食品中大腸菌群檢測結(jié)果與分析

1、    食品中大腸菌群檢測結(jié)果與分析    董慧明摘 要：為了提高微生物實驗室大腸菌群的檢測能力，遼寧省檢驗檢測認(rèn)證中心于2019年參加了乳粉中大腸菌群的計數(shù)（定量）檢測能力驗證，依據(jù)食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗 大腸菌群計數(shù)（gb 4789.32016）進(jìn)行檢驗，同時應(yīng)用3m petrifilm cc測試片作為對照手段。結(jié)果表明，樣品code tf02240028結(jié)果報告為3 100 cfu/g、code tf02240028結(jié)果報告為4 200 cfu/g，反饋結(jié)果滿意，z值均<2。關(guān)鍵詞：大腸菌群;能力驗證;平板計數(shù);3m測試片大腸菌群

2、是一群能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣、無芽孢需氧及兼性厭氧的革蘭氏陰性桿菌。大腸菌群與大腸桿菌相似，可以其檢出情況來判斷食品是否受到了人及溫血動物糞便的污染，作為食品、飲用水等衛(wèi)生指標(biāo)菌1。大腸菌群定量檢測為食品微生物實驗室常規(guī)檢測項目，其檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性能判定實驗室基本能力水平是否達(dá)到要求。食品中大腸菌群的檢測有著重要意義，可以掌握食品的衛(wèi)生狀況，有利于控制腸道病的爆發(fā)傳播，及時做出有效的預(yù)防措施2。能力驗證活動是利用實驗室間的比對，按照預(yù)先制定的準(zhǔn)則評價參加者的能力3。為提高實驗室食品微生物檢測能力，確保出具的檢驗報告的準(zhǔn)確性和科學(xué)性，同時完成實驗室質(zhì)量控制和完善實驗室管理制度，本實驗室報名參加了中

3、國食品藥品檢定研究院乳粉中大腸菌群的計數(shù)（定量）能力驗證。本實驗依據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗 大腸菌群計數(shù)（gb 4789.32016）4的要求進(jìn)行實驗，同時應(yīng)用3m petrifilm cc測試片作為對照手段。1 材料與方法1.1 樣品本實驗室收到2件待測樣品，每件樣品由1個菌球及相應(yīng)奶粉組成，編碼分別為code tf02240028、code tf02240125。檢測時每個相同編碼的大腸菌群樣品和奶粉基質(zhì)作為1件樣品進(jìn)行檢測。以無菌操作打開樣品的西林瓶，將西林瓶內(nèi)小球加入到225 ml 0.85%生理鹽水中，充分溶解;然后再將與西林瓶相同編碼的奶粉樣品加入到上述生理鹽水

4、中，充分均質(zhì)混勻。依此方法，分別對2件樣品進(jìn)行處理，制成110的樣品勻液。1.2 儀器與試劑電熱恒溫培養(yǎng)箱（德國binder公司）;a2型生物安全柜（美國nuaire公司）;生物顯微鏡（日本olympus公司）;電子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）;高壓滅菌鍋（日本tomy公司）;均質(zhì)器（法國梅里埃公司）?；途G乳糖膽鹽（brilliant green lactose bile，bglb）肉湯、結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂（violet red agar，vrba）、0.85%無菌生理鹽水，均購自北京陸橋技術(shù)有限公司;petrifilm cc大腸菌群測試紙片（美國3m公司）。1.3 實驗方法依據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)食

5、品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗 大腸菌群計數(shù)（gb 4789.32016）4的要求進(jìn)行實驗。同時，用3m大腸菌群測試紙片法作為對照手段進(jìn)行實驗， 每個稀釋度做兩平行，每片接種量為1 ml，36 培養(yǎng)24 h。2 結(jié)果與分析2.1 培養(yǎng)計數(shù)在vrba平板上選取菌落在15150 cfu的平板，分別計數(shù)平板上出現(xiàn)的典型和可疑菌落，典型菌落為紫紅色，菌落周圍有紅色的膽鹽沉淀環(huán)，菌落直徑為0.5 mm，或更大4。大腸菌群菌落在3m大腸菌群測試片上生長產(chǎn)酸使培養(yǎng)基顏色變紅變深，目標(biāo)菌落為紅色菌落并且周圍有氣泡產(chǎn)生，計數(shù)結(jié)果見表1。2.2 確證實驗從10-2稀釋度的vrba平板上挑取10個典型和可疑菌落（

6、不同類型），用無菌接種針取挑取菌落的菌體分別接種于bglb肉湯管中，36 培養(yǎng)2448 h，觀察產(chǎn)氣情況，凡bglb肉湯管產(chǎn)氣，即可報告為大腸菌群陽性（+）4，需要注意的是如果接種前bglb導(dǎo)管內(nèi)有氣泡，應(yīng)該先排除以免影響結(jié)果。兩個樣品選取的所有典型和可疑菌落均為大腸菌群，見表2。2.3 大腸菌群平板計數(shù)的報告經(jīng)最后證實為大腸菌群陽性的試管比例乘以相應(yīng)稀釋度vrba平板計數(shù)菌落數(shù)，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品中大腸菌群結(jié)果報告數(shù)，單位為cfu/g。樣品編號code tf02240028結(jié)果報告為3 100 cfu/g，樣品編號code tf02240028結(jié)果報告為4 200 cfu/g。2.4

7、實驗結(jié)果反饋經(jīng)能力驗證組織機(jī)構(gòu)反饋，本實驗室code tf02240028大腸菌群的檢測結(jié)果為3.491，指定值為3.732，z值為1.16;code tf02240125大腸菌群的檢測結(jié)果為3.623，指定值為3.732，z值為0.52;z值均<2，兩個樣品的結(jié)果評價為滿意。3 結(jié)論與討論本次大腸菌群能力驗證結(jié)果報告與指定值相比數(shù)值偏低，分析原因可能是：人員操作時間過長，樣品處理后應(yīng)立即進(jìn)行檢驗，操作時間過長會導(dǎo)致菌體死亡，造成實驗結(jié)果偏低;操作過程中，樣品稀釋不規(guī)范或均質(zhì)時間過短會也會直接影響實驗結(jié)果;樣品的存儲和運(yùn)輸應(yīng)該嚴(yán)格按照要求執(zhí)行，否則可能到導(dǎo)致結(jié)果出現(xiàn)偏差;樣品冷凍后沒有放

8、置達(dá)到室溫即開始實驗，溫度迅速升高導(dǎo)致菌體破裂受損，在規(guī)定的培養(yǎng)時間內(nèi)菌體沒有完全恢復(fù)，導(dǎo)致計數(shù)時菌數(shù)低5;vrba作為一種選擇性培養(yǎng)基，性能決定了檢測結(jié)果質(zhì)量的高低，還應(yīng)加強(qiáng)關(guān)鍵培養(yǎng)基和試劑的性能驗收。為保障本次大腸菌群能力驗證結(jié)果的準(zhǔn)確性，本實驗室采用多個稀釋度和3m大腸菌群紙片對照等技術(shù)手段。3m大腸菌群測試片含有vrb培養(yǎng)劑（violet red bile），一種冷水可溶性的凝膠劑和四唑翁（tetrazollium）指示劑，可增強(qiáng)菌落計數(shù)效果。表面覆蓋的膠膜，可留住發(fā)酵乳糖的大腸菌群產(chǎn)生的氣體。能力驗證結(jié)果反饋表明，3m紙片法的檢測結(jié)果更接近指定值，測試片的檢測結(jié)果穩(wěn)定可靠，且其具有快

9、速簡便的特點(diǎn)，可作為實驗室檢驗的輔助手段和大批量食品微生物快速檢測方法。在以后的能力驗證考核中，還可加入基質(zhì)輔助激光解吸/電離飛行時間質(zhì)譜儀（malei-tof-ms）等技術(shù)手段，對結(jié)果進(jìn)行進(jìn)一步確證，可以排除干擾菌，使檢驗結(jié)果更加準(zhǔn)確。參考文獻(xiàn)1劉云國.食品衛(wèi)生微生物學(xué)標(biāo)準(zhǔn)鑒定圖譜m.北京：科學(xué)出版社，2009.2許金榜.vrba和3m petrifilmtm快速測試片定量檢測大腸菌群的性能比較研究j.質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督研究，2021，1（73）：17-22.3中國合格評定國家認(rèn)可委員會.能力驗證規(guī)則：cnas-rl02：2018s.北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2018.4國家衛(wèi)生和計劃生育委員會，國家食品藥品監(jiān)督管理總