食品中菌落總數(shù)的測(cè)定實(shí)驗(yàn)

1、食品中菌落總數(shù)的測(cè)定實(shí)驗(yàn)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模毫私庀♂屍桨逵?jì)數(shù)的原理 , 掌握涂抹平板培養(yǎng)法和混合平板培養(yǎng)法 5 認(rèn)識(shí)細(xì)菌、放射菌、霉菌、的菌落特征。二、原理平板菌落計(jì)數(shù)法是將等測(cè)樣品經(jīng)適當(dāng)稀釋后，其中的微生物充分 分散為單個(gè)細(xì)胞，取一定量的稀釋液接種到平板上，經(jīng)過(guò)培養(yǎng)，由每 個(gè) 單 細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖而形成的肉眼可見(jiàn)的菌落， 即一個(gè)單菌落應(yīng)代表原 樣品中的一個(gè)單細(xì)胞。統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)，根據(jù)其稀釋倍數(shù)和取樣接種量即可 換 算出樣品中的含菌數(shù)。 但是，由于待測(cè)樣品往往不易完全分散成 單個(gè) 細(xì)胞， 所以，長(zhǎng)成的一個(gè)單菌落也可能來(lái)自樣品中的多個(gè)細(xì)胞。因此平 板菌落計(jì) 數(shù)的結(jié)果往往偏低。為了清楚地闡述平板菌落計(jì)數(shù)的結(jié)果，

2、現(xiàn) 在已傾向使 用菌落形成單位 (colony-forming units, cfu) 而不以絕對(duì)菌落 數(shù)來(lái)表示樣品 的活菌含量。該計(jì)數(shù)法的缺點(diǎn)是操作較繁，結(jié)果需要培養(yǎng)一段時(shí)間才能取得，而 且 測(cè)定結(jié)果易受多種因素的影響，但是這種計(jì)數(shù)方法最大的優(yōu)點(diǎn)是可以 獲得 活菌的信息，所以被廣泛用于生物制品檢驗(yàn)，以及食品、飲料和水 等含菌 指數(shù)或污染度的檢測(cè)三、試劑和材料4 ? 儀器恒溫培養(yǎng)箱： 36 C 士 1 C, 30 C 士 1 C。均質(zhì)器或振蕩器無(wú)菌吸管： 1 ml 0.01 ml 刻度、 10ml 0.1 ml 刻度或微量 移液器及吸頭無(wú)菌錐形瓶：容量 250 ml 、500 ml 、 無(wú)菌培

3、養(yǎng)皿：直徑 90 mm 菌落計(jì)數(shù)器2 ? 樣品1 平板計(jì)數(shù)瓊脂 plate count agar ，PCA 培養(yǎng)基：蛋白豚 5.0 g 、 酵母浸膏2.5 g、葡萄糖1.0 g、瓊脂15.0 g 蒸館水1 000 ml、pH 7.0 ±0.2。將所有成分加于蒸館水中，煮沸溶解，調(diào)節(jié) pH 分裝試管或錐形瓶 -121 C 高壓滅菌 15 min o 注： 用平板 計(jì)數(shù)瓊脂，稱(chēng)取 23.5 g 于 1 000 ml 蒸鐳水中，加熱煮沸至完全溶解 ，121 C 高壓滅菌 20min ，冷卻至 45-47C 左右備用。2 無(wú)菌生理鹽水：氯化鈉 NaCI 5.875g 蒸憾水純潔水 500ml

4、 稱(chēng)取 5.875 g NaCI 溶于 500ml 蒸館水中， 121 C 高壓滅菌 20min 。3?器材100ml 無(wú)菌水、 9ml 無(wú)菌水、無(wú)菌平皿、天平、稱(chēng)樣瓶、記號(hào)筆、酒精燈等。四、操作及實(shí)驗(yàn)步驟1 ?樣品的稀釋?zhuān)?5 g ml樣品+225 ml稀釋液，均質(zhì)。10倍系列稀釋。每遞增稀釋一次，換用 1次1 ml無(wú)菌吸管或吸頭。注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面選擇2個(gè)？ 3個(gè)適宜稀釋度的樣品勻液，各取1 ml分別參加無(wú)菌培養(yǎng)皿內(nèi)。吸取 1 ml空白稀釋液 作 空白對(duì)照。每皿中參加15 ml? 20 ml平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基，并 轉(zhuǎn)動(dòng)平 皿 使其混合均勻。2?培養(yǎng)：待瓊脂凝固后，將平板翻轉(zhuǎn)，36 ±1 C培養(yǎng)48 h 士 2 h。水 產(chǎn)品30 士 1 C培養(yǎng)72 h 士 3 h ° 如果有彌漫生長(zhǎng)的菌落時(shí)，可 在凝 固后的 瓊脂外表覆蓋一薄層瓊脂培養(yǎng)基約 4 ml ，凝固后翻轉(zhuǎn)平 板。3.菌落計(jì)數(shù)：記錄稀釋倍數(shù)和相應(yīng)的菌落數(shù)量菌落計(jì)數(shù)以菌落形成單位(col ony-formi ng un its,CFU表小。+ 0.1 n2 ) d五、計(jì)算公式：式中：N樣品中菌落數(shù)；刀C-平板含適宜范圍菌落數(shù)的平板菌落數(shù)之和 ;n1 第一稀釋度低稀釋倍