細(xì)菌的芽孢和莢膜染色PPT課件

1、二、原理：二、原理： （一）芽孢染色（一）芽孢染色 1、芽孢：某些細(xì)菌（多為革蘭氏染色陽(yáng)性桿菌）在一定生長(zhǎng)階段或環(huán)境條件下，細(xì)胞正常代謝、分裂停止，胞質(zhì)濃縮，在細(xì)胞內(nèi)形成一個(gè)圓形、橢圓形或圓柱形，對(duì)不良環(huán)境有較強(qiáng)抵抗能力的特殊結(jié)構(gòu)。由于在細(xì)胞內(nèi)，也叫內(nèi)生孢子內(nèi)生孢子（Endospore）。第1頁(yè)/共15頁(yè) 2、芽孢菌體的特點(diǎn)芽孢菌體的特點(diǎn)：不能繁殖的休眠體，含水少、含脂高、致密不透明，對(duì)不良環(huán)境有很強(qiáng)的抵抗能力。 有的芽孢在一定條件下可保持活力數(shù)年甚至數(shù)十年之久。條件適宜時(shí)能重新萌發(fā)。 芽孢尤其能耐高溫： 枯草桿菌的芽孢，在沸水中可存 活1小時(shí)； 破傷風(fēng)芽孢桿菌可在沸水中存活 3小時(shí)； 肉毒梭

2、狀芽孢桿菌的芽孢可在沸水 中存活6小時(shí)，即使在1800C干燥箱中仍可存活10分鐘。 芽孢可作為培養(yǎng)基滅菌徹底與否的檢驗(yàn)依據(jù)。第2頁(yè)/共15頁(yè)3、芽孢的大小、位置具有分類鑒定上的意義：、芽孢的大小、位置具有分類鑒定上的意義：肉毒芽孢桿菌第3頁(yè)/共15頁(yè)能形成芽孢的細(xì)菌種類 在桿菌中能形成芽孢的種類較多，在球菌和螺旋菌中只有少數(shù)菌種可形成芽孢 產(chǎn)生芽孢的幾個(gè)屬： 芽孢桿菌屬(Bacillus) 梭狀芽孢桿菌屬(Clostridium) 芽孢八疊球菌屬(Sporosarcina)第4頁(yè)/共15頁(yè)4 4、芽孢染色的原理：、芽孢染色的原理： 利用細(xì)菌的芽孢和菌體對(duì)染料的親和力不同的原理，用不同的染料進(jìn)行

3、著色，使芽孢和菌體呈不同的顏色而便于區(qū)別。 細(xì)菌的芽孢壁比營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞壁厚，致密、通透性低，著色和脫色都比營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞困難。 第5頁(yè)/共15頁(yè) 一般采用堿性染料（孔雀綠）并在微火上加熱或延長(zhǎng)染色時(shí)間，使菌體和芽孢同時(shí)都染上色后，再用水沖洗脫去菌體的染料，此時(shí)仍保留芽孢的著色，并用對(duì)照染料來(lái)染菌體，這樣就將芽孢和菌體分別染成兩種不同的顏色。第6頁(yè)/共15頁(yè) （二）莢膜染色法：莢膜染色法： 有些細(xì)菌生活在一定營(yíng)養(yǎng)條件下，可向細(xì)胞壁表面分泌一層松散透明、疏松、柔軟、粘度極大，粘液狀或膠質(zhì)狀的物質(zhì)即為莢膜（Capsule）。 莢膜的化學(xué)成分主要是多糖、多肽、蛋白質(zhì)、脂以及由它們組成的復(fù)合物脂多糖、脂蛋白

4、等。 莢膜雖不是細(xì)胞的主要結(jié)構(gòu)，但它是細(xì)胞外碳源和能源性貯藏物質(zhì)，并能保護(hù)細(xì)胞免受干燥的影響，同時(shí)能增加某些病原菌的致病能力，抵御宿主吞噬細(xì)胞的吞噬。 第7頁(yè)/共15頁(yè) 莢膜染色原理：莢膜化學(xué)成分為多糖類衍生物、糖原或多肽，對(duì)染料結(jié)合力很弱，因此不易染色。一般采用負(fù)染色負(fù)染色的方法，使細(xì)菌和背景著色，背景與菌體之間形成一透明區(qū)即莢膜。由于莢膜很薄，容易變形，在制片時(shí)一般不用加熱固定。肺炎球菌莢膜染色鉀細(xì)菌莢膜染色第8頁(yè)/共15頁(yè)三、材料三、材料： 1、菌種：枯草芽孢桿菌、鉀細(xì)菌； 2、染色液：孔雀綠、蕃紅溶液、甲醇、生理鹽水等； 3、器材：試管夾、酒精燈、接種針、載玻片、顯微鏡、香柏油、二甲苯

5、、擦鏡紙等。 第9頁(yè)/共15頁(yè)鉀細(xì)菌(Bacillus mucilaginosus) 膠質(zhì)芽孢桿菌第10頁(yè)/共15頁(yè)（一）芽孢染色（一）芽孢染色 取枯草桿菌制成涂片、干燥、固定； 用試管夾夾住玻片一端，涂層上加孔雀綠3-4滴； 加熱5分鐘使冒蒸汽，中途補(bǔ)加孔雀綠，勿煮干； 冷卻、水洗（細(xì)水）； 蕃紅溶液復(fù)染2 - 3分鐘，水洗； 干燥、鏡檢； 結(jié)果：芽孢呈綠色，菌體呈紅色。 第11頁(yè)/共15頁(yè)（二）莢膜染色 取鉀細(xì)菌一環(huán)，做成涂片，自然干燥（不能加熱）， 可用吹風(fēng)機(jī)冷風(fēng)吹干； 甲醇固定； 水洗； 蕃紅溶液12分鐘； 水洗； 自然干燥、鏡檢； 結(jié)果：背景紅色、莢膜無(wú)色、菌體紅色。 第12頁(yè)/共15