微柱液相色譜-雙電極電化學(xué)法測定腦微透析液中單胺類遞質(zhì)的含量

1、微柱液相色譜雙電極電化學(xué)法測定腦微透析液中單胺類遞質(zhì)的含量第?卷第?期?年?月色？譜?微柱液相色譜?雙電極電化學(xué)法測定腦微透析液中單胺類遞質(zhì)的含量葉惟泠?尹萍波?梅鎮(zhèn)彤?中國科學(xué)院上海生理研究所?上海?提?要?用微柱液相色譜?雙工作電極電化學(xué)檢測法?分析了麻醉大 口鼠紋狀體微透析樣品中的單胺類遞質(zhì)及其代謝產(chǎn)物的含量?無論在上游 的氧化電位或下游的還原電位進(jìn)行檢測?至少在?范i韋i內(nèi)？?濃 度與響應(yīng)的線性關(guān)系良好?檢測極限可達(dá)?以下?對于檢測的優(yōu)點(diǎn)和 需要注意的問題作了扼要的討論?關(guān)鍵詞?微柱液相色譜?雙電極電化學(xué) 法檢測?分析微透析液?單胺類遞質(zhì)分類號?u?前言屮樞單胺類遞質(zhì)從神經(jīng)元末梢釋放后

2、?？由于被迅速代謝和神經(jīng)元的重 攝収作用?使這些遞質(zhì)在腦內(nèi)微透析實(shí)驗(yàn)的收集液?即微透析液?中的濃 度非常低?難以用常規(guī)柱液相色譜分析法檢測?微柱液相色譜分 析具有省溶劑和增加靈敏度的優(yōu)點(diǎn)?雙電極電化學(xué)檢測可提高檢測 的靈敏度?選擇性和對流出組分的鑒別能力?用微柱液相色譜?雙 電極電化學(xué)法檢測?分析微透析液中的單胺類遞質(zhì)在我國尚未見報道?本 工作應(yīng)用這一高效分析測試技術(shù)?測定了麻醉動物腦透析液中微量單胺類 遞質(zhì)?并對此分析法作了討論？單胺類遞質(zhì)的去甲腎上腺素?腎上腺素?多巴胺?拜色胺?？以及它的代謝產(chǎn)物?二輕基苯乙酸?高香草酸 ?疑眄|卩朵乙酸?的標(biāo)樣和離子對試 劑己烷磺酸鈉均購口 ？?公司？乙

3、月青為?公司?級試劑?其余為國產(chǎn)分析純試劑?所有標(biāo)樣貯液?(!?都用?u?高氯酸配制?再用人工腦脊液?稀釋至所需濃度？?透析樣品的采集透析實(shí)驗(yàn)的儀器設(shè)備和灌流使用的?組成同前文?除了抗壞血 酸改為?(!?外?實(shí)驗(yàn)動物為雄性?純種 大鼠?體重?左右?動物在三漠乙醇的麻醉下?按每?體重腹 腔注射?三漠乙醇的劑量?固定在?型?等的大鼠?立體定位儀上?按?？?材料和方法?儀器和試劑 腦定位圖譜?將自制的同心型探頭?尖端直徑? a ?透析膜有效長度?插入紋狀體?開始灌流和收集透析樣品?灌高效液相色譜儀為美國?公司?系列?？?微流量泵?六通進(jìn)樣閥?接?？ a ?進(jìn)樣環(huán)？微柱？流速度為? a ?£

4、1?每?收集一管?探頭使用前?將 探頭尖端浸沒在每種標(biāo)樣濃度各為?？ a ?£1?的混合標(biāo)樣溶液中?在相 同流速和室溫條件下測試英體外回收率?本文比較了基礎(chǔ)條件?高鉀刺 激? 濃度為?濃度以維持（1?相應(yīng)降低?粒徑?a?用?個?安培型檢測器分別控制?個玻碳工作電極?？ 上游電極?和下游電極?對一個?說?參比電極的電位分別設(shè)置為?氧化?和?還原?靈敏度均為?雙通道的同時 采集?儲存?處理和色譜圖及數(shù)據(jù)的激光打印都在色譜工作 站？?電腦？公司提供 的?色譜資料分析軟件?上進(jìn)行？e國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目？?基金號?本文 q 攵稿 h 期？?？?？?？巾參回日期？?等滲?和深度麻醉造成大鼠

5、窒息死亡后紋狀休透析液內(nèi)單胺類遞質(zhì)及其代謝產(chǎn)物的水平？?色譜條件等比洗脫單胺類遞質(zhì)及其代謝產(chǎn)物的流動相的色?譜?卷緩沖液組成?u?為?乙酸鈉?檸檬酸?？己?烷磺酸 鈉？緩沖液？乙月青？ b ?uu?流速?？ a ?為了防止溶于流動相的微量氧氣損 傷玻碳電極和造成噪音?流動相除了用超聲脫氣外?還在儲液槽與泵之間 在線?連接了？?型 口動真空脫氣裝置?？量釋放的透析液色譜圖？由于采用了上述串型相鄰式的設(shè)置?圖? 的非保留雜峰明顯比圖?的少?在?出峰前基線已回落?且低而平 穩(wěn)?從而保證了準(zhǔn)確的定量測試?用這種設(shè)置分析兒茶酚化合物時?將 在?？ 上測得的電流值?響應(yīng)?與在?？ 上測得的值之比定義為收集

6、系數(shù)?表?列出了 ?在?種不同濃度的標(biāo)樣及?和?紋狀體 不含巧7>7>7> ”存”i i i ?結(jié)果和討論雙工作電極有并型相對?并型相鄰和串型相鄰三種排列方式?由于并型相對式很少應(yīng)用?因而在分析單胺類遞質(zhì)及其代 謝產(chǎn)物時?我們僅對后兩種排列方式作了比較?并型相鄰式可在兩個工作 電極上分別設(shè)置兩個大小不同的氧化電位?利用同一流出物同時在兩個電 位所得響應(yīng)的比值對該組分作進(jìn)一步定性?且可用于同時檢測流出液中的 易氧化和難氧化的組分?但由于兩個電位間的相互t擾?造成噪音較串型 的大?影響了檢測靈敏度?串型相鄰式可在?？ 上測試時受非保留峰干擾?不能準(zhǔn)確積分?在牛物樣中的收集系數(shù)?由

7、表?可見?收 集系數(shù)不隨樣品濃度的變化而改變?因而也能作為一種定性的依 據(jù)?收集系數(shù)的很好的重復(fù)性?使這些兒茶酚化合物不僅在?？ 在?？ 上而且上測試時?其濃度?至少在? a ?£i?范圍上也有一定的響應(yīng)?其中?和?？ 內(nèi)?與響應(yīng)的線性關(guān)系都很好?和? ?約為它們在?？ 上響應(yīng)的?約為在 上的?(!?其原因可能是它們在?上被氧化后 上設(shè)置較小的?在?？上設(shè)置較大的氧化電 的產(chǎn)物也有一定的還原性?但它們在?重復(fù)性遠(yuǎn)比在? 上響應(yīng)的位?并設(shè)置不同的檢測靈敏度?單胺類遞質(zhì)的氧化電位都在?左右?而它們帶甲氧基或甲基代謝產(chǎn)物的氧化電位都在?左右?如果這些代謝產(chǎn)物的色譜峰干擾遞質(zhì)峰的檢 測?微透

8、析液中總是遞質(zhì)含量低而代謝產(chǎn)物含量高?時?這樣設(shè)置是合理 的?單用氧化電位檢測時?較早被洗脫的?等兒茶酚化合物的色譜峰極易受非保上的差?因而線性關(guān)系也差？由于兒茶酚化合物在?上的分析具有上述優(yōu)點(diǎn)?所以上的響應(yīng)來計在表?列出的大鼠紋狀體透析液分析的結(jié)果中?？?和？ ？是按它們在？ 算的?在微透析實(shí)驗(yàn)屮?通常用探頭的體外回收率來校正透析液屮測 得的牛物活性物質(zhì)的含量?使其接近于它在細(xì)胞間隙的實(shí)際水平? 本實(shí)驗(yàn)測得?和？的回 收率？ 依次為？和？ 表?屮的數(shù)據(jù)均是經(jīng)回收率校正的值？由表?？留峰的干擾?微透析樣本難以前處理?因而這種干擾十分明顯?但這 些兒茶酚化合物具有在上游氧化電位被氧化后?迅速在下

9、游還原電位被還 原的電化學(xué)特性?而微透析液中某些具有電化學(xué)活性的雜質(zhì)?如抗壞血酸?無此可逆性?利用這些電化學(xué)特性?我的數(shù)據(jù)可看出?高?刺激導(dǎo)致遞質(zhì)釋放較基礎(chǔ)狀態(tài)急劇增高?而代 謝產(chǎn)物水平基本不變?死亡時遞質(zhì)大量釋放?代謝產(chǎn)物含量成倍降低?這 些變化趨勢與前人報道?的基木一致？們在?？上設(shè)置氧化電位?在?上設(shè)置還原電位?很好地排除了非保留雜峰的干擾?見圖?圖?是動物麻醉窒息死亡時因應(yīng)激而導(dǎo)致生物活性物質(zhì)大表?種兒茶酚化合物的收集系數(shù)?？ v ?tap 入 £?巾欲0小訣3£4)4)0(1冊屮？£0?？0(|)4)01皿唧0 入x0?0 uv6a?v?化合物?/?j?

10、 ?標(biāo)樣？?a?u? ?a?u? ?a?u?透析液?期?葉惟泠等?微柱液相色譜?雙電極電化學(xué)法測定腦微透析 液中單胺類遞質(zhì)的含量?表?大鼠紋狀休透析液?？ v ? 屮單胺類遞質(zhì)及其代謝產(chǎn)物的含量?(!?ta3入 £?tr)£xovt£vto?£av?？?o4)?ovoa?iv£tpavo?ivc£poj?av6tr| 8ip?8tapoxiteoiv6iaxi|joat8o?v? 4)po ?parorpiaru? ?基礎(chǔ)水平?高?刺激？死后？u? ?圖?大鼠紋狀體微透析液色譜圖(diy?xr|po?atoypa?o(j)?ixpo6

11、iaxipoate(j)po?tnepatotpiatu?施加電位?對?tl?氧化？還原？?u? ? ?微柱液相色譜最適用于含量低?體積小而又難以前處理濃集的生物樣本的分析?其中尤以微透析液的分析最多?這 與近年來微透析技術(shù)的廣為采用密切相關(guān)?參考文獻(xiàn)?尹萍波?梅鎮(zhèn)彤?生理科學(xué)進(jìn)展？葉惟泠？尹萍波？色譜？?王俊德?商振華?郁蘊(yùn)璐?高效液相色譜法?北京?中國?微柱的柱床體積小?柱外效應(yīng)的影響尤為明顯?因此?微柱色譜必須使用與之相匹配的連接系統(tǒng)?？ 進(jìn)樣閥和池體積小? a ?時間常數(shù)小的檢測器?使柱外?特別是 柱后?擴(kuò)散的影響降到最低限度?柱是一種新型高效微柱? 它無需管道而直接連接在進(jìn)樣閥和電極

12、塊?池體積在?？? a ?可調(diào)?之間?基本上排除了柱后擴(kuò)散的影?紀(jì)華民?汪爾康?色譜?£ga? ?葉惟泠？色譜？? ? ? ? ? ? ? ?響?與用常規(guī)柱系統(tǒng)的同類分析相比?靈敏度可提高約?？倍?檢測極限可達(dá)?以下?用微柱色譜分析時?緩沖 液各組分的鹽濃度最好為?微柱?特別是填料粒徑為?？ a ?的微?u?柱?較常規(guī)柱更易被污染而堵塞?因此需用孔徑小于或等于?？a ?的微孔濾膜過濾流動相?在體灌流的微透析液可直接進(jìn)樣?腦?血液? 組織?體液等生物樣本?經(jīng)用微透析或超濾法前處理后?也是微柱分析理 想的樣本？色?譜?卷mixpopopeai0ui6xnpo?atoypa?r）ipu）itq?uaaex8xpo6sexexipox h £ ?ixax?etexovo（|）movoa?ivetpavo?itt£paivbpaivmixpo6iaxi|joateo? ?inavyr）ailvoriturso（j）nripoioaoyip?tr|8xqiv8asaxa6e?ipo（|）2xievxea? ?zqavynctl?abcrcpaxt? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 巧巧門巧？巧？巧