生活飲用水微生物指標檢驗復習進程

1、第一頁，共44頁。 檢測依據(yj)：GB 5750-2006 生活飲用水衛(wèi)生檢驗規(guī)范第二頁，共44頁。 掌握水樣采集規(guī)則及注意事項。 熟悉常用水衛(wèi)生細菌學指標。 熟悉菌落(jnlu)總數、大腸菌群、耐熱大腸菌群的測定方法及檢測意義。 學會對所檢測的水樣作綜合分析。第三頁，共44頁。項目單位限值說明總大腸菌群MPN/100mL或CFU/100mL不得檢出一般性污染耐熱大腸菌群MPN/100mL或CFU/100mL不得檢出指示糞便污染大腸埃希氏菌MPN/100mL或CFU/100mL不得檢出指示糞便污染菌落總數CFU/mL100一般性污染賈第鞭毛蟲個/10 L1腸道原蟲隱孢子蟲個/10 L1腸道

2、原蟲第四頁，共44頁。水體的微生物污染問題日趨嚴重。在各種水體，特別是污染水體中存在有大量的有機物質，適于各種微生物的生長。水體中微生物污染的來源：土壤，以及人類、動物的排泄物污染。水體中少數(shosh)致病微生物（主要來自人或動物的糞便污染）可導致某些腸道傳染病傳播。水微生物檢測可用于評價水質情況，預報水質的污染趨勢，以保證水質的衛(wèi)生安全。第五頁，共44頁。在實際工作中，對水質衛(wèi)生質量的評價(pngji)和控制，是無法對水體中各種可能存在的致病微生物一一進行檢測。一般選擇有代表性的一種或一類微生物作為指示菌，通過對指示菌的檢測，來了解水體是否受到過的微生物污染，是否有腸道病原微生物存在的可

3、能。第六頁，共44頁。 菌落總數(aerobic bacterial count) 是指1ml水樣在營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中，于37經48h培養(yǎng)后，所生長的細菌菌落的總數。 檢測意義：作為一般性污染的指標(zhbio)，即評價被檢樣品的微生物污染程度和安全性。水樣菌落總數越多，說明水被微生物污染程度越嚴重，病原微生物存在的可能性越大，但不能說明污染的來源。第七頁，共44頁。 總大腸菌群(coliform bacteria) 是指一群需氧及兼性厭氧的，37生長時能使乳糖發(fā)酵，在24h內產酸產氣的革蘭氏陰性(ynxng)無芽胞桿菌。 檢測意義：作為糞便污染的指標。水樣總大腸菌群數的含量，表明水被糞便污染的

4、程度，而且間接地表明有腸道致病菌存在的可能。第八頁，共44頁。耐熱大腸菌群（thermotoletant Coliform Organisms）：在4444.5下具有與大腸菌群相同(xin tn)發(fā)酵及生物化學性能的菌群。注意：我國習慣上把耐熱大腸菌群稱為“糞大腸菌群”。第九頁，共44頁。第十頁，共44頁。水樣采集；菌落(jnlu)總數的測定；總大腸菌群的測定;耐熱大腸菌群的測定。第十一頁，共44頁。水樣水樣總大腸菌群總大腸菌群菌落菌落(jnlu)總數總數報告報告(bogo)報告報告耐熱大腸菌群耐熱大腸菌群或大腸埃希氏菌或大腸埃希氏菌報告報告第十二頁，共44頁。第十三頁，共44頁。 采樣(ci

5、 yn)原則 所采集的樣品具有代表性。 采樣(ci yn)容器：選擇無菌硼硅玻璃瓶和聚乙烯塑料瓶。 不能是新的污染源；不吸收或吸附某些待測組分；不與待測組分發(fā)生反應。保證從采樣(ci yn)到分析期間，樣品各組分的濃度不發(fā)生改變。 微生物樣品必須按一般無菌操作的基本要求采集，并保證在運送、貯存過程中不受污染。第十四頁，共44頁。 自來水水樣：先將自來水龍頭用火焰燒灼3min滅菌，再開放水龍頭使水流(shuli)5 min（經常用水的水龍頭放水13min）后，采集水樣于無菌玻璃瓶，約占瓶容量80%，以便搖勻水樣。 水源水水樣：選有代表性的地點及可疑地方，一般距水面下1015cm采樣。采樣后，將瓶

6、塞蓋好，再從水中取出。第十五頁，共44頁。 注意事項 嚴格無菌操作。 做好標記：采得水樣后應立即記錄水樣名稱、地點、時間等內容。 從速送檢。水樣從采集到檢驗不應超過(chogu)2h，在4下保存不應超過(chogu)24h。第十六頁，共44頁。1、滅菌吸管 10mL、1mL刻度吸管分別包好，160干烤2h滅菌2、9mL滅菌生理鹽水3、相應的滅菌培養(yǎng)基4、檢驗(jinyn)前 ，無菌室及超凈臺用紫外線燈照射30min第十七頁，共44頁。定義： 是指水樣在營養(yǎng)瓊脂上有氧條件(tiojin)下37培養(yǎng)48h后，所得1mL水樣所含細菌菌落的總數 。培養(yǎng)基：營養(yǎng)瓊脂 設備：放大鏡/菌落計數器第十八頁，共

7、44頁。1 m L 飲 用 水 水 樣平皿1 m L 水 源 水 水 樣1 0 倍系列稀釋5 0 營養(yǎng)瓊脂3 6 1 培養(yǎng)4 8 h計 數平行樣空白樣第十九頁，共44頁。方法水樣搖勻20次左右(zuyu)，使細菌分散。傾注培養(yǎng)：無菌吸取1ml水樣分別置于2個空平皿，另一個作空白對照。再傾注15ml瓊脂（約45）于平皿中旋轉，混勻待瓊脂凝固后倒置3748h。菌落計數：用肉眼或放大鏡檢查，計數平皿內菌落數目。第二十頁，共44頁。 結果分析與報告 計算平均菌落數： 報告方式：菌落總數(cfu/ml)。 cfu：colony forming units 當檢樣的菌落數為l100時，按實有數報告；大于1

8、00時，采用二位有效數字(yu xio sh z)報告。 國家標準（GB5749-2006）規(guī)定生活飲用水菌落總數每毫升不得超過100個。第二十一頁，共44頁。 器材與試劑(shj) 無菌1ml吸管6支/組，無菌10ml吸管1支/組。 無菌平皿9個/組，營養(yǎng)瓊脂。 90ml滅菌鹽水1瓶（內置適量玻璃珠），9ml滅菌鹽水管3支。第二十二頁，共44頁。 方法 稀釋水樣： 無菌吸10ml混勻水樣注入(zh r)90ml滅菌水瓶中,混勻成1:10水樣。 取1:10水樣1ml注入(zh r)9ml滅菌試管中混勻成1:100水樣。同法稀釋成1:1000, 1:10000水樣。第二十三頁，共44頁。 方法(

9、fngf) 傾注培養(yǎng)： 用1ml無菌吸管吸取23個適當濃度的稀釋液1ml,分別注入無菌平皿中，每個稀釋度應同時做2個平皿，另取一平皿作空白對照。再做傾注培養(yǎng)(方法(fngf)同飲用水)。 菌落計數：方法(fngf)同飲用水。第二十四頁，共44頁。第二十五頁，共44頁。 結果分析(fnx)與報告 計算不同稀釋度的平均菌落數： 稀釋度的選擇和菌落總數報告方式： 首先選擇平均菌落在30300之間者進行計算。 計算方法和報告方式如表1所示。第二十六頁，共44頁。第二十七頁，共44頁。 由表2可判定水質被污染的程度(chngd)。 表2 一般水源水中菌落總數與水清潔程度(chngd)的關系 水的類別最清

10、潔水清潔水不太清潔水不清潔水極不清潔水菌落總數 cfum110100100100010001000010000100000100000第二十八頁，共44頁。注意事項菌落總數測定中，應選擇合適的稀釋(xsh)度進行。（生活飲用水，國家標準規(guī)定每毫升不得超過100個，因此可以直接吸取1毫升到平板進行培養(yǎng)）各稀釋(xsh)管、相應平皿做好標記。包括：水樣名稱、稀釋(xsh)度、時間、小組。嚴格無菌操作。進行水樣稀釋(xsh)時，每一稀釋(xsh)度均需更換吸管。傾注時，要注意營養(yǎng)瓊脂的溫度。傾入瓊脂后要混勻，待瓊脂凝固后倒置培養(yǎng)。第二十九頁，共44頁。分為(fn wi)三步：初發(fā)酵試驗平板分離復發(fā)酵

11、證實試驗第三十頁，共44頁。定義： 總大腸菌群指一群在37培養(yǎng)24h能發(fā)酵乳糖、產酸產氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性(ynxng)無芽孢桿菌。培養(yǎng)基：乳糖蛋白胨培養(yǎng)液 二倍濃縮乳糖蛋白胨培養(yǎng)液 伊紅美藍培養(yǎng)基 設備：顯微鏡第三十一頁，共44頁。二 倍乳 糖蛋 白胨 培養(yǎng) 液 5 管乳 糖蛋 白胨 培養(yǎng) 液 5 管乳 糖蛋 白胨 培養(yǎng) 液 5 管1 0 m L1 m L1 m L水 樣10倍稀釋陰 性報 告未 檢 出陽 性EM B3 6 1 培 養(yǎng) 2 4 h3 6 1 培 養(yǎng) 2 4 h革 蘭 氏 染 色顯 微 鏡 檢報 告陰 性無 典 型菌 落無 典 型 細 菌報 告陰 性G -無 芽 孢

12、桿 菌乳 糖蛋 白胨 培養(yǎng) 液3 6 1 培養(yǎng)2 4 h無 產 酸 產 氣報 告陰 性陽 性M P N 表結 果 報 告 乳 糖 發(fā)酵 試 驗2 4 h 分 離培 養(yǎng)2 4 h 證 實試 驗2 4 h1 5 管 法 檢 測 步 驟第三十二頁，共44頁。 初發(fā)酵試驗：采用乳糖蛋白(dnbi)胨培養(yǎng)液37培養(yǎng)24h，觀察產酸產氣情況。 平板分離：對陽性管培養(yǎng)物，接種于伊紅美藍培養(yǎng)基，觀察菌落特征，并進行革蘭氏染色和鏡檢。 復發(fā)酵證實試驗：對典型和可疑菌落，接種于乳糖蛋白(dnbi)胨培養(yǎng)液，進行復發(fā)酵證實試驗.， 結果報告（MPN）：根據標準所附檢索表報告結果（MPN”最可能數”）。 第三十三頁，

13、共44頁。初發(fā)酵、復發(fā)酵試驗初發(fā)酵、復發(fā)酵試驗(shyn)結果結果第三十四頁，共44頁。多管發(fā)酵法結果(ji gu)大腸菌群在伊紅美藍培養(yǎng)基上的典型(dinxng)菌落特征大腸菌群革蘭氏染色(rns)顯微鏡下的形態(tài) 第三十五頁，共44頁。 多管發(fā)酵(f jio)法 耐熱大腸菌群（thermotoletant Coliform Organisms）：在4444.5下具有與大腸菌群相同發(fā)酵(f jio)及生物化學性能的菌群。第三十六頁，共44頁。1.1基本性質 培養(yǎng)溫度提高到4444.5，在此條件下仍能生長和發(fā)酵乳糖的菌群。 埃希氏菌屬：糞源特異性 耐熱大腸菌群 克雷伯菌屬 腸桿菌屬總大腸菌群 檸

14、檬酸菌屬 其它(陰溝腸桿菌和弗氏檸檬酸桿菌) 注意：耐熱大腸菌在配水系統(tǒng)中是不能繁殖的，除非管網中有充足的營養(yǎng)物質（升華需氧量超過10/mgL）,以及(yj)管網中沒有余氯。第三十七頁，共44頁。1.2 主要用途 埃希氏大腸菌是最準確和專一(zhuny)的糞便污染指示 。耐熱大腸菌的檢出，可認為近期水體直接或者間接地受到了糞便污染。注意：GB/5749-2006規(guī)定，如果飲用水檢出總大腸菌群，就必須檢測耐熱大腸菌或者埃希氏大腸菌。 第三十八頁，共44頁。定義(dngy)： 用提高培養(yǎng)溫度的方法將自然環(huán)境中的大腸菌群與糞便中的大腸菌群區(qū)分開，在44.5仍能生長的大腸菌群，稱為耐熱大腸菌群。培養(yǎng)基

15、： EC培養(yǎng)基 伊紅美藍瓊脂 設備：無特殊設備第三十九頁，共44頁。 初發(fā)酵（同總大腸菌群），24h 耐熱培養(yǎng)(piyng)：陽性管接種（44.5度），24h 平板培養(yǎng)(piyng)：陽性管接種EMB平板，24h第四十頁，共44頁。乳 糖蛋 白胨 培養(yǎng) 液 5 管乳 糖蛋 白胨 培養(yǎng) 液 5 管二 倍乳 糖蛋 白胨 培養(yǎng) 液 5 管1 0 m L1 m L1 m L水 樣10倍稀釋陰 性報 告未 檢 出陽 性EM B3 6 1 培 養(yǎng) 2 4 h36 1培 養(yǎng) 24h報 告陰 性結 果 報 告 乳 糖發(fā) 酵試 驗24h 證 實試 驗24h多 管 發(fā) 酵 法 檢 測 步 驟EC 培養(yǎng) 液44.5 培養(yǎng) 24h不 產 氣產 氣有 典 型 菌 落檢 索 M PN表 耐 熱培 養(yǎng)24h無 典 型 菌 落報 告陰 性第四十一頁，共44頁。菌落總數細菌學指標總大腸菌群耐熱大腸菌群大腸埃