溶血對生化檢驗結果的影響PPT課件

1、溶血的定義溶血對生化檢驗結果的影響溶血標本的處理標本溶血的原因如何避免溶血第1頁/共30頁一、溶血的定義溶血是紅細胞破壞溶血是紅細胞破壞, ,紅細胞的一些組分釋紅細胞的一些組分釋放進入血清或血漿，導致實驗樣品出現(xiàn)特有的放進入血清或血漿，導致實驗樣品出現(xiàn)特有的紅色增加。很多因素都可以使紅細胞破壞，發(fā)紅色增加。很多因素都可以使紅細胞破壞，發(fā)生溶血，從而干擾監(jiān)測，使檢驗結果失去真實生溶血，從而干擾監(jiān)測，使檢驗結果失去真實性和準確性，影響疾病的診斷和治療。性和準確性，影響疾病的診斷和治療。第2頁/共30頁溶血是臨床生化檢驗中最常見的一種干擾溶血是臨床生化檢驗中最常見的一種干擾和影響因素。和影響因素。溶

2、血后溶血后顯著增高顯著增高的有的有ASTAST、ALTALT、LDHLDH、K+K+、TBILTBIL、TPTP、ALBALB等；等；溶血后溶血后顯著降低顯著降低的項目有的項目有GLUGLU、CRCR等。等。第3頁/共30頁（一）溶血對肝功能測定的影響1.天門冬氨酸氨基轉移酶（AST） 溶血造成AST升高可能是由以下兩個方面的原因引起(1)人類紅細胞中AST活性約為血清中的40倍，當標本溶血時紅細胞破裂后釋放AST，勢必引起血清AST活性的升高從而使溶血標本的結果明顯高于未溶血標本。(2)溶血后血清顏色加深，致使測得的吸光度值增高。第4頁/共30頁2 2、谷氨酸、谷氨酸- -丙酮酸轉氨酶（丙酮

3、酸轉氨酶（ALTALT） 紅細胞中紅細胞中ALTALT活性約是血清中活性約是血清中7 71515倍。嚴重溶血（倍。嚴重溶血（HbHb約約6.5g/L6.5g/L）時，可使）時，可使血清血清ALTALT由由20U/L20U/L增高到增高到26.5U/L26.5U/L（增加約（增加約27%27%）。因此溶血后）。因此溶血后ALTALT含量測定的增高含量測定的增高主要來源于細胞內主要來源于細胞內ALTALT的大量釋放。的大量釋放。 可見與可見與ASTAST相比，相比，ALTALT受溶血影響輕受溶血影響輕些。些。第5頁/共30頁3 3、乳酸脫氫酶（、乳酸脫氫酶（LDHLDH） 紅細胞和血小板中含有豐富

4、的紅細胞和血小板中含有豐富的LDHLDH，紅細胞中，紅細胞中LDHLDH的含量是血清的的含量是血清的160160200200倍，故受溶血影響最大。在倍，故受溶血影響最大。在測定環(huán)節(jié)上都有可能發(fā)生不同程度的測定環(huán)節(jié)上都有可能發(fā)生不同程度的血小板破壞，而影響血小板破壞，而影響LDHLDH測定，使其測定，使其測定結果偏高。測定結果偏高。第6頁/共30頁4 4、谷氨酰轉肽酶（谷氨酰轉肽酶（GGTGGT） 由于紅細胞內由于紅細胞內GGTGGT含量很低，輕含量很低，輕微溶血對其測定結果影響不大，但重微溶血對其測定結果影響不大，但重度溶血則有影響度溶血則有影響第7頁/共30頁5 5、總蛋白（總蛋白（TPTP

5、） 總蛋白的測定通常選用雙縮脲法，總蛋白的測定通常選用雙縮脲法，主波長主波長540nm,540nm,而血紅蛋白在而血紅蛋白在555nm555nm有吸收有吸收峰，試驗表明如果溶血標本中峰，試驗表明如果溶血標本中HbHb 0.5g0.5gL L時無干擾；而高時無干擾；而高HbHb，會使結，會使結果偏高，可以做樣品空白來消除影響。果偏高，可以做樣品空白來消除影響。第8頁/共30頁6 6、總膽紅素（、總膽紅素（TBILTBIL） 重氮法測定重氮法測定TBILTBIL，最后生成紅紫色，最后生成紅紫色的偶氮膽紅素，主要在波長為的偶氮膽紅素，主要在波長為540nm540nm560nm560nm處有光吸收。而

6、處有光吸收。而HbHb在波長在波長540nm540nm550nm550nm處有光吸收，恰與偶氮膽紅素的比處有光吸收，恰與偶氮膽紅素的比色波長相近。因此溶血后細胞破裂時大色波長相近。因此溶血后細胞破裂時大量量HbHb進入血清進入血清, ,勢必造成勢必造成TBILTBIL測定值的升測定值的升高高, ,是是TBILTBIL測定的正向干擾因素。測定的正向干擾因素。第9頁/共30頁 此外，由于此外，由于HbHb重氮試劑反應形成的重氮試劑反應形成的產(chǎn)物可破壞偶氮膽紅素，溶血對重氮法產(chǎn)物可破壞偶氮膽紅素，溶血對重氮法測定膽紅素同時存在負向干擾，使測定測定膽紅素同時存在負向干擾，使測定結果偏低，但該作用較輕微

7、，因此溶血結果偏低，但該作用較輕微，因此溶血后由于后由于HbHb對測定結果的干擾，對測定結果的干擾，TBILTBIL的測的測定結果往往偏高。定結果往往偏高。第10頁/共30頁（二）溶血對血脂測定的影響1 1、總膽固醇（、總膽固醇（TCTC） 試驗表明如果溶血標本中試驗表明如果溶血標本中HbHb1.5g1.5gL L無干擾；而高濃度時因無干擾；而高濃度時因HbHb的固有顏色的固有顏色干擾，會使結果偏高。干擾，會使結果偏高。第11頁/共30頁2 2、甘油三酯（甘油三酯（TGTG） 除去上述如總膽固醇影響因素外，除去上述如總膽固醇影響因素外，目前所用甘油磷酸氧化酶目前所用甘油磷酸氧化酶過氧化物過氧化

8、物酶法和乙酰丙醇顯色法都以測量甘油酶法和乙酰丙醇顯色法都以測量甘油為基礎，而紅細胞膜磷脂可被磷脂酶為基礎，而紅細胞膜磷脂可被磷脂酶作用，產(chǎn)生游離甘油，所以溶血后測作用，產(chǎn)生游離甘油，所以溶血后測定結果偏高。定結果偏高。第12頁/共30頁3 3、載脂蛋白載脂蛋白A(APOA)A(APOA)及載脂蛋及載脂蛋(APOB)(APOB) 免疫透射比濁法使用最廣泛，以免疫透射比濁法使用最廣泛，以抗原抗體為基礎，血紅蛋白可使測定抗原抗體為基礎，血紅蛋白可使測定結果升高，故標本溶血后測定結果偏結果升高，故標本溶血后測定結果偏高。高。第13頁/共30頁（三）溶血對腎功能測定的影響1 1、尿素（尿素（UREA)U

9、REA) 無論是二乙酰無論是二乙酰肟法還是脲酶肟法還是脲酶法，溶血均可導致光譜藍色部分吸法，溶血均可導致光譜藍色部分吸光度值升高對結果都有干擾，導致光度值升高對結果都有干擾，導致結果偏高。結果偏高。第14頁/共30頁2 2、尿酸、尿酸(UA) (UA) 試驗表明如果溶血標本中試驗表明如果溶血標本中HbHb1g1gL L會干擾；是因為測定波長會干擾；是因為測定波長546mm546mm時因時因HbHb固有顏色固有顏色潛在影響使測定結果潛在影響使測定結果偏高偏高( (比色法比色法) ) 。 第15頁/共30頁3 3、肌酐（、肌酐（CreCre） 苦味酸法測定苦味酸法測定CreCre的特異性較差，的特

10、異性較差，易受其它還原性物質影響，主要是維易受其它還原性物質影響，主要是維生素生素C C、酮體、丙酮酸等假肌酐干擾。、酮體、丙酮酸等假肌酐干擾。假肌酐物質亦可與苦味酸形成顏色反假肌酐物質亦可與苦味酸形成顏色反應，導致測定值發(fā)生偏差。這種假肌應，導致測定值發(fā)生偏差。這種假肌酐物質紅細胞中最多，血清中較少，酐物質紅細胞中最多，血清中較少，故溶血后紅細胞中假肌酐物質的釋放故溶血后紅細胞中假肌酐物質的釋放是造成測定值發(fā)生偏差的主要原因。是造成測定值發(fā)生偏差的主要原因。第16頁/共30頁 溶血釋放出的物質導致溶血釋放出的物質導致JaffeJaffe反應反應 而致測定結果的升高。而致測定結果的升高。Jaf

11、feJaffe反應指血反應指血漿中的肌酐與堿性苦味酸鹽反應，生漿中的肌酐與堿性苦味酸鹽反應，生成黃紅色的苦味酸肌酐復合物的反應。成黃紅色的苦味酸肌酐復合物的反應。第17頁/共30頁（四）溶血對電解質測定的影響1 1、鉀（、鉀（K K+ +） 細胞內液的主要陽離子，約細胞內液的主要陽離子，約9898的鉀存于細胞內，紅細胞內鉀濃的鉀存于細胞內，紅細胞內鉀濃度約為度約為105mmol/L105mmol/L，而血清中僅有，而血清中僅有3.5 mmol/L3.5 mmol/L5.4 mmol/L5.4 mmol/L，紅細胞，紅細胞中鉀的含量比血清中高中鉀的含量比血清中高2323倍。因此倍。因此溶血造成血

12、清鉀明顯升高，增高主溶血造成血清鉀明顯升高，增高主要來源于紅細胞內鉀的大量釋放。要來源于紅細胞內鉀的大量釋放。第18頁/共30頁 有報道表明血清游離血紅蛋白有報道表明血清游離血紅蛋白在在2.52.52.8g/L2.8g/L時血清鉀增高時血清鉀增高14%14%16%16%，血清游離血紅蛋白達，血清游離血紅蛋白達6.6g/L6.6g/L時血清鉀增高可達時血清鉀增高可達41%41%，所以應在，所以應在樣品采集后樣品采集后1h1h內應將紅細胞與血清內應將紅細胞與血清分離。并且在分析血清鉀的結果時分離。并且在分析血清鉀的結果時應引起高度注意。應引起高度注意。第19頁/共30頁2 2、氯（、氯（CLCL-

13、 -） 血漿中氯約為血漿中氯約為103mmol/L103mmol/L，紅，紅細胞中氯約為細胞中氯約為4954mmol/L4954mmol/L。溶血。溶血會導致細胞內的氯離子轉移到血清會導致細胞內的氯離子轉移到血清中，從而引起了血清氯離子測定值中，從而引起了血清氯離子測定值的升高的升高第20頁/共30頁3 3、磷（、磷（P P） 實驗表明如果溶血標本中實驗表明如果溶血標本中HbHb1g/L1g/L影響很小，而在影響很小，而在HbHb等于等于2.8g2.8gL L時影響較大，所以應在采血時影響較大，所以應在采血后后30min30min內分離血細胞，否則會因磷內分離血細胞，否則會因磷酸酯從酸酯從RB

14、CRBC中釋放而會使結果偏高。中釋放而會使結果偏高。 第21頁/共30頁（五）溶血對葡萄糖測定的影響葡萄糖葡萄糖(GLU)(GLU) 葡萄糖氧化酶法測定葡萄糖氧化酶法測定GLUGLU的特異的特異性較強，干擾物較少，但過氧化氫酶性較強，干擾物較少，但過氧化氫酶易受到其它物質的影響，如維生素易受到其它物質的影響，如維生素C C、谷胱苷肽均因能競爭谷胱苷肽均因能競爭H H2 2O O2 2而導致負偏而導致負偏差，樣品中某些強的酶會促使差，樣品中某些強的酶會促使GLUGLU降降解而導致測定值明顯下降的。如果在解而導致測定值明顯下降的。如果在血清或血漿加入血清或血漿加入NaFNaF、KFKF作為酵解抑作

15、為酵解抑制劑樣品收集后立即去蛋白時，溶血制劑樣品收集后立即去蛋白時，溶血樣品也可以用。樣品也可以用。第22頁/共30頁（六）溶血對心肌酶譜測定的影響 由于由于LDH LDH 、HBDHHBDH在紅細胞內的含在紅細胞內的含量皆明顯高于胞外，故溶血后結果都量皆明顯高于胞外，故溶血后結果都升高，雖然紅細胞中不含升高，雖然紅細胞中不含CK CK ，但含，但含有大量的腺苷酸激酶有大量的腺苷酸激酶(AK)(AK)，可干擾測，可干擾測定定CK CK 的偶聯(lián)法的反應體系，人為地的偶聯(lián)法的反應體系，人為地引起引起CKCK結果的升高。結果的升高。第23頁/共30頁三、標本溶血的原因1 1、環(huán)境溫度變化，氣溫較低時

16、血清、環(huán)境溫度變化，氣溫較低時血清不易分離，標本需經(jīng)多次離心，離心不易分離，標本需經(jīng)多次離心，離心后容易出現(xiàn)溶血現(xiàn)象。后容易出現(xiàn)溶血現(xiàn)象。2 2、標本運送過程中導致碰撞，從而、標本運送過程中導致碰撞，從而使離心后也會出現(xiàn)溶血現(xiàn)象。使離心后也會出現(xiàn)溶血現(xiàn)象。3 3、采血量不足，相對低滲抗凝導致、采血量不足，相對低滲抗凝導致溶血。溶血。第24頁/共30頁4 4、特殊人群如肥胖者、小孩等血管、特殊人群如肥胖者、小孩等血管不易找到或太細導致抽血時多次操不易找到或太細導致抽血時多次操作或壓迫時間過長也會引起溶血現(xiàn)作或壓迫時間過長也會引起溶血現(xiàn)象。象。5 5、針頭過細或抽血速度過快，負壓、針頭過細或抽血速

17、度過快，負壓太大，紅細胞通過針尖時破壞而溶太大，紅細胞通過針尖時破壞而溶血。血。第25頁/共30頁四、溶血標本的處理1 1、主動與臨床聯(lián)系，結合臨床首先、主動與臨床聯(lián)系，結合臨床首先排除體內溶血的可能，若不是體內溶排除體內溶血的可能，若不是體內溶血，建議重新采取標本，否則應在檢血，建議重新采取標本，否則應在檢驗報告單上注明驗報告單上注明“標本溶血標本溶血”，以提，以提醒臨床醫(yī)生注意醒臨床醫(yī)生注意. .2 2、利用溶血指數(shù)變化值，根據(jù)各項、利用溶血指數(shù)變化值，根據(jù)各項目的回歸方程，對易受溶血影響的目的回歸方程，對易受溶血影響的ASTAST、CKCK、CK-MBCK-MB、LDH,LDH, K K+ + 的測定結的測定結果進行部分糾正，尤其對輕中度溶血果進行部分糾正，尤其對輕中度溶血效果較好，但對重度溶血標本則應重效果較好，但對重度溶血標本則應重新復查。新復查。第26頁/共30頁3 3、從方法學上克服或減少溶血的干、從方法學上克服或減少溶血的干擾，如通過設置樣品空白或改用雙擾，如通過設置樣品空白或改用雙波長比色、導數(shù)分光光