狀特征。2、學(xué)習(xí)和初步掌握小麥條銹病抗性鑒定技術(shù)。二、內(nèi)容說(shuō)明小麥銹病俗稱(chēng)黃疸、麥疸等，分條銹病、葉銹病和稈銹病三種，其中條銹病是我國(guó)發(fā)生范圍最廣、危害最重的麥類(lèi)病害，一般減產(chǎn)25%75%，也是東北地區(qū)限制小麥增產(chǎn)的主要因素。小麥條銹病主要發(fā)生在葉片上，其次為葉鞘和莖上，穗部穎殼和莖上也可發(fā)生。癥狀如圖6-2。病

15、原菌為條形柄銹菌（puccinia striiformis west），擔(dān)子菌亞門(mén)柄銹菌屬。夏孢子球形或卵圓形，淡黃色，尺度為1828微米×1824微米，壁厚l2微米，表面有微刺，發(fā)芽孔排列不規(guī)則（如圖6-3）。冬孢子梭形或捧形，雙細(xì)胞，橫隔處有纜縮，頂端平截或略圓，褐色，下端色淺，尺度為3053微米×1220微米，頂端壁厚35微米，具短柄（如圖6-4）。 圖6-2 條銹病癥狀 圖6-3 條銹病夏孢子堆 圖6-4 條銹病冬孢子堆條銹病的發(fā)生流行，取決于小麥品種的抗病性、菌源和菌量及氣候條件。選育和栽培抗銹品種是防治小麥銹病危害的一項(xiàng)最基本、最有效的措施，近幾年來(lái)，隨著小麥群

16、體多樣化的實(shí)施，具有累加毒性、毒性譜更寬的條銹病菌新的毒性小種的不斷產(chǎn)生和發(fā)展，許多小麥高抗品種逐漸喪失其抗病性，使我國(guó)大面積小麥生產(chǎn)品種而臨嚴(yán)重的抗性危機(jī)。從事小麥育種工作必須掌握對(duì)銹病抗性的鑒定方法。小麥品種抗條銹病的表現(xiàn)形式，按其對(duì)條銹菌的專(zhuān)化性有無(wú)，可以劃分為專(zhuān)化性抗性和非專(zhuān)化性抗性?xún)纱箢?lèi)。專(zhuān)化性抗性主要表現(xiàn)為過(guò)敏性的壞死反應(yīng)，非專(zhuān)化性抗性一般表現(xiàn)為抗接觸、抗侵入、抗擴(kuò)展以及除過(guò)敏性反應(yīng)以外的其它生理生化抗病特性。銹病的發(fā)生受到小麥材料的抗病能力、病原物的致病力和發(fā)病環(huán)境的影響，銹病在自然條件下，并非每年每地均嚴(yán)重發(fā)生。因此，在進(jìn)行抗銹病育種時(shí)，除在發(fā)病的麥田中進(jìn)行直接鑒定外，還必須人

17、工接種鑒定，如采用苗期鑒定和成株期鑒定。一般來(lái)說(shuō)苗期抗病的品種大多數(shù)成株期仍然表現(xiàn)抗病，變?yōu)楦胁〉闹徽己苄”壤?，因此苗期鑒定有重要意義。幼苗鑒定在溫室中進(jìn)行，于充分發(fā)病后進(jìn)行鑒定。成株期鑒定一般在田間進(jìn)行。因小麥條銹病的危害主要在成株期，故鑒定結(jié)果最能反應(yīng)出生產(chǎn)需要。成株期抗性鑒定在一些條銹病常年發(fā)生較重的地區(qū)可以依靠自然發(fā)病，但為了保證充分發(fā)病得到可靠的結(jié)果，也有必要進(jìn)行人工接種。本實(shí)驗(yàn)將選用苗期鑒定和成株期鑒定兩種人工接種鑒定。三、材料儀器1供試材料 小麥育種材料、感病對(duì)照品種、抗病對(duì)照品種；供試條銹病菌種（選用致病力強(qiáng)、分布廣的不同生理小種)。2儀器用具 小花盆、試管、培養(yǎng)皿或燒杯、蒸餾

18、水、接種針、玻棒、保濕桶、注射器、噴霧器、塑料薄膜等。四、方法步驟（一）幼苗接種 該方法可在較短的時(shí)間內(nèi)測(cè)定大量材料對(duì)銹病的抗病性，便于鑒定不同小麥品種對(duì)不同銹病生理小種的抗病性，能防止當(dāng)?shù)匚窗l(fā)現(xiàn)而外地己存在的新的生理小種的傳播。1育苗 在接種鑒定前10d左右，將待鑒定的小麥品種的種子，播種于直徑為810cm左右的小花盆內(nèi)。每盆播種23個(gè)品種，其中一個(gè)品種為易感病的誘發(fā)品種，以用作對(duì)照。各品種要相互隔開(kāi)，插上木簽，注明品種名稱(chēng)及播種日期等。2接種時(shí)間 接種適宜時(shí)間是在麥苗第一片葉子長(zhǎng)達(dá)45cm時(shí)。3采集孢子 在溫室培養(yǎng)的發(fā)病植株上，按不同生理小種分別采集新鮮孢子粉，將試管傾斜套進(jìn)麥株病葉，再輕

19、輕震動(dòng)，使已成熟的孢子落于管內(nèi)，達(dá)到要求量即可。4孢子懸浮液的配制 采集不同生理小種的新鮮孢子粉，分別在玻璃杯內(nèi)用蒸餾水稀釋至孢子懸浮液透光呈桔黃色即可。如果采取混合接種，則各小種的孢子粉事先應(yīng)等量混合，而后配成孢子懸浮液，現(xiàn)配現(xiàn)用。5接種方法 一般可用的接種方法有涂抹、噴霧、噴粉等方法，第一種方法主要在繁殖少量菌種或接種少量鑒定材料時(shí)應(yīng)用，后兩種方法適于對(duì)大量材料的接種鑒定。但一般常用的是涂抹接種法。具體操作是： 用潔凈的手指蘸清水將麥苗的葉片摩擦數(shù)次，去掉葉片表面的蠟質(zhì)和茸毛，以利于菌液吸附于葉面上。用消毒過(guò)的接種針蘸上配制好的孢子懸浮液，涂抹于麥葉正面進(jìn)行接種。然后記錄并在木簽上注明接種

20、日期及所用菌種。 接種后把麥苗隨即放入保濕桶中(即用一鐵皮桶，其內(nèi)盛水，保持99%100%濕度)，再用噴霧器噴降水霧，令麥苗和保濕桶的內(nèi)壁沾滿(mǎn)霧滴。噴霧不能過(guò)量，以防沖掉已接種的銹病孢子。噴霧后，馬上蓋嚴(yán)塑料薄膜，把保濕桶放置在適宜的溫度條件（最適溫度為913）下，保濕階段經(jīng)24h左右。 將麥苗取出，移至陽(yáng)光充分的溫室內(nèi)，平均溫度最好分別控制在1618，光照時(shí)間每天應(yīng)不少于12h，冬季光照不足，需每天增加一定時(shí)間的人工輔助光照。溫度和光照掌握的好壞是發(fā)病充分與否的關(guān)鍵。 經(jīng)兩周后麥苗即可發(fā)病，此時(shí)即可鑒定品種的抗病力。.注意：在分別接種不同生理小種進(jìn)行鑒定時(shí)，接種用的一切用具都要先行消毒，防止

21、可能發(fā)生的污染影響鑒定結(jié)果。（二）成株接種1材料種植 把每個(gè)被鑒定材料采用凹穴播種法種成一個(gè)小區(qū)，在鑒定材料圃的四周和在鑒定區(qū)內(nèi)每當(dāng)隔1020個(gè)小區(qū)播種高感品種做為誘發(fā)行。誘發(fā)行最好用24個(gè)高感品種等量混合播種。2接種時(shí)間 接種條銹病的適宜時(shí)間，通常是在小麥拔節(jié)前后。3孢子采集條銹菌配制孢子懸浮液 方法同幼苗接種。4接種方法 一般可用的接種方法有涂抹、注射、噴霧、噴粉等方法，但最常用的是注射接種法：選擇夜間有露傍晚進(jìn)行。為了提高田間濕度，接種后和開(kāi)始發(fā)病后，在誘發(fā)行上用清水噴霧，或澆水，保證良好的誘發(fā)條件。將配制好的孢子懸浮液吸入注射器在感病誘發(fā)行植株的第二可見(jiàn)（從上數(shù)）葉片與葉鞘相接處將針頭

22、傾斜刺入，切勿刺穿，再稍稍回抽，即行注射孢子液，以見(jiàn)到心葉上端冒出水珠為度。在誘發(fā)行接種，一般每隔1m左右選取單莖35個(gè)予以注射35針。隨即用塑料薄膜覆蓋保濕，次日早晨揭開(kāi)。（三) 抗銹性鑒定觀察與記載衡量小麥品種對(duì)銹病的抗性和發(fā)病程度，常用反應(yīng)型、普遍率及嚴(yán)重度三個(gè)指標(biāo)。 反應(yīng)型 是指小麥植株受病菌侵染后的保衛(wèi)性反應(yīng)。是一種定性的記載標(biāo)準(zhǔn)，用常規(guī)分級(jí)法表示，能較好地反映出品種免疫性的本質(zhì)。目測(cè)評(píng)定，其反應(yīng)型新標(biāo)準(zhǔn)采用9級(jí)制，其分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)如表6-3。表6-3 小麥品種對(duì)條銹菌反應(yīng)型的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)級(jí) 別抗 性 程 度品 種 反 應(yīng) 的 癥 狀013579免疫型近免疫型高抗型中抗型中感型高感型葉片健康，

23、沒(méi)有病害癥狀葉片上有點(diǎn)滴枯死斑和失綠反應(yīng)，但無(wú)夏孢于堆葉片夏孢子堆很小且很少，孢子周?chē)型示G和枯死斑夏孢子堆小到中等，較分散，周?chē)锌菟篮褪ЬG反應(yīng)夏孢子堆中等大小，數(shù)量較多，周?chē)M織無(wú)枯死反應(yīng)，但有失綠現(xiàn)象夏孢子堆大而多，連成條紋，串連成片，早期葉片既無(wú)枯死也無(wú)褪綠現(xiàn)象 嚴(yán)重度 即病葉上孢子堆占葉面積的百分率，用以表示病害發(fā)生的嚴(yán)重程度。用分級(jí)法表示。一般可分8級(jí)，即1%、5%、10%、25%、40%、65%、80%、100%。一般在田間銹病發(fā)展到高峰期時(shí)進(jìn)行鑒定，記載時(shí)在1m行中隨機(jī)取3點(diǎn)，每點(diǎn)記載1030片頂三葉的實(shí)際嚴(yán)重度，求平均嚴(yán)重度。 普遍率 指病害發(fā)生的普遍程度，即發(fā)病葉片數(shù)占調(diào)查

24、總?cè)~片數(shù)的百分率。一般用目測(cè)估計(jì)法觀測(cè)記載。要求精確鑒定時(shí)，可根據(jù)被鑒定材料小區(qū)面積的大小，可設(shè)點(diǎn)隨機(jī)選取3050片葉觀察記載。此外，還應(yīng)觀察銹菌的潛育期。即銹菌從侵入和建立寄生關(guān)系到表現(xiàn)明顯的癥狀為止的時(shí)期。潛育期的長(zhǎng)短與品種的抗病性有密切的關(guān)系，即使同一品種對(duì)不同生理小種以及在不同溫度下其潛育期也不同，因而可用來(lái)作為鑒定的一種指標(biāo)。接種后一般從11d后開(kāi)始，每天在接菌圃中逐品種檢查一次以某一品種有50%頂三葉上孢子堆破裂為標(biāo)準(zhǔn)，記載日期，推算潛育期。在正常情況下，接種后約經(jīng)兩星期即可發(fā)病，抗銹性的病情鑒定時(shí)間是小麥乳熟期以后，田間銹病發(fā)展到高峰時(shí)進(jìn)行。每個(gè)品種逐個(gè)進(jìn)行鑒定記載。鑒定小麥品種

25、的抗銹性應(yīng)以鑒定反應(yīng)型為主，并目測(cè)鑒定普遍率和嚴(yán)重率。鑒定雜種后代只鑒定反應(yīng)型。均按上述分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)定。五、實(shí)驗(yàn)作業(yè)1采集條銹病菌新鮮孢子和配制其孢子懸浮液，并按分配任務(wù)進(jìn)行注射接種和做好接種后的田間管理工作。2小麥條銹病發(fā)病條件是哪些? 在人工接種時(shí)怎樣保證這些條件? 接種鑒定抗性過(guò)程中，容易出現(xiàn)哪些問(wèn)題干擾鑒定結(jié)果？ 3發(fā)病盛期對(duì)供鑒材料的抗病性進(jìn)行鑒定，并對(duì)抗性進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)分析。將觀察結(jié)果填寫(xiě)表6-4。表6-4 小麥條銹病抗病性鑒定結(jié)果記錄品種反應(yīng)型嚴(yán)重度普遍率潛育期iii 玉米大斑病抗性鑒定一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康谋緦?shí)驗(yàn)將學(xué)習(xí)和初步掌握玉米大斑病抗性鑒定技術(shù)：1玉米大斑病的主要癥狀特征觀察2玉米

26、大斑病的接種辦法3玉米大斑病的病情與抗性級(jí)別鑒定二、內(nèi)容說(shuō)明玉米大斑?。╤elminthosporium turcicum）在中國(guó)分布廣泛，主要發(fā)生在氣候較涼爽的玉米種植區(qū)，是東北玉米主要病害之一，發(fā)生嚴(yán)重。大斑病菌主要侵染玉米葉片、苞葉和葉鞘。病害主要發(fā)生在玉米抽雄以后，下部葉片首先發(fā)病并迅速向上部葉片擴(kuò)展。發(fā)病初期，葉片上出現(xiàn)水漬狀青灰色斑，向兩端擴(kuò)展，形成黃褐色梭形或長(zhǎng)紡錘形大斑（如圖6-5），影響植株光合作用，造成籽粒灌漿不足，導(dǎo)致產(chǎn)量降低，嚴(yán)重時(shí)全株枯死，造成嚴(yán)重?fù)p失。 圖6-5 玉米大斑病典型病斑病原菌為大斑突臍孢菌exserohilum turcicum (pass.) leon

27、ard et suggs 。有性態(tài)：大斑剛毛球腔菌setosphaeria turcica (luttrell) leonardet suggs。世界已知病原菌有5個(gè)生理小種，我國(guó)已發(fā)現(xiàn)其中3個(gè)，分別為0號(hào)小種，1號(hào)小種，23號(hào)小種。0號(hào)和1小種是我國(guó)主要玉米產(chǎn)區(qū)的優(yōu)勢(shì)小種?？共∮N是防治大斑病最經(jīng)濟(jì)有效的措施。玉米對(duì) 圖6-6 玉米大斑病原菌 大斑病抗性表現(xiàn)亦分兩種：一是由多基因控制，表現(xiàn)不同程度的病斑數(shù)；一是由單基因控制，產(chǎn)生抗性病斑，表現(xiàn)褪綠病斑或褪綠斑點(diǎn)甚至無(wú)病斑。玉米對(duì)斑病抗性水平鑒定和評(píng)價(jià)是一項(xiàng)專(zhuān)業(yè)性強(qiáng)、技術(shù)性高的工作，包括一系列的內(nèi)容。只有在具備適宜的病原菌、適宜的病害發(fā)生環(huán)境以

28、及能夠較準(zhǔn)確反映寄主抗性本質(zhì)的評(píng)價(jià)指標(biāo)的條件下，玉米品種的抗性水平才能得以真實(shí)反映。抗病性鑒定的各個(gè)步驟都影響著植株抗性的表達(dá)程度和表達(dá)真實(shí)性。科學(xué)、準(zhǔn)確地開(kāi)展玉米的抗病特性鑒定和抗性評(píng)價(jià)，是正確評(píng)價(jià)種質(zhì)的抗性、在育種過(guò)程中合理選擇和聚合抗性、在生產(chǎn)中充分利用抗性的重要基礎(chǔ)。玉米抗病性鑒定程序主要包括主要生理小種病原菌的準(zhǔn)備，接種時(shí)期的選擇，最佳的接種方法、抗病性鑒定圃的設(shè)立、田間調(diào)查觀察與記載等步驟和內(nèi)容。鑒定玉米育種材料抗大斑病的方法有自然誘發(fā)鑒定，大田誘發(fā)鑒定和人工接種鑒定。但以人工接種鑒定較為可靠。三、材料儀器藥品1供試材料 玉米抗病和感病對(duì)照材料，玉米大斑病菌種（1號(hào)生理小種）。2儀

29、器用具 高壓滅菌鍋、超凈工作臺(tái)、酒精燈、接種環(huán)、恒溫箱、燒杯、漏斗、試管、紗布、玻璃棒、培養(yǎng)皿、顯微鏡、小噴霧器、保濕罩等。3藥品試劑 75%酒精、0.1%升汞溶液、葡萄糖、瓊脂、馬鈴薯等。四、方法步驟（一）人工接種1菌種的培養(yǎng) 病原菌的分離 選取新鮮病葉作為分離材料，在滅菌室內(nèi)進(jìn)行操作。先將病斑剪成45mm2大小，約3040塊，然后分別將病組織小塊置于0.1%升汞溶液中消毒1min，立即取出，按無(wú)菌操作方法投入無(wú)菌水中清洗三次，每次23 min。最后以無(wú)菌操作方法，將病斑組織按正方形四點(diǎn)排列，栽種在pda平板培養(yǎng)基（去皮馬鈴薯20g，葡萄糖1020g，瓊脂1720g，水100ml）上，置25

30、30溫箱中培養(yǎng)約7d。 菌種的純化 選取培養(yǎng)性狀典型的菌落，按無(wú)菌操作方法移植到斜面培養(yǎng)基上（每個(gè)典型菌落移3管），然后再放在25恒溫下培養(yǎng)。待產(chǎn)生孢子后，選取菌落較一致的斜面12管，挑取一點(diǎn)，觀察孢子的形狀、分隔數(shù)、臍點(diǎn)特點(diǎn)。然后計(jì)測(cè)孢子大小。確認(rèn)純種后，再用斜面培養(yǎng)基擴(kuò)大培養(yǎng)，讓其產(chǎn)生大量孢子后，置冰箱中保存待用。2孢子懸浮液的制備 將培養(yǎng)物用少量蒸餾水洗下孢子，用紗布濾去菌絲及培養(yǎng)基，濾液用蒸餾水稀釋?zhuān){(diào)至在100倍顯微鏡下每個(gè)視野10個(gè)孢子左右為宜。3接種時(shí)期 苗期接種一般在玉米苗齡58葉時(shí)進(jìn)行；成株期接種在抽雄前進(jìn)行。4接種方法 苗期接種 接種前在孢子液中加入2%蔗糖，以促進(jìn)孢子萌發(fā)。接種菌液量是每株12cm。用微型噴霧器均勻噴霧，噴后立即覆蓋保濕罩，在22左右保濕24h。 成株期接種 將粉碎的頭一年病葉撒入心葉喇叭口，接種應(yīng)在下午或傍晚濕度較大時(shí)進(jìn)行。天氣干燥時(shí)，接種后可在每株心葉噴水。（二）病情鑒定和分級(jí)標(biāo)準(zhǔn) 1苗期鑒定及標(biāo)準(zhǔn) 接種后12d左右進(jìn)行病情鑒定，鑒定應(yīng)