淺談食品微生物檢驗(yàn)中的無菌操作

1、    淺談食品微生物檢驗(yàn)中的無菌操作    吳同輝摘 要：在整個(gè)食品微生物檢驗(yàn)流程中，無菌操作貫穿始終。正確進(jìn)行無菌操作，就能夠得到反映食品衛(wèi)生質(zhì)量的準(zhǔn)確數(shù)據(jù)，如果任一環(huán)節(jié)未做到無菌操作，就會(huì)使得檢驗(yàn)結(jié)果失真，檢驗(yàn)也就失去意義。同時(shí)，操作人員在檢驗(yàn)時(shí)，要注意防范不當(dāng)?shù)牟僮鲙淼奈⑸镂廴?。關(guān)鍵詞：食品安全；無菌室；微生物檢驗(yàn)；無菌操作1.前言近年來，食品微生物污染越來越被人們所關(guān)注，由此引發(fā)的一系列食品安全問題被提到議程。如何保證食品的安全性，筆者認(rèn)為除了加大對(duì)工廠安全監(jiān)管外，食品微生物檢驗(yàn)必不可少。根據(jù)食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)總則gb 478

2、9.1-2010，檢驗(yàn)結(jié)果報(bào)告后，剩余樣品或同批樣品不進(jìn)行微生物項(xiàng)目的復(fù)檢。這一規(guī)定對(duì)于食品微生物檢驗(yàn)的要求更加嚴(yán)格。因此要保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，就必須確保在食品微生物檢驗(yàn)過程中做到無菌操作。無菌，是指環(huán)境中不存在保證生命活動(dòng)的營養(yǎng)細(xì)胞的狀態(tài)。而無菌操作，指的是采用無菌器材進(jìn)行植物組織、細(xì)胞傳代、細(xì)胞接種等培養(yǎng)操作，防止微生物進(jìn)入無菌范圍1。要保證食品微生物檢驗(yàn)中的無菌操作，就必須做到環(huán)境無菌、儀器無菌、培養(yǎng)基無菌、人員無菌、操作無菌2。下面就談?wù)勈称肺⑸餀z驗(yàn)中無菌操作需要注意的這幾個(gè)方面。2.食品微生物檢驗(yàn)中的無菌操作2.1食品微生物室環(huán)境的無菌微生物操作大多是在無菌室進(jìn)行的，因此保證無菌

3、室環(huán)境的無菌是十分重要的。2.1.1無菌室的滅菌無菌室在每次使用前，打開室內(nèi)的紫外燈照射約30分鐘，就能保證室內(nèi)空氣、墻壁表面基本無菌。為了增強(qiáng)滅菌效果，在紫外燈打開之前，向無菌室中噴灑5%的石碳酸溶液，能夠使部分微生物沉降并殺死。此外，定期對(duì)無菌室按照每立方米福爾馬林體積數(shù)（ml）與高錳酸鉀克數(shù)2：1的比例進(jìn)行福爾馬林-高錳酸鉀熏蒸3，能夠最大程度殺滅無菌室中的微生物，保證室內(nèi)環(huán)境無菌。微生物檢驗(yàn)完畢后，操作人員離開無菌室，需再打開無菌室內(nèi)的紫外燈照射30min后關(guān)閉。2.1.2無菌室無菌程度的檢查操作人員于無菌室?guī)讉€(gè)關(guān)鍵位置，放置無菌營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)皿，打開皿蓋15min后蓋好，置于37的生化

4、培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24-48h，如果每個(gè)培養(yǎng)皿中菌落總數(shù)不超過1個(gè)，說明無菌室無菌程度良好，反之，則需要對(duì)無菌室進(jìn)一步滅菌。2.2食品微生物室儀器的無菌微生物室中所有操作都要通過儀器來實(shí)現(xiàn)。因此儀器的無菌是整個(gè)微生物檢測(cè)是否準(zhǔn)確的關(guān)鍵。2.2.1設(shè)備的無菌微生物無菌操作一般是在超凈工作臺(tái)中進(jìn)行，工作臺(tái)在每次使用之前，需要打開風(fēng)機(jī)，紫外燈照射20min。工作臺(tái)臺(tái)面可以用75%的酒精或0.1%新潔爾滅溶液擦洗。操作結(jié)束后，需打開工作臺(tái)紫外燈照射20min后關(guān)閉。生化培養(yǎng)箱、霉菌培養(yǎng)箱、二氧化碳培養(yǎng)箱等是用來培養(yǎng)細(xì)菌、霉菌、酵母等菌群的主要工具，需要經(jīng)常對(duì)箱體內(nèi)部消毒滅菌，以防止培養(yǎng)物受到污染，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)

5、果。此外，電子天平、均質(zhì)器、水浴鍋、顯微鏡等設(shè)備都需要定期進(jìn)行清潔滅菌。2.2.2器具的無菌對(duì)于待滅菌的培養(yǎng)皿，需要用牛皮紙或報(bào)紙包好后，于121下滅菌30min，然后置于80左右的烘箱中，烘干后置于超凈工作臺(tái)滅菌后使用。新購買的培養(yǎng)皿需用2%的鹽酸浸泡3h后，清洗再滅菌。帶菌的培養(yǎng)皿121下滅菌30min后，清洗干凈后滅菌。檢驗(yàn)剩余未用的培養(yǎng)皿不能重復(fù)使用，需再次滅菌4。接種環(huán)、鑷子等金屬工具，需將接觸培養(yǎng)基的部分在酒精燈外焰灼燒至紅后，方可使用。l棒使用前應(yīng)浸泡于75%的酒精中，使用時(shí)取出于酒精燈外焰灼燒滅菌。對(duì)于乳膠塞、膠頭、試管架等實(shí)驗(yàn)工具，一般采用75%的酒精擦拭或者化學(xué)藥品噴灑滅菌

6、。2.3食品微生物室中培養(yǎng)基的無菌培養(yǎng)基的質(zhì)量是微生物質(zhì)量控制的關(guān)鍵，關(guān)系到微生物檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確與否，而培養(yǎng)基的無菌則是培養(yǎng)基質(zhì)量控制的重點(diǎn)。2.3.1培養(yǎng)基用水要求培養(yǎng)基用水用蒸餾水，或者經(jīng)滲透處理的無菌、無干擾劑、無抑制劑的水5。2.3.2生化試劑要求微生物室所使用的生化試劑，其生產(chǎn)廠家必須是國家衛(wèi)生部認(rèn)可的企業(yè)， “三證”齊全 6。每批培養(yǎng)基接收后在使用前，需要進(jìn)行質(zhì)量驗(yàn)證，只有符合質(zhì)量要求的生化試劑方可使用。2.3.3配置好的培養(yǎng)基滅菌對(duì)于需要高壓蒸汽滅菌的培養(yǎng)基應(yīng)先于水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，加熱煮沸后根據(jù)該微生物室中高壓蒸汽滅菌鍋既定的滅菌工藝，設(shè)定相應(yīng)的滅菌時(shí)間，滅菌鍋設(shè)定的工作溫度和時(shí)間一

7、般為121 15min，滅菌效果可以用化學(xué)指示膠帶或生物指示劑進(jìn)行檢測(cè)5。對(duì)于某些特定的培養(yǎng)基，高壓蒸汽滅菌會(huì)破壞其有效成分，只能煮沸滅菌。此外，有些培養(yǎng)基需采用過濾除菌的方式進(jìn)行滅菌。2.4食品微生物室人員的無菌操作人員除了具備扎實(shí)的業(yè)務(wù)技能外，樹立正確的無菌觀念也是至關(guān)重要的。操作人員進(jìn)入無菌室前，在緩沖間內(nèi)要更換白大褂、工作鞋、帽、戴口罩，在風(fēng)淋室要風(fēng)淋，并且用75%的酒精進(jìn)行手部消毒，嚴(yán)格保證自身的凈化，做好個(gè)人衛(wèi)生工作，禁止吸煙7。無菌室僅限操作人員進(jìn)入，輔助人員可以再無菌室外通過物流窗進(jìn)行觀察或協(xié)助。2.5食品微生物室操作的無菌操作人員進(jìn)出無菌室要隨手關(guān)門，避免雜菌隨空氣流入無菌室

8、，保證室內(nèi)的潔凈無菌。操作人員在無菌室操作時(shí)，切勿交談。同時(shí)應(yīng)避免不必要的走動(dòng)，動(dòng)作要輕，幅度要小，縮短樣品在空氣中暴露的時(shí)間，并盡量縮短在無菌室內(nèi)的操作時(shí)間，能在微生物室準(zhǔn)備間進(jìn)行的工作，應(yīng)避免在無菌室內(nèi)進(jìn)行。當(dāng)發(fā)生操作污染時(shí)，操作人員應(yīng)立即將浸泡于5%石碳酸溶液中的抹布完全覆蓋污染物，防止污染物擴(kuò)散。實(shí)驗(yàn)用品應(yīng)通過物流窗傳遞。操作完成后，操作人員應(yīng)用75%酒精擦拭工作臺(tái)臺(tái)面，并及時(shí)清理使用過的廢物并進(jìn)行滅菌。此外，操作人員應(yīng)將無菌操作記錄及時(shí)進(jìn)行登記。3.結(jié)語微生物檢驗(yàn)是食品安全的保障，無菌操作則是微生物檢驗(yàn)的重要環(huán)節(jié)。沒有絕對(duì)的無菌，只有相對(duì)的無菌。操作人員在進(jìn)行微生物檢驗(yàn)時(shí)，一定要樹立

9、無菌操作觀念，規(guī)范無菌操作程序，才能保證檢驗(yàn)流程順利完成。同時(shí)，操作人員要根據(jù)實(shí)際需要，合理運(yùn)用無菌操作技術(shù)，避免在微生物檢驗(yàn)中，引入雜菌，影響檢驗(yàn)結(jié)果的真實(shí)性、準(zhǔn)確性。參考文獻(xiàn)1 肖巍.食品微生物檢驗(yàn)中無菌操作技術(shù)研究j.科技資訊.2014，12（14）：40-42.2 顏松.食品微生物無菌室的內(nèi)部質(zhì)量控制分析j.質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督研究.2013， （6）：37-40.3 劉剛，秦菊萍，李宏英.禽舍熏蒸消毒的方法及注意問題j.中國動(dòng)物保健.2011，13（1）：52.4 楊小山，陳天舒.食品微生物檢測(cè)中無菌條件的保持及幾種常用檢測(cè)方法的比較研究j.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué).2013，41（6）： 2666-2721.5 王綏家，黃宏星.微生物實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)基的質(zhì)量控制j.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床.20