紅顏草莓莖尖組培快繁技術(shù)研究

1、    紅顏草莓莖尖組培快繁技術(shù)研究    張黎鳳+錢雯婕+魏紅英+滕大芳摘要 以紅顏草莓為試材，對草莓匍匐莖莖尖進行組培脫毒壯苗快繁技術(shù)與應用研究。結(jié)果表明：適宜紅顏草莓誘導分化增殖培養(yǎng)基配方以 ms+6-ba 0.5 mg/l+naa 0.1 mg/l最好；繼代增殖培養(yǎng)基配方以ms+6-ba 1.0 mg/l+iaa 0.1 mg/l較適宜；誘導生根培養(yǎng)基配方以1/2ms+iba 1.0 mg/l或1/2ms+naa 0.1 mg/l較理想，最佳移栽基質(zhì)為營養(yǎng)土珍珠巖蛭石=111，移植成活率可達95%以上。關(guān)鍵詞 草莓；莖尖；組織培養(yǎng)；快繁s668.

2、4 a 1007-5739（2017）07-0071-01草莓是薔薇科，草莓屬，多年生草本植物，屬于當今世界七大水果之一，在我國栽培面積僅次于葡萄。草莓品種過去主要用傳統(tǒng)匍匐莖分株繁殖，繁殖速度慢，親本的優(yōu)良性狀無法保持，植株容易積累多種疾病，導致種苗退化，草莓品質(zhì)下降1-2。采用草莓組培脫毒進行無性繁殖，可以大量生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)的無毒苗，提高草莓的品質(zhì)。因此，組織培養(yǎng)作為植物優(yōu)良品種大量繁殖的最有效方式。1 材料與方法1.1 供試材料供試草莓品種為紅顏，選取生長健壯、無病的植株，在新長的匍匐莖頂端剪去5 cm左右作試驗材料。1.2 試驗方法1.2.1 外植體處理。采集健壯的草莓匍匐莖尖，將匍匐莖用水

3、沖洗莖尖，再把莖尖放入3%雙氧水消毒瓶中消毒10 min，倒出雙氧水，再用無菌水沖洗3遍，然后轉(zhuǎn)放到超凈工作臺上進行滅菌處理。具體滅菌流程：先用75%酒精消毒10 s，倒出酒精，用無菌水沖洗3次，然后加入0.1%升汞消毒8 min，最后用無菌水沖洗45次。在顯微鏡下用解剖刀剝?nèi)ビ兹~，切取0.51.0 mm的莖尖接種到培養(yǎng)基上。培養(yǎng)室溫度為2226 ，光照強度為1 5002 000 lx，光照12 h/d3。1.2.2 培養(yǎng)基選擇。試驗以ms為基本培養(yǎng)基，其中附加奈乙酸（naa）、6-芐氨基腺嘌呤（6-ba）。葡萄糖30 g/l，瓊脂6 g/l。誘導培養(yǎng)基：ms培養(yǎng)基+6-ba（0.2、0.5、

4、1.0 mg/l）+naa（0.1、0.2、0.3 mg/l）；繼代培養(yǎng)基：ms培養(yǎng)基+6-ba（0.5、1.0、1.5 mg/l）+iaa（0.1、0.3、0.5 mg/l）；生根培養(yǎng)基：ms培養(yǎng)基+iba（0.5、1.0、1.5 mg/l）或naa（0.5、1.0、1.5 mg/l）。培養(yǎng)基ph值為5.8。使用前需要高壓滅菌，在101.325 kpa下，高壓滅菌20 min。2 結(jié)果與分析2.1 不同激素水平對草莓誘導的影響外植體經(jīng)過2周左右的培養(yǎng)后，可慢慢分化出叢生芽。由表1可知，4號和5號培養(yǎng)基的萌發(fā)數(shù)最高，4號培養(yǎng)基的褐化數(shù)最少。隨著naa的比例增大，褐化數(shù)也逐漸增多，6-ba和na

5、a有一定的比例，才能促使芽增長。因此，最佳誘導培養(yǎng)基為ms+6-ba 0.5 mg/l+naa 0.1 mg/l。2.2 不同激素水平對草莓繼代培養(yǎng)的影響經(jīng)過初代培養(yǎng)后產(chǎn)生小芽叢苗，在超凈工作臺上用鑷子、剪刀、培養(yǎng)皿，分隔成34株在一起的小芽叢，再將誘導分化出的叢生芽接種于不同激素配比的繼代增殖培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，每瓶34株芽叢。由表2可知，當iaa濃度為0.1 mg/l時，增殖芽數(shù)最多，且隨iaa濃度的增加增殖芽數(shù)減少，增殖芽數(shù)最多的是4號培養(yǎng)基。因此，草莓最佳繼代培養(yǎng)基為ms+6-ba 1.0 mg/l+iaa 0.1 mg/l4-5。2.3 不同草莓組培苗生根培養(yǎng)基對草莓生根的影響將生長良

6、好的無根草莓苗接種于生根培養(yǎng)基30 d后，由表3可知，培養(yǎng)基中加入一定比例的生長激素可以促進生根。當1/2ms培養(yǎng)基上添加iba和naa可以增加平均根數(shù)，當iba濃度為1.0 mg/l時，生根率為90%，平均根長為5 cm；當naa濃度為0.1 mg/l時，生根率為95%，平均根長為6 cm。因此，草莓最佳生根培養(yǎng)基為1/2ms+iba 1.0 mg/l或1/2ms+naa 0.1 mg/l。2.4 試管苗的移栽當試管苗長有56條根時，可慢慢開瓶煉苗，使試管苗逐漸適應移栽環(huán)境。經(jīng)過1周左右的時間煉苗，從瓶中取出試管苗，沖洗掉瓊脂，用多菌靈浸泡后移栽到營養(yǎng)土蛭石珍珠巖=111的基質(zhì)中，并且蓋上塑

7、料薄膜來維持濕度。每周可噴灑營養(yǎng)液1次6。移栽結(jié)束后，幼苗所生長的環(huán)境需要保持高濕度，濕度應在85%95%之間，且移植后的環(huán)境溫度應稍高于移植前幼苗生長的環(huán)境溫度。白天可控制在2526 ，夜間不低于1418 。3 結(jié)論與討論該試驗結(jié)果表明，紅顏草莓誘導分化增殖最適宜培養(yǎng)基是ms+6-ba 0.5 mg/l+naa 0.1 mg/l，繼代增殖最適宜培養(yǎng)基是ms+6-ba 1.0 mg/l+iaa 0.1 mg/l，最佳生根培養(yǎng)基是1/2ms+iba 1.0 mg/l或1/2ms+naa 0.1 mg/l。營養(yǎng)土珍珠巖蛭石=111的基質(zhì)適宜進行馴化煉苗7-8。本試驗發(fā)現(xiàn)的不同激素種類和配比，直接影

8、響紅顏草莓生根的發(fā)生，能較好地誘導出愈傷組織，這將為紅顏草莓的快速繁殖、規(guī)?；a(chǎn)提供技術(shù)支持。4 參考文獻1 張志宏，肖敏，楊洪一，等.草莓病毒病脫除方法的比較與評價j.果樹學報，2006，23（5）：720-723.2 何歡樂，陽靜，蔡潤，等.草莓莖尖培養(yǎng)脫毒效果研究j.北方園藝，2005（5）：79-81.3 劉健，劉向蕾，胡繁榮，等.草莓熱處理結(jié)合莖尖培養(yǎng)脫毒效果研究j.浙江農(nóng)業(yè)科學，2009（6）：1088-1090.4 陳德海，潘文蘭，楊濤，等.草莓組織培養(yǎng)細胞發(fā)育過程德電鏡觀察j.廈門大學學報（自然科學版），1999，36（6）：918-920.5 王常蕓，李曉亮，王建玲，等.草莓脫毒技術(shù)與開發(fā)應用j.山東農(nóng)業(yè)科學，2007（4）：118-120.6 胡淑明，張學英，李青云，等.