抗核抗體基本概念及對應臨床疾病概述

1、抗核抗體基本概念及臨床檢測抗核抗體基本概念及臨床檢測傳統(tǒng)定義傳統(tǒng)定義 針對細胞核成分的自身抗體的總稱。針對細胞核成分的自身抗體的總稱。廣義定義廣義定義 針對細胞內(nèi)所有抗原成分的自身抗體的總稱。對針對細胞內(nèi)所有抗原成分的自身抗體的總稱。對ana的理的理解不再局限于核成分，而是指核酸和核蛋白抗體的總稱解不再局限于核成分，而是指核酸和核蛋白抗體的總稱 靶抗原存在于包括細胞核、細胞漿、細胞骨架、細胞分裂靶抗原存在于包括細胞核、細胞漿、細胞骨架、細胞分裂結構等部位結構等部位抗核抗體的定義抗核抗體的定義 ana可見于多種疾病，特別是結締組織疾病，常作為結締組可見于多種疾病，特別是結締組織疾病，常作為結締組

2、織病的診斷、病情判斷和療效觀察的指標織病的診斷、病情判斷和療效觀察的指標 在非結締組織病中也可出現(xiàn)陽性。在非結締組織病中也可出現(xiàn)陽性。 正常人中（特別是老年人）也可出現(xiàn)陽性，但滴度低，并且正常人中（特別是老年人）也可出現(xiàn)陽性，但滴度低，并且常表現(xiàn)為常表現(xiàn)為igm型型 高滴度高滴度ana則高度提示自身免疫性疾病則高度提示自身免疫性疾病 目前，目前，ana檢測已成為臨床上的一個極重要的自身免疫病的檢測已成為臨床上的一個極重要的自身免疫病的篩查實驗。篩查實驗。ana檢測的臨床意義檢測的臨床意義系統(tǒng)性紅斑狼瘡系統(tǒng)性紅斑狼瘡活動期活動期非活動期非活動期藥物誘導的紅斑狼瘡藥物誘導的紅斑狼瘡混合性結締組織病

3、（混合性結締組織?。╩ctd、sharp綜合征）綜合征）類風濕性關節(jié)炎類風濕性關節(jié)炎進行性系統(tǒng)性硬化癥進行性系統(tǒng)性硬化癥多發(fā)性肌炎及皮肌炎多發(fā)性肌炎及皮肌炎干燥綜合征干燥綜合征慢性活動性肝炎慢性活動性肝炎潰瘍性結腸炎潰瘍性結腸炎其它風濕病其它風濕病正常人正常人 9510080100100100204020508595305070803040265-10ana檢測的臨床意義ana實驗室檢測策略推薦實驗室檢測策略推薦ana間接免疫熒光法篩查實驗間接免疫熒光法篩查實驗間接免疫熒光法檢測間接免疫熒光法檢測ana基本原理基本原理間接免疫熒光法間接免疫熒光法 包被包被hep-2細胞的基質玻片細胞的基質玻片

4、樣本中樣本中ana-iggfitc標記的抗人標記的抗人igg抗體抗體l 抗原譜完整抗原譜完整 (細胞核、細胞漿中近百種自身抗原細胞核、細胞漿中近百種自身抗原)l 人源細胞，無種屬非特異熒光干擾人源細胞，無種屬非特異熒光干擾l 腫瘤細胞，易于培養(yǎng)及商品化生產(chǎn)腫瘤細胞，易于培養(yǎng)及商品化生產(chǎn)l 核質比大，可觀察到多種不同熒光核型核質比大，可觀察到多種不同熒光核型ana篩查的經(jīng)典和標準基質篩查的經(jīng)典和標準基質: hep-2均質型核點型著絲點型核仁型scl-70粗顆粒型細顆粒型核膜型.核糖體p蛋白線粒體型高爾基體溶酶體肌動蛋白波形蛋白基于基于hep-2細胞為基質的細胞為基質的ana初篩實驗初篩實驗ana

5、間接免疫熒光法篩查試驗的實際價值間接免疫熒光法篩查試驗的實際價值l 初步甄別自身免疫性疾病患者（陰陽性結果）初步甄別自身免疫性疾病患者（陰陽性結果）l 盡可能判斷熒光核型（縮小靶抗原確認實驗范圍）盡可能判斷熒光核型（縮小靶抗原確認實驗范圍）l 獲取抗體滴度信息（判斷病情進展、預后等）獲取抗體滴度信息（判斷病情進展、預后等）考慮到熒光法篩查試驗存在主觀性強的特點，因此應考慮到熒光法篩查試驗存在主觀性強的特點，因此應以一種客觀和現(xiàn)實的態(tài)度去面對篩查試驗結果以一種客觀和現(xiàn)實的態(tài)度去面對篩查試驗結果幾個相對常見且重要的熒光核型幾個相對常見且重要的熒光核型均質型核點型著絲點型核仁型粗顆粒型核膜型.核糖體

6、p蛋白線粒體型肌動蛋白常見且重要核型的標準l核型表現(xiàn)相對典型l陽性率相對較高l靶抗原相對明確應重視應重視ana滴度的檢測滴度的檢測抗體滴度的臨床意義1、明確界定自身免疫性疾病患者；2、作為疾病進程、臨床療效和病情預后及轉歸等的判斷指標當前國際主流ana間接免疫熒光法檢測系統(tǒng)廣泛采用的起始稀釋度為1:40。即該檢測系統(tǒng)的正常參考范圍為1:40。梯度稀釋時的稀釋因子為1:2。hob公司產(chǎn)品推薦按照1:80開展稀釋。 熒光強弱及血清稀釋度熒光強弱及血清稀釋度熒光強弱判讀熒光強弱判讀 觀察標本的特異性熒光強度一般用“+”號表示?！啊睘闊o或僅見極微弱熒光；“+”為熒光較弱但清楚可見；“+”為熒光明亮；“

7、+”為耀眼的強熒光。臨床上根據(jù)特異性熒光強度達臨床上根據(jù)特異性熒光強度達“+”+”以上判定為陽性以上判定為陽性抗體梯度稀釋抗體梯度稀釋起始稀釋：起始稀釋：1:801:80梯度稀釋（稀釋因子梯度稀釋（稀釋因子2 2）1:1601:1601:3201:3201:6401:6401:12801:12801:25601:2560直至抗體轉陰直至抗體轉陰各稀釋度的反應性各稀釋度的反應性抗體滴度抗體滴度臨床意義臨床意義1:801:640陽性陽性+1:80陽性，需結合臨床表現(xiàn)綜合判斷陽性，需結合臨床表現(xiàn)綜合判斷陽性陽性+1:160陽性，提示可能存在相關疾病陽性，提示可能存在相關疾病陽性陽性+弱弱+1:320

8、明確陽性，提示可能存在相關疾病明確陽性，提示可能存在相關疾病陽性陽性+陽性陽性+1:640中等陽性，提示可能存在相關疾病中等陽性，提示可能存在相關疾病陽性陽性+陽性陽性+1:1280強陽性，高度提示存在相關疾病強陽性，高度提示存在相關疾病陽性陽性+陽性陽性+1:2560極強的陽性，高度提示存在相關疾病。極強的陽性，高度提示存在相關疾病。ana熒光滴度判讀舉例熒光滴度判讀舉例hob公司間接免疫熒光法產(chǎn)品系列公司間接免疫熒光法產(chǎn)品系列產(chǎn)品系列產(chǎn)品系列ana篩查篩查dsdnaakaanca組織器官組織器官基質基質hep-2細胞細胞綠蠅短膜蟲綠蠅短膜蟲大鼠食管大鼠食管中性粒細胞中性粒細胞乙醇和甲醛固定

9、乙醇和甲醛固定大鼠肝大鼠肝/腎腎/胃胃檢測項目檢測項目ana各種不同核型各種不同核型抗抗dsdna抗體抗體抗角蛋白抗體抗角蛋白抗體抗中性粒細胞胞漿抗體抗中性粒細胞胞漿抗體asmapcaamalkm-1lc-1hep-2細胞產(chǎn)品系列細胞產(chǎn)品系列 （舉例）（舉例）166孔孔1010孔孔812孔孔ana靶抗原確認實驗靶抗原確認實驗條帶酶免分析法檢測條帶酶免分析法檢測ana基本原理基本原理lia檢測方法原理檢測方法原理底物底物顏色反應顏色反應硝酸纖維膜硝酸纖維膜igg抗體抗體堿性磷酸酶標記的抗人堿性磷酸酶標記的抗人igg抗體抗體anaana譜系列譜系列u1-nrnp u1-nrnp 和和 smsm抗原

10、抗原sle: 5-30%sle: 5-30%sle: 15-40%sle: 15-40%mctd: 95-100%mctd: 95-100%功能功能: :參與參與mrnamrna前體的剪切前體的剪切ss-a (ro-60), ro-52 和和ss-banti-ss-a (60 kda)干燥綜合征.:40-95%sle: 20-60%新生兒狼瘡: 96%anti-ss-b干燥綜合征.:40-95%sle: 10-20%新生兒狼瘡: 78%anti-ro-52 (52 kda)非特異功能: 調(diào)控rna翻譯功能:rna聚合酶iii輔助蛋白xscl-70 (dna-拓撲異構酶拓撲異構酶i)功能: 在d

11、na復制和轉錄過程中完成雙鏈解螺旋疾病疾病:硬化癥硬化癥: 50% - 75%anti-scl-70 anti-scl-70 特點特點 局限型和彌散型硬化癥病中的陽性率分別為局限型和彌散型硬化癥病中的陽性率分別為10% 和和48%。 抗抗scl-70抗體陽性的患者通常病情發(fā)展快、預抗體陽性的患者通常病情發(fā)展快、預后差、多器官累及。后差、多器官累及。pm-scl 抗原抗原: 幾種多肽復合物幾種多肽復合物(分子量間于分子量間于20-100kda)，主要的靶抗原為，主要的靶抗原為100 kda 相關疾病相關疾病: 硬化癥硬化癥:2% - 5% 肌炎肌炎:8%重疊綜合征重疊綜合征:24%jo-1 抗原

12、:組氨酰trna合成酶(50 kda),細胞漿中的磷蛋白 相關疾病: 多肌炎/皮肌炎的血清學標志，陽性率為25- 35%，當伴有肺間質纖維化的多肌炎，陽性率可高達70%。 著絲點著絲點 抗原：動粒中的4種蛋白：a (17 kda), b (80 kda), c(140 kda), d蛋白 (50 kda)。著絲點蛋白 b為主要的靶抗原 (與iif：100%) 功能: 分裂期紡垂體的附著點 相關疾病: 硬化癥:18%局限型: 80% - 95%(crest綜合征) pcna:細胞增殖相關核抗原細胞增殖相關核抗原i型型 抗原抗原:dna聚合酶聚合酶的輔助蛋白的輔助蛋白 發(fā)揮控制細胞周期的作用發(fā)揮控

13、制細胞周期的作用 相關疾病相關疾病: 系統(tǒng)性紅斑狼瘡的特異性抗體，但其發(fā)生率僅為系統(tǒng)性紅斑狼瘡的特異性抗體，但其發(fā)生率僅為3%。 染色體結構示意圖染色體結構示意圖dna核小體染色體染色質組蛋白dsdna 抗原：雙鏈dna，天然dna(脫氧核糖核酸骨架) 相關疾?。篸sdna: 為sle的診斷標準之一，陽性率為60-90%，不同的檢測方法診斷特異性差別較大?？贵w滴度與疾病的活動性、狼瘡腎炎的發(fā)病風險具有相關性。組蛋白組蛋白 抗原:h1, h2a, h2b, h3, h4，h2a-h2b，h3-h4(主要的靶抗原為h1和h2b) 相關疾病: 藥物誘導性 le: 100%(抗組蛋白抗體是該病唯一的標

14、志性抗體)各種結締組織?。簊le: 30-80% ssc: 30% ss: 10%核小體核小體 抗原:組蛋白和dna形成的復合物 相關疾病: sle：高特異性指標，陽性率為50-95%，特異性幾乎100%，抗核小體抗體可獨立于抗dsdna抗體單獨出現(xiàn)，因而抗核小體抗體與抗dsdna抗體聯(lián)合檢測，可提高sle的血清學檢出率。40 s亞基60 s亞基亞基p0p1 p1p2 p2抗原抗原:核糖體核糖體60s 亞基中的亞基中的3種蛋白質種蛋白質:p0, p1, p2. 具備相同的碳端抗原位點具備相同的碳端抗原位點核糖體核糖體 p蛋白蛋白相關疾病相關疾病: sle:為為sle的高特異性指標，陽性率為的高