《儀器分析》實(shí)驗(yàn)講義2

1、儀器分析實(shí)驗(yàn)講義制藥與生命科學(xué)學(xué)院2008 1 前言儀器分析是分析科學(xué)的重要組成部分，近半個(gè)世紀(jì)以來， 隨著現(xiàn)代物理學(xué)、 電子學(xué)、計(jì)算機(jī)科學(xué)的快速發(fā)展， 儀器分析有了突飛猛進(jìn)的發(fā)展。分析測(cè)定的靈敏度、 準(zhǔn)確性大大提高， 分析測(cè)定的對(duì)象日益擴(kuò)大，分析測(cè)定的自動(dòng)化程度極大地提高。因此，儀器分析在各個(gè)領(lǐng)域的應(yīng)用越來越多， 學(xué)好儀器分析， 可為將來的科學(xué)研究打下良好的基礎(chǔ)。儀器分析課程的教學(xué)既要使學(xué)生獲得扎實(shí)的理論和技能基礎(chǔ)，又要緊跟國內(nèi)外學(xué)科發(fā)展的要求。實(shí)驗(yàn)課教學(xué)是儀器分析課程的重要組成部分，旨在引導(dǎo)學(xué)生將理論聯(lián)系實(shí)際，提高動(dòng)手能力，培育創(chuàng)新精神。本儀器分析實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)中精選了紫外-可見分光光度法、氣相

2、色譜法、高效液相色譜法等分析方法的典型實(shí)驗(yàn)。2 總則1、檢驗(yàn)方法中所采用的名詞及單位制均應(yīng)符合國家規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)。2、檢驗(yàn)方法中所使用的水， 在沒有注明其他要求時(shí)， 系指其純度能滿足分析要求的蒸餾水或去離子水。3、檢驗(yàn)方法中所使用的砝碼、滴定管、移液管、容量瓶、刻度吸管及分光光度計(jì)等均須按國家有關(guān)規(guī)定及規(guī)程進(jìn)行校正。4、 液體的滴，系指蒸餾水至標(biāo)準(zhǔn)管流下的一滴的量， 在 20時(shí) 20 滴相當(dāng)于 lml。5、化學(xué)試劑的等級(jí)標(biāo)志和符號(hào)化學(xué)試劑在瓶簽上注明的等級(jí)、標(biāo)志、符號(hào)及瓶簽顏色都是按國家統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的。見下表。我國化學(xué)試劑的等級(jí)標(biāo)志級(jí)別一級(jí)品二級(jí)品三級(jí)品純度分類優(yōu)級(jí)純( 保證試劑 ) 分析純(分析

3、試劑 ) 化學(xué)純實(shí)驗(yàn)試劑生物試劑符號(hào)g r ar c p lr r或 r 瓶簽顏色綠色紅色藍(lán)色棕色或其它色黃色或其它色但是，近年來由于化學(xué)試劑的品種規(guī)格發(fā)展繁多，其他規(guī)格的試劑包裝顏色各異，主要應(yīng)根據(jù)文字和符號(hào)來識(shí)別化學(xué)試劑的等級(jí)。6、試劑分級(jí)標(biāo)準(zhǔn) 按國家統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，規(guī)定了各級(jí)化學(xué)試劑的純度及雜質(zhì)含量。實(shí)驗(yàn)室最常見的試劑規(guī)格為: 基準(zhǔn)試劑是一類用于標(biāo)定容量分析標(biāo)準(zhǔn)溶液的標(biāo)準(zhǔn)參考物，可精確稱量后直接配制標(biāo)準(zhǔn)溶液。主成分含量一般99.95%100.05% ，雜質(zhì)含量略低于一級(jí)品或與一級(jí)品相當(dāng)。優(yōu)級(jí)純?yōu)橐患?jí)品，又稱保證試劑，成分高，雜質(zhì)含量低，主要用于精密的科學(xué)研究和測(cè)定工作。分析純?yōu)槎?jí)品， 質(zhì)量略

4、低于優(yōu)級(jí)純，雜質(zhì)含量略高，主要用于一般的科學(xué)研究和重要的測(cè)定?；瘜W(xué)純?yōu)槿?jí)品，質(zhì)量較分析純差，但高于試驗(yàn)試劑，用于工廠、教3 學(xué)實(shí)驗(yàn)的一般分析工作。實(shí)驗(yàn)試劑為四級(jí)品，雜質(zhì)含量更多，但比工業(yè)品純度高，主要用于普通的實(shí)驗(yàn)或研究?；瘜W(xué)試劑除上述四級(jí)外， 高純?cè)噭?又可分為超純、特純、高純、光譜純及色譜純或色譜標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)等試劑。這一類化學(xué)試劑主成分含量可達(dá)四個(gè)9(99.99%) 到五、六個(gè) 9 不等。光譜純?cè)噭?雜質(zhì)含量用光譜分析法己測(cè)不出或低于某一限度 ; 色譜純或色譜標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)， 是指用于色譜分析的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，其雜質(zhì)含量用色譜分析法測(cè)不出或低于某一限度。應(yīng)根據(jù)對(duì)分析結(jié)果的不同要求確定所選用的化學(xué)試劑的

5、規(guī)格。純度高、雜質(zhì)含量少的試劑因制造或提純過程復(fù)雜，價(jià)格較高。7、配制溶液的要求7.1 一般試劑及提取用的溶劑可用化學(xué)純?cè)噭缬鲈噭┛瞻赘呋驅(qū)y(cè)定有干擾時(shí)，則需采用更純的試劑或經(jīng)純化處理的試劑。7.2 配制微量物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)溶液時(shí)，所用試劑純度應(yīng)在分析純以上。7.3 作為標(biāo)定標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液濃度用的試劑純度應(yīng)為基準(zhǔn)級(jí)或優(yōu)級(jí)純。7.4 溶液未指明何種溶液配制時(shí)，均指水溶液。7.5 一般試劑用硬玻璃瓶存放，堿液和金屬溶液用聚乙烯瓶存放，需避光試劑儲(chǔ)于棕色瓶中。8、在檢驗(yàn)方法中， 精密稱取 系指在稱量操作中必須按所列數(shù)值稱取，精密稱取約 系指必須稱至 0.lmg ，但稱取量可接近所列數(shù)值，以上兩種稱量一般

6、用分析天平。 稱取 系指要求稱至 0.1g ，可用架盤藥物天平 ( 托盤天乎 ) 稱量。9、配制溶液濃度9.1 容量百分比溶液 (%，v/v)，系指 1ooml 溶液中含有該化合物若干毫升。9.2 質(zhì)量容量百分比溶液 (%， m/v)， 系指 1ooml溶液中含有該化合物若干克，在檢驗(yàn)方法中，一般百分比濃度即指質(zhì)量百分比濃度。9.3 溶液的比例濃度，系指液體溶質(zhì)體積與溶劑體積的比。9.4 硫酸、鹽酸、硝酸，系指濃硫酸、濃鹽酸、濃硝酸。1o 、檢驗(yàn)的有關(guān)要求10.1 數(shù)據(jù)的計(jì)算方法和取值應(yīng)遵循有效數(shù)字法則及數(shù)字修約規(guī)則。4 1o.2 檢驗(yàn)時(shí)必須做平行試驗(yàn)。10.3 檢驗(yàn)結(jié)果的表示方法有以下幾種表

7、示形式: 毫克百分含量 : 每百克 ( 或每百毫升 )樣品中所含被測(cè)物質(zhì)的毫克數(shù)。百分含量 (%): 每百克 ( 或每百毫升 ) 樣品中所含被測(cè)物質(zhì)的克數(shù)。千分含量 ( ): 每公斤 ( 或每升 )樣品中所含被測(cè)物質(zhì)的克數(shù)。百萬分含量 (ppm): 每公斤 (或每升 ) 樣品中所含被測(cè)物質(zhì)的毫克數(shù)，或每克 ( 或每毫升 ) 樣品中所含被測(cè)物質(zhì)的微克數(shù)。十億分含量 (ppb):每公斤 ( 或每升 )樣品中所含被測(cè)物質(zhì)的微克數(shù)，或每克( 或每毫升 )樣品中所含被測(cè)物質(zhì)的納克數(shù)。5 實(shí)驗(yàn)一 分光光度法測(cè)定樣品中的總鐵一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c要求1、了解鄰二氮菲比色法測(cè)定鐵的基本原理；2、熟悉分光光度計(jì)的使用；

8、3、掌握分光光度法分析條件選擇的方法。二、實(shí)驗(yàn)原理紫 外 可 見 分 光 光 度 法 （ ultraviolet-visible molecular absorption spectrometry ）是根據(jù)溶液中物質(zhì)的分子或離子對(duì)紫外和可見光譜區(qū)輻射能（200800nm ）的吸收來研究物質(zhì)的組成含量和結(jié)構(gòu)的方法。它廣泛用于無機(jī)和有機(jī)物的定性和定量測(cè)定，是常用的分析方法。朗伯比爾定律是吸收光度法的基本定律，是說明物質(zhì)對(duì)單色光吸收的強(qiáng)弱與吸光物質(zhì)的濃度及厚度間關(guān)系的定律。a=abc 即在一定條件下吸光度與吸收層厚度和吸光物質(zhì)的濃度成正比。鄰二氮菲是測(cè)定鐵的較好顯色劑，在ph39 的介質(zhì)中，它與fe

9、() 形成紅橙色絡(luò)合物（ lgk穩(wěn)21.3 ，最大吸收波長(zhǎng) 508nm ， 1.1 104） ，在一定濃度范圍內(nèi)， fe() 的濃度與吸光度遵守吸收定律。樣品中若有fe()，可用還原劑（如鹽酸羥胺）將其還原成fe()，則本方法可測(cè)出總鐵含量。4fe3+2nh2oh 4fe2+n2o +4h+h2o nn 3fe2+nnfe2+3用可見分光光度法分析時(shí)， 為了得到最佳的測(cè)量靈敏度、 準(zhǔn)確度及重現(xiàn)性，在含量測(cè)定前應(yīng)進(jìn)行條件實(shí)驗(yàn)，選擇最佳分析條件。方法的選擇性很高， 相當(dāng)于鐵含量 40 倍的 sn2+、 al3+、 ca2+、 mg2+、 zn2+、 sio32-，20 倍的 cr3+、mn2+、v

10、5+、po43-，5 倍的 co2+、cu2+等均不干擾測(cè)定。6 三、實(shí)驗(yàn)儀器1、可見分光光度計(jì)；2、分析天平等。四、實(shí)驗(yàn)試劑所用試劑均為分析純（ ar級(jí)） ，水為蒸餾水。1、硫酸亞鐵銨2、鄰二氮菲3、濃鹽酸4、鹽酸羥胺5、醋酸鈉6、ph試紙（1-14）五、實(shí)驗(yàn)步驟（一）試劑的配制1、鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取硫酸亞鐵銨0.3500 g ，加熱溶解，移入50 ml 容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。此溶液濃度為1 mg/ml，使用時(shí)配制成濃度為100 g/ml 標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液。2、鄰二氮菲溶液： 0.1 水溶液，需加熱溶解。臨用時(shí)配制。3、鹽酸羥胺溶液： 10水溶液，臨用時(shí)配制。4、鹽酸溶液： 10（v/

11、v）水溶液。5、醋酸緩沖溶液（ ph=4.6） ：將 68g 醋酸鈉溶于約 500ml蒸餾水中，加入 29ml冰醋酸，稀釋定容至1l。（二）實(shí)驗(yàn)條件的選取1、繪制吸收曲線（含鐵標(biāo)準(zhǔn)液）和溶液（不含鐵標(biāo)準(zhǔn)液）。(1) 用水作參比溶液，分別繪制上述兩種溶液的吸收曲線(2) 用溶液作參比溶液，繪制有色配合物的吸收光譜比較上述三種吸收光譜，選取合適的測(cè)定波長(zhǎng)。2、顯色劑用量的選擇取 6 個(gè) 50ml容量瓶，各加入100 g/ml鐵標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液 1.0ml，加 10鹽酸7 溶液 1ml ， 10鹽酸羥胺溶液1ml ， 醋酸緩沖溶液 5ml， 搖勻， 再加入 0.00 、 0.25、0.50 、1.00 、

12、2.00 、3.00 ml0.1 鄰二氮菲溶液，定容，搖勻。在選定波長(zhǎng)處，用未加顯色劑溶液管作參比，測(cè)量溶液吸光度值。以顯色劑體積為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制吸光度顯色劑用量曲線，確定最佳顯色劑用量。（三）水樣中鐵含量的測(cè)定1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制準(zhǔn)確吸取 100 g/ml 鐵標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液 0.0、0.20 、0.40、0.60 、0.80 、1.0ml于 50ml容量瓶中，加入 10鹽酸溶液 1ml ，10鹽酸羥胺溶液 1ml ，醋酸緩沖溶液 5ml及鄰二氮菲溶液適量，用水稀釋至50ml ，搖勻，測(cè)定溶液的吸光度。2、水樣中鐵含量的測(cè)定準(zhǔn)確吸取上述處理好的樣品溶液2.0ml于 50ml容量瓶中，以

13、下操作按照標(biāo)準(zhǔn)曲線制作的步驟進(jìn)行，測(cè)定樣品的吸光度。（四）數(shù)據(jù)處理1、繪制吸收曲線實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)水做參比波長(zhǎng) (nm)492 496 500 504 508 512 516 520 524 530 溶液 a 波長(zhǎng) (nm)492 496 500 504 508 512 516 520 524 530 溶液 a 溶液做參比波長(zhǎng) (nm)492 496 500 504 508 512 516 520 524 530 溶液 a 適宜的檢測(cè)波長(zhǎng)以波長(zhǎng)為橫坐標(biāo)， 對(duì)應(yīng)的吸光度為縱坐標(biāo)， 將測(cè)得值逐個(gè)描繪在坐標(biāo)紙上，并連成光滑曲線，即得吸收光譜。從曲線上查得溶液的最大吸收波長(zhǎng) (nm)，得測(cè)量鐵的測(cè)量波長(zhǎng)（又稱

14、工作波長(zhǎng)）。（2）顯色劑用量的選擇實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)鄰二氮菲溶液（ml）0.00 0.25 0.50 1.00 2.00 3.00 8 吸光度 a 適宜的顯色劑用量以顯色劑鄰二氮菲溶液的加入量（ml ）為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的吸光度為縱坐標(biāo)，繪制吸光度顯色劑用量曲線。從中找出適宜的顯色劑用量。（3）標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制（終體積50ml ）實(shí)驗(yàn)點(diǎn)1 2 3 4 5 6 加入鐵標(biāo)準(zhǔn)液量 （ml ）0.0 0.20 0.40 0.60 0.80 1.0 鐵含量（ g）鐵濃度（ mg/l）吸光度值以鐵標(biāo)準(zhǔn)的濃度為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的吸光度為縱坐標(biāo)，繪制吸光度鐵濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線。(4) 水樣測(cè)定六、思考題1、醋酸鈉、鄰二氮菲、鹽酸羥胺在

15、試驗(yàn)中各起什么作用？2、什么是吸收曲線？什么是標(biāo)準(zhǔn)曲線？標(biāo)準(zhǔn)曲線和吸收曲線有何區(qū)別？3、參比溶液的作用？4、如需測(cè)定樣品中fe3+的含量，如何操作？如測(cè)定一般鐵鹽的總鐵量是否要加鹽酸羥胺？5、實(shí)驗(yàn)的各項(xiàng)測(cè)定中， 哪種試劑加入量的體積要比較準(zhǔn)確，而其它試劑則可不必，為什么？6、根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)， 計(jì)算在最大吸收波長(zhǎng)下鄰二氮菲鐵絡(luò)合物的摩爾吸收光系數(shù)。實(shí)驗(yàn)二雙波長(zhǎng)分光光度法測(cè)定復(fù)方新諾明片中磺胺甲基異噁唑及甲氧芐氨嘧啶的含量9 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊?、掌握雙波長(zhǎng)分光光度法的基本原理，混合組分不經(jīng)分離直接測(cè)定各組分含量的方法。2、熟悉用單波長(zhǎng)型分光光度計(jì)進(jìn)行雙波長(zhǎng)法測(cè)定。二、基本原理1、雙波長(zhǎng)分光光度

16、計(jì)法消除干擾吸收的基本原理在干擾組分的吸收光譜上吸收系數(shù)相同的兩個(gè)波長(zhǎng)處，若被測(cè)組分的吸收系數(shù)有顯著差異，則可用于消除干擾吸收，即直接測(cè)定混合物在此兩波長(zhǎng)處的吸收度之差值，該差值與待測(cè)定物濃度成正比，而與干擾物濃度無關(guān)。用數(shù)學(xué)表達(dá)式如下：lclcbbaab2b1a2a1ba2ba121）（混若 b 為干擾物，所選波長(zhǎng)21處的 eb相等，所以0be則lcaa混與待測(cè)物濃度成正比，與干擾物濃度無關(guān)。2、雙波長(zhǎng)法測(cè)定復(fù)方新諾明片中磺胺甲基異噁唑（smz ）含量的基本原理復(fù)方新諾明片是含磺胺甲基異噁唑（smz ）和甲氧芐氨嘧啶（ tmp ）的復(fù)方片劑。在 0.1mol/l 的氫氧化鈉溶液中， smz在

17、 257nm波長(zhǎng)處有一最大吸收峰，tmp在 257nm和 304nm波長(zhǎng)處為等吸收點(diǎn)，而smz在這兩波長(zhǎng)處的吸收度差異大，所以測(cè)得樣品在257nm和 304nm波長(zhǎng)處的吸收度差值與 smz 濃度成正比，10 與 tmp 濃度無關(guān)。smz 的標(biāo)準(zhǔn)曲線及回歸方程繪制)/:(002. 010467. 62mlgccsr=0.9999, 線性范圍 015 g/ml 3、tmp含量測(cè)定原理以 tmp 的 max=287nm 為測(cè)定波長(zhǎng)，利用光吸收具有加和性測(cè)得吸收值，計(jì)算 tmp 的含量。ittmpnmcmissmznmcmtmpsmznmceceaaa%,1287,1% ,1287,1287smz 、

18、tmp在 287nm處的吸收系數(shù) :6.109%12871smznmcm；4 .247%12871tmpnmcm三、實(shí)驗(yàn)儀器1、可見分光光度計(jì)2、分析天平等四、實(shí)驗(yàn)試劑1、方新諾明片2、0.1mol/l 的氫氧化鈉溶液3、95乙醇五、實(shí)驗(yàn)步驟精密稱取粉末約 0.140 0 g，置于 250ml容量瓶中，加入95乙醇 50ml振搖 10min 溶解，以 0.1mol/lnaoh溶液稀釋至刻度。用干燥濾紙過濾，棄去初濾液，取 10ml濾液置 100ml容量瓶中，以 0.1mol/lnaoh溶液稀釋至刻度得液。精密吸取液25ml置另一 100ml容量瓶中，以 0.1mol/lnaoh溶液稀釋至刻度得

19、溶液液。測(cè)定液在 287nm處的吸收度，測(cè)定 液在 257nm和 304nm波長(zhǎng)處的吸收度差值，按工作曲線或回歸方程吸收系數(shù)計(jì)算二組分的含量。（由于處方中 smz為 0.4g/ 片，tmp 為 0.08g/ 片，即 smz為 tmp的 5 倍。如果采用同一濃度的濃溶液，則 smz 的吸收度大大超過測(cè)定值范圍（吸收值在0.3 0.7 之間） ，致使測(cè)定讀數(shù)不準(zhǔn)。如果采用稀溶液，由于tmp吸收度太小而使實(shí)驗(yàn)誤差增大。為此采用濃稀兩溶液使smz 、tmp 均有合適的測(cè)定范圍）。11 六、數(shù)據(jù)處理測(cè)定波長(zhǎng) (nm) 吸收值 a 溶液287 溶液257 304 smz含量的計(jì)算參考回歸方程002. 01

20、0467. 62sscmlgcss/10467.6002.02tmp含量的計(jì)算tscc4.2476.109287（cs ct：g/100ml ） ，得 tmp 的濃度 ct12 實(shí)驗(yàn)三 色譜參數(shù)的測(cè)試及計(jì)算一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、 通過本實(shí)驗(yàn)基本色譜參數(shù)的測(cè)定與計(jì)算， 了解各色譜參數(shù)的意義及其相互關(guān)系。2、通過本實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步掌握柱效、柱選擇性、分離能力、保留值等性質(zhì)，使之能選擇出最佳色譜操作條件，得到可靠的定性、定量結(jié)果。二、實(shí)驗(yàn)原理（一）氣相色譜法以氣體作為流動(dòng)相的色譜法稱為氣相色譜法。氣相色譜法適用于分離有一定揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的化合物。目前已廣泛用于化工、醫(yī)藥衛(wèi)生、環(huán)境及食品監(jiān)測(cè)等方面。1、流程氣相

21、色譜法是采用氣體作為流動(dòng)相的一種色譜法。在此法中：載氣（不與被測(cè)物作用，用來載送試樣的惰性氣體， 如氫氣、氮?dú)獾龋┹d著待分離的試樣通過色譜柱中的固定相，使試樣中各組分分離，然后分別檢測(cè)。其簡(jiǎn)單流程如圖1 所示。載氣由高壓鋼瓶 1 供給，經(jīng)減壓閥2 減壓后，進(jìn)入載氣凈化干燥管3 以除去載氣中的水分。由針形閥4 控制載氣的壓力和流量。流量計(jì)5 和壓力表 6 用以指示載氣的柱前流量和壓力。再經(jīng)過進(jìn)樣口（包括氣化室）7，試樣就在進(jìn)樣口注入（如為液體試樣， 經(jīng)氣化室瞬間氣化為氣體） 。由載氣攜帶進(jìn)入色譜柱8，將各組分分離后依次進(jìn)入檢測(cè)器9 后放空。檢測(cè)器信號(hào)由記錄儀10 記錄，就可得到色譜圖。13 氣相

22、色譜儀組成：從色譜流程圖可知道，氣相色譜儀一般由五部分組成：（1） 載氣系統(tǒng)，包括氣源、氣體凈化、氣體流速控制和測(cè)量。（2） 進(jìn)樣系統(tǒng)，包括進(jìn)樣口、氣化室。（3） 色譜柱和柱溫箱，包括恒溫控制裝置。（4） 檢測(cè)系統(tǒng)，包括檢測(cè)器及控溫裝置。（5） 記錄系統(tǒng)，包括放大器、記錄儀，有的儀器還有數(shù)據(jù)處理裝置。2、氣相色譜法特點(diǎn)：（1） 分離分析連貫性強(qiáng)，方法簡(jiǎn)便。（2） 分離效能高，選擇性好。（3） 分析速度快。（4） 靈敏度高。（5） 應(yīng)用范圍廣。在規(guī)定的色譜條件下，測(cè)定惰性組分的死時(shí)間（tm ）及被測(cè)組分的保留時(shí)間（tr） 、半高峰寬（ w1/2） 、及峰高（ h）等參數(shù)，便可計(jì)算出基本色譜參數(shù)值

23、。三、儀器與試劑1、儀器：氣相色譜儀一套； dnp 柱 1m3mm ；tcd檢測(cè)器；微量注射器（5-10 l）2、試劑：純樣：苯、甲苯、二甲苯混合樣：苯、甲苯、二甲苯的混合洋四、實(shí)驗(yàn)步驟1、色譜條件：溫度控制： 柱溫 120； 檢測(cè)器溫度： 100；氣化器溫度 120載氣：氮?dú)饬魉?40ml/min 進(jìn)樣量：空氣 :50 l，苯、甲苯、二甲苯混合樣1 l；信號(hào)衰減視靈敏度而定。2、測(cè)試：待儀器開啟運(yùn)行至基線平穩(wěn)后，進(jìn)樣進(jìn)混合樣，每次1 l，重復(fù)三次進(jìn)純樣，每種純樣進(jìn)一次，每次進(jìn)0.4 l 進(jìn)空氣，用微量注射器進(jìn)50 l 空氣，測(cè) tm，重復(fù)三次3、記錄數(shù)據(jù)14 五、數(shù)據(jù)處理1、記錄數(shù)據(jù)純 樣組

24、分空氣苯甲苯二甲苯tr（min）混合樣空氣苯甲苯二甲苯tr（min） （1）tr（min） （2）tr（min） （3）平均值 （min）偏差空氣tr（min） （1） tr（min） （2） tr（min） （3） 平均值 （min）2、各基本參數(shù)計(jì)算： 調(diào)整保留時(shí)間： 相對(duì)保留值： 容量因子： 理論塔板數(shù)： 有效塔板數(shù)：有效塔板高度：3、數(shù)據(jù)處理調(diào)整保留時(shí)間相對(duì)保留值容量因子理論塔板數(shù)有效塔板數(shù)有效塔板高度苯甲苯二甲苯六、問題討論1. 兩種方法測(cè)定的 tm何者準(zhǔn)確？為什么？15 2. 色譜基本參數(shù)測(cè)量與計(jì)算的關(guān)鍵問題是什么？氣相色譜儀操作規(guī)程一、載氣鋼瓶的使用規(guī)程1、鋼瓶必須分類保管，直立

25、因定，遠(yuǎn)離熱源，避免暴曬及強(qiáng)烈震動(dòng)，氫氣室內(nèi)存放量不得超過二瓶。2、氧氣瓶及專用工具嚴(yán)禁與油類接觸。3、鋼瓶上的氧氣表要專用，安裝時(shí)螺扣要上緊。4、操作時(shí)嚴(yán)禁敲打，發(fā)現(xiàn)漏氣須立即修好。5、用后氣瓶的剩余殘壓不應(yīng)少于980 kpa。6、氫氣壓力表系 反螺紋 ，安裝拆卸時(shí)應(yīng)注意防止損壞螺紋。二、減壓閥的使用及注意事項(xiàng)1、在氣相色譜分析中，鋼瓶供氣壓力在9.8 14.7 mpa。2、減壓閥與鋼瓶配套使用，不同氣體鋼瓶所用的減壓閥是不同的。氫氣減壓閥接頭為反 向螺紋 ，安裝時(shí)需小心。使用時(shí)需緩慢調(diào)節(jié)手輪，使用后必須旋松調(diào)節(jié)手輪和關(guān)閉鋼瓶閥門。3、關(guān)閉氣源時(shí)，先關(guān)閉減壓閥，后關(guān)閉鋼瓶閥門，再開啟減壓閥，

26、排出減壓閥內(nèi)氣體，最后松開調(diào)節(jié)螺桿。三、微量注射器的使用及注意事項(xiàng)1、微量注射器是易碎器械，使用時(shí)應(yīng)多加小心，不用時(shí)要洗凈放入盒內(nèi)，不要隨便玩弄，來回空抽，否則會(huì)嚴(yán)重磨損，損壞氣密性，降低準(zhǔn)確度。2、微量注射器在使用前后都須用丙酮等溶劑清洗。3、對(duì) 10100 微升的注射器，如遇針尖堵塞，宜用直徑為0.1 mm的細(xì)鋼絲耐心穿通 , 不能用火燒的方法。4、硅橡膠墊在幾十次進(jìn)樣后，容易漏氣，需及時(shí)更換。5、用微量注射器取液體試樣，應(yīng)先用少量試樣洗滌多次，再慢慢抽入試樣，并稍多于需要量。如針管內(nèi)有氣泡則將針頭朝上，使氣泡上升排出，再將過量的試樣排出，用濾紙吸去針尖外所沾試樣。注意切勿使針頭內(nèi)的試樣流

27、失。6、取好樣后應(yīng)立即進(jìn)樣，進(jìn)樣時(shí)，注射器應(yīng)與進(jìn)樣口垂直，針尖刺穿硅橡膠墊16 圈，插到底后迅速注入試樣， 完成后立即拔出注射器， 整個(gè)動(dòng)作應(yīng)進(jìn)行得穩(wěn)當(dāng)，連貫，迅速。注意：針尖在硅橡膠墊圈上的位置、插入速度、停留時(shí)間和拔出速度等都會(huì)影響進(jìn)樣的重復(fù)性，操作時(shí)應(yīng)注意。四、熱導(dǎo)池檢測(cè)器的使用及注意事項(xiàng)1、開啟熱導(dǎo)池檢測(cè)器電源前，必須先通載氣，實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，把橋電流調(diào)到最小值，再關(guān)閉熱導(dǎo)池檢測(cè)器電源，最后關(guān)閉載氣。2、穩(wěn)壓閥、針形閥的調(diào)節(jié)須緩慢進(jìn)行。穩(wěn)壓閥不工作時(shí)，必須放松調(diào)節(jié)手柄。針形閥不工作時(shí)，應(yīng)將閥門處于“開”的狀態(tài)。3、各室升溫要緩慢，防止超溫。4、更換汽化室密封墊片時(shí)，應(yīng)將熱導(dǎo)電源關(guān)閉。若流量

28、計(jì)浮子突然下落到底，也應(yīng)首先關(guān)閉該電源。5、橋電流不得超過允許值。五、氫火焰檢測(cè)器的使用及注意事項(xiàng)1、通氫氣后，待管道中殘余氣體排出后，應(yīng)及時(shí)點(diǎn)火，并保證火焰是點(diǎn)著的。2、使用 fid 時(shí)，離子室外罩須罩住，以保證良好的屏蔽和防止空氣侵入。如果離子室積木，可將端蓋取下，待離子室溫度較高時(shí)再蓋上。工作狀態(tài)下，取下檢測(cè)器罩蓋，不能觸及極化極，以防觸電。3、離子室溫度應(yīng)大于100 度，待層析室溫度穩(wěn)定后，再點(diǎn)火，否則離子室易積水，影響電極絕緣而使基線不穩(wěn)。17 實(shí)驗(yàn)四 高效液相色譜的定性定量方法一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、了解并熟悉高效液相色譜儀的流程。2、掌握液相色譜定性及外標(biāo)定量方法。3、了解液相色譜檢測(cè)器

29、及色譜柱的分類。二、實(shí)驗(yàn)原理（一）高效液相色譜高效液相色譜儀的主要部件：貯液器、高壓泵、梯度洗提裝置、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器、恒溫器、數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)等。儀器流程：貯液器中貯存的載液（常需除氣） 經(jīng)過過濾后由高壓泵輸送到色譜柱入口。 當(dāng)采用梯度洗提時(shí)一般需用雙泵系統(tǒng)來完成輸送。 樣品由進(jìn)樣器注入載液系統(tǒng)， 而后送到色譜柱進(jìn)行分離。 分離后的組分由檢測(cè)器檢測(cè)，輸出信號(hào)供給記錄儀或數(shù)據(jù)處理裝置。如果需收集餾分作進(jìn)一步分析，則在色譜柱一側(cè)出口將樣品餾分收集起來。各部分功能：1、高壓泵：往復(fù)式柱塞泵：是一種恒流泵，這種泵的特點(diǎn)是不受整個(gè)色譜體系中其余部分阻力稍有變化的影響，連續(xù)供給恒定體積的流動(dòng)相；更換溶

30、劑方便，很適用于梯度洗提；不足之處是輸出有脈沖波動(dòng)，會(huì)干擾某些檢測(cè)器（如差示折光檢測(cè)器） ，但對(duì)紫外檢測(cè)器的影響不大。18 2、進(jìn)樣裝置：高壓定量進(jìn)樣閥： 這是通過進(jìn)樣閥（常用六通閥）直接向壓力系統(tǒng)內(nèi)進(jìn)樣而不必停止流動(dòng)相流動(dòng)的一種進(jìn)樣裝置。3、色譜柱：目前液相色譜法常用的標(biāo)準(zhǔn)柱型是內(nèi)徑為4.6mm ，長(zhǎng)度為 25cm的直形不銹鋼柱。填料顆粒度510 m ，色譜柱的填料種類主要有-c18、-c8、-nh2、-cn、-so3-、-cooh 等等。4、檢測(cè)器：紫外光度檢測(cè)器：紫外光度檢測(cè)器是液相色譜法廣泛使用的檢測(cè)器，它的作用原理是基于被分析樣品組分對(duì)特定波長(zhǎng)紫外光的選擇性吸收，組分濃度與吸光度的關(guān)

31、系遵守比耳定律。紫外光度檢測(cè)器有固定波長(zhǎng)（單波長(zhǎng)和多波長(zhǎng)）、可變波長(zhǎng)（紫外分光和紫外可見分光）和二極管陣列檢測(cè)器。這種檢測(cè)器的特點(diǎn)：靈敏度高；最小檢測(cè)濃度可達(dá)10-9g/ml；對(duì)溫度和流速不敏感，可用于梯度洗提；結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單；缺點(diǎn)是不適用于對(duì)紫外光完全不吸收的試樣。示差檢測(cè)器是通過對(duì)物質(zhì)的物理常數(shù)折光指數(shù)的測(cè)量來進(jìn)行檢測(cè)的，它是一種通用型檢測(cè)器，但是，它的缺點(diǎn)是對(duì)溫度變化非常敏感，不能用于梯度洗脫。熒光檢測(cè)器是通過檢測(cè)被測(cè)物在一定波長(zhǎng)紫外光激發(fā)下發(fā)出的熒光量來對(duì)被測(cè)物進(jìn)行定量的，但并不是所有有機(jī)物都能發(fā)出熒光，在紫外光照射下會(huì)產(chǎn)生熒光的有機(jī)物，絕大多數(shù)為環(huán)狀化合物，像某些代謝物、食品、藥物、氨基酸

32、、多肽、胺類。維生素、石油高沸點(diǎn)餾分、生物堿、膽堿和甾族化合物等。（二）分離原理苯、萘、聯(lián)苯、菲分別屬于單環(huán)，多環(huán)及稠環(huán)芳烴，且極性強(qiáng)度和分子量均有差別，因此，它們?cè)趶?qiáng)極性的流動(dòng)相與非極性固定相之間的分配系數(shù)k 就不同，保留時(shí)間也就不相同，混合樣品因此而得以在色譜體系中被分離開。由于苯、萘、聯(lián)苯、菲都對(duì)紫外波長(zhǎng)有吸收，因此選用紫外檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)。在反相色譜系統(tǒng)里 , 固定相是非極性的 , 流動(dòng)相是極性的。在化學(xué)鍵合相色譜中，固定相的配合基常是鏈長(zhǎng)2-18 碳原子的烷基。 流動(dòng)相一般為極性有機(jī)溶劑和水的混合溶液。以溶質(zhì)極性減弱的次序洗脫。隨著移動(dòng)相極性的增強(qiáng)。保19 留值亦隨之增大。反相色譜的分離是以溶質(zhì)的疏水結(jié)構(gòu)的差異為基礎(chǔ)的，溶質(zhì)極性越大，保留值越小，對(duì)于同系物，其保留值隨碳數(shù)的增加而增大。溶劑的組成對(duì)樣品的保留有非常深刻的影響，溶質(zhì)保留值的大小是隨洗脫液的極性的降低而下降的， 當(dāng)流動(dòng)相組成一定時(shí) , 樣品在較長(zhǎng)烷基配合基的固定相上的保留值較大。在高效液相色譜中 , 定性方法有已知標(biāo)準(zhǔn)物定性， 保留值經(jīng)驗(yàn)定性、 用不同色譜體系定性、離析色譜峰后用其他方法定性等。本次實(shí)驗(yàn)采用已知標(biāo)準(zhǔn)物根據(jù)保留值定性的方法。定量方法有歸一化法、內(nèi)標(biāo)法、外標(biāo)法等。本次實(shí)驗(yàn)采用