培養(yǎng)基配制及消毒與滅菌及LB培養(yǎng)基制備ppt課件

1、1 了解培育基的種類、掌握培育基的配制、了解培育基的種類、掌握培育基的配制、分裝方法和滅菌前的預備任務；高壓滅菌分裝方法和滅菌前的預備任務；高壓滅菌的原理、運用范圍和本卷須知。的原理、運用范圍和本卷須知。2 明確培育基的配制原理。明確培育基的配制原理。3 經過對經過對LB培育基的配制，掌握配制培育基培育基的配制，掌握配制培育基的普通方法和步驟。的普通方法和步驟。 培育基是人工地將多種物質按各種微培育基是人工地將多種物質按各種微生物生長的需求配制而成的一種混合生物生長的需求配制而成的一種混合營養(yǎng)基質，用以培育或分別各種微生營養(yǎng)基質，用以培育或分別各種微生物。因此，營養(yǎng)基質該當有微生物所物。因此，

2、營養(yǎng)基質該當有微生物所能利用的營養(yǎng)成分包括碳源、氮源、能利用的營養(yǎng)成分包括碳源、氮源、能源、無機鹽、生長要素和水。根能源、無機鹽、生長要素和水。根據(jù)微生物的種類和實驗目的不同，培據(jù)微生物的種類和實驗目的不同，培育基也有不同的種類和配制方法。育基也有不同的種類和配制方法。1天然培育基天然培育基:主要成分是復雜的天然有機物質，主要成分是復雜的天然有機物質，如馬鈴薯、豆芽汁、牛肉膏、蛋白胨、血清等。如馬鈴薯、豆芽汁、牛肉膏、蛋白胨、血清等。這些復雜天然有機物質的成分不完全了解，每次這些復雜天然有機物質的成分不完全了解，每次所用的原料，其中各成分的數(shù)量也不恒定。這類所用的原料，其中各成分的數(shù)量也不恒定

3、。這類培育基是實驗室常用的培育基，例如牛肉膏蛋白培育基是實驗室常用的培育基，例如牛肉膏蛋白胨培育基、馬鈴薯培育基等。胨培育基、馬鈴薯培育基等。2合成培育基合成培育基:用化學成分完全了解的純試劑配制用化學成分完全了解的純試劑配制而成的培育基，如高氏而成的培育基，如高氏1號培育基，查氏培育基號培育基，查氏培育基等。普通用于營養(yǎng)代謝、分類鑒定、菌種選育、等。普通用于營養(yǎng)代謝、分類鑒定、菌種選育、遺傳分析等。遺傳分析等。 1固體培育基固體培育基:在液體培育基中參與凝固劑即為在液體培育基中參與凝固劑即為固體培育基。實驗用的凝固劑有瓊脂、明膠和硅固體培育基。實驗用的凝固劑有瓊脂、明膠和硅膠，后者用于配制自

4、養(yǎng)微生物的固體培育基。對膠，后者用于配制自養(yǎng)微生物的固體培育基。對其他多數(shù)微生物來講，以瓊脂最為適宜，普通參其他多數(shù)微生物來講，以瓊脂最為適宜，普通參與與1525%即可凝固成固體。此培育基可供即可凝固成固體。此培育基可供分別、鑒定、活菌計數(shù)、菌種保藏等用。分別、鑒定、活菌計數(shù)、菌種保藏等用。 2半固體培育基半固體培育基:在液體培育基中參與少量凝固在液體培育基中參與少量凝固劑即為半固體培育基，例如瓊脂只需參與劑即為半固體培育基，例如瓊脂只需參與0207%。常用作細菌動力檢查和菌種保管、噬菌。常用作細菌動力檢查和菌種保管、噬菌體制劑的制備等。體制劑的制備等。 3液體培育基液體培育基:沒有加瓊脂，配

5、好后成液體形狀沒有加瓊脂，配好后成液體形狀的培育基。常用于生理代謝的研討和工業(yè)發(fā)酵等。的培育基。常用于生理代謝的研討和工業(yè)發(fā)酵等。 1根底培育基根底培育基:含有普通細菌生長繁衍需含有普通細菌生長繁衍需求的根本的營養(yǎng)物質。最常用的根底培育求的根本的營養(yǎng)物質。最常用的根底培育基是上面提及的天然培育基中的牛肉膏蛋基是上面提及的天然培育基中的牛肉膏蛋白胨培育基。這種培育基可作為一些特殊白胨培育基。這種培育基可作為一些特殊培育基的根底成分。培育基的根底成分。 2營養(yǎng)培育基加富培育基營養(yǎng)培育基加富培育基:在根底培在根底培育基中參與某些特殊營養(yǎng)物質，如血液、育基中參與某些特殊營養(yǎng)物質，如血液、血清、酵母浸膏

6、或生長因子等。用以培育血清、酵母浸膏或生長因子等。用以培育對營養(yǎng)要求高的微生物，如培育百日咳桿對營養(yǎng)要求高的微生物，如培育百日咳桿菌需求含有血液的培育基。菌需求含有血液的培育基。 3鑒別培育基鑒別培育基:是一類含有某種特定化合物或試是一類含有某種特定化合物或試劑的培育基。某種微生物在這種培育基上培育后，劑的培育基。某種微生物在這種培育基上培育后，它所產生的某種代謝產物與這種特定的化合物或它所產生的某種代謝產物與這種特定的化合物或試劑能發(fā)生某種明顯的特征性反響，根據(jù)這一特試劑能發(fā)生某種明顯的特征性反響，根據(jù)這一特征性反響可以將某種微生物與其他種微生物區(qū)別征性反響可以將某種微生物與其他種微生物區(qū)別

7、開來。主要用于不同類型微生物的快速鑒定，如開來。主要用于不同類型微生物的快速鑒定，如用來檢查細菌能否產生硫化氫的醋酸鉛培育基。用來檢查細菌能否產生硫化氫的醋酸鉛培育基。 4選擇培育基選擇培育基:利用微生物對某種或某些化學物利用微生物對某種或某些化學物質的敏感性不同，在培育基中參與這類物質，抑質的敏感性不同，在培育基中參與這類物質，抑制不需求的微生物生長，而利于所需分別的微生制不需求的微生物生長，而利于所需分別的微生物生長，從而到達分別或鑒別某種微生物的目的，物生長，從而到達分別或鑒別某種微生物的目的，如分別真菌的馬丁氏培育基。既有選擇作用又有如分別真菌的馬丁氏培育基。既有選擇作用又有鑒別作用的

8、培育基，如鑒別腸道桿菌的遠藤氏培鑒別作用的培育基，如鑒別腸道桿菌的遠藤氏培育基等。育基等。 LB培育基是一種運用最廣泛和最普通的細培育基是一種運用最廣泛和最普通的細菌根底培育基，有時又稱為普通培育基。菌根底培育基，有時又稱為普通培育基。它含有酵母提取物、蛋白胨和它含有酵母提取物、蛋白胨和NaCl。碳源。碳源和能源：酵母提取物，氮源：磷酸鹽、蛋和能源：酵母提取物，氮源：磷酸鹽、蛋白胨，無機鹽：白胨，無機鹽：NaCl。在配制固體培育基。在配制固體培育基時還要參與一定量瓊脂作凝固劑。瓊脂在時還要參與一定量瓊脂作凝固劑。瓊脂在常用濃度下常用濃度下96時溶化，普通實踐運用時時溶化，普通實踐運用時在沸水浴

9、中或下面墊以石棉網(wǎng)煮沸溶化，在沸水浴中或下面墊以石棉網(wǎng)煮沸溶化，以免瓊脂燒焦。瓊脂在以免瓊脂燒焦。瓊脂在40時凝固，通常時凝固，通常不被微生物分解利用。不被微生物分解利用。 由于這種培育基多用于培育細菌，因由于這種培育基多用于培育細菌，因此，要用稀酸或稀堿將其此，要用稀酸或稀堿將其pH調至中性調至中性或微堿性，以利于細菌的生長繁衍?；蛭A性，以利于細菌的生長繁衍。 LB培育基的配方如下：酵母提取物培育基的配方如下：酵母提取物 5g、蛋白胨、蛋白胨 10g、NaCl 5g、瓊、瓊脂脂 1520g、水、水 1000mL、pH 7.47.6 酵母提取物，蛋白胨，酵母提取物，蛋白胨， NaCl，瓊脂；

10、，瓊脂；1mol/L NaOH， 1mol/L HCl；試管，三角；試管，三角燒瓶，燒杯，量筒，玻棒，培育基分裝器，燒瓶，燒杯，量筒，玻棒，培育基分裝器，天平，牛角匙，高壓蒸汽滅菌鍋，天平，牛角匙，高壓蒸汽滅菌鍋，pH試紙試紙pH 5.59.0，棉花，牛皮紙，記號筆，棉花，牛皮紙，記號筆，麻繩，紗布等。麻繩，紗布等。1稱量稱量 按培育基配方比例依次準確地稱取酵母提取物、蛋白胨、按培育基配方比例依次準確地稱取酵母提取物、蛋白胨、NaCl放入燒杯中。蛋白胨很易吸潮，在稱取時動作要迅放入燒杯中。蛋白胨很易吸潮，在稱取時動作要迅速。另外，稱藥品時嚴防藥品混雜，一把牛角匙用于一種速。另外，稱藥品時嚴防藥

11、品混雜，一把牛角匙用于一種藥品，或稱取一種藥品后，洗凈、擦干，再稱取另一藥品，藥品，或稱取一種藥品后，洗凈、擦干，再稱取另一藥品，瓶蓋也不要蓋錯。瓶蓋也不要蓋錯。2溶化溶化在上述燒杯中可先參與少于所需求的水量，用玻棒攪勻，然在上述燒杯中可先參與少于所需求的水量，用玻棒攪勻，然后，在石棉網(wǎng)上加熱使其溶解。待藥品完全溶解后，補充后，在石棉網(wǎng)上加熱使其溶解。待藥品完全溶解后，補充水分到所需的總體積。假設配制固體培育基，將稱好的瓊水分到所需的總體積。假設配制固體培育基，將稱好的瓊脂放入已溶化的藥品中，再加熱溶化，在瓊脂溶化的過程脂放入已溶化的藥品中，再加熱溶化，在瓊脂溶化的過程中，需不時攪拌，以防瓊脂

12、糊底使燒杯破裂。最后補足所中，需不時攪拌，以防瓊脂糊底使燒杯破裂。最后補足所失的水分。失的水分。 3調調pH在未調在未調pH前，先用精細前，先用精細pH試紙丈量培育基的原始試紙丈量培育基的原始pH值，假值，假設設pH偏酸，用滴管向培育基中逐滴參與偏酸，用滴管向培育基中逐滴參與1mol/L NaOH，邊加邊攪拌，并隨時用邊加邊攪拌，并隨時用pH試紙測其試紙測其pH值，直至值，直至pH達達7.6。反之，那么用反之，那么用1mol/L HCl進展調理。留意進展調理。留意pH值不要調過值不要調過頭，以防止回調，否那么，將會影響培育基內各離子的濃頭，以防止回調，否那么，將會影響培育基內各離子的濃度。對于

13、有些要求度。對于有些要求pH值較準確的微生物，其值較準確的微生物，其pH的調理可的調理可用酸度計進展運用方法，可參考有關闡明書。用酸度計進展運用方法，可參考有關闡明書。4分裝分裝 1液體分裝分裝高度以試管高度的液體分裝分裝高度以試管高度的1/4左右為宜。左右為宜。2固體分裝分裝試管，其裝量不超越管高的固體分裝分裝試管，其裝量不超越管高的1/5，滅菌后，滅菌后制成斜面，分裝三角燒瓶的量以不超越三角燒瓶容積的一制成斜面，分裝三角燒瓶的量以不超越三角燒瓶容積的一半為宜。半為宜。3半固體分裝試管普通以試管高度的半固體分裝試管普通以試管高度的1/3為宜，滅菌后垂為宜，滅菌后垂直待凝。直待凝。5加塞加塞培

14、育基分裝終了后，在試管口或三角燒瓶口上塞上棉塞，以培育基分裝終了后，在試管口或三角燒瓶口上塞上棉塞，以阻止外界微生物進入培育基內而構成污染，并保證有良好阻止外界微生物進入培育基內而構成污染，并保證有良好的通氣性能。的通氣性能。6.包扎包扎加塞后，將全部試管用麻繩捆扎好，再在棉塞外包一層牛皮加塞后，將全部試管用麻繩捆扎好，再在棉塞外包一層牛皮紙，以防止滅菌時冷凝水潤濕棉塞，其外再用一道麻繩扎紙，以防止滅菌時冷凝水潤濕棉塞，其外再用一道麻繩扎好。用記號筆注明培育基稱號、組別、日期。三角燒瓶加好。用記號筆注明培育基稱號、組別、日期。三角燒瓶加塞后，外包牛皮紙，用麻繩以活結方式扎好，運用時容易塞后，外

15、包牛皮紙，用麻繩以活結方式扎好，運用時容易解開，同樣用記號筆注明培育基稱號、組別、日期。解開，同樣用記號筆注明培育基稱號、組別、日期。7滅菌滅菌將上述培育基以將上述培育基以1.05kg/cm215磅磅/英寸英寸2，121.3，20分鐘高壓蒸汽滅菌。如因特殊情況不能及時滅菌，那么應分鐘高壓蒸汽滅菌。如因特殊情況不能及時滅菌，那么應放入冰箱內暫存。放入冰箱內暫存。8擱置斜面擱置斜面將滅菌的試管培育基冷至將滅菌的試管培育基冷至50左右，將試管左右，將試管棉塞端擱在玻棒上，擱置的斜面長度以不棉塞端擱在玻棒上，擱置的斜面長度以不超越試管總長的一半為宜。超越試管總長的一半為宜。9無菌檢查無菌檢查將滅菌的培育基