仿制藥分析方法與穩(wěn)定性研究

1、仿制藥分析方法的驗證和藥品仿制藥分析方法的驗證和藥品穩(wěn)定性的研究穩(wěn)定性的研究譚海松譚海松 PhDNov 27, 2011主要內容主要內容n仿制藥的仿制藥的GMP要求要求n仿制藥分析方法的驗證仿制藥分析方法的驗證n仿制藥穩(wěn)定性的研究仿制藥穩(wěn)定性的研究FDAFDA官員來制藥公司檢查時的留言官員來制藥公司檢查時的留言n我們并不期望在檢查過程中所有事我們并不期望在檢查過程中所有事情都是完美無缺的情都是完美無缺的, ,但是我們的確但是我們的確希望所檢查到的東西全在你們的希望所檢查到的東西全在你們的有有效控制效控制之中之中.藥檢局對仿制藥的要求藥檢局對仿制藥的要求n仿制藥品系指仿制國家已批準正式生產仿制藥

2、品系指仿制國家已批準正式生產并收載于國家藥品標準的品種并收載于國家藥品標準的品種.n仿制藥與被仿制藥應具有相同的劑型仿制藥與被仿制藥應具有相同的劑型, ,劑量劑量, ,質量質量, ,用途用途, ,用法用法, ,效果和安全度效果和安全度. . 仿制藥的質量控制仿制藥的質量控制藥品測試藥品測試分析方法分析方法分析方法驗證分析方法驗證科學性科學性( (理論正確理論正確) )藥品藥品質量質量可靠性可靠性( (避免人為和儀器誤差避免人為和儀器誤差) )準確性準確性 ( (正確反映真實值正確反映真實值) )分析方法分析方法驗證的前提驗證的前提:GMP:GMP標準標準標準物和試劑標準物和試劑儀器儀器操作人員

3、操作人員分析方法驗證分析方法驗證標準作業(yè)程序標準作業(yè)程序 (SOP)(SOP)實驗室實驗室標準物和試劑標準物和試劑的的SOPSOP要求要求n包裝上注明生產廠家包裝上注明生產廠家, 批號和有效期批號和有效期n如生產廠家沒有提供有效期如生產廠家沒有提供有效期, SOP要規(guī)要規(guī)定有效期定有效期n實驗記錄要有所用到的實驗記錄要有所用到的標準物和試劑的標準物和試劑的生產廠家生產廠家, 批號和有效期批號和有效期分析分析儀器儀器的的SOPSOP要求要求n所有分析所有分析儀器都要儀器都要有使用記錄有使用記錄n分析分析儀器在使用前要用儀器在使用前要用標準物校準標準物校準n分析分析儀器儀器每半年進行一次每半年進行

4、一次儀器儀器校準校準HPLC在使用前用在使用前用標準物校準舉例標準物校準舉例溶劑空白溶劑空白定量限或分離效率檢查定量限或分離效率檢查標準物溶液標準物溶液-1 (注射注射3次次)標準物溶液標準物溶液-2 (注射注射3次次)樣品溶液樣品溶液 (每隔每隔10個樣品注射標準物溶液個樣品注射標準物溶液-1,2).標準物溶液標準物溶液-1 標準物溶液標準物溶液-2定量限或分離效率檢查定量限或分離效率檢查溶劑空白溶劑空白實驗室的實驗室的SOPSOP要求要求n所有儀器都要有所有儀器都要有校準日期或相應的注釋校準日期或相應的注釋n所有樣品和所有樣品和溶液溶液都要有批號都要有批號, ,有效期和有效期和來源來源n實

5、驗室中的工作人員要有必要的安全防實驗室中的工作人員要有必要的安全防護護n實驗室要保持整潔實驗室要保持整潔工作人員工作人員的的SOPSOP要求要求n每個工作人員都要每個工作人員都要有相關有相關SOP的培訓培訓記錄記錄n工作人員工作人員每年至少參加一次每年至少參加一次GMP培訓培訓主要內容主要內容n仿制藥的GMP要求n仿制藥分析方法的驗證仿制藥分析方法的驗證n仿制藥穩(wěn)定性的研究仿制藥的研發(fā)過程仿制藥的研發(fā)過程找到原料藥找到原料藥穩(wěn)定性的研究穩(wěn)定性的研究專利保護將失效或專利保護將失效或專利挑戰(zhàn)專利挑戰(zhàn)生物等效性臨床試驗生物等效性臨床試驗簡化新藥簡化新藥(ANDA)申請申請分析方法的研究和驗證分析方法

6、的研究和驗證配方和生產工藝的研究配方和生產工藝的研究 成品藥片分析樣品的制備實例成品藥片分析樣品的制備實例n把把10片藥品放于片藥品放于500毫升容量瓶中毫升容量瓶中, 加入加入400毫升溶劑毫升溶劑, 以以200rpm搖搖30分鐘分鐘, 然后加入溶劑然后加入溶劑到刻度到刻度. 搖勻后搖勻后, 以以8,000rpm高速離心高速離心10分鐘分鐘, 取上清液用取上清液用高壓液相色譜高壓液相色譜(HPLC)(HPLC)進行進行分析分析.n分析方法的驗證分析方法的驗證API全部溶于溶劑全部溶于溶劑HPLC正確分析出樣品溶液的濃度正確分析出樣品溶液的濃度分析結果的可靠性分析結果的可靠性分析方法驗證的內容

7、分析方法驗證的內容nAPI全部溶于溶劑全部溶于溶劑準確度準確度, 精密度精密度n正確分析出樣品溶液的濃度正確分析出樣品溶液的濃度專屬性專屬性, 線性線性, 范圍范圍, 檢測限檢測限, 定量限定量限n分析結果可靠性分析結果可靠性 耐用性耐用性, 精密度精密度分析方法驗證內容分析方法驗證內容n專屬性專屬性n線性線性n準確度準確度n精密度精密度n范圍范圍n檢測限檢測限, 定量限定量限n耐用性耐用性n樣品溶液穩(wěn)定性樣品溶液穩(wěn)定性分析方法驗證分析方法驗證-專屬性專屬性n專屬性的定義專屬性的定義在其它成分可能存在下在其它成分可能存在下, ,分析方法能夠正確檢分析方法能夠正確檢測出被分析物的特性測出被分析物

8、的特性. .n專屬性的測定舉例專屬性的測定舉例: :高壓液相色譜高壓液相色譜高壓液相色譜的系統(tǒng)適用性高壓液相色譜的系統(tǒng)適用性n色譜峰的容量因子色譜峰的容量因子: 1k20: 1k=1.5: R=1.5n色譜峰的拖尾系數(shù)色譜峰的拖尾系數(shù): T2.0: T=99.9% (LC/MS, : =99.9% (LC/MS, DAD, UV)DAD, UV)高壓液相色譜的系統(tǒng)適用性高壓液相色譜的系統(tǒng)適用性色譜峰的容量因子色譜峰的容量因子: k=t/tM-1色譜峰分辨率色譜峰分辨率: R=2(t2-t1)/(W1+W2)高壓液相色譜的系統(tǒng)適用性高壓液相色譜的系統(tǒng)適用性色譜峰的拖尾系數(shù)色譜峰的拖尾系數(shù): T=

9、W0.05/(2f)高壓液相色譜的系統(tǒng)適用性高壓液相色譜的系統(tǒng)適用性色譜峰分辨率色譜峰分辨率: 2.0色譜峰的拖尾系數(shù)色譜峰的拖尾系數(shù): 1.0AU0.0000.0050.0100.0150.0200.0250.0300.0350.0400.0450.0500.0550.060Minutes8.509.009.5010.0010.5011.0011.5012.0012.5013.0013.5014.00Peak 1 - 11.655Peak 2 - 11.923分析方法驗證分析方法驗證-線性線性n線性的定義線性的定義在測定范圍內在測定范圍內, ,檢測結果與被分析物濃檢測結果與被分析物濃度呈線性

10、關系的程度度呈線性關系的程度. .n線性的測定線性的測定在被分析物濃度在被分析物濃度20%-150%20%-150%內內, ,至少測至少測5 5個個濃度濃度. .例如例如20%,80%,100%,120%,150%20%,80%,100%,120%,150%最小二乘法線性回歸最小二乘法線性回歸, R=0.999, R=0.999線性舉例線性舉例-HPLC線性舉例線性舉例-HPLC分析方法驗證分析方法驗證-準確度準確度n準確度的定義準確度的定義測定結果與真實值之間的接近程度測定結果與真實值之間的接近程度. 向向制劑中加入已知量的被測物進行回收率制劑中加入已知量的被測物進行回收率測定來驗證測定來驗

11、證.n 準確度的測定準確度的測定在在3 3個濃度個濃度(80%,100%,120%)(80%,100%,120%)中中, ,每個濃每個濃度制備度制備3 3個樣品個樣品. .每個濃度每個濃度3 3個樣品的平個樣品的平均均回收率必須在回收率必須在98-102%.98-102%.分析方法驗證分析方法驗證-精密度精密度n精密度的定義精密度的定義同一樣品多次取樣測試結果的接近程度同一樣品多次取樣測試結果的接近程度 n精密度的測定精密度的測定: %RSD=2% (6: %RSD=2% (6個樣品個樣品) )重復性重復性: 同一分析人所得結果的精密度同一分析人所得結果的精密度中間精密度中間精密度: 同一實驗

12、室同一實驗室, 不同的日期不同的日期, 設設備和人員所得結果的精密度備和人員所得結果的精密度重現(xiàn)性重現(xiàn)性: 不同實驗室不同實驗室, 不同人員所得結果的不同人員所得結果的精密度精密度分析方法驗證分析方法驗證-范圍范圍n范圍的定義范圍的定義分析藥品達到一定準確分析藥品達到一定準確度度, 精密精密度度和線和線性的區(qū)間性的區(qū)間. .n范圍的要求范圍的要求含量測定含量測定: 80-120%: 80-120%含量均勻度測定含量均勻度測定: 70-130%: 70-130%溶出度溶出度: 50-150%: 50-150%雜質測定雜質測定: : 規(guī)定限度規(guī)定限度20%20%分析方法驗證分析方法驗證-檢測限和定

13、量限檢測限和定量限 n檢測限檢測限: 試樣中被分析物能被檢測到的試樣中被分析物能被檢測到的最低量最低量, 一般定義為信噪比大于一般定義為信噪比大于3:1n定量限定量限: 試樣中被分析物能被定量測定試樣中被分析物能被定量測定的最低量的最低量, 一般定義為信噪比大于一般定義為信噪比大于10:1 檢測限和定量限信噪比的測量檢測限和定量限信噪比的測量分析方法驗證分析方法驗證-耐用性耐用性 n耐用性耐用性的定義的定義測定條件發(fā)生小的變動時測定條件發(fā)生小的變動時, 測定結果不測定結果不受影響的承受程度受影響的承受程度 n耐用性耐用性測定的舉例測定的舉例: :高壓液相色譜高壓液相色譜流動相流動相: 組成組成

14、, pH值值, 流速的變動流速的變動色譜柱色譜柱: 廠家廠家, 批號批號, 柱溫的變動柱溫的變動分析方法驗證分析方法驗證-樣品溶液穩(wěn)定性樣品溶液穩(wěn)定性 n樣品溶液穩(wěn)定性樣品溶液穩(wěn)定性的定義的定義樣品溶液在一定儲藏條件下可被重復使樣品溶液在一定儲藏條件下可被重復使用的時間用的時間n樣品溶液穩(wěn)定性樣品溶液穩(wěn)定性的測定的測定樣品溶液穩(wěn)定性樣品溶液穩(wěn)定性測定結果是初始結果測定結果是初始結果98.5-101.598.5-101.5%.%.仿制藥分析方法的來源仿制藥分析方法的來源n中國藥典n美國藥典（USP）n歐洲藥典（EP）n日本藥典（JP）n原料藥廠家n文獻分析方法驗證的參考文獻分析方法驗證的參考文獻

15、nICH Q2- Validation of Analytical Proceduresn美國藥典（USP）主要內容主要內容n仿制藥的GMP要求n仿制藥分析方法的驗證n仿制藥穩(wěn)定性的研究仿制藥穩(wěn)定性的研究穩(wěn)定性測試目的穩(wěn)定性測試目的n考察原料藥或制劑的性質在溫度考察原料藥或制劑的性質在溫度, ,濕度濕度, , 光線等條件的影響下隨時間變化的規(guī)律光線等條件的影響下隨時間變化的規(guī)律. .n為藥品的生產、包裝、貯存、運輸條件為藥品的生產、包裝、貯存、運輸條件和有效期的確定提供科學依據(jù)和有效期的確定提供科學依據(jù), ,以保證以保證臨床用藥安全有效臨床用藥安全有效. .穩(wěn)定性測試的趨勢穩(wěn)定性測試的趨勢n包

16、括更多的貯藏條件以使臨床實驗可在包括更多的貯藏條件以使臨床實驗可在不同國家進行不同國家進行n提早開始穩(wěn)定性研究來附和不同國家藥提早開始穩(wěn)定性研究來附和不同國家藥檢局的要求檢局的要求穩(wěn)定性測試穩(wěn)定性測試需要控制的條件需要控制的條件n測試內容和標準測試內容和標準n貯存條件貯存條件 n測試頻率測試頻率n測試完成時間測試完成時間原料藥的原料藥的測試內容和標準測試內容和標準n外觀變化外觀變化: 顏色顏色n物理性質變化物理性質變化: 晶型晶型, 熔點熔點, 熱失熱失重重, 水含量水含量 n主要成分含量主要成分含量: 97-103%n雜質含量：雜質含量：0.15%仿制藥對原料藥的要求仿制藥對原料藥的要求n與

17、被仿制藥品的與被仿制藥品的原料藥原料藥具有相同的物理具有相同的物理化學性質化學性質: :如鹽如鹽, ,晶型和異構體晶型和異構體( (對映體對映體) )n原料藥的雜質限度原料藥的雜質限度原料藥雜質的含量應低于質控限度原料藥雜質的含量應低于質控限度雜質的種類和含量雜質的種類和含量與被仿制藥相同與被仿制藥相同如如雜質的含量明顯高于質控限度且與雜質的含量明顯高于質控限度且與被仿被仿制藥不同制藥不同, ,應做必要的安全性研究應做必要的安全性研究原料藥中基因毒性雜質要被有效控制原料藥中基因毒性雜質要被有效控制原料藥的雜質限度原料藥的雜質限度最大日劑量最大日劑量 報告限度報告限度鑒定限度鑒定限度質控限度質控

18、限度 2 g0.03%0.05%0.05%原料藥中基因毒性雜質的控制原料藥中基因毒性雜質的控制n基因毒性雜質舉例基因毒性雜質舉例alkylating electrophilic center, unstable epoxide, aromatic amines, aromatic nitro, azo-structure, N-nitroso-groupn基因毒性雜質的控制限基因毒性雜質的控制限 1.5 ug/day藥物制劑的藥物制劑的測試內容和標準測試內容和標準n外觀變化外觀變化: 顏色顏色n主要成分含量：變化小于主要成分含量：變化小于5%n降解產物降解產物: 70% at 45 minn物

19、理性質物理性質: 水含量水含量, 顆粒度顆粒度制劑的雜質限度制劑的雜質限度最大日劑量最大日劑量 報告限度報告限度 鑒定限度鑒定限度質控限度質控限度 2 g0.05%0.1%0.15%溶出度測定模擬人體的消化過程溶出度測定模擬人體的消化過程溶出度測定的重要性溶出度測定的重要性n控制藥物制劑質量的一個重要指標控制藥物制劑質量的一個重要指標 n決定決定藥物制劑穩(wěn)定性的一個重要依據(jù)藥物制劑穩(wěn)定性的一個重要依據(jù)n用來評價藥物制劑質量是否受原料藥用來評價藥物制劑質量是否受原料藥, 配方配方, 生產工藝和生產地變化的影響生產工藝和生產地變化的影響USP 1: 轉籃法轉籃法n溶出度測試過程中溶出度測試過程中,

20、 , 藥品滯留在轉籃里藥品滯留在轉籃里n可以調節(jié)緩沖液的可以調節(jié)緩沖液的值而不影響值而不影響籃里的藥籃里的藥品品n適用于片劑適用于片劑, ,膠囊等膠囊等USP 2: 槳法槳法n溶出度測試過程中溶出度測試過程中, ,藥品留在容器底部的藥品留在容器底部的中間中間n適用于片劑適用于片劑, ,膠囊和膠囊和懸浮液等懸浮液等USP II 溶出度測定儀器溶出度測定儀器USP II 溶出度測定舉例溶出度測定舉例USP 3: 往復式圓筒法往復式圓筒法n藥品隨藥品隨圓筒在溶液圓筒在溶液中做上下運動中做上下運動n不同緩沖液可放在不同緩沖液可放在不同不同容器中容器中n適用于片劑適用于片劑, ,膠囊膠囊和緩釋藥等和緩釋

21、藥等USP III 溶出度測定儀器溶出度測定儀器52USP III 溶出度測定舉例溶出度測定舉例USP III 溶出度測定舉例溶出度測定舉例溶出度測定方法的要素溶出度測定方法的要素n選擇適當緩沖液選擇適當緩沖液(pH): API(pH): API在緩沖液中在緩沖液中的溶解度是藥品的溶解度是藥品100%100%釋放的釋放的5-105-10倍倍. .n設定設定適當?shù)霓D速適當?shù)霓D速(USPI,USPII): (USPI,USPII): 50rpm,75rpm,100rpm50rpm,75rpm,100rpmn使用使用適當?shù)姆治龇椒ㄟm當?shù)姆治龇椒? UV,HPLC: UV,HPLC海南華益泰康藥業(yè)有限

22、公司海南華益泰康藥業(yè)有限公司n成立于2010年6月，海口市引進的重大科技項目，總投資1億元人民幣。n以新藥研發(fā)為主，集生產、銷售于一體的綜合性國際化醫(yī)藥企業(yè)。n公司關鍵核心研發(fā)人員均來自美國，有10年以上在美國著名制藥醫(yī)藥公司藥物制劑開發(fā)和技術管理的經驗。海南華益泰康藥業(yè)有限公司海南華益泰康藥業(yè)有限公司n公司總建筑面積達1萬多平方米，4000平米的制劑研發(fā)和生產車間，2500平米的分析研發(fā)和質量控制實驗室。n生產車間及研發(fā)實驗室完全按照美國GMP要求標準建設，并引入國外藥廠的現(xiàn)代化設計和管理理念為產品把關。n目前有近十個項目處于研發(fā)階段，大部分是緩釋和腸溶等復雜劑型。分析實驗室儀器設備分析實驗

23、室儀器設備n液相色譜：安捷倫1260和1100型n氣相色譜：安捷倫7890加頂空自動進樣n紫外可見：安捷倫8453加自動進樣器n溶出儀：安捷倫708加自動進樣器n溶出儀USPIII：安捷倫(Varian) Bio-Disn傅里葉紅外：島津Prestige穩(wěn)定性測試的穩(wěn)定性測試的貯貯存條件存條件氣候帶氣候帶溫度溫度( (O OC)C) 濕度濕度(%RH)(%RH)溫帶溫帶2145地中海地中海氣候氣候, ,亞熱帶亞熱帶2560干干熱帶熱帶3025濕熱帶濕熱帶3070國際氣候帶國際氣候帶穩(wěn)定性測試的穩(wěn)定性測試的貯貯存條件存條件貯貯存條件存條件最短時間最短時間 ( (月月) )長期長期試驗試驗25C/

24、60%RH or 30C/65%RH12加速加速試驗試驗40C/75%RH6穩(wěn)定性測試的儲存條件穩(wěn)定性測試的儲存條件貯貯存條件存條件最短時間最短時間 ( (月月) )長期長期試驗試驗5C 3C12加速加速試驗試驗25C/60%RH6穩(wěn)定性測試的儲存條件穩(wěn)定性測試的儲存條件貯貯存條件存條件最短時間最短時間 ( (月月) )長期長期貯貯存存-20C 5C12光照穩(wěn)定性的測試光照穩(wěn)定性的測試n總光照：1.2 million lux hoursn光強： 200 watt hours/n實驗要求：裸露在光源下放在包裝中成品藥有效期的確定成品藥有效期的確定n穩(wěn)定性好的藥品一般以長期穩(wěn)定性好的藥品一般以長期

25、試驗結果來試驗結果來確定有效期確定有效期n綜合加速綜合加速試驗和試驗和長期長期試驗結果進行統(tǒng)計試驗結果進行統(tǒng)計分析分析如三批統(tǒng)計分析結果差別較小如三批統(tǒng)計分析結果差別較小, ,取平均值取平均值為為有效期有效期如統(tǒng)計分析結果差別較大如統(tǒng)計分析結果差別較大, ,取最短的為取最短的為有有效期效期穩(wěn)定性的測試頻率穩(wěn)定性的測試頻率 n長期長期試驗試驗第一年第一年: : 每三個月測一次每三個月測一次第二年第二年: : 每六個月測一次每六個月測一次第二年以后第二年以后: : 每年測一次每年測一次n加速加速試驗試驗六個月時間六個月時間: 至少至少測三次測三次, ,包括包括起始點和第起始點和第六個月的點六個月的

26、點. .穩(wěn)定性的測試時間和有效期穩(wěn)定性的測試時間和有效期貯存條件貯存條件(C/%RH)測試時間測試時間 (月月)136912 18每年每年結束結束5 T T T30/65 or 25/60 TTTTTTT40/75( T )TT 50TT 光照試驗光照試驗T 有效期有效期61212182430+12結束結束 測試完成時間測試完成時間測試時間測試時間 (月月)完成時間完成時間 ( (天天) ) 328穩(wěn)定性測試穩(wěn)定性測試樣品的選擇樣品的選擇n最少采用三批樣品最少采用三批樣品n采用一定規(guī)模生產的樣品采用一定規(guī)模生產的樣品n能夠代表大規(guī)模生產條件下的產品質量能夠代表大規(guī)模生產條件下的產品質量合成路線

27、合成路線配方配方包裝包裝 穩(wěn)定性測試穩(wěn)定性測試樣品生產規(guī)模的要求樣品生產規(guī)模的要求n口服固體制劑口服固體制劑: :片劑片劑, ,膠囊等膠囊等1000010000個制劑單位個制劑單位n大體積包裝的制劑大體積包裝的制劑: :靜脈輸液靜脈輸液穩(wěn)定性試驗所需總量的穩(wěn)定性試驗所需總量的1010倍以上倍以上哪些變化需要重測原料藥哪些變化需要重測原料藥的穩(wěn)定性的穩(wěn)定性n改變合成路線改變合成路線n改變合成過程中最后的純化步驟改變合成過程中最后的純化步驟n改變大規(guī)模生產的步驟改變大規(guī)模生產的步驟n改變分析方法和規(guī)格要求改變分析方法和規(guī)格要求哪些變化需要重測成品藥的哪些變化需要重測成品藥的穩(wěn)定性穩(wěn)定性n不同的制劑

28、和配方不同的制劑和配方n改變主要添加劑的比例改變主要添加劑的比例n改變生產步驟改變生產步驟, ,生產設備和生產地生產設備和生產地n改變藥品的包裝改變藥品的包裝穩(wěn)定性研究的特點穩(wěn)定性研究的特點n周期長周期長n樣品選擇較嚴格樣品選擇較嚴格n重測率高重測率高n成本較高成本較高穩(wěn)定性研究的參考文獻穩(wěn)定性研究的參考文獻nICH Q1A- Stability Testing of New Drug Substances and ProductsnICH Q1B- Stability Testing: Photostability Testing of New Drug Substances and Pro

29、ductsnICH Q3- Impurities FDA 483 舉例舉例Your firm invalidated analytical data without any scientific justificationYour investigation attributes an unknown peak to injector contamination but this peak was not present in previous system suitability or sample injectionsYour corrective action addresses product disposi