二氫吡啶類鈣拮抗劑的分析

1、二氫吡啶類鈣拮抗劑的分析二氫吡啶類鈣拮抗劑的分析藥學院藥物分析教研室藥學院藥物分析教研室【大綱要求【大綱要求】1 1、掌握二氫吡啶類鈣拮抗劑類代表藥物的、掌握二氫吡啶類鈣拮抗劑類代表藥物的體內(nèi)過程體內(nèi)過程2 2、熟悉二氫吡啶類鈣拮抗劑類代表藥物的、熟悉二氫吡啶類鈣拮抗劑類代表藥物的體內(nèi)分析方法體內(nèi)分析方法HNH3CCH3OH3CONO2OOCH3硝苯地平硝苯地平HNH3CCH3OH3COOOCH3NO2尼群地平尼群地平HNH3CCH3OH3COOONO2O尼莫地平尼莫地平HNH3COH3COOOCH3ClONH2氨氯地平氨氯地平主要代表性藥物主要代表性藥物主要的理化性質(zhì)主要的理化性質(zhì)較強的紫外

2、吸收特性，沒有熒光特性較強的紫外吸收特性，沒有熒光特性一般顯中性，含有一般顯中性，含有N N原子的顯弱堿性原子的顯弱堿性不穩(wěn)定性，見光易分解不穩(wěn)定性，見光易分解光學特性光學特性體內(nèi)過程體內(nèi)過程口腹易吸收、半衰期短、達峰時間較快口腹易吸收、半衰期短、達峰時間較快血漿蛋白結(jié)合率高血漿蛋白結(jié)合率高一般經(jīng)肝臟代謝，代謝產(chǎn)物一般沒有活性一般經(jīng)肝臟代謝，代謝產(chǎn)物一般沒有活性含量分析方法含量分析方法同位素標記法同位素標記法熒光分析法熒光分析法氣相色譜法氣相色譜法液相色譜法液相色譜法色譜和質(zhì)譜聯(lián)用法色譜和質(zhì)譜聯(lián)用法 樣品的制備：樣品的制備：往往采用簡單的液液往往采用簡單的液液萃取法進行，萃取溶劑多為苯、乙酸乙

3、萃取法進行，萃取溶劑多為苯、乙酸乙酯和氯仿等，取萃取后的有機層，揮干酯和氯仿等，取萃取后的有機層，揮干用流動相溶解后直接進樣分析。用流動相溶解后直接進樣分析。熒光測定法熒光測定法硝苯地平三氯化鈦鄰苯二甲醛熒光物質(zhì)硝苯地平三氯化鈦鄰苯二甲醛熒光物質(zhì)用乙酸乙酯進行液液萃取（用乙酸乙酯進行液液萃?。╬H=7)，測定硝苯地平，測定硝苯地平用氯仿進行液液萃?。ㄓ寐确逻M行液液萃?。╬H=2)，測定硝苯地平的代謝產(chǎn)物，測定硝苯地平的代謝產(chǎn)物氣相色譜分析氣相色譜分析色譜柱：填充柱或毛細管柱色譜柱：填充柱或毛細管柱 OV-1 OV-17OV-1 OV-17柱溫：柱溫：225225270270檢測器：電子捕獲檢測

4、器檢測器：電子捕獲檢測器 ECDECD人血漿中尼群地平的人血漿中尼群地平的GCGC法測定法測定色譜條件：色譜條件：DB-1DB-1毛細管柱（毛細管柱（25 m25 m 0.328 mm, 0.328 mm, I.D., 0.5 m)I.D., 0.5 m)載氣：高純氮氣載氣：高純氮氣檢測器檢測器: ECD: ECD進樣溫度：進樣溫度：260 260 檢測溫度：檢測溫度：300 300 升溫方式：程序升溫升溫方式：程序升溫 255 255 （6.2 min)6.2 min)270 270 （5min5min）分流進樣：分流進樣：4040：1 14/min4/min 樣品的前處理：樣品的前處理：取

5、內(nèi)標，加血樣，混取內(nèi)標，加血樣，混合后加入合后加入1mol/mL1mol/mL的的NaOH0.5mlNaOH0.5ml，混合，混合，加入乙醚加入乙醚- -環(huán)己烷（環(huán)己烷（1 1：1 1），窩旋，離），窩旋，離心，取有機相用氮氣流吹干，殘渣用甲心，取有機相用氮氣流吹干，殘渣用甲醇溶解后進樣分析。醇溶解后進樣分析。人血漿中尼莫地平的毛細管氣相人血漿中尼莫地平的毛細管氣相色譜色譜ECDECD檢測及藥代動力學檢測及藥代動力學 樣品制備：樣品制備：加入加入1g/ml1g/ml的尼群地平，的尼群地平，再加入再加入1mol/lNaOH 0.5ml1mol/lNaOH 0.5ml，混勻后，用乙，混勻后，用乙酸

6、乙酯正己烷（酸乙酯正己烷（1 1：1 1）萃取，）萃取，4000 rpm4000 rpm離心，取有機相吹干后用甲醇溶解后進樣離心，取有機相吹干后用甲醇溶解后進樣分析分析。色譜條件：色譜條件：OV-101OV-101毛細管柱（毛細管柱（25 m25 m 0.2 mm, 0.2 mm, I.D., 0.5 mI.D., 0.5 m) )載氣：高純氮氣載氣：高純氮氣檢測器檢測器: ECD: ECD進樣溫度：進樣溫度：260 260 氣化室溫度：氣化室溫度：270270檢測溫度：檢測溫度：300 300 升溫方式：恒溫洗脫升溫方式：恒溫洗脫分流進樣：分流進樣：3333：1 12.02.025.025.

7、0100.0100.0回收率回收率 日間日間 日內(nèi)日內(nèi)82.382.388.488.489.289.28.58.57.07.01.11.18.88.87.57.52.92.9高效液相色譜法高效液相色譜法一般進行的是反相液相色譜法一般進行的是反相液相色譜法一般使用紫外檢測器或電化學檢測器一般使用紫外檢測器或電化學檢測器一般多選用含有緩沖液的甲醇或乙腈一般多選用含有緩沖液的甲醇或乙腈為流動相為流動相可選用同類藥物或安定類藥物為內(nèi)標可選用同類藥物或安定類藥物為內(nèi)標RP-HPLCRP-HPLC法測定血漿中的硝苯地平法測定血漿中的硝苯地平 樣品制備樣品制備 取待測血漿取待測血漿600l600l，置于，置

8、于10ml10ml具具塞離心管中，加地西泮內(nèi)標物溶液（塞離心管中，加地西泮內(nèi)標物溶液（300ng/ml300ng/ml）200ul,200ul,氨水氨水120l,120l,渦旋振蕩渦旋振蕩1min,1min,再加入提取溶劑再加入提取溶劑 無水乙醚正己烷（無水乙醚正己烷（3 3：1 1） 4ml 4ml，渦旋振蕩，渦旋振蕩20min20min，離心（，離心（3000r/min3000r/min）10min10min，置，置-20-20C C的冰箱的冰箱中冷凍中冷凍2h2h，上層有機相轉(zhuǎn)移至另一離心管中，于，上層有機相轉(zhuǎn)移至另一離心管中，于5050C C水浴中用氮氣吹干，殘渣加水浴中用氮氣吹干，殘

9、渣加5050乙腈乙腈200l, 200l, 渦旋混合、離心（渦旋混合、離心（1500r/min1500r/min）10min10min，取，取15l15l進進樣（低濃度則進樣樣（低濃度則進樣30l30l）。）。色譜條件色譜條件 色譜柱為色譜柱為Luna C18(250Luna C18(250* *4.6mm,5um)4.6mm,5um)；保護柱為；保護柱為AlltechAlltech C18(30C18(30* *2mm,40um)2mm,40um)。流動相為乙腈水二乙胺磷酸（。流動相為乙腈水二乙胺磷酸（5151：4949：0.120.12：0.100.10，V/VV/V），流速），流速1.2

10、ml/min1.2ml/min。柱溫。柱溫4545C C。紫外監(jiān)測器，波長。紫外監(jiān)測器，波長238nm238nm，進樣量，進樣量151530l30l。RP-HPLCRP-HPLC法測定尼群地平法測定尼群地平樣品制備樣品制備 避光操作。取體液避光操作。取體液1l1l或組織勻漿或組織勻漿4ml4ml，置置15ml15ml具塞離心管中，精密加入地爾硫卓內(nèi)標物溶液具塞離心管中，精密加入地爾硫卓內(nèi)標物溶液（1g/L1g/L甲醇）甲醇）10.2ml10.2ml，加，加50mmol/L50mmol/L磷酸鹽緩沖溶液磷酸鹽緩沖溶液（pH9.8pH9.8）1ml,1ml,搖勻，加環(huán)己烷異丙醇（搖勻，加環(huán)己烷異丙

11、醇（96.596.5：3.53.5，V/VV/V）5ml5ml提取，離心（提取，離心（4000r/min4000r/min）15min,15min,取有機相于取有機相于水浴中用氮氣吹干，殘渣溶于水浴中用氮氣吹干，殘渣溶于100l100l流動相，吸取流動相，吸取10l10l進樣分析。進樣分析。色譜條件色譜條件 色譜柱為色譜柱為YWG C18(150YWG C18(150* *4.6mm,5m)4.6mm,5m)。流動相。流動相為甲醇：為甲醇：50 mmol50 mmol/L/L磷酸鹽緩沖溶液磷酸鹽緩沖溶液7070：3030，V/VV/V），磷），磷酸調(diào)酸調(diào)pHpH至至6.86.8；流速；流速1.

12、0ml/min1.0ml/min。柱溫：室溫。紫外監(jiān)測。柱溫：室溫。紫外監(jiān)測器，波長器，波長236nm236nm；進樣量；進樣量10l10l。 HPLCHPLC電化學檢測法測定血漿或血清中尼電化學檢測法測定血漿或血清中尼卡地平及其代謝產(chǎn)物卡地平及其代謝產(chǎn)物 樣品制備樣品制備 取待測血漿樣品取待測血漿樣品200l200l，加入，加入pH1.0pH1.0的的TrisTris緩沖液和內(nèi)標物布替林，用甲基叔丁基醚提取，緩沖液和內(nèi)標物布替林，用甲基叔丁基醚提取，離心后分離有機相，取離心后分離有機相，取100l100l進樣。進樣。色譜條件色譜條件 色譜柱為色譜柱為S5SCXS5SCX硅膠柱（硅膠柱（125

13、x5.0 mm125x5.0 mm，5m5m）。流動相：甲醇，含）。流動相：甲醇，含20 mmol20 mmol/L/L高氯酸銨。流高氯酸銨。流速：速：2.0ml/min2.0ml/min。檢測：電化學檢測器，玻碳電極為。檢測：電化學檢測器，玻碳電極為工作電極，工作電極，Ag/AgClAg/AgCl為參比電極，工作電位為參比電極，工作電位+1.1V+1.1V。液相色譜質(zhì)譜質(zhì)譜聯(lián)用法測定人血液相色譜質(zhì)譜質(zhì)譜聯(lián)用法測定人血漿中的氨氯地平漿中的氨氯地平 樣品制備樣品制備 在暗室中取血漿在暗室中取血漿1.0 ml1.0 ml置置10 ml10 ml具塞試管中，依次加具塞試管中，依次加入流動相入流動相1

14、00l,100l,內(nèi)標物溶液（內(nèi)標物溶液（4 4羥基普羅帕酮溶液羥基普羅帕酮溶液80ng/ml80ng/ml，用流動相溶解）用流動相溶解）100l100l，1mol/LnaOH1mol/LnaOH溶液溶液100 ul100 ul, ,渦旋渦旋30 s30 s。加。加乙醚二氯甲烷（乙醚二氯甲烷（2 2：1 1）3 ml3 ml提取，往復振蕩提取，往復振蕩10 min10 min，離心，離心5 5 minmin，分取有機相于，分取有機相于4040C C空氣流中吹干。殘留物加空氣流中吹干。殘留物加100l100l流動相流動相溶解，取溶解，取20l20l進樣。進樣。色譜條件色譜條件 色譜柱：色譜柱：Z

15、orbaxZorbax XDB C8 XDB C8柱（柱（150 mm150 mm* *4.6 mm ID,5 4.6 mm ID,5 mm）。流動相：乙腈水甲酸（）。流動相：乙腈水甲酸（7575：3535：1 1），流速：），流速：0.4ml/min0.4ml/min。柱溫為。柱溫為2020C C。質(zhì)譜條件質(zhì)譜條件 離子源為離子源為ESIESI源，源電壓源，源電壓4.5kV4.5kV；加熱毛細；加熱毛細管溫度管溫度150150C C；鞘氣為氨氣，流速；鞘氣為氨氣，流速621kPa621kPa；輔助氣（；輔助氣（N2N2）流速流速23au;23au;碰撞氣（碰撞氣（ArAr）壓力）壓力1.9Pa1.9Pa。碰撞誘導解離。碰撞誘導解離（CIDCID）電壓）電壓20V(20V(氨氯地平氨氯地平) )和和40V(40V(內(nèi)標物內(nèi)標物) )；正離子方；正離子方式檢測；掃描方式為選擇反應監(jiān)測（式檢測；掃描方式為選擇反應監(jiān)測（SRMSRM），用于定量），用于定量分析的二級碎片離子分別為分析的二級碎片離子分別為m/z238(m/z238(氨氯地平氨氯地平) )和和m/z116m/z116（內(nèi)標物（內(nèi)標物4 4羥基普羅帕酮），掃描時間為羥基普羅帕酮），掃描時