內(nèi)窺鏡中檢測(cè)HBV的PCR技術(shù)與ELISA方法比較

1、內(nèi)窺鏡中檢測(cè)hbv的pcr技術(shù)與elisa方法比較游 潔 王金明(湖北省黃石市疾病預(yù)防控制中心 湖北黃石435003)【中圖分類號(hào)】r446【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】b【文章編號(hào)】1672-5085(2009)18-0092-02 【摘要】目的 比較pcr hbv-dna和elisa hbsag兩種檢測(cè)方法在檢測(cè)內(nèi)窺鏡 中hbv的檢測(cè)情況，從而確定木次研究的試驗(yàn)方法。方法 現(xiàn)場(chǎng)采集內(nèi)窺鏡各 關(guān)鍵部位(鏡身、孔道、活檢鉗)的樣品207份，平均分成兩份，按各自所用試 劑盒的要求分別進(jìn)行試驗(yàn)，比較兩種試驗(yàn)的陽性檢擊率、一致性等試驗(yàn)評(píng)價(jià)指標(biāo)。 結(jié)果 pcr hbv-dna 陽檢率為 27.54%、elisa hb

2、sag 陽檢率為 2.42%,經(jīng)χ2 檢驗(yàn)，χ2=4.63 p =0.031、一致性檢驗(yàn),kappa=0.089 zp =0.008,由此說明 兩種檢驗(yàn)方法在內(nèi)窺鏡中痕量的hbv的檢測(cè)過程中有顯著性差異。結(jié)論pcr hbv-dna對(duì)與內(nèi)窺鏡中痕量的hbv的檢測(cè)試驗(yàn)方法優(yōu)于elisa hbsag方法，在木 次調(diào)查研究中應(yīng)該采用pcr hbv-dna的檢測(cè)方法。abstract objectives: compare pcr hbv-dna with elisa hbsag method in hbv on the endoscopes , in order to

3、determine the investigative experiment. methods： compare with the positive detectable rate and the consistency indices(kappa) between the two experiments in 207 samples. results： the positive examine rate of pcr hbv-dna is 27.54%,but elisa hbsag is only 2.42%, there are significant differenee betwee

4、n the two methods( x 2 = 4.63 p = 0.031 and kappa = 0.089 p = 0.008). conclusions： pcr hbv-dna method can be used in this research to evaluate the disinfectant effect of the endoscopes in huangshi city.隨著人們對(duì)乙型肝炎病毒(hbv)的深入研究，對(duì)與血清中的hbv的檢 測(cè)方法也日臻完善，主要有基于免疫學(xué)elisa的hbvm (乙肝病毒感染標(biāo)志物) 檢測(cè)和基于分子牛物學(xué)pcr的hbv-dna (乙

5、型肝炎病毒基因組)檢測(cè)。兩種方 法各有優(yōu)劣，pcr方法靈敏高，但儀器和操作要求較高，所用檢測(cè)成木也較高; elisa方法試驗(yàn)條件要求不高、方便、便宜，但對(duì)于痕量hbv的檢測(cè)容易出現(xiàn)假 陰性。本文旨在通過對(duì)內(nèi)窺鏡中痕量hbv的檢測(cè)進(jìn)行分析，確定黃石地區(qū)各醫(yī) 療單位hbv污染內(nèi)窺鏡的調(diào)查吋所應(yīng)采用的最佳檢測(cè)方法。具體如下：1材料與方法1.1樣品采集、處理 由黃石市疾病預(yù)防控制中心的專業(yè)監(jiān)測(cè)人員在各 醫(yī)療單位當(dāng)天所使用的內(nèi)窺鏡檢查完2/3數(shù)量的病人吋按常規(guī)操作對(duì)全市各級(jí) 醫(yī)院內(nèi)窺鏡的鏡身（含鏡頭）、活檢鉗、內(nèi)鏡孔道等主要部位進(jìn)行釆樣：內(nèi)鏡鏡 身、鏡頭表面：用浸有無菌中和劑（0.5%硫代硫酸鈉+1.0

6、%甘氨酸、1.0%吐溫、 0.1%卵磷脂的0.03mol/lpbs,以下類同）的棉簽,于表面100 cm 2反復(fù)涂抹10 次，無菌操作條件下將棉簽采樣部位剪入5ml含無菌中和劑試管中，振打80次， 作為樣液?；顧z鉗：無菌操作條件下將活檢鉗直接放入10ml含中和劑的無菌 鹽水試管中，開關(guān)活檢鉗瓣，振蕩洗脫30秒，取出活檢鉗，作為樣液。內(nèi)鏡孔道：無菌操作條件下用無菌注射器吸取10ml含無菌中和劑采樣液，從 活檢鉗孔口注入，用無菌的帶塞試管在活檢出口接收流出液，作為樣液。1.2乙型肝炎病毒檢測(cè)所得上清液應(yīng)用pcr法檢測(cè)hbvdna, hbv-pcr熒光定量檢測(cè)試劑盒為深圳匹基生物工程股份有限公司產(chǎn)品

7、，所用儀器 為roche light cycler實(shí)時(shí)熒光基因擴(kuò)增儀（瑞士）。同份樣品用elisa法檢測(cè)乙型 肝炎表面抗原（hbsag）, elisa試劑盒為上?？迫A生物工程技術(shù)公司產(chǎn)品。兩種檢 測(cè)的操作方法及判斷結(jié)果均嚴(yán)格按產(chǎn)品說明書進(jìn)行。1.3結(jié)果判斷elisa檢測(cè)的吸光度大于陽性對(duì)照的為陽性結(jié)果，pcr 檢測(cè)的拷貝數(shù)大于l×103 copies/ml為陽性結(jié)果2結(jié)果與討論2.1內(nèi)窺鏡不同部位hbsag與hbvdna的檢測(cè)結(jié)果為207份樣品中用 pcr方法檢測(cè)出鏡身陽性24份，陽性率為32.88%孔道15份，陽性率為25.42% 活檢鉗18份，陽性率為24%, hbv-

8、dna檢測(cè)陽性率為27.54%;而用elisa方法 測(cè)出鏡身陽性1份，陽性率為1.37%孔道3份，陽性率為5.08%活檢鉗1份，陽 性率為1.33%, hbsag檢測(cè)陽性率為2.42%o內(nèi)窺鏡各部位的hbsag與hbvdna 污染陽性率見表1,內(nèi)窺鏡各部位的hbsag與hbvdna檢測(cè)陽性的分布情況。hbv-dna檢測(cè)的陽性率明顯高于hbsag的檢測(cè)陽性率。2.2對(duì)于上述207份樣品均采用了 hbsag與hbv-dna兩種檢測(cè)試驗(yàn)， 我們對(duì)其結(jié)果的一致性進(jìn)行了整理，整理結(jié)果2.3 pcr hbv-dna的主要原理是基因擴(kuò)增，對(duì)于樣本的濃度要求不高， 而elisa hbsag是原液的免疫反應(yīng)，如

9、果抗原或抗體的濃度不高，很難達(dá)到紫外 分光光度儀區(qū)分的吸光度。故對(duì)于內(nèi)窺鏡中微量的hbv宜用pcr hbv-dna檢測(cè) 方法?？傊?pcr技術(shù)是h前對(duì)微量hbv dna檢測(cè)最靈敏、最特異的方法7, 亦是判斷hbv傳染性簡(jiǎn)單、可靠的方法。不宜應(yīng)用elisa hbsag方法對(duì)內(nèi)窺鏡 hbv的消毒效果進(jìn)行監(jiān)測(cè)，以免降低了對(duì)內(nèi)窺鏡消毒效果的要求。參考文獻(xiàn)i 徐金秀，徐青，許幼珍口腔科器械污染監(jiān)測(cè)分析與對(duì)策.中華醫(yī)院感染學(xué)雜 志，1999, 9(4):250 251. 張淑英，戴智玉，方芬等口腔科應(yīng)重視潛在的特異性感染卩中華醫(yī)院感染學(xué) 雜志，2002, 12(9):673.3 曹力，梁慧，王鮮平等全方位做好醫(yī)院質(zhì)量監(jiān)測(cè)控制醫(yī)院感染卩中華醫(yī)院感 染學(xué)雜志，2002, 12(5):378 379.4 楊華明，高季鴻醫(yī)院口腔器械微生物污染及其消毒現(xiàn)狀j.中國消毒學(xué)雜志， 2000, 17(1):26-28 魏琴，呂思平，梁慶紅等加強(qiáng)口腔科醫(yī)院感染的監(jiān)測(cè)控制與管理j中華醫(yī)院 感染學(xué)