測(cè)序知識(shí)概述課件

1、測(cè)序知識(shí)概述測(cè)序知識(shí)概述測(cè)序知識(shí)概述測(cè)序知識(shí)概述PPTPPT課件課件2 2ContentContent普通測(cè)序及測(cè)序相關(guān)基礎(chǔ)知識(shí)普通測(cè)序生產(chǎn)流程介紹困難模板測(cè)序相關(guān)知識(shí)困難模板測(cè)序生產(chǎn)流程介紹測(cè)序簡(jiǎn)單問(wèn)題解答測(cè)序知識(shí)概述測(cè)序知識(shí)概述PPTPPT課件課件3 3普通測(cè)序及測(cè)序相關(guān)基礎(chǔ)知識(shí)普通測(cè)序及測(cè)序相關(guān)基礎(chǔ)知識(shí)基本概念基本概念什么是DNA以及DNA測(cè)序又稱脫氧核糖核酸，是染色體的主要化學(xué)成分，同時(shí)也是組成基因的材料。 DNA分子極為龐大(分子量一般至少在百萬(wàn)以上)，主要組成成分是腺嘌呤脫氧核苷酸、鳥嘌呤脫氧核苷酸、胞嘧啶脫氧核苷酸和胸腺嘧啶脫氧核苷酸（簡(jiǎn)稱A、T、C、G）。DNA存在于細(xì)胞核、線

2、粒體、葉綠體中，也可以以游離狀態(tài)存在于某些細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中。大多數(shù)已知噬菌體、部分動(dòng)物病毒和少數(shù)植物病毒中也含有DNA。除了RNA(核糖核酸)和噬菌體外，DNA是所有生物的遺傳物質(zhì)基礎(chǔ)。生物體親子之間的相似性和繼承性即所謂遺傳信息，都貯存在DNA分子中。測(cè)序知識(shí)概述測(cè)序知識(shí)概述PPTPPT課件課件4 4普通測(cè)序及測(cè)序相關(guān)基礎(chǔ)知識(shí)普通測(cè)序及測(cè)序相關(guān)基礎(chǔ)知識(shí)基本概念基本概念DNA的結(jié)構(gòu)DNA共有四級(jí)結(jié)構(gòu)一級(jí)結(jié)構(gòu)：一級(jí)結(jié)構(gòu)：由多個(gè)4種脫氧核苷酸分子通過(guò)3，5磷酸二酯鍵連接形成的直線型或環(huán)型多聚體。 二級(jí)結(jié)構(gòu)：二級(jí)結(jié)構(gòu)：在堿基互補(bǔ)配對(duì)的基礎(chǔ)上形成的DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)。三級(jí)結(jié)構(gòu)：三級(jí)結(jié)構(gòu)：在二級(jí)結(jié)構(gòu)上，DN

3、A雙螺旋結(jié)構(gòu)通過(guò)折疊和扭曲所形成的特定構(gòu)象。如超螺旋等。四級(jí)結(jié)構(gòu)：四級(jí)結(jié)構(gòu)：指DNA與蛋白質(zhì)形成的復(fù)合物。如染色體（質(zhì)）。DNA測(cè)序就是測(cè)定DNA的一級(jí)結(jié)構(gòu)測(cè)序知識(shí)概述測(cè)序知識(shí)概述PPTPPT課件課件5 5普通測(cè)序及測(cè)序相關(guān)基礎(chǔ)知識(shí)普通測(cè)序及測(cè)序相關(guān)基礎(chǔ)知識(shí)基本概念基本概念DNA結(jié)構(gòu)示意圖單核苷酸及DNA的二級(jí)結(jié)構(gòu)4種脫氧核苷酸分子通過(guò)3，5磷酸二酯鍵連接形成的直線型或環(huán)型多聚體。測(cè)序知識(shí)概述測(cè)序知識(shí)概述PPTPPT課件課件6 6普通測(cè)序及測(cè)序相關(guān)基礎(chǔ)知識(shí)普通測(cè)序及測(cè)序相關(guān)基礎(chǔ)知識(shí)基本概念基本概念DNA結(jié)構(gòu)示意圖DNA的三級(jí)結(jié)構(gòu)：雙螺旋DNA進(jìn)一步扭曲盤繞則形成其三級(jí)結(jié)構(gòu)，超螺旋是DNA三級(jí)結(jié)

4、構(gòu)的主要形式。 。 測(cè)序知識(shí)概述測(cè)序知識(shí)概述PPTPPT課件課件7 7普通測(cè)序及測(cè)序相關(guān)基礎(chǔ)知識(shí)普通測(cè)序及測(cè)序相關(guān)基礎(chǔ)知識(shí)基本概念基本概念DNA結(jié)構(gòu)示意圖DNA的四級(jí)結(jié)構(gòu)： DNA與蛋白質(zhì)形成的復(fù)合物。如染色體（質(zhì)）。測(cè)序知識(shí)概述測(cè)序知識(shí)概述PPTPPT課件課件8 8普通測(cè)序及測(cè)序相關(guān)基礎(chǔ)知識(shí)普通測(cè)序及測(cè)序相關(guān)基礎(chǔ)知識(shí)基本概念基本概念DNA測(cè)序原理目前DNA測(cè)序的原理是Sanger雙脫氧鏈末端終止法，簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō)，就是單引物擴(kuò)增的PCR反應(yīng)，但是將PCR反應(yīng)體系中的dNTP換成了帶有熒光標(biāo)記的ddNTP和dNTP的混合物。目前最普遍的DNA測(cè)序技術(shù)是采用四色熒光分別標(biāo)記四種ddNTP. 一個(gè)樣品的

5、測(cè)序反應(yīng)只需在同一反應(yīng)體系中同時(shí)加入四種ddNTP. 產(chǎn)物無(wú)須分離即可在一個(gè)泳道中電泳.序列的讀取依靠檢測(cè)器對(duì)不同熒光的區(qū)分.并需要通過(guò)軟件系統(tǒng)的分析.動(dòng)畫演示：http:/ 9普通測(cè)序及測(cè)序相關(guān)基礎(chǔ)知識(shí)普通測(cè)序及測(cè)序相關(guān)基礎(chǔ)知識(shí)測(cè)序模板的要求測(cè)序分析軟件A. Sequencing Analysis 5.2，用于將測(cè)序原始數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為峰圖文件B.DNAStar,用于將測(cè)序得到的結(jié)果進(jìn)行拼接C.Chromas，用于顯示DNA測(cè)序峰圖文件測(cè)序模板的要求PCRPCR產(chǎn)物直接測(cè)序產(chǎn)物直接測(cè)序 PCR已純化產(chǎn)物：提供切膠回收純化后的PCR產(chǎn)物20ul (濃度大于50 ng/l), 并請(qǐng)?zhí)峁舛?(濃度須正

6、確) 大于3.2 pmol/l的測(cè)序引物1020 l（具體體積視客戶反應(yīng)數(shù)相應(yīng)增加）。未純化PCR產(chǎn)物：提供至少40ulPCR擴(kuò)增原液，送樣前取2ul經(jīng)瓊脂糖膠鑒定目的片斷為明亮的一條帶, 同時(shí)請(qǐng)?zhí)峁舛?(濃度須正確) 大于3.2 pmol/l的測(cè)序引物1020 l （具體體積視客戶反應(yīng)數(shù)相應(yīng)增加）。測(cè)序知識(shí)概述測(cè)序知識(shí)概述PPTPPT課件課件1010普通測(cè)序及測(cè)序相關(guān)基礎(chǔ)知識(shí)普通測(cè)序及測(cè)序相關(guān)基礎(chǔ)知識(shí)測(cè)序模板的要求測(cè)序模板的要求注意事項(xiàng):PCR產(chǎn)物直接測(cè)序成功的關(guān)鍵是PCR產(chǎn)物的純度，所以我們提倡用膠回收PCR產(chǎn)物。如果有幾條PCR產(chǎn)物長(zhǎng)度相近，用電泳膠也無(wú)法分開時(shí)，此時(shí)的PCR產(chǎn)物直接測(cè)

7、序會(huì)出現(xiàn)雙峰，這種情況建議把PCR產(chǎn)物克隆后測(cè)序。PCR已純化產(chǎn)物請(qǐng)用水稀釋不要用elution buffer。PCR產(chǎn)物直接測(cè)序成功的另一要因是引物。不是能做PCR反應(yīng)的引物便一定能測(cè)序。測(cè)序用引物要求較高,引物的3端必須與模板完全配對(duì)，含有Mix堿基的引物一般不能測(cè)序 (特別是3端)。此外，測(cè)序引物長(zhǎng)度一般為20個(gè)堿基左右，GC含量必須在5060%左右，TM值在55-65度之間。盡量保證測(cè)序引物的純度。并且引物需要用水而非TE溶解。PCR未純化產(chǎn)物最好不要添加染料。測(cè)序知識(shí)概述測(cè)序知識(shí)概述PPTPPT課件課件1111普通測(cè)序及測(cè)序相關(guān)基礎(chǔ)知識(shí)普通測(cè)序及測(cè)序相關(guān)基礎(chǔ)知識(shí)測(cè)序模板的要求測(cè)序模板

8、的要求質(zhì)粒質(zhì)粒DNADNA的測(cè)序的測(cè)序 質(zhì)粒樣品：請(qǐng)注明載體名稱及是否含有特殊結(jié)構(gòu)、插入片段的長(zhǎng)度及插入片段的酶切位點(diǎn)情況、請(qǐng)?zhí)峁┲辽?5ul以上的提純的質(zhì)粒DNA ，濃度大于200 ng/l（體積視客戶反應(yīng)個(gè)數(shù)適當(dāng)增加）。含有質(zhì)粒的菌液/沉淀菌體/平板菌/穿刺菌樣品：請(qǐng)注明菌體的種類及抗生素抗性的情況、所含載體的名稱及結(jié)構(gòu)情況、插入片段的長(zhǎng)度及插入片段的酶切位點(diǎn)情況、如果有特殊抗生素添加比例或培養(yǎng)條件特殊須注明。含有噬菌體含有噬菌體DNADNA的樣品的樣品公司均不提供此類抽提服務(wù)，請(qǐng)客戶提供質(zhì)粒形態(tài)的樣品20ul ，濃度大于50 ng/l。務(wù)必需要客戶注明是含有噬菌體DNA的質(zhì)粒。測(cè)序知識(shí)概

9、述測(cè)序知識(shí)概述PPTPPT課件課件1212普通測(cè)序及測(cè)序相關(guān)基礎(chǔ)知識(shí)普通測(cè)序及測(cè)序相關(guān)基礎(chǔ)知識(shí)測(cè)序引物的要求測(cè)序引物的要求長(zhǎng)度在18-25bp之間GC含量在35%-60%之間不含兼并堿基TM值在55-65度之間無(wú)引物二聚體、無(wú)發(fā)夾結(jié)構(gòu)隨機(jī)引物和帶有熒光標(biāo)記的引物不能測(cè)序如果設(shè)計(jì)引物，最好引物距離目的基因50bp左右測(cè)序知識(shí)概述測(cè)序知識(shí)概述PPTPPT課件課件1313普通測(cè)序生產(chǎn)流程介紹普通測(cè)序生產(chǎn)流程介紹客戶樣品送達(dá)公司后，需要3個(gè)階段A.模板制備階段B.測(cè)序反應(yīng)階段C.報(bào)告分析階段測(cè)序知識(shí)概述測(cè)序知識(shí)概述PPTPPT課件課件1414困難模板測(cè)序相關(guān)知識(shí)困難模板測(cè)序相關(guān)知識(shí)困難樣品的定義和鑒別

10、困難樣品的定義和鑒別困難樣品的定義和鑒別不滿足常規(guī)測(cè)序樣品質(zhì)量要求的樣品用常規(guī)測(cè)序反應(yīng)體系無(wú)法得到正常結(jié)果的樣品分類現(xiàn)象樣品類型樣品鑒別序列結(jié)構(gòu)困難模板中斷/衰減POLY G/C質(zhì)粒：10個(gè)連續(xù)單堿基重復(fù)PCR產(chǎn)物：5個(gè)連續(xù)單堿基重復(fù)POLY A/T質(zhì)粒：15個(gè)連續(xù)單堿基重復(fù)PCR產(chǎn)物：10個(gè)連續(xù)單堿基重復(fù)二級(jí)結(jié)構(gòu)/發(fā)夾結(jié)構(gòu)用于RNAi干擾實(shí)驗(yàn)GC RICH局部75GC堿基富集AT RICH局部80AT堿基富集樣品片段大于10KB測(cè)序序列有峰值，但背景信號(hào)極高，導(dǎo)致機(jī)器無(wú)法判讀，用通用測(cè)序反應(yīng)體系（5ul體系）無(wú)法得到結(jié)果測(cè)序知識(shí)概述測(cè)序知識(shí)概述PPTPPT課件課件1515困難模板測(cè)序相關(guān)知識(shí)

11、困難模板測(cè)序相關(guān)知識(shí)困難樣品的定義和鑒別困難樣品的定義和鑒別優(yōu)化模板質(zhì)量雙峰非單克?。ㄙ|(zhì)粒）外源插入片段中雙峰模板不純/多條帶PCR樣品中含1100BP差異的多個(gè)片段，目前1.5瓊脂糖凝膠無(wú)法分離無(wú)信號(hào)引物模板不匹配1、無(wú)結(jié)合位點(diǎn)無(wú)信號(hào)2、測(cè)序引物與模板Tm值相差太大，無(wú)法結(jié)合無(wú)信號(hào)模板濃度低用通用測(cè)序反應(yīng)體系（5ul）無(wú)法得到結(jié)果,，預(yù)試驗(yàn)中電泳鑒定模板條帶亮度低于標(biāo)準(zhǔn)50ng/ul的marker雜峰引物特異性差測(cè)序序列有峰值，但背景信號(hào)極高，導(dǎo)致機(jī)器無(wú)法判讀，用通用測(cè)序反應(yīng)體系（5ul體系）無(wú)法得到結(jié)果預(yù)試驗(yàn)失敗菌不長(zhǎng)二次搖菌培養(yǎng)，菌液仍清淡不足以抽提質(zhì)粒抽不出質(zhì)粒 兩次抽提質(zhì)粒電泳鑒定無(wú)

12、質(zhì)粒條帶或條帶亮度很弱，不足以進(jìn)行反應(yīng)多條帶在瓊脂糖膠上看到多條擴(kuò)增產(chǎn)物帶，目前1.5瓊脂糖凝膠無(wú)法分離質(zhì)粒含基因組DNA在瓊脂糖膠上，質(zhì)粒主帶后看到基因組DNA帶測(cè)序知識(shí)概述測(cè)序知識(shí)概述PPTPPT課件課件1616困難模板測(cè)序相關(guān)知識(shí)困難模板測(cè)序相關(guān)知識(shí)常規(guī)樣品與困難樣品的不同點(diǎn)常規(guī)樣品與困難樣品的不同點(diǎn)正常樣品正常樣品困難樣品困難樣品預(yù)預(yù)實(shí)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)部部分分1、菌液樣品顏色略微偏白 ，培養(yǎng)過(guò)夜后，搖蕩新鮮培養(yǎng)液呈漂絮狀2、質(zhì)粒2ul電泳鑒定無(wú)雜帶，主條帶亮度達(dá)100ng/ul（與標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒帶對(duì)比）3、PCR產(chǎn)物2ul電泳鑒定無(wú)雜帶或無(wú)彌散狀，主條帶亮度達(dá)50ng/ul（與標(biāo)準(zhǔn)Marker對(duì)比）1

13、、菌液樣品清澈，二次搖菌培養(yǎng)，菌液仍清淡如培養(yǎng)前，不足以抽提質(zhì)粒2、菌液顏色泛黃，呈泥水狀，兩次抽提質(zhì)粒電泳鑒定無(wú)質(zhì)粒條帶或條帶亮度很弱，不足以進(jìn)行測(cè)序反應(yīng)3、PCR產(chǎn)物在瓊脂糖膠上看到多條擴(kuò)增產(chǎn)物帶，目前1.5瓊脂糖凝膠無(wú)法分離4、PCR產(chǎn)物電泳鑒定時(shí)，在瓊脂糖膠上2ul的上樣量看不到擴(kuò)增產(chǎn)物帶5、質(zhì)粒樣品已降解：電泳鑒定在瓊脂糖膠上看到火箭狀拖尾6、質(zhì)粒樣品含RNA帶：在瓊脂糖膠上，質(zhì)粒主帶前看到較寬的RNA帶7、質(zhì)粒含基因組DNA：在瓊脂糖膠上，質(zhì)粒主帶后靠近點(diǎn)樣孔，看到基因組DNA帶測(cè)序知識(shí)概述測(cè)序知識(shí)概述PPTPPT課件課件1717困難模板測(cè)序相關(guān)知識(shí)困難模板測(cè)序相關(guān)知識(shí)常規(guī)樣品與困

14、難樣品的不同點(diǎn)常規(guī)樣品與困難樣品的不同點(diǎn)正常樣品正常樣品困難樣品困難樣品測(cè)測(cè)序序反反應(yīng)應(yīng)后后1、菌液、質(zhì)粒樣品測(cè)序反應(yīng)后，測(cè)序結(jié)果的彩圖是清晰的，背景信號(hào)干擾少，峰型是尖的，尖峰與讀取的堿基編碼是一致的，中間波形緊湊均勻的，正常的測(cè)序反應(yīng)能保證達(dá)到800Bases以上，見例圖 2、PCR樣品正常測(cè)序結(jié)果峰值判斷與質(zhì)粒樣品大致相同，唯一區(qū)別是PCR產(chǎn)物測(cè)序結(jié)束的末端最后一個(gè)堿基為A（綠色峰），見例圖 1、測(cè)序信號(hào)未能延伸到800BP之后，出現(xiàn)信號(hào)中止或衰竭2、測(cè)序信號(hào)為單個(gè)峰上再疊一個(gè)峰，稱為雙峰3、測(cè)序信號(hào)只有背景信號(hào)，無(wú)清晰峰值，稱為無(wú)信號(hào)4、測(cè)序圖譜有樣品峰存在，但背景信號(hào)掩蓋了部分樣品峰

15、值信號(hào)，稱為雜峰測(cè)序知識(shí)概述測(cè)序知識(shí)概述PPTPPT課件課件1818測(cè)序簡(jiǎn)單問(wèn)題解答測(cè)序簡(jiǎn)單問(wèn)題解答術(shù)語(yǔ)講解術(shù)語(yǔ)講解搖菌搖菌是指將客戶提供的菌液、穿刺菌、平板菌接入液體培養(yǎng)基中，37過(guò)夜培養(yǎng)，從而得到足夠用于抽提出一定濃度質(zhì)粒的過(guò)程。劃平板平板是將用于細(xì)菌培養(yǎng)的固體培養(yǎng)基，倒于平皿之上，待凝固后用于培養(yǎng)細(xì)菌。劃平板是用接種環(huán)在平板培養(yǎng)基表面通過(guò)分區(qū)劃線而達(dá)到純化分離微生物的一種方法。是將微生物樣品在固體培養(yǎng)基表面多次作“由點(diǎn)到線”稀釋而達(dá)到分離的目的。用于目的微生物的分離、克隆的活化。（如圖）通知客戶“劃板失敗”，是即使我們通過(guò)將客戶的菌液通過(guò)劃平板處理，但是平板上沒有菌落生長(zhǎng)，證明克隆可能已

16、經(jīng)沒有活力，建議客戶重新提供樣品。測(cè)序知識(shí)概述測(cè)序知識(shí)概述PPTPPT課件課件1919測(cè)序簡(jiǎn)單問(wèn)題解答測(cè)序簡(jiǎn)單問(wèn)題解答術(shù)語(yǔ)講解術(shù)語(yǔ)講解抽質(zhì)粒質(zhì)粒是細(xì)菌、酵母菌和放線菌等生物中染色體以外的DNA分子抽質(zhì)粒是指用質(zhì)粒抽提試劑盒，采用堿裂解法，經(jīng)過(guò)裂解去除蛋白等步驟，從細(xì)菌中獲得質(zhì)粒DNA的過(guò)程。鑒定鑒定是指將抽提出的質(zhì)粒、客戶提供的質(zhì)粒&PCR已純化產(chǎn)物、PCR未純化產(chǎn)物取2ul經(jīng)EB染色，點(diǎn)于1.3%瓊脂糖凝膠上，通過(guò)觀察DNA樣品條帶亮度對(duì)樣品濃度進(jìn)行判定的過(guò)程。測(cè)序知識(shí)概述測(cè)序知識(shí)概述PPTPPT課件課件2020測(cè)序簡(jiǎn)單問(wèn)題解答測(cè)序簡(jiǎn)單問(wèn)題解答術(shù)語(yǔ)講解術(shù)語(yǔ)講解條帶條帶是DNA樣品（質(zhì)

17、粒、PCR產(chǎn)物）經(jīng)過(guò)EB染色，在瓊脂糖膠上形成的明亮帶，條帶的存在證明客戶的樣品中存在一定量的DNA模板(如圖)。通常，我們通知客戶“無(wú)條帶”的意思是：客戶的樣品我們經(jīng)EB染色，在瓊脂糖膠上沒有亮帶，證明客戶提供的樣品中，沒有DNA模板，或模板含量極低，不能用于測(cè)序。條帶弱的意思是與DNA Marker相比，條帶亮度弱，無(wú)法從膠中回收產(chǎn)物。測(cè)序知識(shí)概述測(cè)序知識(shí)概述PPTPPT課件課件2121測(cè)序簡(jiǎn)單問(wèn)題解答測(cè)序簡(jiǎn)單問(wèn)題解答術(shù)語(yǔ)講解術(shù)語(yǔ)講解PCRPCR是P Polymerase C Chain R Reaction 的簡(jiǎn)稱，即聚合酶鏈鎖反應(yīng)，是指在DNA聚合酶催化下，以母鏈DNA為模板，以特定引

18、物為延伸起點(diǎn)，通過(guò)變性、退火、延伸等步驟，體外復(fù)制出與母鏈模板DNA互補(bǔ)的子鏈DNA的過(guò)程。是一項(xiàng)DNA體外合成放大技術(shù)，能快速特異地在體外擴(kuò)增任何目的DNA。 PCR反應(yīng)原理演示http:/ TA克隆系統(tǒng)）。測(cè)序知識(shí)概述測(cè)序知識(shí)概述PPTPPT課件課件2323測(cè)序簡(jiǎn)單問(wèn)題解答測(cè)序簡(jiǎn)單問(wèn)題解答常見問(wèn)題解答常見問(wèn)題解答什么是walking測(cè)序？對(duì)于插入片斷較長(zhǎng)的DNA樣品，一個(gè)測(cè)序反應(yīng)往往不能達(dá)到測(cè)通的目的，這個(gè)時(shí)候需要進(jìn)行walking測(cè)序，即以已經(jīng)測(cè)序得到的結(jié)果為基礎(chǔ)，在測(cè)序得到的序列上設(shè)計(jì)引物繼續(xù)向下（上）游測(cè)序的方法。一般來(lái)說(shuō)，第一個(gè)正向walking反應(yīng)測(cè)序部將命名為w1f，第一個(gè)反向

19、walking反應(yīng)測(cè)序部命名為w1r，對(duì)于未知客戶序列方向的命名為w1p，對(duì)于向反向互補(bǔ)鏈進(jìn)行測(cè)序的命名為w1pc。以此類推到第N個(gè)反應(yīng)。如下圖所示測(cè)序知識(shí)概述測(cè)序知識(shí)概述PPTPPT課件課件2424測(cè)序簡(jiǎn)單問(wèn)題解答測(cè)序簡(jiǎn)單問(wèn)題解答常見問(wèn)題解答常見問(wèn)題解答如何查詢載體與引物？每個(gè)公司均會(huì)整理常用的載體與引物表，客戶可向相關(guān)測(cè)序公司索要載體及對(duì)應(yīng)引物表格，以及咨詢公司能提供客戶使用的通用引物。測(cè)序結(jié)果中怎么找不到測(cè)序引物？（用自備引物測(cè)序，前面怎么缺了一段？）由于測(cè)序引物不被熒光標(biāo)記，所以不發(fā)射熒光信號(hào)，在測(cè)序結(jié)果中，是不顯示的。不論自備引物還是通用引物，在測(cè)序結(jié)果中，都是看不到的。由于受到反應(yīng)體系中殘留的BDT反應(yīng)底物影響，測(cè)序結(jié)果前端受到該小分子物質(zhì)的影響，所以不太準(zhǔn)確，因而測(cè)序引物后大約20-30bp在測(cè)序結(jié)果中不顯示。測(cè)序結(jié)果文件名的意義如A04.CS080904823_8037.PQEK834#.W2R(08154058) A04：96孔PCR反應(yīng)板對(duì)應(yīng)樣品孔號(hào)CS08090482