改良后的ICA免疫層析法檢測(cè)沙眼衣原體的抗原的方法學(xué)研究

1、改良后的ica免疫層析法檢測(cè)沙眼衣原體的抗原的方法學(xué)研石小艷陳永紅禹倩(東莞市高垛醫(yī)院檢驗(yàn)科523270)【摘要】口的 通過(guò)不同的檢測(cè)方法，對(duì)沙眼衣原體的抗原進(jìn)行檢測(cè)，比較 這幾種檢測(cè)方式的靈敏度，建立一種簡(jiǎn)便、快速有效的衣原體檢測(cè)方法。方法選 取我院158例泌尿生殖道感染患者，和100例非泌尿生殖道感染的門(mén)診患者,258 例患者均采取giemsa染色細(xì)胞學(xué)檢測(cè)法，pcr反應(yīng)法以及改良前后的ica免疫 層析法進(jìn)行檢測(cè)，并以pcr法檢測(cè)結(jié)果作為對(duì)照。結(jié)果158例泌尿生殖道感染 患者，和100例非泌尿生殖道感染的門(mén)診患者的giemsa染色法的陽(yáng)性率分別為 9.5%和2%, pcr反應(yīng)法的陽(yáng)性率分別

2、為25.9%和12%,改良前ica免疫層析法的 陽(yáng)性率分別為21.5%和5%,改良后ica免疫層析法的陽(yáng)性率分別為24%和10%。 結(jié)論雖然pcr反應(yīng)法的靈敏度最優(yōu)，但是其需要配備高端儀器與專業(yè)人員，只 適合在大型醫(yī)療機(jī)構(gòu)推廣；而改良后的ica免疫層析法操作簡(jiǎn)便，靈嬪度僅次于 pcr反應(yīng)法，適合在基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)廣泛使用?！娟P(guān)鍵詞】ica免疫層析法 沙眼衣原體 聚合酶鏈反應(yīng)【中圖分類號(hào)】r457.2【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】a【文章編號(hào)】2095-1752 (2014) 04-0107-02沙眼衣原體是一組寄生在女性宮頸柱狀上皮細(xì)胞或者男性尿道上皮細(xì)胞的 病原體，在性傳播疾病屮所在的比例以10%逐年增加。沙眼

3、衣原體感染的檢測(cè) 方法有很多，本文對(duì)在我院治療的258例患者的檢測(cè)情況報(bào)告如下。1資料與方法1.1臨床資料選取我院2011年2月到2012年2月258例作為研究的對(duì)象，其屮158例 泌尿生殖道感染患者，其屮男77例，女81例，年齡在1949歲z間。而另外 100例非泌尿生殖道感染的門(mén)診病人，其中有男性42例，女性58例，年齡在20 57歲之間。這些研究對(duì)象在接受檢測(cè)之前，需要確保未使用抗生素。1.2方法1.2.1ica免疫層析法(1) 改良前ica免疫層析法標(biāo)本采集：女性受檢對(duì)象需要采集其宮頸口外的分泌物。男性受檢對(duì)象需要 采集其尿道口分泌物lo檢測(cè)吋，嚴(yán)格按照相關(guān)操作規(guī)程與試劑操作說(shuō)明書(shū)進(jìn)

4、行操作。ica免疫層析法所需的ica試劑均由浙江艾康生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)。操作方法：將0.6毫升試劑緩緩加入待測(cè)標(biāo)本當(dāng)中，并進(jìn)行加熱，吋間為10 分鐘至12分鐘之間。加熱完畢后，待標(biāo)本冷卻至室溫，將標(biāo)本的過(guò)濾液滴至測(cè) 試卡，15分鐘之后，觀察檢測(cè)結(jié)果。判定標(biāo)準(zhǔn)：陽(yáng)性：測(cè)試區(qū)與對(duì)照區(qū)均會(huì)出現(xiàn)一條紅色條狀物；陰性：僅僅在對(duì)照區(qū)出現(xiàn)一條紅色條狀物；無(wú)效：測(cè)試區(qū)與對(duì)照區(qū)均無(wú)任何反應(yīng)，需要重新檢測(cè)。(2) 改良后ica免疫層析法ica免疫層析法是通過(guò)檢測(cè)單克隆抗體來(lái)實(shí)現(xiàn)的。在檢測(cè)之前，必須通過(guò)高 溫處理，將抗原分離出來(lái)。而沙眼衣原體抗原存在特異性，只有當(dāng)溫度處于78 攝氏度至82攝氏度之間，抗原才能完全

5、成功被分離出來(lái)。一旦溫度控制不當(dāng)， 就會(huì)導(dǎo)致分離出的抗原又重新結(jié)合，從而導(dǎo)致檢測(cè)的靈敏度降低。因此，改良后的ica免疫層析法采用了電子恒溫水溫箱來(lái)控制溫度，這樣可 以更加精準(zhǔn)有效地將溫度控制在78攝氏度至82攝氏度之間的最佳范圍，阻止分 離出來(lái)的衣原體抗原逆結(jié)合，以提高檢測(cè)的靈敏度。另外，檢測(cè)標(biāo)本的采集方式 也會(huì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果造成影響。男性受檢對(duì)象不僅僅要采集其尿道分泌物作為檢測(cè)標(biāo) 本，還應(yīng)該采集其尿液，并將尿道分泌物與尿液混合后，再進(jìn)行檢測(cè)。標(biāo)本檢測(cè) 的操作方法，同改良前的ica免疫層析法一致，只是通過(guò)電子恒溫水溫箱來(lái)控制 溫度，避免誤差所產(chǎn)生的不良后果。陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)同上。1.2.2giemsa

6、 染色法giemsa染色法檢測(cè)，對(duì)于男性患者需要采集其尿道的細(xì)胞與分泌物，對(duì)于 女性患者需要采集宮頸口的細(xì)胞與分泌物2。檢測(cè)過(guò)程中，需要嚴(yán)格按照國(guó)家 相關(guān)臨床操作規(guī)程進(jìn)行操作。陽(yáng)性：出現(xiàn)染色細(xì)胞；陰性：無(wú)染色細(xì)胞出現(xiàn)。 giemsa染色法中所需要的giemsa染色液必須按照全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程第 三版進(jìn)行自配并使用。1.2.3pcr反應(yīng)法pcr反應(yīng)法為實(shí)吋熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)法，與giemsa染色法檢測(cè)所需標(biāo) 本采集部位一致。由于pcr反應(yīng)法是國(guó)際公認(rèn)的診斷方法之一，適用于檢測(cè)多種 臨床標(biāo)本，并且對(duì)于篩選無(wú)癥狀人群具有非常大的優(yōu)勢(shì)3。因此，選取該方法 的檢測(cè)結(jié)果作為對(duì)照，以評(píng)價(jià)其他兩種檢測(cè)法的

7、靈敏度。另外，pcr檢測(cè)法所用 到的fq-pcr試劑、標(biāo)準(zhǔn)液以及陰陽(yáng)性質(zhì)控物均由上海復(fù)星醫(yī)學(xué)科技發(fā)展有限公 司生產(chǎn)。1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析使用spss18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析,當(dāng)p<0.05時(shí),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2結(jié)果表1 258例患者的沙眼衣原體陽(yáng)性結(jié)果檢測(cè)法泌尿生殖道感染者陽(yáng)性結(jié)果n (%)非泌尿生殖道感染者陽(yáng)性結(jié)果 n (%)pcr 反應(yīng)法 41 (25.9%)12 (12%)改良前ica免疫層析法34 (21.5%)5 (5%)改良后ica免疫層析法38 (24%)10 (10%)giemsa 染色法 15 (9.5%)2 (2%)這兩組人群中，由giemsa染色法檢測(cè)出陽(yáng)性的患

8、者，pcr反應(yīng)法與ica免 疫層析法均檢測(cè)為陽(yáng)性。在158例泌尿生殖道感染患者中，改良前ica免疫層析 法所檢測(cè)岀的36例陽(yáng)性患者，其pcr反應(yīng)法的檢測(cè)結(jié)果也為陽(yáng)性。在pcr反應(yīng) 法檢測(cè)出的41例陽(yáng)性患者中，僅有7例未被改良前ica層析法檢測(cè)出陽(yáng)性，與 此同時(shí)僅有3例未被改良后ica層析法檢測(cè)出陽(yáng)性。在100例非泌尿生殖道感染 門(mén)診病人中，改良前ica層析法檢測(cè)出的5例陽(yáng)性，其中有1例通過(guò)pcr反應(yīng)法 檢測(cè)的結(jié)果為陰性。改良后ica層析法檢測(cè)出的10例陽(yáng)性，pcr反應(yīng)法檢測(cè)出 的結(jié)果均為陽(yáng)性。通過(guò)而pcr反應(yīng)法檢測(cè)出的12例陽(yáng)性中，有3例通過(guò)改良前 ica層析法檢測(cè)的結(jié)果為陰性。為了進(jìn)一步了解

9、改良前后的ica層析法檢測(cè)的可靠性與靈敏度，以pcr檢測(cè) 的結(jié)果作為參照，進(jìn)一步分析100例非泌尿生殖道感染門(mén)診病人的檢測(cè)情況，判 定檢測(cè)的有效性與敏感性。具體情況見(jiàn)表2。表2 100例非泌尿生殖道感染門(mén)診病人的檢測(cè)結(jié)果比較單位：例pcr反應(yīng)法 改良前ica免疫層析法 改良后ica免疫層析法+ + + 4 7 10 2 1 83 0 88比較改良前后ica免疫層析法的檢測(cè)結(jié)果，則x2二0.417, p<005,有差異， 具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。pcr反應(yīng)法特別適用于篩選無(wú)癥狀人群，由表2可知，在這100例非泌尿生 殖道感染的門(mén)診病人中，篩選出12例沙眼衣原體陽(yáng)性患者。以pcr反應(yīng)法的檢

10、測(cè)結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)，則不難發(fā)現(xiàn)，改良后的ica免疫層析法與改良前的ica免疫層析 法相比，改良后的ica免疫層析法的敏感性更優(yōu)，降低了假陰性率，能夠更精確 地反映受檢對(duì)象的陽(yáng)性率。因此，對(duì)于基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)來(lái)說(shuō)，改良后的ica免疫層 析法簡(jiǎn)便、快速，準(zhǔn)確，適合廣泛推廣。3討論沙眼衣原體與支原體是一種比較常見(jiàn)的病原體，將會(huì)造成泌尿生殖系統(tǒng)的感 染，但是因?yàn)槠渑R床表現(xiàn)具有非特異性，所以人們對(duì)其的重視力度還不夠。在對(duì) 患者進(jìn)行治療吋，沒(méi)有及吋對(duì)病原體進(jìn)行檢查，以及濫用抗生素，均會(huì)使得患者 的病情被延誤，甚至造成疾病的進(jìn)一步傳播。所以，應(yīng)該加強(qiáng)對(duì)沙眼衣原體和支 原體感染的臨床意識(shí)，并口應(yīng)該注意藥物的選擇。gie

11、msa染色法的敏感性明顯低于另兩種檢測(cè)方法，但是其具有較高的特異 性，可以在臨床上起到輔助作用。pcr靈敏度較高，適用于篩查無(wú)癥狀人群，但是其成本比較高，需要用到高 端的檢測(cè)儀器，并且需要相關(guān)操作人員具有一定的專業(yè)操作技能。該方法是通過(guò) dna檢測(cè)來(lái)實(shí)現(xiàn)的，是現(xiàn)如今較為高端的新技術(shù)方法，因此，更適合在大型醫(yī)療 機(jī)構(gòu)中推廣4。另一方面，正是由于其具有較高的靈敏度，有可能會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng) 性的結(jié)果，因此必須重視這一問(wèn)題。ica免疫層析法采用的是單克隆抗體檢測(cè)的方式，并且改良后的免疫層析法 相較于改良前的免疫層析法具有更高的敏感性，提高了陽(yáng)性預(yù)測(cè)度，增加了臨床 感染診斷的可靠性，無(wú)需特殊的儀器，操作方便快

12、捷，降低了假陽(yáng)性與假陰性的 出現(xiàn)概率，非常適合在基層醫(yī)療單位推廣5。參考文獻(xiàn)1 趙廣錄，張娟娟，王峰五種不同沙眼衣原體實(shí)驗(yàn)室篩查試劑檢測(cè)性能評(píng)價(jià)j中國(guó)艾滋病性病,2012,18 (2)： 109-1122 張數(shù)文基層適宜的沙眼衣原體檢驗(yàn)技術(shù)j中國(guó)計(jì)劃生育學(xué)雜志，2013,21(8)： 574-5763 劉志超.四種檢測(cè)泌尿生殖道沙眼衣原體方法的比較與評(píng)價(jià)j 中國(guó)皮膚性 病學(xué)雜志，2011,25 (8)： 641-6434 邵麗麗沙眼衣原體臨床分離株藥物敏感性測(cè)定及耐藥基因檢測(cè)j 中 國(guó)皮膚性病學(xué)雜志，2010, 24:404-4075 nan dini den dukuri,lia nglia ng wan g,alula hadgu .evalua